Способ получения аминогликозидного антибиотического комплекса

 

Использование: микробиологическая и медицинская промышленность. Сущность изобретения: культуру Streptomyces cremeus subsp nebramycini выращивают на посевной питательной среде, после чего вносят в питательную среду, содержащую соевую муку, животный жир, глюкозу, хлористый аммоний, мел и водопроводную воду , при этом через 30-36 ч после начала культивирования вносят раствор сернокислого марганца. При этом с 24 по 48 ч культивирования в культуральной жидкости поддерживают насыщение кислородом на уровне 6-10%. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)л С 12 Р 19/50

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4731518/13 (22) 16.08.90 (46) 23.05.92. Бюл. М 19 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт биотехнологии (72) Г.Н.Вострокнутова, В,Н.Ковалев, Л.ll.Æèràíoâà, Г.М.Симонова, Н,А.Саитова и О.А. Белоусова (53) 615.475(088.8) (56) Лабораторный регламент на производство тобрамицина сульфата. — М,: ВНИ!Лантибиотиков, 1983. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИНОГЛИКОЗИДНОГО АНТИБИОТИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА

Изобретение относится к микробиологической и медицинской промышленности, в частности к способу получения аминогликозидного комплекса, состоящего из карбамоилтобрамицина (тобрамицин медицинский препарат представляет интерес в химиотерапии инфекций, обусловленных грамотрицательными бактериями, в том числе Ps, aeruginosa), карбамоилканамицина и апрамицина (применяется в ветеринарии при лечении желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота и свиней), Известны способы получения антибиотического комплекса, содержащего тобрамицин и апрамицин, Наиболее близким к изобретению является способ, согласно которому вегетативный посевной материал культуры

Streptomyces cremeus subsp. nebramycini выращивают на посевной среде следующего состава, мас.%,: кукурузный. экстракт 2,0: глицерин 2,0; хлористый аммоний 0,2; хлористый натрий 0,3; мел 0,5; животный жир

0,75.. Ж 1735369 А1 (57) Использование: микробиологическая и медицинская промышленность. Сущность изобретения: культуру Streptomyces

cremeus subsp nebramycini выращивают на посевной питательной среде, после чего вносят в питательную среду, содержащую соевую муку, животный жир, глюкозу, хлористый аммоний, мел и водопроводную воду, при этом через 30-36 ч после начала культивирования вносят раствор сернокислого марганца. При этом с 24 по 48 ч культивирования в культуральной жидкости поддерживают насыщение кислородом на уровне 6-10, 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

Процесс ферментации ведется на среде следующего состава, мас,%: мука соевая

3.5; глюкоза 1,5: животный жир 1,5; хлористый аммоний 0,6; сернокислый магний

1.1: мел 0.7. водопроводная вода остальное.

До начала процесса ферментации в среду вносят сернокислый марганец в концентрации 0,025%, Количество подаваемого воздуха составляет один объем на один обьем среды в 1 мин. работа мешалки непрерывная с числом оборотов 150 об/мин.

Недостатком известного способа является низкая антибиотическая активность культуральной жидкости в конце ферментации. . Целью изобретения является увеличение антибиотической активности культуральной жидкости, Поставленная цель достигается тем, что сернокислый марганец вносится на стадии ферментации не сразу, а через 30-36 ч роста, в течение вторых су ок ферментации, когда идет интенсивное накопление биомассы, 1735369 процент насыщения кислорода в культуральной жидкости поддерживается на уровне 6-10 .

