Препарат из живых лактобактерий

 

Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской биотехнологии, и касается составов лечебных препаратов-зубиотиков, содержащих живые микроорганизмы полезной микрофлоры человека. Цель изобретения - повышение биологической активности фармакопейного препарата из живых лактобактерий для лечения неспецифических воспалительных процессов пищеварительного тракта и других открытых полостей. Эта цель достигается тем, что в составе препарата используют штаммы лактобактерий вида Lactobacillus acidoplilus 10 аш, Nk₁ и К₃Ш₂₄ в соотношении 1 : 1 : 1. Общее количество колониеобразующих единиц составляет 10⁷ на 1 дозу.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к медицинской и касается составов лечебных препаратов-зубиотиков, содержащих живые микроорганизмы полезной микрофлоры человека.

Лактобактерии являются общепризнанными представителями облигатного бактериоценоза здорового человека, начиная с полости рта, так и на слизистых верхних дыхательных путей, вагинальной полости и на коже, обеспечивая состояние физиологической нормы. Любые формы дисбактериозов, сопровождающие практически все виды патологии как инфекционной, так и неинфекционной природы, характеризуются нарушениями в качественном и количественном составе лактофлоры, что требует применения средств коррекционной терапии. В их числе первостепенная роль принадлежит биологическим препаратам- эубиотикам, действующим началом которых являются живые микробные клетки облигатных видов лактобактерий.

До недавнего времени с лечебно-профилактическими целями достаточно широко использовались различные виды кисломолочных продуктов, заквашенных полезными штаммами лактобактерий. Однако низкая стандартность таких составов и нестабильность при хранении, определяющая короткие сроки годности, значительно ограничивает сферу их применения. Более отвечающими задачам коррекционной бактериальной терапии являются стандартные фармакопейные формы биологических препаратов-эубиотиков, конструируемые на основе стабильных культур производст- венных штаммов.

Известны биопрепараты-эубиотики на основе живых культур лактобактерий, выпускаемые практически во всех развитых странах. Они содержат живые культуры лактобактерий как в моносоставе, так и в различных сочетаниях с представителями других родов микроорганизмов.

Наиболее близким к предлагаемому состав из живых лактобактерий "Лактобактерин", выпускаемый предприятиями России. Этот препарат содержит живую культуру штамма лактобактерий вида L.plantarum и или вида L.formentum в моносоставе в количестве не менее 4 ˙ 10⁹ колониеобразующих единиц на каждую дозу [1] Столь высокое содержание действующего начала в дозе указывает на его относительно малую биологическую активность, которая контролируется при помощи лабораторных тестов антагонистической активности против патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Вместе с тем известно, что любое повышение содержания микробного начала в биопрепарате увеличивает антигенную нагрузку на организм больного усиливая риск и выраженность побочных реакций.

Цель изобретения повышение биологической активности фармакопейного препарата из живых лактобактерий для лечений неспецифических воспалительных процессов пищеварительного тракта и других открытых полостей.

Эта цель достигается тем, что в составе препарата используют штаммы лактобактерий виде Lactobacillus acidophilus 100 аш. NК1 и К₃Ш₂₄ в соотношении 1:1:1. Общее количество колониеобразующих единиц составляет 10⁷ на 1 дозу.

Сочетанное использование трех штаммов лактобактерий вида L.acidophilus обеспечивает препарат одновременно высокой антагонистической активностью и адгезивностью, что существенно отличает его от аналога.

Показатели предлагаемого препарата по антагонистической активности против шигелл и сальмонелл находятся на одинаково высоком уровне 8,57 ± 0,44 и 8,80 ± 0,27, а в отношении протея достигают 7,31 ± 1,10, тогда как у аналога активность против сальмонелл и протея значительно уступает предлагаемому и составляет соответственно 7,50 ± 1,10 и 4,52 ± 1,00.

Адгезивная активность заявляемого препарата характеризуется вдвое более высокими показателями к клеткам как толстого, так и тонкого кишечника, находясь на уровне 7,0 ± 0,12 и 10,3 ± 0,18 по сравнению с аналогом, имеющим показатели 4,9 ± 1,20 и 5,7 ± 0,45 соответственно.

