Способ диагностики злокачественных опухолей

 

Предлагаемый способ относится к медицине, в частности к онкологии. Цель изобретения - повышение достоверности и обеспечение универсальности диагностики злокачественных опухолей. Для диагностики злокачественных опухолей по предлагаемому способу к 1 мл сыворотки (негемолизированной) крови наслаивают 1 мл цитохрома C (4 мг/мл), визуально наблюдают на поверхности этих жидкостей белое кольцо, по которому судят о реакции преципитации, смешивают указанные жидкости, определяют наличие низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохрома C, по реакции преципитации и по соотношению низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохрома C в пределах от 225 до 663 ед. плотности диагносцируют злокачественную опухоль. 1 табл.

Предлагаемый способ относится к медицине, в частности к онкологии.

Проблема диагностики злокачественных новообразований является ключевой проблемой в онкологии, решение которой обеспечивает успешное лечение больных.

Среди многочисленных и разнообразных способов диагностики злокачественных опухолей особое место занимает способы диагностики по крови, некоторые из которых основаны на использовании: лимфоблаков, обнаруживаемых в периферической крови больных и являющихся одним из ранних признаков острого лимфолейкоза (Абдулкадыров К.М. Ругаль В. И. Хронический зозинофильный миелолейкоз. Врачебное дело, 1983, N 5, с. 52-54); лимфоцитопении, которая является основным симптомом лимфогранулематоза (Иванушкин Е.Ф. и др. Нарушение клеточного иммунитета у детей, больных лимфогранулематозом, и возможности его коррекции. Труды II Московского международного института им. Н.И. Пирогова. М. 1981, с. 50-59); повышение СОЭ, отражающего нарушение белкового обмена в организме больных и наблюдающего при многих злокачественных опухолях (Ранняя диагностика злокачественных опухолей. М. 1984); анемии, которая является одним из частых признаков рака толстой и прямой кишки (Мельников Р.А. Современное состояние проблемы диагностики лечения рак прямой кишки. В книге: Диагностика и лечение рака прямой кишки. Труды научно-исследовательского института онкологии Минздрава СССР, Л. 1983, с. 5-10); фиброногена в плазме крови (авт. св. N 978.862, A 61 K 35/16, 1980); фибронопептида A, повышенный уровень которого в крови выявляется у больных раком головы и шеи, раком легких, толстой кишки и предстательной железы (Rickles F. R. и др. Abnormalities of blood coaqulation in patients with cancer. Cancer, 1983, vol. 51, N 2, p. 301-307); билирубина, соответствующее изменение которого является характерным клиническим проявлением рабдомиосаркомы желчных протоков (Ganes G.O. и др. Differential features of some unusual Eilary tumors. Gastronintest Radiol, 1982, vol. 7, N 7, p. 341-348); ЯМР релаксации в сыворотке крови: у больных со злокачественными опухолями обнаружено увеличение времени спинрешеточной релаксации в сыворотке крови (Ревокатов О.П. и др. ЯМР-релаксация в сыворотке крови человека и диагностика злокачественных новообразований. Биофизика, 1982, т. 27, N 2, с. 336-337); хемилюминесценции плазмы крови, изменение которой обнаруживается у больных хроническим лимфолейкозом, некоторыми вариантами острого лейкоза и лимфогранулематозом (Серкиз Я. И. Хриенко А.П. Диагностическое значение хемилюминесценции плазмы крови у онкологических больных. В кн. Первый Всесоюзный биологический съезд 1982, с. 167);
титра антител к вирусу Эпштейна-Барр для диагностики скрытых форм рака носоглотки (Pearson G.R. Epstein Barr virus: Immunology. In: viral oncology. Ed. G. Kein. New York: Raun Press, 1980, p. 739-767);
альфафетопротеина в сыворотке крови для диагностики рака печени (Татаринов Ю. С. Эмбриональные и плацентарные белки как маркеры злокачественных опухолей. В кн. Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины. Труды II Московского медицинского института им. Н.И. Пирогова, М. 1979, с. 20-21);
коагуляции и фибринолиза крови (Диагностика изменений в системе свертывания крови и фибринолизе методом электрокоагулографии на этапах хирургического и комбинированного лечения онкологических больных для своевременной их коррекции. М. 1982, с. 6).