Пример 1 (по известному способу). В качестве объекта исследования используют культуру Streptomyces cremeys subsp.

nebramycini (штаммы 2242, 9871). Вегетативный инокулят выращивают при 37+.1 С в течение 24 ч в колбах на качалке с числом оборотов 240 об/мин и в посевном аппарате вместимостью 7 л (k n. = 0,7), с числом оборотов мешалки 150 об/мин на среде следующего состава, мас. : глицерин 2,0; кукурузный экстракт 2,0; животный жир

0,75, хлористый аммоний 0,2; хлористый натрий 0,3, мел 0,5; водопроводная вода остальное, рН среды до стерилизации 7,4+0,1, Посевной материал (рН 5,5-7,0), не содержащий посторонней микрофлоры, в количестве 2 от объема культуральной жидкости используют при проведении ферментаций при 37й1 С в аппаратах вместимостью 30 л (узап.= 0,5) и в колбах (Ч750

100 мл среды; Ч1оо 25 мл среды) на качалке с числом оборотов 240 об/мин на среде следующего состава, мас. : соевая мука

3,5; животный жир 1,5; глюкоза 1,5; хлористый аммоний 0,6; сернокислый магний 1,1; мел 0,7; водопроводная вода остальное, рН среды 6,2 +.0,1, До начала процесса ферментации в среду вносят раствор сернокислого марганца до конечной концентрации 0,025, Продолжительность ферментации 72 ч.

Антибиотическую активность кул ьтуральной жидкости определяют методом диффузии в агар с использованием тест-культуры

Васйоз subtilis штамм 6633 и выражают в единицах на 1 мл. Суммарная антибиотическая активность культуральной жидкости

2800 мкг/мл (для штамма 9871 и 1400 мкг/мл для штамма 2242), Пример ы 2-14. Вегетативный инокулят культуры Streptomyces cremeus subsp.

nebramecini как в примере 1, Посевной материал культивируют на ферментационной известной среде (примеры 1-7) и на среде, содержащей нетрадиционные виды сырья (примеры 8-14). Время внесения сернокислого марганца в среду варьируют.

Полученные данные по влиянию времени внесения сернокислого марганца в среду на антибиотическую активность культуральной жидкости представлены в таблице, 40

Формула изобретения

1, Способ получения аминогликозидного антибиотического комплекса, включающий культивирование продуцентэ

Streptomyces cremeus subsp nebramycini в питательной среде с внесением раствора сернокислого марганца, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью увеличения антибиотической активности культуральной жидкости, раствор сернокислого марганца вносят через 30-36 ч после начала культивирования, 2. Способ по и. 1. отличающийся тем, что с 24 по 48 ч культивирования в культуральной жидкости поддерживают уровень насыщения кислорода на уровне

6-10 ).

Из таблицы следует, что оптимальным временем внесения сернокислого марганца является 30-36 ч роста культуры, Внесение сернокислого марганца в культуральную

5 жидкость на эти часы ферментации приводит к увеличению антибиотической активности культуральной жидкости на 20 по сравнению с прототипом.

Пример 15. Процесс ферментации

10 проводят, как в примере 1. В течение вторых суток ферментации, когда удельная скорость роста продуцента максимальная, улучшают условия аэрации посредством увеличения расхода воздуха и числа оборо15 тов мешалки, поддерживая процент насыщения кислорода в культуральной жидкости на уровне десяти. Суммарная антибиотическая активность культуральной жидкости на

72 ч ферментации 3360 мкг/мл для штамма

20 9871 и 1680 мкг/мл для штамма 2242.

Пример 16. Процесс ферментации проводят, как в примере 13, при этом с 24 до

48 ч роста продуцента увеличивают обороты мешал ки в аппарате,, поддерживая процент

25 насыщения кислорода на уровне шести, На

36 ч ферментации в культуральную жидкость вносят стерильно раствор сернокислого марганца до конечной концентрации

0,025 . На 72 ч роста суммарная антибио30 тическая активность культуральной жидкости 4620 мкгlмл для штамма 9871 и

2310 мкг/мл для штамма 2242.

Из полученных данных следует, что увеличение аэрации в течение вторых суток

35 ферментации приводит к увеличению антибиотической активности культурэльной жидкости на 10-20/.

1735369

15

25

Составитель Г, Вострокнутова

Техред М.Моргентал Корректор Т. Малец

Редактор Н. Гунько

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1793 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5