Это преимущество обеспечивает создание в организме человека более выраженного защитного барьера против возбудителя заболевания на уровне эпителиальных тканей пищеварительного тракта и других нестерильных полостей.

Приведенные преимущества предлагаемого препарата определяются как подбором штаммов среди вида L.acidophilus, так и сохранением в его составе полного спектра присущих данному виду микробных метаболитов благодаря технологии получения без этапа концентрации выращенной биомассы.

Достаточная клиническая эффективность малых доз предлагаемого препарата (на уровне 10⁷) в отличие от аналога (10⁹ 10¹⁰) позволяет существенно снизить антигенную нагрузку на организм пациента, что дает возможность расширить сферу его применения и уменьшить риск побочных реакций. Комиссионные испытания заявляемого препарата, где в контрольных группах применялся Лактобактерин, выявили преимущества первого. Это достоверно выражалось в укорочении сроков выздоровления от диареи взрослых и детей, а также в более выраженной нормализации микрофлоры, включая санацию от патогенного стафилококка.

В таблице приведены результаты сравнительной характеристики предлагаемого препарата и известного по критериям лабораторных и клинических испытаний.

Из приведенных данных очевидны преимущества предлагаемого препарата как по критериям лабораторной оценки, так и по результатам клинических испытаний.

Таким образом, предлагаемый препарат отличается существенно большей биологической активностью и клиническим эффектом по сравнению с аналогом. Применение его позволяет значительно расширить сферу показаний для лактосодержащих биопрепаратов, а именно использовать для быстрого купирования диарейного синдрома у детей раннего возраста, в том числе с кожными проявлениями атопического дерматита, с успехом применять у больных, страдающих дисбактериозом стафилококковой этиологии и впервые достичь стойкого эффекта при лечении обширного круга тяжелых форм стоматологических заболеваний.

Существенный экономический эффект от внедрения заявляемого препарата в практику определяется сокращением продолжительности курсов лечения благодаря его более высокой клинической эффективности.

П р и м е р 1. Ампулу или флакон каждого из штаммов лактобактерий 100 аш. NК₁, К₃Ш₂₄ вскрывают стерильно, разводят 5-ю миллилитрами 0,9%-ного раствора натрия хлорида. Полученные взвеси переносят стерильно (каждую отдельно) в пробирки со стерильным обезжиренным молоком и инкубируют при 37^оС в течение 18 ч. Получаемые таким образом культуры пеpвой генерации пересевают последовательно дважды в стерильное молоко для получения 2 и 3-й генерации, внося по 0,1 мл культуры в пробирку с 10 миллилитрами молока и инкубируя при 37^оС в течение 18 ч. Выраженные культуры каждого штамма 3-й генерации соединяют в общей емкости в соотношении 1:1:1 и засевают в производственную питательную среду, содержащую лактозы 10 г, натрия хлористого 5 г, L-цистина 0,2 г, магния сернокислого 4-водного 0,05 г, калия фосфорнокислого двухзамещенного 2 г, аммония лимоннокислого 2 г, натрия уксуснокислого 5 г, агар-агара 0,75 г, дрожжевого автолизата 650 мл, казеинового гидролизата 350 мл, при уровне аминного азота 150 мг. Культуру инкубируют при 37^оС в течение 18 ч.

В емкость с полученной производственной культурой, после коррекции рН до значения 7,0 при помощи 5%-ного раствора аммиака, стерильно вводят сахарозо-желатиновую смесь (стабилизатор) в количестве сахарозы 8% желатина 1% Культуру разливают мерно по 5 доз во флаконы и подвергают высушиванию.

П р и м е р 2. Производственную культуру выращивают и стабилизируют согласно описанию по п.1, после чего разливают в стерильные металлические кассеты, плотно закрывают 4-мя слоями стерильной марли, высушивают, размельчают в грануляторе и используют для получения готовых лекарственных форм.

