Штамм вируса гриппа а(нini) для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей

 

Использование: медицинская вирусология. Сущность изобретения: вакцинный штамм А/92/17/89 - рекомбинант, полученный скрещиванием эпидемического вируса А/Ленинград/92/89 (HINI) с холодоадаптированным температурочувствительным штаммом А/Ленинград/134/57/17 (H2N2) - донором аттенуации, безвредным для взрослых людей и детей. Штамм А/92/17/89 активно репродуцируется в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре (32°С), разность в показателях инфекционной активности при 32° и 40°С - 6,75 ld ЭИД 50/0,2 мл. Рекомбинант унаследовал от актуального апидемического вируса 2 гена, кодирующие поверхностные белки (геммагглютинин и нейраминидазу) и 6 генов, кодирующих внутренние белки от донора аттенуации. По данным рекомбинационно-комплементационного анализа в геноме штамма А/92/17/89 имеется 3 ts-мутации, характерных для донора аттенуации А/Ленинград/134/57/17 (H2N2). Штамм А/92/17/89 ареактогенен для взрослых и детей 3 - 15 лет при интраназальном введении и вызывает четырехкратный прирост антител в крови у 61,9% взрослых, привитых однократно. Штамм включен в ГКВ. Депонент N2251.

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано для профилактики эпидемического гриппа.

Известный штамм А/Новошахтинск/3/17/86 (H1N1) (а.с. N 1571067), использовавшийся для получения живой гриппозной вакцины, существенно отличается по антигенным свойствам от современных эпидемических вирусов гриппа А(H1N1) (1).

Целью изобретения является получение вакцинного штамма актуальной разновидности на основе эпидемически актуального вируса А/Ленинград/92/89 (H1N1).

Вакцинный штамм A/92/17/89 (H1N1) получен в результате рекомбинации эпидемического вируса A/Ленинград/92/89 c холодоадаптированным температурочувствительным штаммом А/Ленинград/134/57/17 (H2N2) c последующей селекцией в присутствии антисыворотки А/Ленинград/134/57/17.

Штамм A/92/17/89 (H1N1) унаследовал от донора аттенуации гены 1, 2, 3, 5, 7 и 8, кодирующие белки Р3, Р1, Р2, NP, M, и NS, соответственно и 2 гена от эпидемического вируса, кодирующие поверхностные белки (HA и NA). Температурочувствительный холодоадаптированный рекомбинант А/92/17/89 (H1N1) унаследовал 3ts-мутации в генах 1,5 и 7 от донора аттенуации, которые обеспечивают высокую степень безвредности и стабильности рекомбинанта. Таким образом указанный рекомбинантный вакцинный штамм характеризуется сочетанием полезных признаков родительских вирусов, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичности поверхностных белков актуального эпидемического вируса A/Ленинград/92/89 (H1N1) и температурочувствительности, характерной для штамма А/Ленинград/134/57/17 (H2N2).

Морфология штамма A/92/17/89 (H1N1) полиморфная, типичная для вируса гриппа.

Штамм А/92/17/89 накапливается в куриных эмбрионах до 7,5-8,0lg ЭИД 50/0,2 мл в течение 48 ч при 32^оС. Агглютинирует 1%-ный раствор эритроцитов кур в разведении 1:512. Обладает стабильностью биологических признаков после 5-кратного пассирования в развивающихся куриных эмбрионах. Обладает ареактогенностью и выраженной иммуногенностью при однократном интраназальном введении.

П р и м е р 1. Группе из 5 здоровых серонегативных лиц ввели интраназально двукратно с интервалом 28 дней в объеме 0,5 мл вакцинный штамм A/92/17/89 (H1N1) с инфекционным титром 7,0 lg ЭИД 50/0,2 мл. Среди привитых не было зарегистрировано ни одной температурной реакции. При обследовании в РТГА парных сывороток этих лиц 4-кратный прирост антител был зарегистрирован у 3 из 5 двукратно вакцинированных.

По данным неврологического, биохимического, иммунологического исследований кандидат в вакцинные штаммы А/92/17/89 (H1N1) оказался безвредным для людей.

П р и м е р 2. Группе из 105 здоровых лиц ввели интраназально в том же объеме, что и в примере 1, вакцинный штамм A/92/17/89 (H1N1). 31 волонтер получил плацебо. Среди привитых не было зарегистрировано сильных и средних температурных реакций, слабые температурные реакции (до 37,5^оС) были отмечены в 2,7% среди привитых и в 4,1% - в группе плацебо. Показатели реактогенности вакцин - 0. При исследовании парных сывороток 42 человек из этой группы с исходным уровнем < 1:8 отмечен 4-кратный прирост антител у 26 человек, что составило 61,9%.

П р и м е р 3. Дети 3-15 лет (20 человек) были иммунизированы однократно штаммом A/92/17/89 (H1N1), 10 детей получили плацебо. В течение 5 дней не было отмечено температурных реакций (показатель реактогенности - 0).

П р и м е р 4. 123 ребенка 3-15 лет получили однократно вакцинный штамм A/92/17/89 (H1N1) и 87 - плацебо.

При наблюдении в течение 5 дней после иммунизации не выявлено температурных реакций средней и сильной степеней (показатель реактогенности - 0).

Таким образом результаты изучения кандидата в вакцинные штаммы A/92/17/89 (H1N1) на взрослых и детях показали, что штамм соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинам штамма МРТУ-42 N 373-70 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения взрослым и детям.

Штамм депонирован в коллекцию ГКВ, депонент N 2251.

Формула изобретения

ШТАММ ВИРУСА ГРИППА А(НINI) ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ И ДЕТЕЙ.

Штамм вируса гриппа А (HINI) ГКВ N 2251 для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей.