Способ диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов и способ получения контрольного образца для его осуществления (варианты)

 

Изобретение относится к медицине (лабораторной диагностике) и может применяться для диагностики заболеваний опухолевого происхождения. Изобретение позволяет повысить точность диагностики за счет снижения гипердиагностики и расширить область диагностируемых внутренних органов (желудок, поджелудочная железа, легкие и т.д.). Сущность способа диагностики, основанного на исследовании пробы крови в сравнении с контролем путем пропускания ультразвука (УЗ) переменной частоты 3-20 МГц через дистиллированную воду (ДH₂О) и контрольный образец при 37±0,05^oC (в одном варианте), через (ДН₂O) контрольный образец и пробу сыворотки при температурах Т₁ и Т₂ (T₂ > T₁) из диапазона 15 - 40^oC (третий вариант) с последующим измерением относительных скоростей ультразвука ϕ₁< 15,2·10^-13, диагностируют заболевание (в первом варианте), ϕ₁ и ϕ₂ (для пробы сыворотки крови) V и при ϕ₁·ϕ₂<270·10^-3 диагностируют заболевание (второй вариант), ϕ₁, ϕ₂ для температуры Т₁, ϕ₃, ϕ₄ для температуры Т₂ и определения величины и при величине П≅300 диагностируют заболевание (третий вариант), для П от 301 до 399 дополнительно вычисляется и при П₁ < 16,0 диагностируют заболевание; вычисляется и при величине П₂ < 83 диагностируют заболевание; вычисляется П₃=((mS)_o·S_o·δ(mS))·10¹¹ и при величине П₃ < 59 диагностируют заболевание. Контрольные образцы для осуществления способа (по 1 и 2 вариантам) готовят смешиванием 30%-ной трихлоруксусной (ТХУ кислоты, доведенной разбавлением до концентрации с относительным изменением скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде (-18,0±0,05)·10^-3, с пробой сыворотки при соотношении объемов 1:4 и добавлением раствора NaHCO₃ в объеме, равном объему сыворотки крови и имеющим относительное изменение скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде (22,0±0,05)·10^-3, смесь центрифугируют со скоростью 6000 об/мин в течение 1,5 мин и надосадочную жидкость используют как контрольный образец. Для третьего варианта способа диагностики в способе получения контрольного образца смесь пробы сыворотки крови и ТХУ центрифугируют при скорости 5000 об/мин в течение 2 мин, затем добавляют раствор NaHCO₃ с относительным изменением скорости УЗ по отношению к ДН₂O (16,0±0,05)·10^-3 и смесь центрифугируют при скорости 5000 об/мин в течение 2 мин, после чего надосадочную жидкость используют в качестве контрольного образца. 3 с. и 5 з. п. ф-лы.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может применяться для диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов.

Актуальность данной задачи определяется тем, что используемые лабораторные методы диагностики недостаточно эффективны в связи с их низкой чувствительностью и специфичностью. Вследствие этого выявленный с помощью традиционных методов рак в 50% случаев является генерализованным. Считают, что если бы рак был выявлен на ранних этапах своего развития, успешное его лечение было бы возможным у 90% больных по сравнению с 35% в настоящее время. Не удивительно, что число исследований, направленных на поиск методов, с помощью которых можно было бы диагностировать рак до его клинического проявления, постоянно увеличивается.

Известен способ диагностики онкологических заболеваний внутренних органов методом иммуноферментного анализа (ИФА). Однако, как показывают собственные наблюдения и литературные материалы, использование ИФА особенно на ранних стадиях рака нерезультативно, что объясняется гетерогенностью состава опухолей и, как следствие, различием числа продуцирующих клеток при новообразованиях одинакового происхождения и размера, разнообразием маркеров, которые может продуцировать опухоль, разной степенью интенсивности синтеза и метаболизма маркера, а также пределами чувствительности методов, применяемых для их обнаружения.

Реальная диагностическая эффектность способа ИФА колеблется от 30-40% для РЭА до 65% для СА 19 9 при раке поджелудочной железы. Кроме того, способ ИФА не предназначен для скрининговых обследований.

Комитетом экспертов Международной Федерации клинической химии по референтным величинам принято называть диагностической эффективностью (ДЭ) следующую величину: где ИП истинно положительный результат, ИО истинно отрицательный результат, ЛО ложноотрицательный результат, ЛП ложноположительный результат.

Известен способ дифференциальной диагностики вирусных гепатитов и желтух опухолевого происхождения путем исследования сыворотки крови больного, через которую пропускают ультразвук. Частоту ультразвука варьируют от 7 до 8 МГц и наоборот, измеряют относительное изменение скорости его прохождения в образце и сравнивают с контролем при нормальном атмосферном давлении и 25 ± 0,1^oC. При величине параметра (17,9 19,7) 10^-3 делают вывод о желтухе опухолевого происхождения, при величине (21,2 22,4) 10^-3 о вирусном гепатите. Описанный способ имеет ограниченные возможности, так как может применяться только при заболеваниях печени, причем с 20 23% гипердиагностики, особенно при гепатите В и циррозе печени.

Технической задачей изобретения является повышение точности диагностики за счет снижения гипердиагностики и расширения диагностируемых внутренних органов (желудок, поджелудочная железа, нижний отдел кишечника, половые органы, легкие и т.д.).

В способе ультразвуковой диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов, основанном на исследовании пробы крови путем пропускания через дистиллированную воду ультразвука с изменяющейся частотой и измерением относительной скорости его прохождения, по изобретению ультразвук, изменяющийся в интервале 3 20 МГц, дополнительно пропускают через контрольный образец, причем контрольный образец и дистиллированная вода находятся при 37 ± 0,05^oC, и при величине относительной скорости ϕ₁ прохождения ультразвука в контрольном образце, меньшей 15,2·10^-3 диагностируют опухолевое заболевание (п. 1 формулы изобретения).

Данный способ диагностики осуществляется следующим образом.

У пациента из локтевой вены забирают 7 мл крови без антикоагулянта и оставляют на 1,5 ч при комнатной температуре для образования сыворотки крови. Затем пробирку центрифугируют и 0,8 мл сыворотки крови отбирают в чистую сухую пробирку и используют для получения контрольного образца, который готовится в соответствии с п. 3 формулы изобретения. Затем в устройство для контроля биологических жидкостей, в котором поддерживается температура 37 ±0,05^oC, помещают дистиллированную воду (ДН₂O). На устройство контроля подают сигнал частотой, изменяющейся на 1 МГц, из любой части диапазона от 3 до 20 МГц (например, от 6,5 до 7,5 МГц) с высокочастотного генератора (например, типа Г4 -164), управляемого микроЭВМ.

Установлено, что корректные измерения относительной скорости ультразвука в сыворотке крови, дистиллированной воде и контрольном образце возможны при изменении частоты не менее чем на 1 МГц в любой части диапазона от 3 до 20 МГц.

Пьезоизлучатели устройства контроля преобразуют ВЧ-сигнал в ультразвуковой сигнал той же частоты, который распространяется в ДН₂О, находящейся в акустической ячейке устройства контроля. Пьезоприемники преобразуют ультразвуковой сигнал в ВЧ-сигнал, который поступает на высокочастотный микровольтметр (например, типа ВЗ 57). Продетектированный высокочастотный сигнал с выхода микровольтметра поступает на вольтметр постоянного тока (например, типа В7 53), управляемый той же ЭВМ. В результате обработки данных, получаемых с пьезоприемников устройства контроля биожидкостей, в памяти микроЭВМ фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в выбранном диапазоне частот (например, от 6,5 до 7,5 МГц) для дистиллированной воды. Затем в акустическую ячейку устройства контроля заливается контрольный образец и аналогично в памяти микроЭВМ фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в том же диапазоне (от 6,5 до 7,5 МГц) для контрольного образца. Затем микроЭВМ вычисляет среднюю разность частотного расстояния между резонансными пиками и вычисляет номер j выбранного резонансного пика по формуле: где N число частотных расстояний между резонансными пиками в выбранном частотном диапазоне (от 6,5 до 7,5 МГц). Затем выбирают значения центральных частот резонансных пиков одного и того же номера для дистиллированной воды и контрольного образца и вычисляются соответствующие скорости ультразвука по формуле: где V¹ обозначает скорость ультразвука в каждой из исследованных сред: для дистиллированной воды 1 H₂O, для контрольного образца 1=S; v¹ и f¹_j скорости ультразвука и центральные частоты резонансных пиков номера j для дистиллированной воды (H₂O) и контрольного образца (S); z_jI продольные волновые числа устройства для контроля биологических сред для H₂O и S; R радиус устройства для контроля биосред.

На основании результатов вычислений по формуле (2) вычисляют относительное изменение скорости ультразвука в контрольном образце относительно дистиллированной воды при 37±0,05^oC:
и при величине относительной скорости ϕ₁, меньшей 15,2 10^-3, диагностируют опухолевое заболевание.

Точность диагностики может быть повышена путем применения способа, сущность которого заключается в следующем.

Способ диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов, основанный на исследовании пробы крови путем пропускания через дистиллированную воду и пробу сыворотки крови ультразвука с изменяющейся частотой и измерением относительной скорости его прохождения ϕ₂; новым в данном способе является то, что ультразвук, изменяющийся в интервале 3 20 МГц, пропускают дополнительно через контрольный образец, причем дистиллированная вода, проба сыворотки и контрольный образец находятся при температуре 37±0,05^oC, измеряют относительную скорость ϕ₁ прохождения ультразвука через контрольный образец, при ϕ₁, большей 15,6·10^-3, и ϕ₂, меньшей 18,0·10^-3, вычисляют произведение ϕ₁·ϕ₂,, а при величине этого произведения, меньшей 270·10^-6, диагностируют опухолевое заболевание (п. 2 формулы изобретения).

Данный способ диагностики осуществляется следующим образом.

У пациента из локтевой вены забирают 7 мл крови без антикоагулянта и оставляют на 1,5 ч при комнатной температуре для образования сыворотки крови. Затем пробирку с кровью центрифугируют и 0,8 мл сыворотки крови отбирают в чистую сухую пробирку, получают контрольный образец, который готовится по способу, изложенному в п. 3 формулы изобретения. Затем в устройство для контроля биологических жидкостей, в котором поддерживается температура 37±0,05^oC, помещают дистиллированную воду (ДН₂O). На устройство для контроля подают сигнал частотой, изменяющейся на 1 МГц, из любой части диапазона от 3 до 20 МГц (например, от 6,5 до 7,5 МГц) с высокочастотного генератора (например, ГЧ 164), управляемого микроЭВМ.

Пьезоизлучатели устройства контроля преобразуют высокочастотный сигнал в ультразвуковой сигнал той же частоты, который распространяется в ДН₂O, находящейся в акустической ячейке устройства контроля. Пьезоприемники устройства контроля преобразуют ультразвуковой сигнал в ВЧ-сигнал, который поступает на высокочастотный микровольтметр (например, типа ВЗ 57). Продетектированный высокочастотный сигнал с выхода микровольтметра поступает на вольтметр постоянного тока (например, типа В7 53), управляемый той же ЭВМ. В результате обработки данных, получаемых с пьезоприемников устройства контроля, в памяти микроЭВМ фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в выбранном диапазоне частот (например, от 6,5 до 7,5 МГц) для дистиллированной воды. Затем в акустическую ячейку устройства контроля заливается контрольный образец и аналогично в памяти микроЭВМ фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в том же диапазоне частот (от 6,5 до 7,5 МГц) для контрольного образца. И наконец, в акустическую ячейку устройства контроля заливают сыворотку крови и аналогично в памяти микроЭВМ фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в том же диапазоне (от 6,5 до 7,5 МГц) частот для сыворотки крови. Затем микроЭВМ вычисляет среднюю разность частотного расстояния между резонансными пиками и определяет номер j выбранного резонансного пика по формуле (1).

Затем выбираются значения центральных частот f¹_j резонансных пиков одного и того же номера для дистиллированной воды и контрольного образца сыворотки крови и вычисляется соответствующие скорости ультразвука по формуле:

где l обозначает соответственно каждую из исследованных сред: для дистиллированной воды l=H₂O, для контрольного образца l=S, для сыворотки крови l= mS; v¹ и f¹_j скорости ультразвука и центральные частоты резонансных пиков номера j для дистиллированной воды (H₂O), контрольного образца (S) и сыворотки крови (mS); z_jI продольные волновые числа устройств для контроля биологических сред для H₂O, S и mS; R радиус устройства для контроля биосред.