Получаемый препарат проходит три этапа тщательного контроля по развернутой схеме (в производственном цехе, ОБК предприятия и ГИСК им. Л.А.Тарасевича), после чего подвергается маркировке и промышленному выпуску. Критериями проверки являются безвредность, чистота и количество живых микробных клеток в дозе. Углубленными наблюдениями установлено, что разработанная технология обеспечивает высокую стабильность препарата на протяжении двух и более лет, а именно сохранение требуемого лимита колониеобра- зующих единиц, что вдвое превышает принятый для биопрепаратов годовой срок годности.

Таким образом, предлагаемый биопрепарат на основе живой культуры лактобактерий вида L. acidophlus является стандартной стабильной фармакопейной формой, длительно сохраняющей исходную активность. Его высокая клиническая эффективность позволяет ограничить лечебную дозу на уровне 10⁷, что обеспечивает хорошую переносимость и отсутствие побочного действия при существенном снижении антигенной нагрузки на организм пациента.

Формула изобретения

ПРЕПАРАТ ИЗ ЖИВЫХ ЛАКТОБАКТЕРИЙ для лечения неспецифических воспалительных процессов открытых полостей, содержащий штаммы рода Lactobacillus, отличающийся тем, что содержит штаммы L. acidophilus 100 аш, L. acidophilus NK₁ и L. acidophilus K₃ III₂₄ при соотношении 1 : 1 : 1 и общем количестве 1 · 10⁷ колониеобразующих единиц на дозу.

РИСУНКИ

Рисунок 1

QZ4A - Регистрация изменений (дополнений) лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского"

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): Общество с ограниченной ответственностью Фирма "ФЕРМЕНТ"

Характер внесенных изменений (дополнений):Срок действия продлен до 25.07.2008.

Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения: 25.07.2002 № 14825

Извещение опубликовано: 10.12.2006        БИ: 34/2006

* ИЛ - исключительная лицензия НИЛ - неисключительная лицензия

QZ4A - Регистрация изменений (дополнений) лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): ГУ "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского"

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): ООО "АЛФАРМ"

Характер внесенных изменений (дополнений):Срок действия

Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения: 21.05.2002 № 14436

Извещение опубликовано: 10.01.2007        БИ: 01/2007

* ИЛ - исключительная лицензия НИЛ - неисключительная лицензия

QB4A Регистрация лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): Закрытое акционерное общество "Экополис"

Договор № РД0024134 зарегистрирован 12.07.2007

Извещение опубликовано: 20.08.2007        БИ: 23/2007

* ИЛ - исключительная лицензия        НИЛ - неисключительная лицензия

QZ4A - Регистрация изменений (дополнений) лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): Закрытое акционерное общество "Экополис"

Характер внесенных изменений (дополнений):Изменения, не относящиеся к сведениям, приведенным в патенте

Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения: 12.07.2007 № РД0024134

Извещение опубликовано: 20.07.2008        БИ: 20/2008

* ИЛ - исключительная лицензия НИЛ - неисключительная лицензия

QZ4A - Регистрация изменений (дополнений) лицензионного договора на использование изобретения

Лицензиар(ы): Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Вид лицензии*: НИЛ

Лицензиат(ы): Закрытое акционерное общество "Экополис"

Характер внесенных изменений (дополнений):Срок действия на 1 год. Изменен размер вознаграждения

Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения:
12.07.2007 № РД0024134

Извещение опубликовано: 10.08.2010        БИ: 22/2010

* ИЛ - исключительная лицензия НИЛ - неисключительная лицензия

QZ4A Государственная регистрация изменений в зарегистрированный договор

Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения:
12.07.2007 № РД0024134

Вид договора: лицензионный

Лицо(а), передающее(ие) исключительное право:
Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Лицо, которому предоставлено право использования:
Закрытое акционерное общество "Экополис" (RU)

Дата и номер государственной регистрации изменений, внесенных в зарегистрированный договор:
19.09.2011 РД0087151

Изменения:
Срок действия продлен на 1 год. Изменения условий договора, не отраженных в Государственном реестре.

Дата публикации: 27.10.2011