Способ профилактики чумы плотоядных

 

Использование: вирусология. Сущность изобретения: для профилактики чумы плотоядных лиофилизированную вакцину против чумы плотоядных регидратируют инактивированным формалином вирус энтерита норок с титром 10^4,0-4,5ИД₅₀/мл с добавлением метабисульфита натрия в конечной концентрации 2,8 - 4,3 г/л. Растворитель добавляют к вакцине в равных соотношениях. Введение осуществляют животным в возрасте 8 - 10 недель однократно в течение 2 ч с момента регидратации вакцины. 5 табл.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано на предприятиях биологической промышленности для производства средств специфической профилактики вирусного энтерита и чумы плотоядных.

Вирусный энтерит - острое специфическое заболевание норок, характеризуется воспалительно-некротическими поражениями желудочно-кишечного тракта, мезентериальных лимфатических узлов и селезенки; поражает норок всех возрастов, но чаще всего молодняк, отход среди которого составляет от 10 до 50% .

Чума плотоядных - также остропротекающее контагиозное заболевание плотоядных, в том числе и норок, характеризующееся лихорадкой, катаральным воспалением слизистых оболочек дыхательного и пищеварительного трактов, поражением нервной системы и кожи; поражает представителей семейств псовых и куньих всех возрастов, но наиболее восприимчив молодняк животных, среди которых отход составляет до 70-80% .

Указанные заболевания являются одной из основных причин отхода молодняка в раннем возрасте, наносящего большой экономический ущерб.

В настоящее время иммунизацию пушных зверей проводят раздельно.

Известен способ получения вакцины и иммунизации против чумы плотоядных, согласно которому молодняку зверей в возрасте 8-10 недель вводят парентерально вакцину, содержащую невирулентный вирус чумы, адаптированный в культуре клеток японских перепелов, в дозе 100-200 ТЦД₅₀.

Также известен способ получения вакцины и иммунизации против вирусного энтерита норок. В период после создания иммунитета против чумы плотоядных, т. е. в возрасте 12-14 недель, молодняку норок вводят инактивированную вакцину, полученную на основе вируса, выращенного в первично-трипсинизированной культуре клеток почки котенка, в питательной среде, содержащей среду Иглу и сыворотку крупного рогатого скота.

Известные способы иммунизации против чумы и вирусного энтерита имеют ряд недостатков.

При раздельном способе иммунизации щенков привитые против чумы в возрасте 8-10 недель оказываются незащищенными в отношении вирусного энтерита. Для создания напряженного иммунитета против вирусного энтерита требуется дополнительно 4-5 недель после вакцинации зверей против чумы.

Ввиду того, что щенки в возрасте с 7 недель обладают повышенной восприимчивостью к вирусному энтериту, среди них наблюдается значительный отход при попадании вируса энтерита.

Целью изобретения является повышение иммуногенности противочумной вакцины и создание напряженного иммунитета в более раннем возрасте у молодняка норок против обоих заболеваний.

Поставленная цель достигается тем, что к энтеритному компоненту с титром вируса 10^4,0-10^4,5 ИД₅₀/мл добавляют метабисульфит натрия в конечной концентрации 2,8-4,3 г/л и используют его в качестве растворителя чумного компонента (с титром 10^2,8-10^4,3 ТЦД₅₀/мл) соотношении 1 : 1. Готовую к употреблению вакцину применяют для иммунизации норок в возрасте 8-10 недель. Вакцинацию проводят в течение 2 ч с момента смешивания в дозе по 1 мл. внутримышечно при содержании в прививочной дозе вируса чумы 10^2,0-10^3,0 ТЦД₅₀/мл и антигена вирусного энтерита 10^4,0-10^4,5 ИД₅₀/мл.

П р и м е р 1. Изготовление чумного компонента.

Аттенуированный штамм вируса чумы плотоядных выращивают.

Используют аттенуированный штамм "ЭПМ" вируса чумы плотоядных, депонированный под номером "10-76", который получен путем многократных пассажей дикого вируса в культурах клеток животных и человека.