На основании результатов вычислений по формуле (4) вычисляется относительное изменение скорости ультразвука в контрольном образце ϕ₁ и сыворотке крови ϕ₂ относительно дистиллированной воды при температуре 37±0,05^oC:


при ϕ₁ большей 15,6·10^-3, и ϕ₂, меньшей 18,0·10^-3, вычисляют произведение относительных скоростей ϕ₁·ϕ₂ и при величине, меньшей 270·10^-6, диагностируют опухолевое заболевание.

Для осуществления способ диагностики по пп. 1 и 2 формулы изобретения необходимо получение контрольного образца из пробы сыворотки крови, сущность способа изготовления которого изложена в п. 3 формулы изобретения.

Большое количество способов клинической лабораторной диагностики основано на получении контрольных образцов из сыворотки крови. Однако эти способы получения контрольных образцов не применимы для описанного выше способа диагностики, основанного на ультразвуковых измерениях в сыворотке крови и контрольном образце, так как необходимые для диагностики компоненты сыворотки крови и получаемых традиционными способами контрольных образцов не могут быть достоверно зафиксированы с помощью ультразвуковых измерений, поскольку их спектральные характеристики находятся в ультрафиолетовой, видимой и инфракрасной частях электромагнитного спектра. Ультразвуковые характеристики принципиально отличаются от электромагнитных. Поэтому способ получения контрольного образца для выявления необходимых для диагностики компонентов сыворотки крови принципиально отличается от существующих. Единственно общим является этап осаждения белков сыворотки крови, который применяется в лабораторной клинической биохимии очень часто.

Известен способ получения контрольного образца для определения активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови, в котором для осаждения белков к сыворотке крови добавляют 10%-ную трихлоруксусную кислоту (ТХУ). Однако этот способ не применим для нашего способа диагностики, так как в результате дальнейших операций получается контрольный образец, спектральные характеристики которого лежат в диапазоне, недоступном для ультразвуковых измерений.

Технической задачей изобретения является получение контрольного образца, который позволит измерить с помощью ультразвука характеристики компонентов сыворотки крови, позволяющих диагностировать заболевание опухолевого происхождения внутренних органов.

Сущность способа изготовления контрольного образца (по п. 3 формулы изобретения), основанного на смешивании пробы сыворотки крови с трихлоруксусной кислотой, заключается в следующем: берут 30%-ную кислоту, доводят ее до концентрации с относительным изменением скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде, равным (-18,0±0,05)·10^-3, при соотношении объемов сыворотки крови и добавляемой кислоты 4:1, перемешивают осадок и добавляют раствор двухуглекислого натрия NaHCO₃ в объеме, равном объему сыворотки крови и имеющем относительное изменение скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде (22,0±0,05)·10^-3; полученную смесь перемешивают до окончания реакции, затем центрифугируют при скорости вращения 6000 об/мин в течение 1,5 мин, после чего надосадочную жидкость сливают и используют для исследований как контрольный образец.

В результате лабораторных и клинических испытаний были определены оптимальные концентрации ТХУ и NaHCO₃, объемы смешивания раствора ТХУ с сывороткой крови.

Предлагаемый способ получения контрольного образца для реализации способа диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов осуществляется следующим образом.

Готовят ТХУ путем добавления дистиллированной воды порциями к 30%-ному раствору ТХУ и измерения (после каждого добавления и тщательного перемешивания) в получаемом растворе относительного изменения скорости ультразвука на устройстве для контроля биологических жидкостей аналогичным образом, как изложено выше. Поскольку скорость ультразвука в ТХУ меньше скорости ультразвука в дистиллированной воде, то результирующее значение относительной скорости ультразвука в растворе ТХУ отрицательно. Необходимая для получения контрольного образца концентрация раствора ТХУ имеет относительное изменение скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде (-18,0±0,05)·10^-3. Это раствор N 1. Затем готовят раствор NaHCO₃ путем разбавления 30 г химически чистого NaHCO₃ в 1000 мл дистиллированной воды, перемешивания до полного растворения NaHCO₃ и последующего фильтрования и добавления к профильтрованному раствору дистиллированной воды порциями и измерения (после каждого добавления и тщательного перемешивания) в получаемом растворе относительного изменения скорости ультразвука на устройстве для контроля биологических жидкостей аналогичным образом, как изложено. Необходимая для получения контрольного образца концентрация раствора NaHCO₃ имеет относительное изменение скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде (22,0±0,05)·10^-3. Это раствор N 2.

