Способ получения пробиотика для животноводства, преимущественно птицеводства

 

„, RU,, 2000116 С (я)5 А 61 К 35/бб

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ " " ецг--, ®Л

К ПАТЕНТУ (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИКА

ДЛЯ ЖИВОТНОВОДСТВА, ПРЕИМУЩЕСТВЕННО ПТИЦЕВОДСТВА (57) Использование: микробиологическая промышленность, пробиотик для птицеводства, молочнокислые бактерии, Сущность изобретения заключается в раздельном

О

О

A (21) 5003828/13 (22) 22,07.91 (46) 07,09.93. Бюл, М 33-36 (71) Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К.Заболотного (72) Подгорский В.С., Коваленко Н.К„Головач Т.Н., Касумова С.А., Мацюк В.М., Гавриленко М.H., Палеха С,И., Немировская

Л.Н., Резанович Т.B., Батюжевский Ю.Н., Жук P.Ê., Шабельник Г.Д. (73) Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К.Заболотного (56) Авторское свидетельство СССР

N 1751891, кл. А 61 К 35/66, 1989.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается производства пробиотиков для птицеводства.

Известны способы получения препаратов на основе молочнокислых бактерий (ацидофилин, ПАБК, СБА), которые рекомендуют испольэовать как в птицеводстве, так и в животноводстве. Они экологически чисты, нейтрализуют действие ксенобиотиков на макроорганизм и представляют альтернативу использованию антибиотиков о кормлении животных.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эфкультивировании при оптимальных условиях, сепарировании, высушивании и смешивании монокультур селекционированных штаммов автохтонной микрофлоры пищеварительного тракта птиц Entегоcoclus

facclum ВКПМ В-2579, Lactobacillus

Salivarius ВКПМ В-5001; Lactobaclltus

fermentum ВКПМ В-5005. Культуры хорешо прикрепляются к стенке пищеварительного тракта, угнетают условно-патогенную и патогенную микрофлору. устойчивы к действию антибиотиков тетрациклинового ряда. способны синтезировать БАВ (витамины, аминокислоты). Активность пробиотика 50 и/или 10 млрд.кл./г при следующем соотношении клеток соответственно 9 — 9,8:0.11,0:0,1 — 1,0. Изобретение может быть использовано в птицеводстве для формиро- а вания и стабилизации микробного ценоза пищеварительного тракта птиц, увеличения их продуктивности, снижения отрицательного воздействия стресса. 1 табл. фекту является способ получения пробиотика для сельскохозяйственных животных, предусматривающий раздельное культивирование, сепарирование и сушку lUTBMMOB

Entегоcoccus faeclum u Lactobaclllus

salivarlus с последующим смешиванием сухих монокультур Я. Препарат разработан для крупного рогатого скота и для его получения используются штаммы, обладающие колонизационной способностью по отношению к эпителию желудочно-кишечного тракта телят. Однако пищеварительный тракт птиц имеет свои физиологические особенности. специфическую аутофлору, что не учтено в прототипе.

2000116

Целью изобретения является способ получения пробиотика "Лактин — К" для направленного формирования и стабилизации микробного ценоза пищеварительного тракта птиц, увеличения их продуктивности, снижения отрицательного воздействия стрессов..

Это достигается использованием в качестве продуцентов селекционированных культур индигенной микрофлоры пищеварительного тракта птиц Entегоcoccus

faeclum, Lactobaclllus sallvarlus u

Lfermentum, которые раздельно выращивают при оптимальных условиях и получают высокие титры клеток в культуральной жидкости, сухих монокультурах и готовом препарате., Нормальная микрофлора цыплят формируется в течение первого месяца после вылупления. Состав молочнокислых бакте- 20 рий в этот период изменяется от знтерококков до преобладания определенных видов лактобацилл. Антагонистическая активность обнаружена у 70 штаммов

