Ферментационная питательная среда для получения аминогликозидного антибиотического комплекса
Использование: в микробиологической и медицинской промышленности для получения аминогликозидного антибиотического комплекса, состоящего из карбамоилтобрамицина,карбамоилканамицина и апрамицина. Сущность изобретения: процесс ферментации продуцента Streptomuces cremeus subsp. nebramycini проводят при 37±1°С в течение 24 ч при перемешивании и аэрации на среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора и минеральные соли. Ферментационная среда содержит нетрадиционные виды сырья: хлопковую муку и свекловичный порошок . Активность культуральной жидкости увеличивается на 25%. 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (st)s С 12 P 19/50
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТО РС КО МУ. СВИДЕТЕЛЬСТВУ
2,4 — 2,6
1,0 — 1,2
0,5 — 0;7
0,6 — 0,8
21) 4731518/13 (22) 16,08.89 (46) 23,05.92. Бюл. N. 19 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт биотехнологии (72) Г. Н, В острокнутова, В. Н. Ковалев.
Л.П.Жиганова, Г,М.Симонова, Н.А.Саитова и О.А.Белоусова (53) 615.470.5(088.8) (56) Лабораторный регламент на производство тобрамицина сульфата, — М.: ВНИИантибиотиков, 1983. (54) ФЕРМЕНТАЦИОННАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ
СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ АМИНОГЛИКОЗИДНОГО АНТИБИОТИЧЕСКОГО КОМПЛ ЕКСА
Изобретение относится к микробиологической и медицинской промышленности. в частности к способу получения аминогликозидного антибиотического комплекса, состоящего из карбамоилтобрамицина (то бр а м и ци н — меди ци н с к и и и ре и а рат. представляет интерес в химиотерапии инфекций, обусловленных грамотрицательными бактериями, в том числе Ps. aeruginosa), карбамоилканамицина и апрамицина (применяется в ветеринарии при лечении желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота и свиней).
Известны различные ферментационные среды для получения аминогликозидного энтибиотического комплекса, содержащего тобрамицин и апрамицин.
Наиболее близким к изобретению является процесс ферментации с использованием продуцента Spteptomyces cremeus
subsp. nebramycini, который ведется на ферметационной питательной среде следующего состава, мас.%, соевая мука 3,5; глюкоза
„„ Ы„„1735368 А1 (57) Использование: в микробиологической и медицинской промышленности для получения аминогликозидного антибиотического комплекса, состоящего из карбамоилтобрамицина, карбамоилканамицина и апрамицина. Сущность изобретения: процесс ферментации продуцента
Streptomuces cremeus subsp. nebramycini проводят при 37 1 С в течение 24 ч при перемешивании и аэрации на среде, содер жащей источники углерода, азота, фосфора и минеральные соли, Ферментационная среда содержит tìтрадиционные виды сырья: хлопковую муку и свекловичный порошок. Активность культуральной жидкости увеличивается на 25%. 1 табл.
1,5; животный жир 1,5; хлористый аммоний
0,6; сернокислый магний 1,1; мел 0,7; водопроводная вода остальное.
Недостатком прототипа является низкая антибиотическая активность культуральной жидкости в конце ферментации.
Целью изобретения является увеличение антибиотической активности культуральной жидкости, Поставленная цель достигается тем, что ферментационная среда для глубинного культивирования Streptomyces cremeus
subsp. nebramycini дополнительно содержит хлопковую муку и свекловичный порошок при следующем соотношении компонентов, мас %:
Соевая мука 1,9 — 2,1
Хлопковая мука 1,4 — 1,6
Свекловичный порошок
Сернокислый магний
Хлористый аммоний
Мел
1735368
Жир животный 1,4 — 1,6
Вода Остальное
Хлопковая мука является источником углерода, азота, фосфора, микроэлементов.
Свекловичный порошок преимущественно является источником углеводов. Использование этих двух компонентов в заданных пределах позволяет получить в ферментационной среде оптимальное соотношение углерод:азот, что приводит к увеличению антибиотической активности культуральной жидкости.
Применение нетрадиционных видов сырья позволяет исключить пищевое сырье — глюкозу из состава среды и снизить содержание соевой муки в среде.
Пример 1 (по известному способу), В качестве объекта исследования используют культуру Streptomyces cremeus subsp.