Для осуществления способа получения контрольного образца к 0,8 мл сывороткой крови добавляют 0,2 мл раствора N 1, перемешивают осадок и добавляют раствор N 2. в объеме, равном объему сыворотки крови, полученную смесь перемешивают до окончания реакции, затем центрифугируют при скорости вращения 6000 об/мин в течение 1,5 мин, после чего надосадочную жидкость сливают и используют для исследований как контрольный образец.

Ультразвуковой способ приготовления растворов N 1 и N 2 заданной концентрации выгодно отличается от традиционных способов тем, что повышается точность приготовления заданной концентрации, которую в любой момент можно проверить на устройстве для контроля биологических жидкостей.

Еще больше возможности по повышению точности диагностики опухолевых заболеваний внутренних органов можно извлечь из метода ультразвуковой диагностики пробы крови путем применения способа диагностики, изложенного в пп. 4-7 формулы изобретения.

Сущность изобретения (п.4 формулы изобретения) заключается в следующем.

В способе ультразвуковой диагностики, основанном на исследовании пробы крови путем пропускания через дистиллированную воду и пробу сыворотки крови ультразвука с изменяющейся частой и измерением относительной скорости ϕ_2/ его прохождения, ультразвук, изменяющийся в интервале 3-20 МГц, пропускают дополнительно через контрольный образец, измеряет относительную скорость ϕ₁ его прохождения через контрольный образец, причем измерения относительных скоростей производят дважды, когда все образцы (ДН₂O, сыворотка крови, контрольный образец) находятся при температуре Т₁, получая соответственно величины скоростей ϕ₁ и ϕ₂, и при температуре Т₂, получая соответственно величины скоростей ϕ₃ и ϕ₄, причем температуры Т₁ и Т₂ должны удовлетворять соотношению Т₂ > T₁, из диапазона температур 15 40^oC, после этого определяют величину П по формуле:
П = δ(S)·δ(mS)·S₀·(mS)₀·10¹⁰, (7)


S₀= δ(S)+ϕ₄ (10)
(mS)_o=δ(mS)+ϕ₃ (11)
и при величине П ≅ 300 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов с диагностической эффективностью не менее 94
Результаты клинических испытаний способа диагностики показали, что для здоровых лиц величина П>500. При этом ни один из обследованных больных злокачественными новообразованиями не имел величину П>570. В то же время некоторые онкологические больные имели величину П в интервали от 300 до 500. Поэтому были определены критерии, позволяющие диагностировать опухолевые заболевания внутренних органов и при П от 300 до 500. Для этого интервал от 300 до 500 разделен на 3 интервала:
1) П от 301 до 399 (п. 5 формулы изобретения);
2) П от 400 до 449 (п. 6 формулы изобретения);
3) П от 450 до 499 (п. 7 формулы изобретения).

Для интервала П от 301 до 399 дополнительно вычисляется

и при величине П1 <16,0 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов с ДЭ 92% Для интервала П от 400 до 449 вычисляется

и при П₂ <83 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов с ДЭ 91% Для интервала П от 450 до 499 вычисляется
П₃=((mS)_o·S_o·δ(mS))·10¹¹ (14)
и при величине П₃ <59 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов с ДЭ 87%
Предлагаемый способ диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов осуществляется следующим образом.

