Способ дифференциальной диагностики реактивного и ювенильного ревматоидного артрита у детей

 

Изобретение относится к медицине, в частности ревматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики ювенильного ревматоидного и реактивного артритов у детей. Для повышения точности диагностики и ранней постановки диагноза иследуют иммунологические показатели периферической крови: определяют митогенстимулированную активность лимфоцитов , вносят вольтарен в дозе 1 мкг/мл и определяют митоген - стимулированную активность лимфоцитов в присутствии вольтарена. При увеличении активности лимфоцитов в присутствии вольтарена по сравнению с исходной диагностируют ювенильный ревматоидный артрит, а при уменьшении активности - реактивный артрит . Применение способа в практике здравоохранения позволит повысить точность дифференциальной диагностики артритов у детей на 27% и обеспечит возможность постановки диагноза в более ранние сроки. сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)ю G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

4 (л)

Ql 4

00 (л) (21) 4752261/14 (22) 23,10;89 (46) 23.05.92. Бюл. ¹ 19 (71) Ленинградский педиатрический медицинский институт и Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины (72) B.Â.ÞðüåB, П,Г.Назаров, Н,И,Кондакова и B.È.Ïóðèíü (53) 616,07 (088,8) (56) Дормидонтов Е.Н. и др. Ревматоидный артрит. 1981, с. 33 — 35. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ РЕАКТИВНОГО И ЮВЕНИЛЬНОГО РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА У

ДЕТЕЙ (57) Изобретение относится к медицине, в частности ревматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагноИзобретение относится к медицине, в частности ревматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики ювенильного ревматоидного и реактивного артритов у детей.

Цель изобретения — ранняя диагностика и повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим обра- . зом.

Для оценки влияния вольтарена на стимулированную митогеном фитогемагглютинином (ФГА) функциональную активность клеток периферической крови используют метод культивирования цельной крови в микроплатах. Для исследования используют культуральную среду следующего состава: среда 199 с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиков (пенициллина и стрептомицина по 100 ЕД/мл).

„„Я „„1735783 А1 стики ювенильного ревматоидного и реактивного артритов у детей. Для повышения точности диагностики и ранней постановки диагноза иследуют иммунологические показатели периферической крови: определяют митогенстимулированную активность лимфоцитов, вносят вольтарен в дозе 1 мкг/мл и определяют митоген — стимулированную активность лимфоцитов в присутствии вольтарена. При увеличении активности лимфоцитов в присутствии вольтарена по сравнению с исходной диагностируют ювенильный ревматоидный артрит, а при уменьшении активности — реактивный артрит. Применение способа в практике здравоохранения позволит повысить. точность дифференциальной диагностики артритов у детей на 27% и обеспечит возможность постановки диагноза в более ранние сроки, На 100 мл этого раствора добавляют 3% глютамина 1 мл, 7,5% гидрокарбоната натрия 2,5 мл, 10% хлористого кальция 0,07 мл, 40% глюкозы 0,25 мл. Гепаринизированную венозную кровь (25-30 ед. гепарина на

1 мл крови) смешивают с 10%-ным желатином в отношении 5:1 и инкубируют при 37" в течение 30 мин. Лейковзвесь снимают, проводят подсчет общего числа лейкоцитов и лимфоцитов и разводят культуральной средой до концентрации лимфоцитов 130 тыс/мл. 0,15 мл этой суспензии вносят в каждую лунку полистиролового 96-луночного V-образного планшета для иммунологических реакций, добавляя дополнительно 10 млн аутологичных эритроцитов на лунку. В каждую лунку вносят митоген фитогемагглютинин в объеме 20 мкл, концентрация его составляет 40 мкг/мл. B половину культур

1735783 одновременно с митогеном вносят вольтарен в концентрации 1 мкг/мл культуры. Для каждого больного ставят по 6 культур (3— без препарата, 3 — в присутствии препарата). Затем культуры инкубируют при 37 в атмосфере абсолютной влажности с 5 g, СО2 в течение 72 ч. 3а сутки до окончания инкубации вносят радиоактивную метку (0,4 мкКи Н-тимидина на лунку). После окончаз ния инкубации культуры снимают с помощью коллектора .с осаждением и промывкой клеток на фильтрах, фильтры с исследуемым клеточным материалом высушивают, помещают в счетные флаконы со сцинтиллятором и просчитывают на сцинтилляционном счетчике "Ракбета" (LKB, Швеция). Сцинтиллятор готовят следующим образом; на 1 л толуола берут 5 г 2,5-дифенилоксазола (ППО) и 100 мг 1,4-ди-2-(5-фенилоксазоллил)-бензола(ПОПОП). ПОПОП предварительно смешивают со 100-200 мл толуола и в течение 20 — 30 мин греют на водяной бане под ватно-марлевой пробкой до. полного растворения. Компоненты смешивают и сцинтиллятор выдерживают в темноте в течение 1 — 2 суток, после чего используют, внося по 5 мл на счетный флакон.

