Способ криоконсервирования эритроцитов

 

Изобретение относится к криобилогии. Цель изобретения - повышение функциональной полноценности сохранности криоконсервированных эритроцитов. К эритромассе добавляют криопротектор полиэтиленоксид молекулярной массы 1500 в два этапа: сначала в концентрации 10-15%, затем 35 - 40%. Конечная концентрация 15%. После этого клетки замораживают до -196°С л/тем погружения в жидкий азот. Отогрев осуществляют на водяной бане при 42 - 45°С.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

)s А 01 N 1/02

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4805315/14 (22) 23,03,90 (46) 07,10.92, Бюл. М 37 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) О.В,Липина, Л,П,Бседихина и M,È,ØðàãG (56) Бредихина Л,П. Функциональная сохранность эритроцитов при низкотемпературном консервировании в растворах полиэтиленоксида. — Автор. дис. канд, мед, наук, Харьков, 1983, с,16. (54) СПОСОБ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ

ЭРИТРОЦИТОВ

Изобретение относится к области криобиологии, Наиболее близким к заявляемому является способ криоконсервирования эритроцитов, согласно которому к эритроцитам добавляют 30% íûé криопротектср ПЭО1500 до конечной концентрации 15%, а затем замораживают путем погружения в жидкий азот. Отогревают на водяной бане (Бродихина Л,П. —:Функциональная сохранность эритроцитов при низкотемпературном консервировании в састворах полиэтиленоксида. Авт.дисс. 1983), Этот способ не обеспечивает достаточно высокой сохранности эритроцитов, что обусловлено перепадом осмотических давлений между внутри — и внеклеточнсй средой при добавлении довольно высокой концентрации криопротектора.

Целью изобретения является повышение сохранности функциональной полноценности эритроцитов.

Пример 1, К 90 мл эритромассы, полученной путем спонтанного осажденля из крови донора, сначала добавляли тонкой,, 512,, 1766345 А1 (57) Изобретение относится к криобилогии, Цель изобретения — повышение функциональной полноценности сохранности криоконсервированных эритроцитов. К зритромассе добавляют криопротектор полиэтиленоксид молекулярной массы 1500 в два этапа: сначала в концентрации 10 — 15%, затем 35 — 40%, Конечная концентрация

15%. После этогс клетки заморажива:от до

-196 С путем погружения в жидкий азот, Отогрев осуществляют на водянс" бане при

4„- о С струей 30 мл 1.0%-наго, а затем 60 мл 40%ного раствора ПЭО-1500, растворы ПЭО1500 готовили на основе 2%-ного раствора среднего цитрата натрия. Полученную зритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и замораживали путем погружения в жидкий азот. Отогрев осуществляли на водяной бане при температуре 42 — 45 С. Сохранность эритроцитов определяли по гемолизу и осмотической хрупкости, Резул ьтаты представлены в таблице.

Пример 2. К 90 мл эритромассы добавляли тонкой струей сначала 22 мл

15% íîãî, а затем 68 мл 35% "ного раствора

ПЭО-1500, Полученную эритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и замораживали путем погружения в жидкий азот, Отогрев осуществляли на водяной бане (42 — 45 С). Результаты представлены в таблице.

Пример 3. К 90 мл эритромассы добавляли тонкой струей сначала 15 мл 5%наго, а затем 75 мл 35%-ного раствора ПЭО1500. Полученную эритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и заморажива1766345

Таблица1 ли путем погружения в жидкий азот. Отогрев осуществляли на водяной бане npv 42 — 45 С. Результаты представлены в таблице.

Пример 4. К 90 мл эритромассы добавляли сначала 45 мл 20%-ного, а затем 5

45 мл 40%-ного раствора ПЭО-1500, Полученную эритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и замораживали путем погружения в"жидкий азот, Отогрев осуществлял и Й водяной бане при 42 — 45 С. 10

Результаты представлены в таблице.

П р и м:е р 5, К 90 мл эритромассы добавляли по каплям 90 мл 30%-ного раствора ПЭО-1500. Полученную эритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и 15 замораживали путем погружения в жидкий азот. Отогревали на водяной бане при 42—

45 С. Результаты представлены в таблице, Из таблицы следует, что высокая сохранность эритроцитов отмечается при до- 20 бавлении криопротектора ПЭО-1500 на первом этапе в концентрации 10 — 15%, на втором — 35 — 40%.

При добавлении ПЭО в концентрациях выше или ниже заявляемых наблюдается 25 снижение сохранности эритроцитов. При введении íà II этапе ПЭО в концентрации выше 40% происходит эгрегация эритроцитов, в связи с чем эту концентрацию не исследовали. 30

По сравнению с прототипом сохранность увеличивается на 25 — 30%.

Для подтверждения функциональной полноценности эритроцитов после крио- 35 консервирования приводится расчет процента гемолиза по формуле

Процент гемолиза криоконсервированных эритроцитов в зависимости от способа добавления криопротектора

n = 5 представлен в таблице

Гематокритная величина эритромассы до смешивания с криопротектором составляла от 0,7 до 0,8, т.к. получалась путем спонтанного осаждения. РН эритромассы был в пределах 7,05 — 7,2.

Изменение криоскопическим методом осмолярности надстоя после смешивания с криопротектором не дает достоверных результатов, Это связано с высокой концентрацией полимера, при которой раствор не кристаллизуется, а переходит в аморфное состояние, Определить осмотичность удается лишь в разбавленных растворах полимеров.

Осмотичность 5%-ного раствора ПЭО1500, приготовленного на основе 2%-ного раствора среднего цитрата натрия. составляет 100 мосм/л при определении криоскопическим методом на осмометре ОМКА

1 Ц-01.

Формула изобретения

Способ криоконсервирования эритроцитов, включающий добавление к эритромассе криопротектора полиэтиленоксида мол, м, 1500 до конечной концентрации 15% с последующим замораживанием, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения сохранности функциональной полноценности эритроцитов, добавление криопротектора осуществляют в два этапа — сначала в концентрации 10 — 15% затем 35 — 40%.

1766345

Таблица2

С оста в ител ь fl. Êo H þõo Bà

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор Н.Король

Редактор С.Кулакова

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Заказ 3491 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5