Способ получения средства, влияющего на гемопоэз из крови животных

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано лекарственных препаратов, при производстве стимулирующих гемопоэз. Цель - получение стерильного и лишенного побочного действия биологически активного и стабильного препарата. Способ осущесвтляют следующим образом: гемолизированную кровь подвергают предварительной очистке с последующей ультрафильтрацией и лиофильному высушиванию, полученную массу используют для приготовления различных лекарственных форм, для этого кровь оленей, взятую в период наибольшей физиологической активности, гемолизируют бидистиллированной водой в соотношении 1 : 0,5, подвергают предварительной очистке, стерилизуют ультрафильтрованием с последующим лиофильным высушиванием. Применение способа позволит значительно расширить сырьевую базу для получения гемостимулирующих препаратов из крови животных, в настоящее время не используемую и уходящую в отходы; отказаться от использования сахара, как основного компонента прототипа, оказывающего деструктивное действие в результате реакции гликации на биологически активные вещества белкового происхождения белки организма человека; лиофилизирование препарата позволяет проводить стандартизацию препарата, облегчит расчет индивидуальной дозировки, а также позволит использовать его в комплексе с другими препаратами или компонентами при выпуске различных лекарственных форм. 2 табл.

Изобретение относится к медицине. Известен способ получения гемостимулирующего препарата из крови крупнорогатого скота [1].

Известный способ получения жидкого бычьего гематогена включает следующие этапы: 1. Забор крови животных, 2. Дефибринирование крови, 3. Гемолиз клеточных элементов крови этиловым спиртом, 4. Внесение в гемолизат сахарного сиропа и фруктовых эссенций, 5. Пастеризация препарата при +57^оС в течение 30 мин, 6. Фасовка препарата.

Недостаток данного способа получения препарата из крови животных заключается в следующем.

1. Дефибринирование. Это сложный и трудоемкий процесс, связанный с комплексом действий, направленных на удаление из крови белка-фибрина, вызывающего свертывание крови и образование сгустка. Он включает: внесение в емкость, на треть заполненную стеклянными бусами, крови животных и встряхивание емкости в течение 45 мин. Затем жидкую часть крови отделяют от сгустка, образовавшегося на стеклянных бусах, что составляет 2/3 внесенного объема крови.

2. Одним из существенных и объемных компонентов жидкого гематогена является сахар, который, попадая в организм, оказывает побочное действие, соединяясь с белками организма в реакции гликации. В результате этого, например, альбумин и липопротеиды модифицируются и теряют способность связываться с жирами и холестерином, что способствует развитию коронарной болезни сердца; кристалины в хрусталике глаза и миелин в оболочке нервов в результате гликации повреждаются, что приводит к пометнению хрусталика глаз и поражению нервных стволов. Процессу гликации подвержен и коллаген - структурный белок кожи, мышц, соединительной ткани мембран, выстилающих капилляры и крупные кровеносные сосуды, фильтрующие части почек. Это демонстрирует наиболее опасные последствия гликации (Бюллетень иностранной научно-технической информации ТАСС, 48, 1989).

3. Температурный режим пастеризации +57^оС вызывает разрушение термолабильных биологически активных веществ белковой природы.

4. Препарат, получаемый известным способом, обладает низкой стабильностью, срок его хранения не более 6 месяцев, при строгом соблюдении температурного режима хранения при +4^оС (М.Д.Машковский. Лекарственные средства, М.: Медицина, 1988, т. 2, с. 490).

5. При известном способе используют дорогостоящие и дефицитные компоненты - сахар, этиловый спирт, фруктовые эссенции.

6. Известный способ предполагает забор крови животных в стерильных условиях. При невозможности создания таких условий, режим пастеризации не обеспечивает качественную стерилизацию препарата, что делает данный способ неприемлемым при иных источниках сырья.

Целью изобретения является получение стерильной, лишенной побочного действия биологически активной и стабильной композиции и упрощение способа.

Поставленная цель достигается тем, что обработке подвергается кровь оленей, взятая в период наибольшей физиологической активности - созревания неокостеневших рогов-пантов. Кровь, минуя процесс дефибринирования, сразу лизирует бидистиллированной водой в соотношении 1:0,5. Остатки клеточных фрагментов крови, белка-фибрина удаляют фильтрованием через фильтр с диаметром пор 200 мкм, а стерилизацию проводят ультрафильтрацией через фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, позволяющие полностью удалить микроорганизмы, так как их диаметр больше 0,2 мкм. Последующее лиофильное высушивание препарата (проводимое по известному способу лиофилизации препаратов крови), сохраняет биологически активную часть вещества, позволяя увеличить сроки хранения препарата до 2 лет, что соответствует срокам хранения лиофилизированных препаратов крови.

По сравнению с выявленными аналогами предлагаемое техническое решение обладает "новизной". В отличие от прототипа в предлагаемом способе обработке подвергают кровь оленей, взятой в период срезки неокостеневших рогов-пантов, что позволяет получить биологически активную композицию, исключает сложный и трудоемкий процесс дефибринирования, исключен температурный режим стерилизации, что позволяет сохранить термолабильные белковые компоненты биологически активных веществ, исключены дорогостоящие и дефицитные компоненты - сахар, этиловый спирт, фруктовые эссенции, что снижает себестоимость препарата, а отсутствие сахара позволяет получить препарат без побочного действия на организм. Следовательно, предлагаемое решение соответствует критерию "существенные отличия" и "положительный эффект".

