Способ получения экстракта рогов сайги

 

Изобретение относится к медицине и медицинской промышленности, а именно к способам получения экстракта рогов сайги. Целью изобретения является интенсификация способа. Поставл енная цель достигается тем, что в качестве сырья дополнительно используют средний слой рогов, сырье измельчают на дезинтеграторе до порошкообразного состояния, экстракцию проводят дистиллированной водой при 20-25°С в течение мин. при соотношении сырье: растворитель 1:50 с одновременным воздействием ультразвуком. 2 ил., 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ()9) (1 I ) (5I)5 А 61 К 35/32

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Яу

,Д," 1

»" ».„

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4917726/14 (22) 10.12.90 (46) 15.05.93. Бюл. М 18 (75) М.А,Алиев, В.П.Верболович, Ю.К.Подгорный, Л.M,Ïîäãîðíàÿ, Ю.П.Еремин, С.М. Верменичев, Г.А.Денисов, Л. П, Зарогацкий и В.А.Загородний (56) Нестеренко И.Ф., Брехман И,И. и др.

Фармакологические исследования препарата из рогов сайги. Владивосток, 1984. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСТРАКТА РОГОВ САЙГИ

Изобретение относится к биологической и медицинской химии и касается получения биологически активных веществ, обладающих фармакологическим действием.

Целью настоящего изобретения является расширение сырьевой базы, используемой для получения биологически активных соединений, повышение выхода продукта и увеличение его активности. Для расширения сырьевой базы предлагается использовать рога сайги, а препарат, получаемый этим способом, назвать сайгорином.

В экспериментах, позволяющих оценить резервные возможности организма по времени плаванья животных было установлено, что экстракт из рогов сайги оказывал стимулирующее действие (табл.1). Метод плаванья и ему подобные являются исключительно трудоемкими. При отработке метода получения сайгорина было установлено наличие у препарата донорных свойств, т.е. наличие соединений с. подвижным атомом водорода. Высокая биологическая активность соединений с подвижным атомом во(57) Изобретение относится к медицине и медицинской промышленности, а именно к способам получения экстракта рогов сайги.

Целью изобретения является интенсификация способа, Поставленная цель достигается тем, что в качестве сырья дополнительно используют средний слой рогов, сырье измельчают на дезинтеграторе до порошкообразного состояния. экстракцию проводят дистиллированной водой при 20-25 С в течение 5-7 мин. при соотношении с ы рье растворитель 1:50 с одновременным воздействием ультразвуком. 2 ил., 4 табл. ь»

1 дорода обусловлена их восстановительными свойствами, К известным соединениям, обладающим такой способностью, можно отнести глутатион, свободная SH-группа ко- Б торого обуславливает его свойства как внут- . римолекуля рного восстановителя и в связи с, этим его широкое участие в метаболизме.

С присутствием подвижного водорода связана биологическая роль НАДН и НАДФН.

Донорами водорода выступает ряд восста- Ф ь новленных форм органических соединений, Q например аскорбиновая кислота, выполня- О ющая роль природного антиоксиданта и др. С) установлено, что между продолжительностью плаванья животных и донорными свойствами введенного препарата имеется линейная зависимость (фиг.1), в связи с чем в дальнейшем при отработке способа пол- . учения сайгорина контроль за его активностью осуществляли по этому показателю.

На фиг,1 показана зависимость времени плаванья мышей от количества введенного препарата, оцениваемого по наличию донорных свойств; на фиг.2 — зависимость выхода прс)дукта от условий экстракции, где

1814900

1 — традиционные методы экстракции; 2— метод дезинтеграции со сдвигом; 3 — дезинтеграция со сдвигом + воздействие предгиперзвука.