1,salivarlus. 40 — б fermentum, 257 — 25

L.buchneri и практически у всех энтерококков. Установлено, что отдельные штаммы, обладающие значительной антагонистической активностью. способны адгезировать на эпителиальных клетках тонкого кишечни- 30 ка кур, колонизируя его, синтезировать витамины группы В и другие биологические активные вещества, устойчивы к действию ряда антибиотиков. Штаммы, составляющие основу препарата, селекционированы 35 по вышеупомянутым признакам и депонированы во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов института

"ВНИИгенетика". Представители селекционированных видов лактобацилл и антеро- 40 кокков наиболее часто встречаются в составе нормальной микрофлоры пищеварительного тракта птиц.

Штамм Е faeclum ВКПМ В-2579 — факультативный анаэроб, каталазоотрица- 45 тельный, образует аммиак из аргинина, гидролизует эскулин, растет в среде с рН

9,6, 6,57ь NaCI. 407ь желчи, 4 таурохолата натрия, выживает после прогрева при 63 С в течение 30 мин, восстанавливает молоко с 50 лакмусом и метиленовой синью, сбраживает манноэу, галактозу, трегалозу, мальтозу, сахарозу. раффиноэу, глюкозу, лактозу, салицин, целлобиозу, фруктору. Растет при температуре 10 и 50 С. 55

Штамм. синтезирует витамины группы

8: тиамин 1,0-1,6 мкг/гСВ, рибофлавин 2022,5, никотиновую кислоту 450-675, пиридоксин 2--3,7; угнетает рост патогенных кишечных папочек, сальмонепл, протея, стафипококка, шигелл; синтезирует ряд аминокислот, в том числе незаменимые: фенилаланин 24 мкг/мл, лейцин 29, лизин 5, треонин 11: обладает высоким индексом адгезивности к энтероцитам кишечника цыплят (4,68 + 2,67). Устойчив и малочувствителен (диаметр зон угнетения роста до 10 мм) к действию тетрациклина, олеандомицина, метициллина. оксациллина, аминогликозидных антибиотиков(стреп-томицина, канамицина).

Штамм обладает антистрессовым и противоопухолевым действием.

Оптимальная температура для роста

37-44 С, рН среды .5,5-6,7, концентрация углеводов (глюкозы, сахарозы) 1,7-2,27ь, аминного азота ферментолизата БВК 20-60 мг,(,. Достигает высокий удельной скорости роста (1,4 ч ).

Штамм 1.saiivarlus ВКПМ В-5001 — факультативный анаэроб, каталазоотрицательный, сворачивает и слабо пептониэирует молоко, растет при 40 желчи, гомоферментативный, растет при 45 С. но не при 20 и 50 С, сбраживает фруктозу, галактозу, лактоэу, мальтозу, маннит, маннозу, раффинозу, сахарозу, трегалозу, глюкозу, мелибиоэу. Синтезирует витамины группы В: 950 мкг/гСВ никотиновой кислоты, 95 рибофлавина, 3,1 пиридоксина, 10 тиамина; аминокислоты: апанин 17 мкг/мл, цистеин 32, лейцин 12, лизин 4; угнетает рост патогенных кишечных палочек, протея, сальмонелл, стафилококков. Адгеэирует к знтероцитам кишечника цыплят, обладая колонизационной реэистентностью (ИАМ

1,3 +. 0,51). Устойчив и малочувствителен к тетрациклину, олеандомицину, метициллину, оксациллину, аминогликоэидам (стрептомицину, канамицину).

Оптимальные условия для роста: температура 42 — 48 С, Рн среды 5.8 — 6,0, концентрация углеводов (глюкозы. сахарозы)

2,2-2,57 „аминного азота ферментолизата

БВК 64 — 88 мг7ь. Скорость роста при оп1имальных условиях достигает 1,0 ч .