Для изготовления чумного компонента вирус выращивают на культуре первично-трипсинизированных клеток эмбрионов японских перепелов в питательной среде, содержащей раствор гидролизата лактальбумин или среду 199 и сыворотку крупного рогатого скота. Полученную вируссодержащую жидкость с вакцинным штаммом вируса лиофильно высушивают, чтобы сохранить длительное время без потери активность живого вакцинного вируса в присутствии 4,5-5% массы сорбита и 1,4-6% массы желатозы. Чумной компонент хранят при плюс 4-6^оС в течение 1 года. Титр вируса в сухой вакцине равен 10^2,8-10^4,3 ТЦД₅₀/мл.

П р и м е р 2. Изготовление энтеритного компонента.

Энтеритный компонент ассоциированной вакцины готовят путем выращивания в первично-трипсинизированной культуре клеток почки котенка 2-6-месячного возраста вирулентного штамма вируса энтерита норок (штамм "Родники", депонированный по N "Р-1631"). После трипсинизации в суспензию клеток вносят ультрафильтрат нативного вируса энтерита норок "Р" и выращивают в питательной среде, включающей среду 199 и сыворотку крупного рогатого скота, при температуре 37^оС в течение 9-11 дней. По достижении титра гемагглютинации не ниже 1 : 16 - 1 : 64 ГАЕ/мл проводят первый слив культуральной жидкости, добавляют на монослой клеток поддерживающую среду и снова инкубируют в течение 3-4 дней. Первый слив культуральной жидкости хранят при 2-4^оС. По истечении этого срока матрасы с содержимым замораживают при температуре минус 20^оС, затем оттаивают. Все вирусные сборы объединяют и определяют титр вируса, который должен быть по РГА не ниже 10⁴ ИД₅₀/мл. Культуральный вирус энтерита норок инактивируют раствором формальдегида в соотношении 0,1% формалина к объему вируса. Инактивацию проводят при 37^оС в течение 20 ч. После инактивации вирусный сбор проверяют на стерильность путем высева на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом в среду Сабуро, после чего вносят 3% -ный раствор гидроокиси алюминия в соотношении 10-15% к объему вирусного сбора, тщательно перемешивают и фасуют.

П р и м е р 3. Приготовление ассоциированной вакцины против чумы и вирусного энтерита (табл. 1).

К вируссодержащему материалу из примера 2 с титром по РГА 10^4,0 - 10^4,5 ИД₅₀/мл добавляют на фосфатно-буферном растворе 20% -ный раствор метабисульфита натрия в конечной концентрации 0,8; 1,4; 2,0; 2,8; 3,2; 4,0; 4,3; 5,0 и 5,8 г/л. К 1 мл каждой из полученных проб с различным содержанием метабисульфита натрия в энтеритной вакцине добавляют по 1 мл культуральной жидкости, содержащей вакцинный вирус чумы в титре 10^3,8 ТЦД₅₀/мл.

В табл. 1 показано, что при значениях концентрации метабисульфита натрия 2,0 и меньше титры вируса чумы снижаются с 10^2,3 до 10^1,3 ТЦД₅₀/мл. Также из табл. 1 видно, что вирус чумы в наиболее высоких титрах получают (сохраняется) в смеси при конечных концентрациях метабисульфита натрия, равных 2,8; 3,2; 4,0 и 4,3 г/л. Дальнейшее повышение концентрации метабисульфита натрия не оказывает существенного влияния на титры вируса чумы. Уменьшение содержания метабисульфита натрия приводит к снижению титра вируса чумы.

Таким образом, оптимальным можно считать содержание метабисульфита, равное 2,8-4,3 г/л.

П р и м е р 4. Сохранность вируса чумы в смешанной вакцине при различной длительности контакта с энтеритным растворителем Материал, полученный в примере 3, выдерживают при комнатной температуре в течение различных промежутков времени. Из табл. 2 видно, что при содержании метабисульфита натрия, взятого в рабочей концентрации, в течение 2 ч титры вируса чумы сохраняются в значениях, достаточных для создания напряженного иммунитета. Более длительное выдерживание смеси приводит к снижению титров вакционного вируса чумы.

В П р и м е р 5. Влияние срока хранения на иммуногенность чумного компонента в смешанной вакцине Данное определение проводят в биопробах на норках с заражением вакцинированных и контрольных зверей вирулентным штаммом вируса чумы; в исследованных сыворотках крови вакцинированных и контрольных зверей определяли уровень титров противочумных антител в реакции нейтрализации (рН) цитопатического действия (ЦПД) в культуре клеток. Состояние иммунитета у норок определяли через 1 месяц после вакцинации ассоциированным препаратом.

