Способ получения пептона

 

Использование: биотехнология, может найти применение в медицине, биотехнологии и генной инженерии. Сущность изобретения: пептон получают, обрабатывая измельченное сырье солевыми растворами, проводят пепсинный и трипсинный гидролиз, отфильтрованный раствор пептона подвергают температурной обработке под давлением в течение 30 - 40 мин. 1 табл.

Изобретение относится к производству белковых препаратов из продуктов животноводства, в частности к производству пептона, может найти применение в медицине, биотехнологии и генной инженерии.

Известен способ получения пептона из продуктов животноводства. Пепсинный гидролиз мясного фарша проводился с подогревом, в качестве источника фермента использовались желудки свиные и крупнорогатого скота [1] .

Недостатком данного способа является низкое качество получаемого пептона, что не позволяет применять его в биотехнологии и генной инженерии.

Известен способ получения пептона, не содержащего чужеродных протеинов, основанный на ферментативном гидролизе плаценты человека, предусматривающий предварительную обработку плаценты человека физиологическим раствором, в качестве ферментов используются пепсин-гидрохлорид, папаин [2] .

Недостатком данного способа является использование труднодоступного сырья - плаценты человека.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому результату является способ получения пептона из продуктов животноводства, в котором пепсинный гидролиз проводится при рН 1,8-2,2 трипсинный гидролиз - при рН 8,0-8,2. В качестве источника фермента использовались слизистая оболочка желудка и поджелудочная железа. Процесс проводился при 45-50^оС в течение 15-20 ч [3] прототип.

Недостатком данного способа является наличие внеклеточных примесей и низкая биологическая активность пептона.

Целью изобретения является повышение биологической активности, т. е. получение высококачественного пептона, пригодного для биотехнологии, молекулярной биологии, генной инженерии и снижение его себестоимости.

Цель достигается тем, что предлагаемый способ включает пепсинный и трипсинный гидролиз, фильтрацию. Согласно изобретению предварительно проводят обработку измельченного сырья солевыми растворами с концентрацией 0,8-1% (хлорида натрия и хлорида калия) для очистки от внеклеточных компонентов исходного материала, полученный отфильтрованный раствор пептона выдерживают при 100-115^оС и давлении 0,04-0,06 МПа в течение 30-45 мин в автоклаве для удаления остаточных примесей (органического и неорганического происхождения), а затем фильтруется.

В патентной и технической литературе признаков, входящих в отличительную часть формулы, а именно предварительная обработка сырья солевыми растворами, температурная обработка отфильтрованного раствора пептона под давлением в течение 30-435 мин с последующей фильтрацией не обнаружено, следовательно, заявляемый способ соответствует критерию "существенные отличия".

Положительный эффект достигается тем, что получают высококачественный пептон, более дешевый, чем пептон фирмы "Difco".

П р и м е р 1. 15 кг замороженного рубца и легкого измельчали, заливали 30 л, 0,9% раствора хлорида натрия при перемешивании. Осадок собирали центрифугированием. В реактор наливали дистиллированную воду в количестве 30 л. При перемешивании добавляли 600-700 мл ортофосфорной кислоты до рН 1,6-1,7 (по рН-метру, рН 2,0-2,2 в качестве источника фермента - 1,2 кг слизистой оболочки свиных желудков, измельченных.

Пепсинный гидролиз вели 6-8 ч при интенсивном перемешивании. Первые три часа осуществляли строгий контроль по рН-метру за реакцией среды. В случае необходимости корректировали рН. По окончании пепсинного гидролиза поднимали температуру реакционной массы до 90^оС. При перемешивании проводили нейтрализацию гидроксидом кальция до рН 8,2-8,5 (1,2 кг), от осадка выпавших солей освобождались центрифугированием.

Трипсинный гидролиз вели при 50^оС, при рН 8,0 источник фермента - поджелудочная железа свиная в количестве 0,6 кг, время - 3 ч.

По окончании триптического гидролиза поднимали температуру реакционной массы до 90^оС. При необходимости проводили нейтрализацию ортофосфорной кислотой до рН 7,0-7,5. От осадка выпавших солей освобождаются центрифугированием. Прозрачный гидролизат автоклавируется при режиме 110-115^оС 0,04-0,06 МПа в течение 30-45 мин. Выбранный режим является оптимальным, так как при этом биологическая активность пептона сохраняется и соответствует значению оптической плотности пептона фирмы "Difco", а количество осадка - примесей максимально. Увеличение (снижение) значений температуры, давления и времени процесса обработки раствора пептона влечет за собой снижение активности пептона, а количество осадка не изменяется (таблица).

Выпавший осадок после автоклавирования отделяли центрифугированием. Прозрачный гидролизат направляли в распылительную сушилку для получения порошка пептона. Характеристика сырья и препаратов, необходимых для производства пептона приведена в таблице (на примерах). Практическая ценность заявляемого способа по сравнению с прототипом состоит в получении высококачественного пептона, не требующего дорогостоящего оборудования, дефицитных сырья и ферментных препаратов. (56) 1. Козлов Н. В. Питательные среды в мериушской микробиологии. Машгиз, 1950, с. 48-49.

2. Авторское свидетельство СССР N 1386654, кл. С 12 N 1/20, 1985.

3. Технологический регламент производства пептона сухого ферментативного для бактериологических целей по ГОСТ 13805-76 - прототип.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТОНА, предусматривающий измельчение исходного сырья - продуктов животноводства, последовательный пепсинный и трипсинный гидролиз с нейтрализацией гидролизата после каждой стадии гидролиза, фильтрацию и сушку целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения биологической ценности, предварительно проводят обработку измельченного сырья солевым раствором, а после фильтрации раствор пептона подвергают температурной обработке под давлением 0,04 - 0,06 МПа в течение 30 - 40 мин.

РИСУНКИ

Рисунок 1