У пациента из локтевой вены забирают 7 мл крови без антикоагулянта и оставляют на 1,5 ч при комнатной температуре для образования сыворотки крови. Затем пробирку цинтрифугируют и 0,8 мл сыворотки крови отбирают в чистую сухую пробирку, получают контрольный образец, который готовится по способу п. 8 формулы изобретения. Затем в два одинаковых устройства для контроля биологических жидкостей, в дном из которых поддерживается температура Т₁, а в другой Т₂ (T₂ > T₁), находящиеся в диапазоне от 15 до 40^oC, помещают дистиллированную воду (ДН₂O). На устройство для контроля биологических жидкостей подают сигнал частотой, изменяющейся от 3 до 20 МГц (например, от 6,5 до 7,5 МГц) с высокочастотного генератора (например, ГЧ-164), управляемого микроЭВМ. Пьезоизлучатели устройств преобразуют ВЧ-сигнал в ультразвуковой сигнал той же частоты, который распространяется в ДН₂O, находящейся в акустических ячейках устройств. Пьезоприемники преобразуют ультразвуковой сигнал в ВЧ-сигнал, который поступает на ВЧ-переключатель, управляемый микроЭВМ, которая через этот переключатель подсоединяет к ВЧ-микровольтметру то одно, то другое устройство для контроля биожидкостей. Продетектированный ВЧ-сигнал с выхода ВЧ микровольтметра поступает на вольтметр постоянного тока (например, В7-53), также управляемый микроЭВМ. В результате обработки данных, получаемых с пьезоприемников устройств для контроля биожидкостей, в памяти микроЭВМ фиксируют центральные части всех резонансных пиков в выбранном диапазоне частот (например, от 6,5 до 7,5 МГц) для дистиллированной воды. Затем в оба устройства заливается сыворотка крови и аналогично в памяти микроЭВМ фиксируются центральные части всех резонансных пиков в том же диапазоне от 6,5 до 7,5 МГц для сыворотки крови. И наконец, в оба устройства заливается контрольный образец и для него аналогично в памяти микроЭВМ фиксируются центральные частоты всех резонансных пиков в том же диапазоне (например, от 6,5 до 7,5 МГц) для контрольного образца. Затем микроЭВМ вычисляет среднюю разность частотного расстояния между резонансными пиками и номер j выбранного резонансного пика по следующей формуле:

где N число частотных расстояний между резонансными пиками в выбранном частотном диапазоне от 6,5 до 7,5 МГц. Затем выбираются значения центральных частот резонансных пиков одного и того же номера для дистиллированной воды, сыворотки крови и контрольного образца и вычисляются соответствующие скорости ультразвука по формуле:

где V¹ обозначает скорость ультразвука в каждой из исследованных сред: для дистиллированной воды l=H₂O, для контрольного образца l mS, для сыворотки крови l S; f¹_j центральные частоты резонансных пиков номера j для дистиллированной воды (H₂O), контрольного образца (mS) и сыворотки крови (S); Z_jI продольные волновые числа устройств для контроля биологических сред для H₂O, S и mS; R радиус устройства для контроля биосред. На основании результатов вычислений по формуле (16) вычисляют относительные изменения скорости ультразвука в сыворотке крови и контрольном образце относительно дистиллированной воды при температурах Т₁ и Т₂:


Затем вычисляют П по формулам (7)-(11) и при величине П≅300 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов.

Если П имеет величину от 301 до 399, вычисляют величину П₁ по формуле (12) и при величине П₁ <16,0 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов.

При величине П от 400 до 449 вычисляется П₂ по формуле (13) и при величине П₂<83 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов.

Если П имеет значение от 450 до 499, вычисляют величину П₃ по формуле (14) и при величине П₃ <59 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов.

Предлагаемый способ прошел апробацию в Онкологическом научном центре РАМН, Нижегородском областном медицинском диагностическом центре в Центральном военном госпитале Министерства безопасности РФ. Результаты апробации способа диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов, представленные в приложении, подтверждают его высокую диагностическую эффективность около 90%
Для осуществления данного способа диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов необходимо получение из сыворотки крови контрольного образца.

Большое количество способов клинической лабораторной диагностики основано на получении контрольных образцов из крови. Однако эти способы получения контрольных образцов не применимы для описанного выше способа диагностики, основанного на ультразвуковых измерениях в сыворотке крови и контрольном образце, так как необходимые для диагностики компоненты крови в получаемых традиционными способами контрольных образцах не могут быть достоверно зафиксированы с помощью ультразвуковых измерений, поскольку и спектральные характеристики находятся в ультрафиолетовой, видимой и инфракрасной частях электромагнитного спектра.

Ультразвуковые характеристики принципиально отличаются от электромагнитных. Поэтому способ получения контрольного образца для выявления необходимых для диагностики компонентов сыворотки крови принципиально отличается от существующих. Единственно общим является этап осаждения белков сыворотки крови, который применяется в лабораторной клинической биохимии очень часто.

