Средство для стабилизации клеточных мембран гепатоцитов

 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии. Цель - создание эффективного средства для стабилизации клеточных мембран гепатоцитов. Для этого предлагается использовать хорионический гонадотропин. 3 табл.

Предлагаемое изобретение относится к биологии и медицине и касается стабилизации клеточных мембран гепатоцитов при облучении.

Известно применение кортизона для стабилизации биологических мембран [1].

Однако это средство обладает побочным действием.

Наиболее близким по технической сущности к изобретению является способ стабилизации биологических мембран путем введения крысам линии Вистар, получавшим предварительно одну инъекцию ССl₄ 50% масляного раствора в дозе 0,3 мл на 100,0 массы тела животного, 3 метокси 18 оманена (милицина) [2].

Однако этот способ не содержит прямых доказательств стабилизации биологических мембран гепатоцитов, т.к. о ней судят на основании активности специфических ферментов в сыворотке крови. Тем более, что в этом способе нет доказательств отсутствия угнетающего действия милицина на ферментный обмен в патологически измененной печени. Недостатком способа является то, что милицин не является лечебным препаратом.

Целью предлагаемого изобретения является увеличение стабилизации клеточных мембран гепатоцитов после облучения.

Указанная цель достигается применением гонадотропина хронического в качестве средства для стабилизации клеточных мембран. Под влиянием этого гормона в печени через 7 и 21 сут после облучения животных гепатоцитов с разрушенными клеточными мембранами оказалось достоверно (Р < 0,01) меньше (1,9±0,3 и 1,3±0,3), что на 62 и 75% соответственно срокам забоя меньше, чем у контрольных облученных животных, не получавших гормон (5,00±0,4 и 5,3±0,4), табл.1.

Ранее хорионический гонадотропин применялся для лечения эндокринной патологии. Так, согласно [3] гонадотропин хорионический для инъекций выпускается в стерильном лиофилизированном виде. Белый или почти белый порошок, растворы его нестойки, готовят их непосредственно перед употреблением на изотоническом растворе хлорида натрия. Активность гормона определяется биологическим путем. Одна единица действия (ЕД) соответствует активности 0,1 мг стандартного порошка хорионического гонадотропина.

Применяют гонадотропин хорионический при понижении функции половых желез у мужчин и женщин, обусловленном нарушением деятельности гипоталамуса и гипофиза. Препарат показан у больных с межуточно-гипофизарной недостаточностью (б-нь Симмондса, синдром Шиена, пангипопитуитаризм любой этиологии, адипозогенитальная дистрофия, гипофизарная карликовость с явлениями полового инфантилизма, гипогонадотропной гипогонадизм с явлениями евнухоидизма), ановуляторной дисфункцией яичников и связанный с нею бесплодием, поздним половым развитием, при привычном и угрожающем аборте в I триместре беременности, при дисфункциональных маточных кровотечениях у женщин в детородном возрасте, при двустороннем крипторхизме у детей, а также при одностороннем крипторхизме после оперативного лечения при наличии признаков евнухоидизма. Препарат применяют также с целью дифференциальной диагностики первичного и вторичного гипогонадизма у мужчин.

Таким образом, предлагаемое изобретение отвечает критериям "Новизна" и "Существенные отличия", т. к. найдено новое применение ранее известного препарата, причем эта новая область использования не вытекает с очевидностью из ранее известных свойств препарата и основано на новом, установленном автором данной заявки свойстве.

Положительный эффект предлагаемого изобретения заключается в том, что: стабилизация клеточных мембран гепатоцитов достигается лечебным препаратом; меньше количество введений препарата (12 инъекций гонадотропина хорионического против 21 инъекции милицина); способ дает прямое доказательство стабилизации клеточных мембран путем подсчета с помощью морфометрии количества гепатоцитов с разрушенными клеточными мембранами, что позволяет количественно выразить действие препарата; способ стабилизирует клеточные мембраны гепатоцитов при облучении, что является более тяжелой и трудно излечимой патологией, чем однократное отравление CCl₄ в указанных дозах.

Стабилизацию клеточных мембран с помощью хорионического гонадотропина проводят следующим образом.

После облучения экспериментальным животным вводят хорионический гонадотропин по следующей схеме.

График введения гонадотропина хорионического (ГХ) облученным животным.

Дни опыта 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Дни вве- + + + + + + + + + + + + дения ГХ Гонадотропин хорионический вводят под кожу один раз в день в дозе от 75 ЕД до 85 ЕД на 100,0 массы тела. Такая доза гормона была выбрана потому, что дает биологический эффект. Однократное ежедневное введение препарата производили потому, что введенный в организм этот гормон распадается и выводится из организма в течение 24 ч. Введение препарата в течение двух дней подряд обусловлено тем, что этот гормон в указанных дозах за этот срок обеспечивает деление большинства готовых к делению гепатоцитов.