Оценку функциональной активности лимфоцитов проводят по стимулированному митогеном фитогемагглютинином синтезу в ДН К лимфоцитами периферической крови, который учитывают по включению радиоактивной метки Н-тимидина в ДНК лимфоцитов и выражают числом импульсов в минуту. После получения результатов со счетчика вычисля.ют среднее значение показателя включения метки для культур без вольтарена и в присутствии препарата. Оценку чувствительности лимфоцитов к вольтарену проводят путем сравнения этих величин. За изменение функциональной активности лимфоцитов в присутствии вольтарена принимали только достоверное (р < 0,05) увеличение или уменьшение показателей под влиянием вольтарена. Для этого вычисляли границы доверительного интервала для показателей функциональной активности лимфоцитов каждого больного с вероятностью

Р = 0,95 по методу определения доверительной зоны линейной регрессии. Если показатели функциональной активности лимфоцитов в присутствии вольтарена попадали в пределы вычисленного доверительного интервала, заключали, что вольтарен не оказывал значимого влияния на функциональную активность лимфоцитов, т.е, клетки были не чувствительны к вольтарену, При получении в культурах с препаратом показателей выше верхней границы доверительного интервала диагности5

55 руют ювенильный ревматоидный артрит, а при показателях функциональной активности лимфоцитов в присутствии вольтарена ниже нижней границы доверительного интервала — диагностируют реактивный артрит.

Пример 1. Больная Ж, 1975 г. рождения, Поступила в кардиоревматологическое отделение для обследования и лечения. Из анамнеза известно, что заболела 3 недели назад, когда после перенесенной ОРВИ у девочки появилась болезненность и припухлость правого коленного сустава. Амбулаторно получала лечение нестероидными противовоспалительными препаратами без положительного эффекта, В анамнезе у девочки сигмоидит. При поступлении на основании клинических признаков поражения суставов и данных анамнеза был поставлен диагноз реактивный артрит правого коленного сустава.

Проведено обследование по предлагаемому способу через 3 недели после начала заболевания.

Получены результаты: ФГА — стимулированная активность лимфоцитов по включению радиоактивной метки 1276 импlмин при доверительном интервале от 1039 до

1513 имп/мин. ФГА — стимулированная активность лимфоцитов в присутствии вольтарена составила 2149 имп/мин. Выявлено достоверное повышение функциональной активности лимфоцитов у больной под влиянием вольтарена, Таким образом, вольтарен оказывает стимулирующее действие, значит, диагноз по предлагаемому способу — ювенильный ревматоидный артрит.

Проведена реакция Ваалер-Розе, Результат: жидкость осталась гомогенной и мутной, агглютинация не произошла, РФ не обнаружен, что соответствует диагнозу ревматоидного артрита.

В качестве контроля использовали комплексное обследование, включающее совокупность клинических, рентгенологических и лабораторных признаков. По совокупности этих признаков через 4 месяца с начала заболевания девочке поставлен диагноз ювенильного ревматоидного артрита.

Таким образом, диагноз, поставленный по предлагаемому способу, совпал с окончательным контрольным диагнозом ювенильного ревматоидного артрита.

Пример 2, Больная И. 1975 г. рождения. Диагноз при поступлении: реактивный артрит, Заболела 7 дней назад, когда после перенесенной ОРВИ появилась отечность и болезненность левого локтевого сустава, oI.раничение подвижности в суставе, местное повышение температуры, Лабораторная ак1735783

35

45

Составитель Н,Валеева

Редактор Н,Козлова Техред M.Ìoðãåíòàë Корректор O.ÊðàBöîBà

Заказ 1813 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 тивность отсутствует. Наследственность благоприятная. Ренгтенологические признаки поражения сустава отсутствуют.

Проведено обследование по предлагаемому способу через 10 дней после начала заболевания. Получены следующие результаты: функциональная активность лимфоцитов периферической крови по

Ф ГА-стимулированному синтезу ДН К составила 2049 имп/мин при доверительном интервале от 1457 — 2641. Функциональная активность в присутствии вольтарена — 1047 имп/мин, т.е. выявлено ингибирующее действие вольтарена. По данным обследования с помощью предлагаемого способа установлен диагноз реактивного артрита.

Кроме того, получили отсутствие РФ по реакции Баалер-Розе и латекс-тексту, т.е. по данным обследования диагноз: реактивный артрит.

Контролем служила постановка диагноза реактивного артрита по совокупности клинико-лабораторных и рентгенологических данных и эффекту антибактериального лечения через 1 месяц после поступления в стационар.

Таким образом, выявлено совпадение диагнозов по данным предлагаемого способа с контролем.

Использование предлагаемого способа

5 в медицинской практике обеспечивает повышение точности дифференциальной диагностики артритов у детей на 27 j, и возможность ранней постановки диагноза за счет возможности оценки изменения на

10 клеточном уровне Т-звена иммуногенеза в условиях блокады синтеза медиаторов воспаления.

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагности15 ки реактивного и ювенильного ревматоидного артрита у детей путем иммунологического исследования крови, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет ранней диагности20 ки, определяют митоген-стимулированную активность лимфоцитов в пробах крови до и после внесения вольтарена и при снижении этого показателя относительно исходного уровня диагностируют реактивный артрит, а

25 при увеличении — ювенильный ревматоидный артрит.