Способ отбора лиц для выявления злокачественных новообразований

 

Использование: биология, медицина, онкология, для отбора лиц для выявления злокачественных новообразований. Сущность изобретения: способ включает взятие у обследуемых проб биологического материала, выделение из него культур эшерихиа и стрептококка с последующей инкубацией в присутствии клеток опухоли L929, приготовление мазка и его окрашивание, а также микроскопическое исследование с рассчетом диагностического индекса индекса целых клеток /ИЦК/. При ИЦК 50 - 60% больных отбирают в группу риска, а при ИЦК равном 49% и ниже в группу юольных злокачественными новообразованиями. Техническим результатом является расширение возможности первичного отбора лиц для ранней диагностики злокачественных новообразований, а также повышение специфичности способ, в результате чего должна повыситься точность диагностики и снизиться процент ошибки при диагностике злокачественных новообразований. Способ позволяет также отобрать из числа обследованных группу риска- лиц с повышенной опасностью развития в дальнейшем злокачественных новообразований и осуществлять за ними последующий контроль. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к биологии и медицине, в частности к онкологии.

Известны различные способы выявления злокачественных новообразований: инструментальные, биохимические, гистоло- гические и др. [1-3] Наиболее близким к предложенному является способ ранней диагностики злокачественных новообразований путем выделения из испражнений человека эшерихла и энтерококка и добавления их к гомогенатам опухолевых клеток, полученных из перевиваемых опухолей крыс. Процент совпадений диагнозов составляет 88% Однако получение гомогенатов из перевиваемых опухолей крыс связано с необходимостью использования дорогостоящих животных, сложным перевиванием опухолей, длительностью их развития (15-20 дней) большим процентом отхода животных из-за невоспроизводимости опухолей, сложности дифференцировки в гомогенате живых клеток от погибших, а также большой примеси клеток соединительной ткани и клеточных элементов крови.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является расширение возможности первичного отбора лиц для ранней диагностики злокачественных новообразований, а также повышение специфичности способа, в результате чего должна повыситься точность диагностики и снизится процент ошибки при диагностике злокачественных новообразований. Предлагае- мое изобретение позволит также отобрать из числа обследованных группу риска, т.е. лиц с повышенной опасностью развития в дальнейшем злокачественных новообразований, и осуществлять за ними последующий контроль.

Сущность изобретения состоит в выделении из испражнений обследуемых людей чистых культур E. coli и Streptococcus faecalis и выявление их литических свойств в отношении культуры опухолевых клеток L 929 трансформированные фибробласты мышей С3Н, получены из банка культур Онкоцентра РАМН, для чего выделенные из испражнений чистые культуры E. coli и Streptococcus faecalis смешивают их с культурой опухолевых клеток L 929 в пропорции 2:1, инкубируют при температуре 37^оС в термостате в течение 4-12 ч, производят подсчет неразрушенных опухолевых клеток и вычисляют индекс целых клеток (ИЦК).

ИЦК (в) определяют по формуле: ИЦК ·100 где ИЦК индекс целых клеток; x количество неразрушенных клеток в контроле; y количество неразрушенных клеток в исследуемом материале.

Значение ИЦК 49% и ниже свидетельствует о наличии злокачественного новообразования в организме человека.

При значении ИЦК от 50% до 60% обследуемого относят к группе риска (и выше).

Значение ИЦК от 61% до 100% свидетельствует об отсутствии у обследуемого человека злокачественного новообразования.

П р и м е р 1. Больной Ф. Диагноз: хронический бронхит. Длительность заболевания более 15 лет.

Для определения ИЦК у больного в стерильный флакон был взят 1,0 г испражнений, во флакон добавили 10,0 мл стерильного физиологического раствора и при комнатной температуре растворили испражнение, помешивая стеклянной палочкой. Через 20 мин полученная взвесь была посеяна петлей на чашки Петри со средой Эндо для выделения эшерихида и на чашки со средой Хайна-Перри для выделения стрептококка. Через 24 ч инкубации в термостате при температуре 37^оС для выделения чистой культуры произведен посев со среды Эндо (эшерихиа) на косой агар, а со среды Хайна-Перри (стрептококк) на кровяной желчный агар. Посевы выдерживали в термостате при температуре 37^оС в течении 24 ч, после чего была проведена окраска культур по Граму и их идентификация по биологическим критериям Шермана в соответствии с определителем Берги.

Из культур идентифицированных бактерий E. coli и Streptococcus faecalis готовили смесь в объеме 20 мл по 4 млрд. в 1 мл каждого микроба, в которую добавляли 1 мл взвеси культуры опухолевых клеток L929 в концентрации 3-4 млн. в 1 мл и инкубировали в термостате при 37^оС в течении 4-12 ч. В качестве контроля к 1 мл взвеси культуры опухолевых клеток добавляли 20 мл физиологического раствора и инкубировали в тех же условиях. Затем из тех и других пробирок готовили мазки, фиксировали их метиловым спиртом и производили окраску красителем Diff guig или генцианвиолетом, после чего производили подсчет неразрушенных клеток и вычисляли ИЦК.

В исследуемых препаратах количество неразрушенных клеток было 12, а в контроле 15 т.е.

ИЦК ·100 0,2·100 20% По ИЦК определено, что у больного имеется злокачественное новообразование и больной был направлен в онкологический диспансер, где у него была диагностирована опухоль легкого.

Больной был оперирован и на основании гистологического исследования был поставлен диагноз: мелкоклеточный рак легкого.

В диагностических целях было обследовано 17171 человек с подозрением на опухоли, из них 60% было отнесено в группу со злокачественными новообразованиями, клиническое подтверждение было у 95,3% (см. таблицу).

В группу риска было выделено 13,3% 9,9% из них в последующие 1-2 года были клинически диагностированы злокачественные новообразования.

У 26,7% обследованных злокачественных новообразований обнаружено не было.

Помимо первичного отбора лиц для ранней диагностики злокачественных новообразований и отбора обследованных в группу риска способ дает возможность дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований, а также позволяет проводить более точный контроль за эффективностью лечения.

Формула изобретения

1. СПОСОБ ОТБОРА ЛИЦ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ, включающий взятие проб биологического материала, выделения культуры эшерихиа и стрептококка с последующей инкубацией в присутствии клеток опухоли, приготовление мазка и его окрашивание, микроскопическое исследование с расчетом диагностического показателя, отличающийся тем, что в качестве опухолевых клеток используют культуру L 929, а в качестве диагностического показателя используют индекс целых клеток.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что отбирают лиц в группу риска при индексе целых клеток 50 60% 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что отбирают лиц в группу больных злокачественными новообразованиями при индексе целых клеток 49% и ниже.

РИСУНКИ

Рисунок 1