Штамм (fermentum ВКПМ В-5005 — факультативный анаэроб, каталаэоотрицательный. гетероферментативный, сворачивает и слабо петониэирует молоко, растет в среде с 4 тауроходата Na, растет при 45 С, но не при 15 С. Сбраживает фруктозу, галактоэу, глюкозу, лактозу, мальтозу, раффинозу, сахарозу, мепибиоэу, рибоэу.

Синтезирует витамины группы В: 125 мкг/rCB никотиновой кислоты, 35 рибофлавина, 1,0 пиридоксина, 10,5 тиамина, угнетает рост патогенных кишечных палочек, сальмонелл, протея, кпебсиелп.

2000116

Количество молочнокислых бактерий в содержимом зоба 15-дневных цыплят

Обладает способностью адгеэировать к энтероцитам кишечника цыплят (ИАМ

1,42 «+. 0,58), Устойчив и малочувствителен к действию тетрациклина, левомицитина, олеандомицина, пенициллина, оксациллина, метициллина.

Оптимальные условия для роста: температура 42-48 С, рН среды 5,8-6,0, концентрация углеводов (глюкозы, сахароэы)

2,2-2,5ф„аминного азота ферментолизата

БВК 64-88 мг . Скорость роста при оптимальных условиях достигает 0,7 ч

Культивирование, сепарирование и сушку штаммов осуществляют раздельно.

Раздельное культивирование штаммов позволяет провести этот процесс при оптимальных для каждой культуры параметрах, что обеспечивает получение высокого титра клеток в культуральной жидкости и увеличение выхода готового препарата.

Пример 1. С целью получения препарата готовят питательную среду, содержащую ферментативные гидролизаты крахмала и БВК в концентрациях, оптимальных для роста культур. Вносят 0,1 посевного материала и выращивают при оптимальных условиях с постоянной работающей мешалкой, без подачи воздуха; нужное рН поддерживают 20$-ным водным аммиаком. Длительность ферментаций в зависимости от культуры 9-18 ч, титр клеток в культуральной жидкости 1-9 млрд/мл. Клетки концентрируют в 10-12 раз с помощью сепарирования и высушивают на распылительной сушилке при температуре воздуха на входе 95 C и на выходе 65 С для энтерококков и 65 С на входе и 40 С на выходе для лактобацилл, Влажность порошка не более

10, активность 150 — 200 млрд.кл/г для эн5

40 терококков и 1-10 млрд.кл/г для лактобацилл, Препараты сухих монокультур

Е faeclum, 1..sallvarlus, L.fårmåntum смешивают, чтобы получить соотношение клеток

9-9.8:0,1-1,0:0,1 — 1.0 и стан,чартизируют кукурузной мукой или цеолитом активности

50 и/или 10 млрд.кл/г.

Пример 2. Пробиотик получают, как описано выше, но с использованием при приготовлении питательной среды свекловичной мелассы вместо ферментолизата крахмала (учитывая содержание сахара в мела ce).

f1 р и м е р 3. Пробиотик получают, как описано выше, но в питательную среду дополнительно вносят 0,3 кукурузного экстракта в качестве источника ростовых веществ.

Применение пробиотика в птицеводстве обеспечивает формирование и стабилизацию нормального микробного ценоэа пищеварительного тракта молодняка цыплят, повышение суточных привесов и сохранности, снижение затрат корма и отрицательного действия стрессов.

Формула изобретения

Способ получения пробиотика для жиl вотноводства, преимущественно птицеводства, путем раздельного культивирования, сепарирования и сушки штамма

Entегоcoccus faecfum ВКПМ N В-2575 и молочнокислых бактерий с последующим смешиванием сухих монокультур, о т л и ч а юшийся тем, что из молочнокислых бактерий используют штаймы Lactobaclllus

Sallvarlus BKflM N В-5001 и Lactobaclllus

fermentum ВКПМ N В-5006, а монокультуры смешивают при соотношении клеток 99,8:0,1-1,0:0,1-10 соответственно.