Способ получения сорбента для аффинной хроматографии

 

Сущность изобретения: целлюлозу обрабатывают водным раствором гепарина в присутствии глутарового альдегида при массовом соотношении целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида, равном (1-7):(1-5):1- 7 при 60-80°С с последующей обработкой этанолом в присутствии серной кислоты при 60-70°С и рН 3,5-4,5.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

1818143 Al (я)5 В 01 J 20/22

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) 4 @, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ вЂ” " :::,;": ." /

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4488422/26 (22) 30.09.88 (46) 30.05.93. Бюл. М 20 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт текстильно-галантерейной промышленности (72) В.В.Шурыгина, 3.Н,Степнова, С.В.Стур-. чак, В,В.Рыльцев и В.Н.Филатов . (56) Струкова С,М, и др. Активация гепаринсефарозой превращения протромбина в претромбин 1. — Биохимия, 1981, т. 46, в. 5, с. 905. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА ДЛЯ

АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ (57) Сущность изобретения: целлюлозу обрабатывают водным раствором гепарина в присутствии глутарового альдегида при массовом соотношении целлюлозы, гепарина и глутарового an ьде гида, равном (1-7):(1-5):17 при 60-80 С с последующей обработкой этанолом в присутствии серной кислоты при

60 — 70 С и рН 3,5 — 4,5.

Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно к способу получения производных целлюлозы и гепарина, которые могут найти применение в качестве сорбента в аффинной хроматографии.

Цель изобретения — ускорение и упрощение процесса.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения сорбента для аффинной хроматографии, включающем обработку гидроксилсодержащего полимера водным раствором гепарина и выделение целевого продукта, в качестве гидроксилсодержащего полимера используют целлюлозу и обработку гепарином проводят в присутствии глутарового альдегида при массовом соотношении целлюлозы гепариЭ на и глутарового альдегида (1 — 7):(1 — 5):(1 — 7) и дополнительно проводят обработку этанолом в присутствии серной кислоты при

60-75 С и рН 3,5-4,5.

Пример 1, 0 14 r гепарина растворяют в 3,6 мл дистиллированной воды и в 0,56 мл

25%-ного раствора глутарового альдегида рН 5. 0,14 г целлюлозы в виде трикотажного полотна помещают в приготовленный раствор при модуле 30.

Массовое соотношение на 1 стадии реакции целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 1:1:1 соответственно. Реакцию проводят при 75 С в течение 40 мин.

Сорбент, полученный на 1 стадии реакции, отжимают и помещают в раствор этилового спирта, содержащего концентрированную серную кислоту, при рН 4,5.

Вторую стадию реакции проводят 20 мин при 75 С. Затем оставшуюся серную кислоту нейтрализуют 1%-ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором, Полученный сорбент высушивают на воздухе и проверяют на содержание иммобилизованного гепарина по цветной реакции с синим красителем азуром 1. Сорбент содержит 150 мг гепарина на 1 r носителя.

Пример 2. 0,70 r гепарина растворяют в 3,6 мл дистиллированной воды и в 0,56 мл

25%-ного раствора глутарового альдегида при рН 5. 0,14 г целлюлозы в виде медицинской марли помещают в приготовленный раствор при модуле 30, 1818143

Массовое соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 1:5,1.

Реакцию проводят при 70 С в течение 50 мин.

Сорбент, полученный на первой стадии реакции, отжимают и помещают в раствор серной кислоты в этиловом спирте при рН

3,5. Вторую стадию реакции проводят 30 мин при 65 С. Затем серную кислоту нейтрализуют 1 -ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором. Полученный сорбент высушивают на воздухе. Содержание гепарина

250 мг на 1 г носителя.

Пример 3. 0,14 г гепарина растворяют в 0,5 мл дистиллированной воды и в 0,56 мл

257;-ного раствора глутарового альдегида при рН 5. 0,14 г целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором до привеса 450 .

Соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 1:1;1 соответственно. Реакцию проводят при 60 С в течение 50 мин. Полученный сорбент

Отжимают и помещают в раствОр серной кислоты в этиловом спирте при рН 4.

Вторую стадию реакции проводят 30 мин при 60 С. Серную кислоту нейтрализуют 1 -ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором, Затем сорбент высушивают на воздухе, содержание иммобилизованного гепарина проверяют по цветной реакции с синим красителем азуром 1. Сорбент содержит 150 мг гепарина на 1 г носителя.

Пример 4. 4 r гепарина растворяют в

18 мл дистиллированной воды и в 12 мл

25 -ного раствора глутарового альдегида при рН 5.

3 г целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором и отжимают на вальцах до привеса

450о

Соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 3:1:3. Реакцию проводят при 75 С в течение 10 мин, Сорбент, полученный на 1 стадии реакции, отжимают и помещают в раствор серной кислоты в этиловом спирте при рН 4.

Вторую стадию реакции проводят 30 мин при 70 С. Оставшуюся серную кислоту нейтрализуют 1 -ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором. Полученный сорбент высушивают на воздухе. - Содержание иммобилизованного гепарина в сорбенте составляет 160 мг гепарина на 1 r носителя.

Пример 5. 1 г гепарина растворяют в

40 мл дистиллированной воды и в 20 мл

25 -ного раствора глутарового альдегида при рН 5.

5 г целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором и Отжимают на вальцах до привеса

400 . Массовое соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно

5:1:5. Реакцию проводят при 80 С в течение

45 мин. Полученный сорбент отжимают и помещают в раствор серной кислоты в этиловом спирте при рН 4.

Вторую стадию реакции проводят 25 мин при 70 С. Затем оставшуюся серную кислоту нейтрализуют 1 íûì раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором, Полученный сорбент высушивают на воздухе. Содержание иммобилизованного гепарина составляет 140 мг на 1 r носителя.

Пример 6. 1 r гепарина растворяют в

42 мл дистиллированной воды и в 28 мл

25 -ного раствора глутарового альдегида при рН 5.

7 r целлюлозы в виде трикотажного полотна пропитывают приготовленным раствором и отжимают до привеса 400, Массовое соотношение целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида равно 7;1:7.

Реакцию проводят 50 мин при.80 С; Сорбент, полученный на 1 стадии реакции, отжимают и помещают в раствор серной кислоты в зтиловом спирте при рН 4. Вторую стадию реакции проводят 30 мин при

65 С, Оставшуюся серную кислоту нейтрализуют 1 -ным раствором бикарбоната натрия и промывают сорбент физиологическим раствором. Полученный сорбент высушивают на воздухе и проверяют на содержание иммобилиэованного гепарина.

Сорбент содержит 110 мг гепарина на 1 г носителя.

Формула изобретения

Способ получения сорбента для аффинной хроматографии, включающий обработку гидроксилсодержащего полимера водным раствором гепарина и выделение целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, в качестве гидроксилсодержащего полимера используют целлюлозу и обработку епарином проводят в присутствии глутарово<-О альдегида при массовом соотношении целлюлозы, гепарина и глутарового альдегида (1 — 7):(1 — 5):(1 — 7) и дополнительно проводят обработку этанолом в присутствии серной кислоты при 60—

75 С и рН 3,5-4,5,