Способ получения предусматривает: 1. Кровь во время срезки неокостеневших рогов-пантов у оленей забирают в стеклянные емкости с бидистиллированной водой в соотношении 1:0,5, встряхивают в течение 10 мин. Жидкость становится прозрачной, ярко-красного цвета. Выбор соотношения компонентов, временной режим подтверждены соответствующим экспериментом, результаты которого представлены в табл. 1.

Наиболее оптимальным режимом является соотношение компонентов этого этапа 1:0,5 в течение 10 мин и более.

2. Гемолизированную кровь подвергают предварительной очистке (в установке УПЛ-0,6) для изъятия клеточных фрагментов периферической крови (через фильтр с диаметром под 200 мкм).

3. Фильтрат подвергают стерилизации методом ультрафильтрации (например, на установке УПЛ-0,6) через фильтр с пределом задержания частиц до 0,2 мкм, применяемый для стерилизации биологических жидкостей. Данные, подтверждающие вывод о качестве стерилизации, представлены в табл. 2.

Предлагаемый способ позволяет получить препарат, лишенный микроорганизмов, выявляемых в прототипе.

4. Стерильный фильтрат подвергают лиофильному высушиванию ранее известным способом в установке типа ОЕ-960/г ПГКЦ (Венгрия). Процесс включает этап замораживания фильтрата (при Т^о = -156^оС), затем емкость с фильтратом помещают в вакуумную камеру, где при вакууме 10^-3 мм рт.ст. в течение 22-24 ч проводится высушивание препарата, согласно режиму лиофильного высушивания препаратов крови.

5. Лиофильно высушенный препарат стандартизируют по количеству белка известными способами, используют для приготовления различных лекарственных форм, например: в виде таблеток, драже, порошков, в капсулах. Все это позволяет проводить индивидуальное дозирование препарата, уменьшить его расход.

Таким образом, предложенный способ получения средства, влияющего на гемопоэз, позволяет получить стерильный, лишенный побочного действия препарат, т.к. отсутствует сахар, вызывающий неблагоприятное действие на белки животного происхождения, содержащий следующую биологически активную композицию, включающую комплекс белков и аминокислот, мг/мл: белки 171,60-178,30; аминокислоты 54,56-60,14; свободные аминокислоты 0,154-0,168; дополнительную аминокислоту - пролин 1,89-2,54.

Из процесса убран этап приготовления препарата, по сравнению с прототипом, - дефибринирование крови, как трудоемкий вид деятельности, связанный с длительным встряхиванием емкости с кровью и стеклянными бусами и следствие этого процесса - снижение выхода продукта на 1/3 объема изначального сырья, переводимого в сгусток. Препарат, полученный предлагаемым способом обладает большей эффективностью стимулирования процессов кровотворения. Показатели крови изучались на морских свинках в опыте "острая кровопотеря" - внутрисердечный забор крови по 9,0 мл из одной особи, с одномоментным введением 20 мл физиологического раствора подкожно. Показатели динамики форменных элементов периферической крови изучались на 7-й и 15-й день эксперимента.

Вывод: на 7-й день после кровеиспускания показатели крови достигли нормы в группе, которая принимала препарат, полученный предлагаемым способом. В группе, где применялся прототип, показатели повышены, но незначительно и не отличаются от контрольной группы, а достигают показателей, близких к норме лишь на 15-й день, как и контрольной группе. Анализируя полученные результаты, можно сказать об эффективности препарата, полученного предлагаемым способом, в стимулировании органов кроветворения, позволяющее в короткие сроки восстановить клеточный состав периферической крови. Полученный препарат, будучи чужеродным белковым препаратом, не оказывает и аллергизирующего действия, о чем свидетельствуют показатели количества эозинофилов крови, которые являются критерием аллергизации организма (А.Д.Адо. Общая аллергология, М., 1978, с. 285), изменяясь от 2,11% - на 7-й день до 1,93% - на 15-й день эксперимента, при 1,96% в контрольной группе.

Предложенный способ получения средства, влияющего на гемопозэ, позволяет рационально использовать отходы оленеводческих хозяйств, во время срезки неокостеневших рогов-пантов и забоя оленей. На Дальнем Востоке поголовье оленей насчитывает от 4,0 до 8,8 млн. гол., выход сырья составляет 3,5-9,0 л крови, т.е. не менее 10% от веса животного. Ранее известный способ не мог быть использован, так как требовал строгой стерильности при взятии крови у животных, что не могло быть соблюдено из-за своеобразия содержания и забоя животных (вольерное и свободное содержание). Кроме того, способ позволяет увеличить выпуск лекарственных препаратов, т.е. улучшить медикаментозное обеспечение населения; проводить индивидуальную дозировку препарата, что окажет влияние на эффективность лечения и рациональное использование.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА ВЛИЯЮЩЕГО НА ГЕМОПОЭЗ ИЗ КРОВИ ЖИВОТНЫХ, включающий гемолиз, отличающийся тем, что, с целью получения стерильного биологически активного и без побочного действия и стабильного средства, обрабатывают кровь оленей, взятую в период наибольшей физиологической активности, гемолизируют бидистиллированной водой в соотношении 1 : 0,5, подвергают предварительной очистке, стерилизуют ультрафильтрованием с последующим лиофильным высушиванием.

РИСУНКИ

Рисунок 1