Для Ьпределения донорных свойств существуют различные методы, однако в силу целого ряда присущих им недостатков нами использован собственный способ определения этого показателя. Для этого в кювету люминометра вносят 250 мкл и 0,1 M 4>осфатного буфера, рН 8,0; 50 мкл 5 10 М раствора пероксидазы хрена и помещают в кюветный блок прибора. Реакцию запускают введением 200 мкл 5 10 3 M раствора люминола, содержащего 7 10 М пере«иси водорода и на ленте самописца записывают кинетику реакции вплоть до ее полного завершения, Площадь под кинетической кривой принимают эа 100 . Регистрируют кинетику реакции в присутствии исследуемых проб, определяют площади под кинетическими кривыми и по величине их снижения судят об активности исследуемых проб. За единицу активности принято количество. препарата, которое вызывает 50$ ингибирование свечения, возникающего в реакции пероксидазного окисления люминола.

Проведенные исследования показали, что биологической активностью обладают только чехол и средний слой рогов, в отличие от ядра, где такие свойства не обнаружены (табл.2), В связи с этим в дальнейшем для получения сайгорина берут только чехол и средний слой,. что позволяет уменьшить количество примесей в целевом продукте, приблизительно на 30 снизить колйчество перерабатываемого в дальнейшем сырья, повысить его удельную активность.

Для достаточно полной и эффективной экстракции необходимо сочетание нескольких факторов: правильный выбор экстрагентов, степень измельчения, условия экстракции (температура, время и т,п.).

В прототипе при анализе предшествоФ вавших методов получения препарата отмечается, что простое иэмельчение пантов с многократным эмульгированием не обеспечивает ни высокого качества препарата, ни его удовлетворительного выхода, Для повышения выхода целевого продукта в прототипе предложено перед измельчением проводить обработку пантов острым паром.

Такая обработка очевидно позволяет снизить требования к качеству измельчения, однако не может способствовать улучшению качества продукта. Это обусловлено тем, что высокая температура при термической обработке является причиной денатурации термолабильных белковых соединений и, в первую очередь, обладающих биологической активностью. Снижение биологической активности пантов при термообработке водой температурой 98-99 С в течение 100 + 40 мин отмечено при разработке способа консервации пантов, в связи с чем авторами предложено сократить время заварки пантов до 30 мин + 30 мин и за

10 счет этого на 18,7 повысить их биологическую активность.

Проведенный анализ недостатков, присущих аналогам и прототипу приводит к за1 ключению, что для повышения выхода

15 продукта и увеличения активности препарата (а следовательно, повышения эффективности производства) необходимо: 1) улучшение технологии измельчения, 2) использование зон. обладающих биологиче20 ской активностью. 3) применение щадящих режимов экстракции.

С целью повышения выхода продукта

1 был разработан способ дезинтеграции ткани рогов до протоплазмы. Для этого сырье

25 растирают до порошкообраэного состояния в зазоре между поверхностями охватывающего и охватываемого тел, последнему из которых придают прецессионное колебание, обеспечивающее удельное давление, З0 равное пределу прочности клеток обрабатываемого слоя рогов, Сочетание сжатия с одновременным сдвигом создает условия для повышения эффективности последующей экстракции. Для подтверждения целесооб"35 разности такого подхода был проведен сравнительный анализ эффективности тра- . диционных методов измельчения (удар. давление, строгание и т.п.) и использованного метода дезинтеграции. С целью сохранения

40 активности препарата экстракцию проводят при температуре 20-25ОС, используя для перемешивания магнитную мешалку.

Для упрощения и удешевления процесса была предпринята попытка заменить эта45 нол дистиллированной водой.

Предпосылкой и обоснованием этого послужило то, что в ряду растворителей для хроматографии дистиллированная вода является более полярным соединением. Ре50 зультаты сопоставительного анализа представлены в табл.З. Видно, что водные экстракты при одном и том же объеме пробы в большей степени снижают светосумму свечения (т.е. содержат большее количество

55 активного вещества) как для чехла, так и для среднего слоя. Нами проведен расчет количества экстракта, который необходим для снижения светосуммы свечения íà 50 (Vsp). Как видно иэ табл.2,водного экстракта из чехла и среднего слоя нужно в 1,6 и 2,3

1814900

Таблица 1

Зависимость времени плавания мышей от количества введенного препарата раза меньше, чем спиртового, т,е, во столько же раз соответственно эффективнее экстракция дистиллированной водой в данных условиях, В связи с этим можно считать, что данная методика экстракции значительно 5 дешевле и экономически оправдана.