Известен способ получения контрольного образца для определения активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови, в котором для осаждения белков к сыворотке крови добавляют 10%-ную трихлоруксусную кислоту (ТХУ). Однако этот способ не применим для нашего способа диагностики, так как в результате дальнейших операций получается контрольный образец, спектральные характеристики которого лежат в диапазоне, недостаточном для ультразвуковых измерений.

Технической задачей, которая решается изобретением, является получение контрольного образца, который позволит измерить с помощью ультразвука характеристики компонентов сыворотки крови, позволяющих диагностировать заболевание опухолевого происхождения внутренних органов.

Сущность изобретения заключается в следующем.

В способе получения контрольного образца путем смешивания сыворотки крови с ТХУ берут ТХУ концентрации 30% доводят ее разбавлением до концентрации с относительным изменением скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде, равным (16,0±0,05)·10^-3, соотношение объема сыворотки крови и ТХУ 4: 1, перемешивают осадок и центрифугируют при скорости вращения 5000 об/мин в течение 2 мин, затем надосадочную жидкость убирают и к осадку добавляют раствор NaHCO₃ в объеме, равном объему исходной сыворотки крови и имеющем относительное изменение скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде (16,0±0,05)·10^-3, полученную смесь перемешивают до окончания реакции, затем центрифугируют при скорости вращения 5000 об/мин в течение 2 мин, после чего надосадочную жидкость сливают и используют для исследований как контрольный образец.

В результате лабораторных и клинических испытаний определены оптимальные концентрации ТХУ и NaHCO₃, объемы смешивания раствора ТХУ с сывороткой крови и объем NaHCO₃, примешиваемый к осадку на втором этапе приготовления контрольного образца.

Предлагаемый способ получения контрольного образца для реализации способа диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов осуществляется следующим образом.

Готовят раствор ТХУ путем добавления дистиллированной воды порциями к 30% -ному раствору ТХУ и измерения после каждого добавления и тщательного перемешивания в получаемом растворе относительного изменения скорости ультразвука на устройстве для контроля биологических жидкостей аналогичным образом, как изложено выше в данном описании. Поскольку скорость ультразвука в ТХУ меньше скорости ультразвука в дистиллированной воде, то результирующее значение относительной скорости ультразвука в растворе ТХУ отрицательно. Необходимая для получения контрольного образца концентрация раствора ТХУ имеет относительное изменение скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде (18,0±0,05)·10^-3. Это раствор N 1. Затем готовят раствор NaHCO₃ путем разбавления 30 г химически чистой NaHCO₃ в 1000 мл дистиллированной воды, перемешивания до полного растворения NaHCO₃ и последующего фильтрования и добавления к профильтрованному раствору дистиллированной воды порциями и измерения после каждого добавления и тщательного перемешивания в получаемом растворе относительно изменения скорости ультразвука на устройстве для контроля биологических жидкостей аналогичным образом, как изложено выше в данном описании. Необходимая для получения контрольного образца концентрация раствора NaHCO₃ имеет относительное изменение скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде (16,0±0,05)·10^-3. Это раствор N 2.

Для осуществления способа получения контрольного образца к 0,8 мл сыворотки крови добавляют 0,2 мл раствора N 1, перемешивают осадок и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 2 мин, например, на центрифуге ОПН-8. Затем надосадочную жидкость убирают и к осадку добавляют раствор N 2, полученную смесь перемешивают до окончания реакции, затем центрифугируют при скорости вращения 5000 об/мин в течение 2 мин, после чего надосадочную жидкость сливают и используют для исследований как контрольный образец.

Ультразвуковой способ приготовления растворов N 1 и N 2 заданной концентрации выгодно отличается от традиционных способов тем, что повышается точность приготовления раствора заданной концентрации, которую в любой момент можно проверить на устройстве для контроля биологических жидкостей.

Формула изобретения

1. Способ диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов, основанный на исследовании пробы крови в сравнении с контролем путем пропускания через дистиллированную воду ультразвука с изменяющейся частотой и измерением относительной скорости его прохождения, отличающийся тем, что ультразвук, изменяющийся в интервале 3 20 МГц, дополнительно пропускают через контрольный образец, причем контрольный образец и дистиллированная вода находятся при температуре 37 ± 0,05^oС, и при величине относительной скорости ϕ прохождения ультразвука в контрольном образце, меньшей 15,2·10^-3 диагностируют опухолевое заболевание.