Из табл. 3 видно, что при сроке хранения смешанной вакцины в течение 2 ч из 5-ти вакцинированных после заражения вирусом чумы остались живы все 5 норок. В то же время титры антител были равны в среднем 1 : 32. Увеличение срока хранения смеси вирусных компонентов более 2 ч снижает иммуногенное действие препарата, что приводит к увеличению количества погибших животных после контрольного заражения вирусом чумы и резкому снижению титров противочумных антител в сыворотках крови вакцинированных.

П р и м е р 6. Контроль иммуногенности ассоциированной вакцины.

Оценку защитного действия вакцины, полученной в предыдущих примерах, проводят на щенках норки старше 8-10 недель. Перед вакцинацией готовят смесь, включающую чумной и энтеритный компоненты в титрах соответственно 3,8 ТЦД₅₀/мл и 4,0 ИД₅₀/мл, смешивая их в равных соотношениях. Для этого полученную партию смешанной вакцины вводят внутримышечно 10 неимунным норкам в объеме по 1 мл. Через 4 недели после иммунизации по 5 иммунизированных и 5 контрольных (неиммунных) норок заражают вирулентным вирусом чумы плотоядных (штамм Снайдер Хилл) в дозе по 10³ ЛД₅₀. Других 5 иммунизированных и 5 контрольных (неиммунных) норок заражают вирусом энтерита, штамм "Родники" в дозе по 10⁴ ИД₅₀/норку.

Для сравнения 5 норкам вводят моновакцину против чумы из штамма ЭПМ, а 5 другим норкам вводят вакцину против вирусного энтерита из штамма "Родники". Через 1, 3, 6, 9 и 12 мес у всех иммунизированных и контрольных животных берут пробы сыворотки крови для определения титров антител. Полученные результаты представлены в табл. 4 и 5.

В течение первых 6-ти месяцев титры антител в пробах сыворотки крови при иммунизации по предлагаемому способу были достоверно выше по сравнению с иммунизацией моновакциной.

Как видно из табл. 4 противочумные антитела обнаруживаются в достаточных титрах через 12 мес после вакцинации как ассоциированной, так и моновакциной.

Как видно из табл. 5, противоэнтеритные антитела постоянно присутствуют в пробах сыворотки крови в достаточных титрах через 12 мес после вакцинации как ассоциированной, так и моновакциной. У контрольных, невакцинированных норок антитела появлялись через 3 месяца в более низких титрах, чем у вакцинированных норок, в результате спонтанного пассирования на зверях слабо вирулентных штаммов энтерита норок.

Технико-экономическая эффективность.

При широком производственном испытании в норковедческих хозяйствах предлагаемого метода профилактики чумы и вирусного энтерита с помощью испытуемой вакцины не было отмечено ни в одном случае прорыва иммунитета.

В течение 1987-89 гг. изготовлено в биоцехе 4,5 млн. доз модифицированной энтеритной вакцины (растворитель для сухой вакцины против чумы плотоядных) и реализовано более чем в 50 зверохозяйствах различных регионов страны. Иммунизация норок данным препаратом показала себя только с положительной стороны. Предлагаемая вакцина создает напряженный иммунитет в течение не менее 12 мес, позволяет в 2 и более раза сокращать материальные и трудовые затраты при ее изготовлении и применении, создает иммунитет против обеих инфекций в более короткие сроки, а также позволяет увеличивать производительность труда, экономя рабочую силу на ферме. Этим значительно сокращаются расходы на профилактическую обработку многотысячного поголовья норок зверосовхозов. (56) Авторское свидетельство СССР N 1221787, кл. A 61 K 39/12, 1980.

Патент США N 4224412, кл. C 12 N 7/00, 1980.

Формула изобретения

СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ, включающий регидратацию лиофилизированной вакцины против чумы плотоядных растворителем с последующим введением животным, отличающийся тем, что в качестве растворителя используют инактивированный формалином вирус энтерита норок с титром 10^4,0 - 10^4,5 ИД₅₀/мл с добавлением метабисульфита натрия в конечной концентрации 2,8 - 4,3 г/л, растворитель добавляют к вакцине в равных соотношениях, а введение осуществляют животным в возрасте 8 - 10 недель однократно с течение 2 ч с момента регидратации вакцины.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3