В проведенных экспериментах осуществление способа выполнялось следующим образом. Белых беспородных крыс размещали в ящике, имеющем 9 ячеек, соответствующим размерам животных и облучали их на гамма-установке "ЛУЧ-1". Условия облучения: источник - Со⁶⁰, Е = 1,25 мэв, поле максимальное, мощность дозы на R = 2 м; Д = 0,092 грей/мин, общая доза 4,50 грей, время облучения = 49 мин.

В опыте использовано 31 животное. Часть животных после облучения получала хорионический гонадотропин под кожу один раз в день в дозе от 75 ЕД до 85 ЕД на 100,0 массы тела.

Через 7 и 21 день после облучения у всех крыс брали кусочки печени для исследования, заливали в парафин, срезы печени толщиной 5-6 микрон после депарафинизации окрашивали гематоксилин-эозином. Затем с помощью светового микроскопа при увеличении 90 х 10 х 1,5 с помощью окулярной морфологической сетки проводили подсчет количества гепатоцитов, имеющих разрушенные клеточные мембраны на тест-площадь препарата. Подсчет проводили при заданной степени достоверности (Р ≅0,05) с использованием таблиц Стрелкова.

Перерывы между введениями гормона делали для того, чтобы восстановить количество гепатоцитов, готовых к делению.

П р и м е р 1. Крысу N 8 сажали в ячейку ящика, имеющего 9 ячеек, соответственно размеру животного и облучали на гаммаустановке "Луч-1". Условия облучения: источник - Со⁶⁰, Е = 1,25 мэв, поле - максимальное, мощность дозы на R = 2 м, Д = 0,092 грей/мин, общая доза 4,50 грей, время облучения = 49 мин.

Через 21 день после облучения у крысы брали кусочки печени для исследования. Приготавливали парафиновые срезы толщиной 5-6 микрон и после депарафинизацими окрашивали гематоксилин-эозином. Затем с помощью светового микроскопа при увеличении 90 х 10 х 1,5 с помощью окулярной морфометрической сетки проводили подсчет количества гепатоцитов, имеющих разрушенные клеточные мембраны, на тест-площадь препарата. Подсчет проводили при заданной степени достоверности (Р≅ 0,05) с использованием таблиц Стрелкова (см. табл.1).

Перерывы между введениями гормона делали для того, чтобы восстановить количество гепатоцитов, готовых к делению.

У крысы N 8 через 21 день после облучения оказалось 4,0 гепатоцита с разрушенными клеточными мембранами на тест-площадь препарата.

П р и м е р 2. Крысу N 17 весом 200,0 облучали при таких же условиях как крысу N 8 в примере 1. После облучения крысе N 17 вводили гонадотропин хорионический в дозе 150 ЕД по приведенной схеме. Препараты печени готовили и изучали таким же образом, как у крысы N 8 в примере 1.

Через 21 день после облучения и введения гормона у крысах N 17 количество гепатоцитов с разрушенными мембранами в среднем оказалось равно 0,2 на тест-площадь препарата.

Данные, полученные в эксперименте послужили основанием для подсчета общего количества нормальных гепатоцитов, имеющих хорошо структурированное ядро, неповрежденную клеточную мембрану и достаточное количество белка в цитоплазме.

У облученных животных на оба срока исследования количество нормальных гепатоцитов было достоверно ниже (Р < 0,01), чем у облученных животных, получавших гонадотропин хорионический, табл.2.

Кроме того, на основании подсчета нормальных (НГ) и дегенерирующих гепатоцитов (ДГ), к последним относили гепатоциты с разрушенными клеточными мембранами, с измененным (кариопикноз, кариолизис) ядрами. Вычисляли отношение НГ/ДГ, которое показывает степень нормализации паренхимы печени. Это отношение у облученных животных, получавших гонадотропин хорионический на оба срока наблюдения оказалось достоверно (Р < 0,01) выше у облученных животных, получавших гонадотропин хорионический, чем у контрольных облученных животных, не получавших гормон, т.е. степень обратимости патологических изменений в печени после облучения под влиянием гонадотропина хорионического выражена более значительно, табл.3.

Результаты исследования говорят о том, что способ можно использовать также и для лечения лучевых повреждений печени.

Формула изобретения

СРЕДСТВО ДЛЯ СТАБИЛИЗАЦИИ КЛЕТОЧНЫХ МЕМБРАН ГЕПАТОЦИТОВ.

Применение хорионического гонадотропина в качестве средства для стабилизации клеточных мембран гепатоцитов.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3