2. Способ диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов, основанный на исследовании пробы крови в сравнении с контролем путем пропускания через дистиллированную воду и пробу сыворотки крови ультразвука с изменяющейся частотой и измерением относительной скорости его прохождения v₂, отличающийся тем, что ультразвук, изменяющийся в интервале 3 20 МГц, пропускают дополнительно через контрольный образец, причем дистиллированная вода, проба сыворотки крови и контрольный образец находятся при температуре 37 ± 0,05^oС, измеряют относительную скорость ϕ₁ прохождения ультразвука через контрольный образец, при ϕ₁, большей 15.6 · 10^-3, и ϕ₂, меньшей 18,0 · 10^-3 вычисляют произведение ϕ₁·ϕ₂, а при величине этого произведения, меньшей 270 · 10^-6, диагностируют опухолевое заболевание.

3. Способ изготовления контрольного образца для осуществления способов диагностики по пп.1 и 2 путем смешивания пробы сыворотки крови с трихлоруксусной кислотой, отличающийся тем, что берут 30%-ную кислоту, доводят ее до концентрации с относительным изменением скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде, равным (-18,0 ± 0,05) · 10^-3 при соотношении объемов сыворотки крови и добавляемой кислоты 4:1, перемешивают осадок и добавляют раствор двууглекислого натрия NaHCO₃ в объеме, равном объему сыворотки крови и имеющем относительное изменение скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде, равное (22,0 ± 0,05) · 10^-3, полученную смесь перемешивают до окончания реакции, затем центрифугируют со скоростью 6000 об/мин в течение 1,5 мин, после чего надосадочную жидкость используют как контрольный образец.

4. Способ диагностики заболеваний опухолевого происхождения внутренних органов, основанный на исследовании пробы крови в сравнении с контролем путем пропускания через дистиллированую воду и пробу сыворотки крови ультразвука с изменяющейся частотой и измерением относительной скорости ϕ₂ его прохождения, отличающийся тем, что ультразвук, изменяющийся в интервале 3 20 МГц, пропускают дополнительно через контрольный образец, измеряют относительную скорость ϕ₁ его прохождения через дистиллированную воду и контрольный образец, причем измерения ϕ₁ и ϕ₂ производят дважды, когда все образцы находятся при температуре Т₁, а затем при температуре Т₂, получая соответственно величины относительных скоростей ультразвука для контрольного образца ϕ₃ и для пробы сыворотки крови ϕ₄, при этом температуры Т₁ и Т₂ должны удовлетворять соотношению T₂ > T₁, из диапазона температуры 15 40^oС, после этого определяют величину П по формуле

при величине П ≅ 300 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что при величине П 301 399 дополнительно определяют величину П₁ по формуле

и при величине П₁ < 16,0 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов.

6. Способ по п.4, отличающийся тем, что при величине П 400 449 дополнительно определяют величину П₂ по формуле

и при величине П₂ < 83 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов.

7. Способ по п.4, отличающийся тем, что при величине П от 450 до 499 дополнительно определяют величину П₃ по формуле
П₃=((mS)_o·S_o·δ(mS))·10¹¹
и при величине П₃ <59 диагностируют опухолевое заболевание внутренних органов.

8. Способ получения контрольного образца для осуществления способов диагностики по пп. 4 7 путем смешивания сыворотки крови с трихлоруксусной кислотой, отличающийся тем, что 30%-ную кислоту доводят до концентрации с относительным изменением скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде, равным (-18,0 ± 0,05) · 10^-3, при соотношении объема сыворотки крови и добавляемой кислоты 4 1 перемешивают осадок и центрифугируют при скорости вращения 5000 об/мин в течение 2 мин, затем надосадочную жидкость убирают и к осадку добавляют раствор натрия двууглекислого NaHCO₃ в объеме, равном объему исходной сыворотки крови и имеющем относительное изменение скорости ультразвука по отношению к дистиллированной воде (16,0 ± 0,05) · 10^-3, полученную смесь перемешивают до окончания реакции, затем центрифугируют при скорости вращения 5000 об/мин в течение 2 мин, после чего надосадочную жидкость сливают и используют для исследований как контрольный образец.