При излучении зависимости выхода продукта от времени экстракции (фиг,2) видно, что использование описанного метода дезинтеграции сырья по сравнению с тра- 10 диционным позволяет в 1,8-2,0 раза повысить выход целевого продукта при более чем десятикратном сокращении времени экстракции, замене этанола широко доступной дистиллированной водой, проведение 15 процесса извлечения при температуре 20—

25 С, Учитывая данные, свидетельствующие о повышении биологической активности консервируемых пантов при сокращении 20 сроков термообработки было исследовано влияние 60-минутной инкубации полученного экстракта при 80 С, которое обнаружило снижение активности препарата на

30 — 50%. 25

С целью более полного извлечения целевого продукта из сырья проведено воздействие на систему сырье-растворитель в процессе экстракции ультразвуковыми колебаниями мГц-диапазона (F = 2,64 мГц, 1- 30

0,6 — 1,0 вт/см, Т = 600 — 900 с), что позволило повысить выход продукта дополнительно на 10 — 12% (фиг.2, кривая 3), Экстракцию проводят при соотношении сырье;растворитель (KzO) 1;50 (вес 35 сырья в гр: обьем воды в мл), Это соотношение было выбрано при обработке метода как оптимальное, позволяющее извлечь 9096 целевого продукта, Дальнейшее увеличение обьема экстрагента, не приводя к 40 существенному увеличению выхода продукта, затрудняет дальнейшую работу, поскольку на последующих этапах выделения приходится иметь дело с большими обьемами жидкости, уменьшение количества Н О 45 ниже указанного соотношения ведет к быстрому росту потерь активного вещества на этапе экстракции, Перемешивание осуществляют на мешалке любого типа при комнатной температуре в течение 10-15 мин, после чего жидкость центрифугируют при

4500 g в течение 10 мин. Надосадочную жидкость сливают, подвергают лиофильной сушке и собирают целевой продукт, Лиофилизация не приводила к снижению активности, что было установлено при сопоставлении активности вещества до и после процесса лиофилизации (табл.4).

Способ осуществляют следующим образом (конкретный пример):

Из исходного сырья (рога сайги) удаляют сердцевину (ядро). Оставшуюся часть растирают до порошкообразного состояния, как указано в описании на стр,5. Десять грамм порошка заливают 500 мл дистиллированной воды, помещают на магнитную мешалку, сверху помещают излучатель генератора УЗ-колебаний (F=2,64м Гц, (=0,7

Вт/см ) таким образом, чтобы поверхность излучателя касалась воды, проводят процесс экстракции 10-15 мин, центрифугируют 10 мин при 4500 g, надосадочную жидкость собирают и подвергают лиофилизации, получают 2,5-3,5 г целевого продукта.

Формула изобретения

Способ получения экстракта рогов сайги, включающий измельчение наружного слоя рогов, экстракцию с последующим отделением осадка, отличающийся тем, что, с целью интенсификации способа, в качестве сырья дополнительно используют средний слой рогов, сырье измельчают на дезинтеграторе до порошкообразного состояния, экстракцию проводят дистиллированной водой при 20-25 С в течение 5-8 мин при соотношении сырье;вода 1:50 с одновременным воздействием ультразвука.

1814900

Таблица 2

Активность препарата по светосумме подавления свечения в 7;

Таблица 3

Зависимость активности экстракта от вида экстрагента

Таблица 4

Влияние лиофильной сушки на активность препарата

Покаэатель

Активность и епа ата, Е

Водный раствор препарата

После лиофильной сушки

583+42

601 2:52

t814900, вл-Ь арепараяп,ed.

140 И дреиЯ мада(ьУ, мк

run rZn

% Й МОЙ

О И

Ts cmpueruu, sue.

Составитель Л. Конюхова

Техред М.Моргентал Корректор В, Петраш

Редактор. Заказ 1600 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101