Способ приготовления инактивированной вакцины против чумы крупного рогатого скота

 

Использование: ветеринарная вирусология. Использование: вакцинный штамм ЛТ вируса чумы КРС выращивают в роллерной культуре перевиваемой линии клеток почки сайгака /ПС/ и инактивируют сернокислой медью в конечной концентрации 0,1-0,2 % при температуре 36-38^oС в течение 22-26 ч. Инактивированная вакцина испытана в лабораторных и производственных условиях: безвредна и нереактогенна при введении кроликам, подсвинкам, якам и КРС, обладает высокими антигенными и иммуногенными свойствами. При двукратной с интервалом 10-14 суток вакцинации КРС препарат вызывает формирование гуморального иммунитета и устойчивости к заражению вирулентным штаммом вируса чумы КРС. Заявка иллюстрирована таблицей. 1 табл.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к способу приготовления инактивированной культуральной вакцины для профилактики чумы крупного рогатого скота (КРС).

Известен способ приготовления инактивированной вакцины из лимфоузлов и легких больных чумой КРГ телят, зараженных вирулентным вирусом чумы КРС (Базылев П. М. докт.дисс. М. 1955). В настоящее время инактивированные вакцины против чумы КРС отсутствуют (Сергеев В.А. в кн. "Вирусные вакцины", Киев, 1993). Для профилактики чумы КРС в нашей стране и за рубежом используют живые вирусвакцины. (А.с. N 194262 от 30.06.65 г.). Для получения вируса по известному способу используют первичнотрипсинизированную культуру клеток почки теленка (ПТ), выращенную на 0,5% гидролизате лактальбумина в матрасах вместимостью 1-1,5 дм³. Активность получаемого вируса составляет 10^5,0-10^6,25 ТЦД₅₀/см³. Затем вирус лиофилизируют со стабилизатором.

Несмотря на очевидные преимущества живых вакцин, существуют определенные аспекты, когда применение инактивированной вакцины предпочтительнее: в благополучных по чуме КРС зонах первичного применения вакцины, необходимость вакцинации животных из групп повышенного риска (молодняк до 1 мес. возраста и стельные животные), вакцинация в экстремальных ситуациях (в период неблагополучия хозяйств по различным заболеваниям), в условиях высокогорья и резкого перепада температур. Это одно из важнейших звеньев любой программы по борьбе и искоренению инфекций.

Целью настоящего изобретения является приготовление экологически безопасной инактивированной культуральной вакцины против чумы КРС.

Указанная цель достигается тем, что используют вакцинный штамм ЛТ (а.с. 174765 от 15.07.65), выращенный в культуре перевиваемой линии клеток почки сайгаков (ПС), а в качестве инактиватора вируса сернокислую медь.

Для приготовления антигенсодержащего сырья вируса чумы КРС используют 3±1 суточную культуру клеток ПС, выращенную в сосудах вместимостью 3 дм³ и полезной площадью 1000 см². Для выращивания культуры клеток применяют среду Игла с 10 сыворотки КРС, вируса с 5 сыворотки КРС. Круговой монослой культуры клеток заражают вакцинным штаммом ЛТ вируса чумы КРС в дозе 0,1-1,0 ТЦД₅₀. На клетку и выращивание вируса проводят в роллерном аппарате при скорости вращения сосудов 10-12 об/час, при температуре 36-38^oС в течение 3-4 суток. При развитии характерных для вируса цитопатических изменений и поражении 80-90 клеток, содержимое сосудов встряхивают для отделения клеток от стекла и сливают в общую стерильную емкость. Биологическая активность вируса в суспензии составляет 10^7,5-10^8,0 ТЦД₅₀/см³.

Для инактивации вируса в вируссодержащую суспензию при перемешивании добавляют раствор сернокислой меди до конечной концентрации 0,1-0,2 и выдерживают при температуре 36-38^oС в течение 22-26 час.

К инактивированной суспензии вируса добавляют стерильный адъювант - масляно-ланолиновую смесь или гидроокись алюминия с глицерином по общепринятой методике.

Инактивированная вакцина против чумы КРС, приготовленная согласно описанному способу, проверена в лабораторных и производственных условиях.

Вакцина безвредна и не реактогенна при введении подкожно для кроликов, подсвинков, яков и крупного рогатого скота в возрасте от 2 мес. до 2 лет (табл.).

Накопление вируснейтрализующих антител (ВН) в сыворотках крови вакцинированных животных после двукратной прививки составляет: у кроликов - 1:4 1: 256, у подсвинков 1:16 1:256, у крупного рогатого скота 2-4 мес. возраста 1:64 1:128, до 2-х лет 1:4 1-32, старше 2-х лет 1:4 1:32.

При однократном введении якам титр антител составил 1:4-1:10. Накопление антител в титре не ниже 1:8 (критерий устойчивости животных к контрольному заражению) отмечено у 80 животных.

Титр антител у животных через 8 мес. после вакцинации составляет 1:8-1: 16. Крупный рогатый скот, вакцинированный двукратно с интервалом 14 суток, устойчив к заражению 10000 ЛД₅₀ вирулентного вируса.

Формула изобретения

Способ приготовления инактивированной вакцины против чумы крупного рогатого скота, включающий получение вируссодержащего материала и его инактивацию, отличающийся тем, что в качестве вируссодержащего материала используют вакцинный штамм с активностью 107,5 108,0 ТЦД₅₀/см³ ЛT вируса чумы крупного рогатого скота, выращенный в роллерной культуре перевиваемой линии клеток почки сайгака, инактивацию проводят сернокислой медью в конечной концентрации 0,1 0,2% при 36 38°С в течение 22 26 ч, после чего добавляют адъювант.

РИСУНКИ

Рисунок 1