Способ подготовки кювет для иммунохимических реакций

 

Использование в медицине, в частности в иммунологии при подготовке кювет к серологическим реакциям. Сущность изобретения заключается в том, что восстановление адсорбирующей способности достигается обработкой одноразовых полистирольных кювет 0,2-0,5% раствором детергента в течение 12-16 ч, погружением на 16-24 ч в раствор 6Н NaOH, с последующим погружением в дистиллированную воду на 18-24 ч и обработкой ультразвуком в течение 30 мин при частоте колебаний 30-60 кГц и оптической мощности 30-70 Вт/см² в 0,1-0,2%-ном растворе детергента 7Х и 30 мин в дистиллированной воде.2 табл.

Изобретение относится к медицине, более конкретно к иммунологии, и касается подготовки кювет к серологичеким реакциям.

Известно, что в качестве твердофазного носителя при постановке хемилюминесцентного иммуноанализа используются полистироловые измерительные кюветы одноразового использования, чаще фирмы "orinicon". Недостатком этой методики является то, что после постановки хемилюминесцентного иммуноанализа измерительные кюветы сбрасываются и в дальнейшем в работе не используются, что экономически не выгодно (Icshoch M. Bohm R. /Zbl.Veterinarmed. 1985. - v.32. N 3, P.157). В литературе отсутствуют данные по восстановлению кювет для повторного их использования.

Однако при необходимости резкого увеличения объема работы по проведению хемилюминесцентного иммуноанализа и остром дефиците измерительных полистироловых кювет возникает потребность их в большом количестве, а также служат препятствием и известные сложности с поставкой импортной лабораторной техники и оборудования.

Предлагаемый способ восстановления кювет позволяет значительно решить эту проблему.

Целью изобретения является увеличение срока и кратности эксплуатации одноразовых измерительных полистироловых кювет в результате восстановления их адсорбирующей способности.

Поставленная цель достигается тем, что на первом этапе проводится десорбция биологически активных веществ с поверхности использованной твердой фазы обработкой щелочью и детергентом. Они гидролизуют белки, омыляют жиры, расщепляют углеводы, тем самым вызывают дестабилизацию иммунохимических веществ на поверхности твердой фазы и удаляют их путем снижения поверхностного натяжения.

На втором этапе обработка кювет ультразвуком в жидких средах для создания зон дефекта на внутренней поверхностей твердой фазы, содержащих открытые водородные связи и статическое электричество. В жидких средах ультразвуковые волны вызывают ряд явлений, из которых наибольшим эффектом обладает кавитация. При этом в жидкости, подвергшейся действию ультразвука, при захлапывании воздушных пузырьков возникают полости огромных давлений. В зонах этих полостей образуются ударные волны. Они разрывают связи, повышают температуру, развивают химические процессы, способствуют образованию электрических зарядов и ионизирующих молекул: После постановки твердофазного хемилюминесцентного иммуноанализа полистироловые измерительные кюветы погружают на 12-16 ч в 0,2-0,5% раствор детергента. В качестве детергента можно использовать твен-20 и стиральный порошок. Затем кюветы индивидуально споласкивают водопроводной водой и погружают на 16-24 ч в раствор 6Н NaOH. После этого кюветы помещают в дистиллированную воду на 18-24 ч при комнатной температуре.

На втором этапе полистироловые кюветы подвергают обработке ультразвуком на аппарате Bronsonic B-220 (USA) при частоте колебаний 30-60 кГц и акустической мощности 30-70 Вт/см² в течение 30 мин в 0,1-0,2%-ном растворе детергента 7Х (Германия) и 30 мин в дистиллированной воде. Затем кюветы подсушивают при комнатной температуре. Обработанные таким образом кюветы используют в дальнейшей работе.

Таким образом, применение предложенной совокупности приемов позволяет восстановить у полистироловых кювет первоначальное качество и использовать их для повторного проведения иммунохимического анализа, что значительно удешевляет расходы на проведение исследований и придает способу изобретательский уровень.

Пример 1. Использованные кюветы обрабатывают проточной водой проводной водой, затем на 16-24 ч погружают в дистиллированную воду.

Контрольные измерения дают очень сильное фоновое свечение, исчисляемые в сотнях.

Пример 2. После проведения анализа измерительные кюветы обрабатывали 1-8 Н NaOH 16-24 ч и 0,1-1,0 раствором детергента 12-16 ч, затем ополаскивали дистиллированной водой при комнатной температуре.

При проведении контрольного измерения на хемилюминометре наблюдаем фоновое свечение в пределах десяток mV. результат отрицательный, т.е. кюветы непригодны для повторного использования, хотя наблюдается снижение величины фона.

Пример 3. Использованные полистироловые кюветы подвергали обработке ультразвуком при частоте колебаний 30-60 кГц и акустической мощности 30-70 кг/см² в течение 30 мин в 0,1-0,2%-ном растворе детергента 7Х.

Обработанные кюветы дают фоновое "свечение" в пределах десяток mV, а после обработки фон снижается, но кюветы еще не пригодны для повторного использования.

Результаты этих исследований приведены в табл.1.

Таким образом из данных табл.1 видно, что предложенная схема обработки кювет способствует восстановлению их адсорбционной способности и делает пригодным наравне с новыми для постановки хемилюминесцентного иммуноанализа.

Пример 4. Для сравнения чувствительности ХЛИА в новых и восстановленных кюветах исследовано по 5 штаммов соответствующих микроорганизмов. Анализ проведен с помощью коммерческих чумных, сапных и экспериментах с/язвенных иммуноферментных тест-систем (табл.2).

Таким образом, благодаря предложенному способу удалось полностью восстановить первоначальные свойства кювет и получить одинаковые с ними результаты.

Использование предлагаемого способа имеет ряд преимуществ: возможность повторного использования кювет для поставки ХЛИА; cоздание экономического эффекта.

Формула изобретения

Способ подготовки кювет для иммунохимических реакций, включающий воздействие на одноразовые полистирольные кюветы 0,2 0,5%-ным раствором детергента в течение 12-16 ч, погружение на 16-24 ч в раствор 6н. NaOH, затем погружение на 18-24 ч в дистиллированную воду и обработку ультразвуком в течение 30 мин при частоте колебаний 30-60 кГц и оптической мощности 30-70 вт/см² в 0,1-0,2%-ном растворе детергента 7Х и 30 мин в дистиллированной воде.

РИСУНКИ

Рисунок 1