nebramycini (штаммы 2242, 9871). Вегетативный инокулят выращивают при 37 1 С в течение 24 ч в колбах на качалке с числом оборотов 240 об/мин и в посевном аппарате вместимостью 7 л (коэффициент заполнения 0,7) с числом оборотов мешалки
150 об/мин на среде следующего состава, мас.,(,: глицерин 2,0; кукурузный экстракт
2,0; жир животный 0,75; хлористый аммоний
0,2; хлористый натрий 0,3; мел 0,5; водопроводная вода остальное. рН среды до стерилизации 7,4+.0,1, Посевной материал используют при проведении ферментаций в аппаратах вместимостью 30 л (коэффициент заполнения
0,5) и в колбах (V75Q 100 мл среды) на качалке с числом оборотов 240 об/мин, добавляя его в количестве 2 от объема культуральной жидкости. Ферментации проводят при
37» 1 С на регламентной ферментационной среде следующего состава, мас,,; соевая мука 3,5; глюкоза 1,5; животный жир 1,5; хлористый аммоний 0,6; сернокислый магний 1,1; мел 0,7; водопроводная вода остальное, рН среды 6,2+0,1. Количество подаваемого воздуха 1 объем на 1 объем среды в 1 мин; работа мешалки непрерывная, число оборотов 150 об/мин. П родолжительность ферментации 72 ч, Антибиотическую активность культуральной жидкости определяют методом диффузии в агар с использованием тесткультуры Вас. subtilis штамм 6633 и выражают в единицах на 1 мл, Суммарная антибиотическая активность культуральной жидкости 2800 мкг/мл для штамма 9871 и
1400 мкг/мл для штамма 2242.
Пример 2. Процесс ферментации продуцента Streptomyces cremeus
nebramycini проводят по примеру 1. В каче5
55 стве ферментационной среды используют среду следующего состава, мас. : соевая мука 2,0; хлопковая мука 1,5; свекловичный порошок 2,5; сернокислый магний 1,1; хлористый аммоний 0,6; мел 0,7; животный жир
1,5; водопроводная вода остальное.
Суммарная антибиотическая активность культуральной жидкости 3500 мкг/мл для штамма 9871 и 1750 мкг/мл для штамма
2242, Пример 3-14, Биосинтез аминогликозидного антибиотического комплекса проводят по примеру 2, Концентрации ингредиентов ферментационной среды и значения антибиотической активности культуральных жидкостей представлены в таблице.
Концентрации мела и жира в пределах
0,6-0,8 и 1,4-1,6 мас. / соответственно, устанавливаемые исходя из их оптимального действия на стабилизацию рН и пеногашение культуральной жидкости, не оказывают заметного влияния на активность культуральной жидкости.
Из приведенной таблицы следует, что оптимальными являются такие концентрации ингредиентов, мас. /,: соевая мука 1,92,1; хлопковая мука 1,4-1,6; свекловичный порошок 2,4-2,6; сернокисл.ый магний 1,01,2; хлористый аммоний 0,5-0,7, При этих значениях ингредиентов активность культуральной жидкости возрастает на 25, что приводит к увеличению выхода антибиотического комплекса и соответственно к снижению его себестоимости. Кроме того, предлагаемая среда позволяет использовать нетрадиционные виды сырья, Формула изобретения
Ферментационная питательная среда для получения аминогликозидного антибиотического комплекса с помощью продуцента Streptomyces cremeus subsp, nebramycini, содержащая соевую муку, мел, хлористый аммоний, сернокислый магний, жир животный, воду, отличающаяся тем, что, с целью увеличения антибиотической активности культуральной жидкости, она дополнительно содержит хлопковую муку и свекловичный порошок при следующих соотношениях компонентов, мас, /:
Соевая мука 1,9 — 2,1
Хлопковая мука 1,4 — 1,6
Свекловичный порошок 2,4.— 2,6
Сернокислый магний 1.,0 — 1,2
Мел 0,6 — 0,8
Хлористый аммоний 0,5 — 0,7
Жир животный 1,4 — 1,6
Вода Остал ьное.
1735368
Суммарная анти-, биотическая ак- ;
Содержание компонентов, мас. о
Состав среды тивность к.ж„ мкг/мл
Соевая мука
Сернокислый магний !
Хлопковая мука
Свекловичный
Хлористый
Животный
Мел
Штамм
2242
Штамм
9871 порошок аммоний жир
15
25
Составитель Г, Вострокнутова
Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Т. Малец
Редактор Н, Гунько
Заказ 1793 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35. Раушская наб„4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101
2
4
6
8
11
12
13
2,0
1,9
2,1
1,5
2,0 . 2,0
2,3
2,0
2,0
2,0
2,0
2,0
2,0
1,5
1,4
1,6
1,5
1,2
1,5
1,5
1,8
1,5
1,5
1,5
1,5
1,5
Известная
25 1,1
24 1,0
2,6 1,2
2,4 1,0
2,5 1,0
22 1,1
2,5 1,0
2,5 1,1
2,8 1,1
2,5 0,8
2,5 1,3
2 5 1,1
2.5 1,1 среда
0,6
0,5
0,7
0,5
0,5
0,7
0,6
0,7
0,5
0,6
0,6
0,4
0,9
0,7
0,6
0,8
0,6
0,6
0,8
0,7
0,8
0,6
0,8
0,7
0,8
0,6 2800
1,5 3500
1,4 3500
1,6 3500
1,4 2700
1,4 3360
1,6 3360
1,4 3500
1,4 3500
1,4 3500
1,4 3360
1,6 3220
1,6 3080
1,4 3500
l 750
