Питательная среда для выделения дифтерийного микроба

 

Использование: медицинская микробиология, лабораторная диагностика возбудителя дифтерии. Сущность изобретения: питательная среда содержит следующие компоненты, г/л панкреатический гидролизат рыбной муки 20 25; ферментативный гидролизат черного альбумина 8 12; хлористый натрий 4 6; агар 10 15; теллурит калия (2%-ный раствор) 5 20 мл. В отличие от кровяного теллуритового агара среда прозрачна, что значительно облегчает обнаружение дифтерийного микроба на поверхности агара. По ростовым свойствам предлагаемая среда превосходит известные. 1табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при лабораторной диагностике возбудителя дифтерии.

Известны питательные среды для выделения дифтерийного микроба из инфицированного материала, содержащие в своем составе гидролизаты белкового сырья (килька, кровь убойных животных), в качестве стимуляторов роста дрожжевой экстракт, L-цистеин солянокислый, глицериновую смесь и стерильную кровь, а для ингибирования роста посторонней микрофлоры теллурит калия [1] Наиболее близким к предлагаемой среде является кровяной теллуритовый агар [2] Основным недостатком этой среды является использование в ее составе стерильной дефибринированной или гемолизированной крови, что исключает возможность стерилизации среды, а получаемая плотная питательная среда непрозрачна. Сложный состав кровяного теллуритового агара приводит к многоэтапности приготовления питательной среды: приготовлению раствора питательного агара, расплавлению и охлаждению агара, добавлению раствора теллурита калия и стерильному внесению гемолизированной крови.

Существенным недостатком этой среды как диагностического препарата является малое количество образующихся колоний: при засеве 100 микробных клеток вырастает не более 5 колоний.

Цель изобретения обеспечение возможности стерилизации и повышение ростовых свойств питательной среды для выделения дифтерийного микроба.

Цель достигается тем, что предлагается питательная среда, содержащая панкреатический гидролизат рыбной муки, ферментативный гидролизат черного альбумина, хлористый натрий, теллурит калия и агар, при следующем соотношении компонентов, г/л: Панкреатический гидролизат рыбной муки 20-25 Ферментативный гидролизат черного альбумина 8-12 Хлористый натрий 4-6 Агар 10-15 Теллурит калия (2%-ный раст- вор) 5-20 мл Отличием предлагаемой среды является использование панкреатического гидролизата рыбной муки и ферментативного гидролизата черного альбумина, причем их соотношение в среде находится в пределах от 3:1 до 2:1 соответственно.

Питательную среду готовят следующим образом.

П р и м е р 1. Для приготовления предлагаемой сухой питательной среды смешивают 20 г панкреатического гидролизата рыбной муки (ТУ оп. 64-15-120-90), 8 г ферментативного гидролизата черного альбумина (ТУ оп. 64-15-114-89), 4 г хлористого натрия и 10 г агара в смесителе барабанного типа. Полученный сухой препарат расфасовывают в ламинированные пакеты или стеклянные банки с завинчивающейся крышкой. Сухая среда может храниться в течение 2 лет (срок наблюдений). Для приготовления плотной питательной среды содержимое пакета или банки (42 г) растворяют в 1 л дистиллированной воды, тщательно размешивают, доводят до кипения и кипятят 1-2 мин при перемешивании и стерилизуют при 1 атм (121^оС) 20 мин. После охлаждения до 45-60^оС добавляют 20 мл 2% -ного процентного раствора теллурита калия и разливают в чашке Петри. Односуточную культуру дифтерии выращивают на сывороточно-агаровой среде, смывают физиологическим раствором, готовят 1 млрд клеток в 1 мл взвеси и путем 10-кратных разведений готовят необходимую посевную дозу. Для контроля сред используют два последних разведения (6 и 7), что соответствует 500 и 100 микробным клеткам в 0,1 мл.

В таблице приведены экспериментальные данные по ростовым свойствам питательных сред при культивировании трех штаммов Corynebacterium dipheriaemitis 143, Corynebacterium diphteriae gravis 3689 и Corynebacterium xerosis 1911. Рост стафилококка (St. aureus Biomico 209p) отсутствует.

П р и м е р 2. Для приготовления сухой питательной среды смешивают 25 г панкреатического гидролизата рыбной муки, 12 г ферментативного гидролизата черного альбумина, 6 г хлористого натрия и 15 г агара. Далее аналогично примеру 1. Ростовые свойства среды представлены в табл.1. Теллурита калия (2% -ный раствор) добавляют 5 мл.

П р и м е р 3. Для приготовления плотной питательной среды берут навеску сухого питательного агара СПА (питательную основу среды прототипа) в количестве 40 г, добавляют навеску 10 г ферментативного гидролизата черного альбумина, заливают 1 л дистиллированной воды. Далее аналогично примеру 2. Ростовые свойства представлены в таблице.

Анализ результатов биологической проверки питательных сред показывает (таблица), что по количеству и размеру вырастающих колоний C. mitis, C. gravis, C. xerosis предлагаемая среда превосходит известные.

Так, при выращивании этих штаммов из 10^-6 и 10^-7 разведений число колоний на предлагаемой среде в 1,5-2,0 раза больше, чем на известных питательных средах.

Диаметр образующихся колоний через 48 ч культивирования на предлагаемой среде на 0,5-1,0 мм больше, чем на известных. Морфология выросших колоний типичная, черного цвета с приподнятым центром.

Увеличения размера и количества колоний на предлагаемой среде удается достичь за счет оптимального соотношения двух компонентов ферментативного гидролизата черного альбумина и панкреатического гидролизата рыбной муки. Такого эффекта не удается получить при использовании в качестве белковой основы панкреатического гидролизата каспийской кильки (пример 3). Ростовые свойства последней остаются на уровне кровяного теллуритового агара.

Большая скорость роста дифтерийных микробов на предлагаемой среде проявляется и при меньших временах культивирования. Через 19 ч культивирования на предлагаемой среде визуально наблюдаются колонии дифтерийного микроба, тогда как на прототипе за это время рост возбудителя дифтерии можно наблюдать с помощью бинокуляра.

Предлагаемая питательная среда прозрачна в отличие от непрозрачного кровяного теллуритового агара, что также значительно облегчает обнаружение дифтерийного микроба на поверхности агара.

За счет теллурита калия (1,5-2,0 мл на 100 мл среды) на всех вариантах сред рост посторонней микрофлоры (St. aureus, E. coli, Pr. vulgaris) подавлен.

Смыв из носоглотки через 20-24 ч культивирования на предлагаемых средах дает более пышный рост дифтероидов по сравнению с известными средами.

Формула изобретения

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ДИФТЕРИЙНОГО МИКРОБА, содержащая питательную основу, хлористый натрий, агар, теллурит калия и воду, отличающаяся тем, что в качестве основы она содержит панкреатический гидролизат рыбной муки и дополнительно ферментативный гидролизат черного альбумина при следующем соотношении компонентов: Панкреатический гидролизат рыбной муки, г 20 25 Ферментативный гидролизат черного альбумина, г 8 12 Хлористый натрий, г 4 6 Агар, г 10 15 Теллурит калия (2%-ный раствор), мм 5 20 Вода, л До 1

РИСУНКИ

Рисунок 1