Из известных способов диагностики злокачественных опухолей по крови наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики злокачественных опухолей (Татаринов Ю.С. Эмбриональные и плацентарные белки как маркеры злокачественных опухолей. В кн. Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины. Труды II Московского медицинского института им. Н.И. Пирогова, М. 1979, с. 20-21), который и выбран в качестве прототипа.

Указанный способ основан на исследовании сыворотки крови обследуемого. При этом эмбриональные и плацентарные белки в сыворотке крови являются маркерами злокачественных опухолей. Высокая степень специфичности главная особенность таких маркеров новообразований. Так, наличие в сыворотке крови альфафетопротеина является признаком гепатоцелюлярного рака печени и опухолей желточного мешка, раково-эмбрионального антигена рака толстого кишечника, фетального сульфогликопротеина-рака желудка, онкофетального гликопротеина рака поджелудочной железы.

Кроме того, данный способ, основанный на использовании указанных маркеров, не позволяет достоверно диагностировать злокачественные опухоли у 100% больных.

Это объясняется тем, что при некоторых злокачественных опухолях (легкого, молочной железы, челюстей влагалища, прямой кишки и др.) возможны пропуски, так как они не имеют соответствующих маркеров.

Целью изобретения является повышение достоверности и обеспечение универсальности диагностики злокачественных опухолей.

Цель достигается тем, что к 1 мл сыворотки (негемолизированной) крови наслаивают 1 мл цитохрома C (4 мг/мл), визуально наблюдают на поверхности этих жидкостей белое кольцо, по которому судят о реакции преципитации, смешивают указанные жидкости, определяют наличие низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохрома C, по реакции преципитации и по соотношению низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохрома C определяют наличие онкобелка в сыворотке крови, который является признаком злокачественной опухоли у обследуемого.

Диагностику злокачественных опухолей по предлагаемому способу осуществляют следующим образом.

К 1 мл сыворотки (негемолизированной) крови, взятой натощак и лишенной форменных элементов, наслаивают 1 мл цитохрома C (4 мг/мл).

Визуально наблюдают на поверхности этих жидкостей белое кольцо, которое указывает на наличие реакции преципитации. При этом указанное кольцо наблюдают через 20-30 мин только в сыворотке онкологических больных.

3) Смешивают указанные жидкости.

4) Определяют, например, в спектрофотометре наличие низкоспиновой формы цитохрома C (542 нм) и высокоспиновой формы цитохрома C (380 и 620 нм).

5) По реакции преципитации и по соотношению низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохрома C определяют наличие онкобелка в сыворотке крови, который является признаком злокачественной опухоли у обследуемого.

Многолетние исследования под руководством доктора медицинских наук профессора Манойлова С. Е. показали, что под влиянием канцерогенных агентов, независимо от их физико-химической природы (проникающая-ионизирующая радиация, химические канцерогены, онкобелок и т.д.) селективно необратимо поражаются цитохромные системы, в частности цитохром C. При этом происходит необратимый переход из низкоспинового состояния (физиологически активного) в высокоспиновое состояние (физиологически неактивное) цитохромов, т.е. происходит процесс окисления атомов железа, следовательно, в клетках нарушаются процессы тканевого дыхания, процессы, связанные с энергетическим обменом.

В этом случае в клетках наступает необратимая гипоксия, приводящая к снижению энергетического обмена и создающая необходимые условия для биосинтеза так называемого онкобелка (туморнуклеопротеида) и к образованию опухолевой клетки.

Исследования показали, что для синтеза онкобелка количества энергии затрачивается меньше, чем для синтеза нормальных белков. Экспериментальный материал достаточно четко показал на зависимость между онкобелками и цитохромами и особенно цитохромом C. В силу высокой мембранной проницаемости опухолевых клеток онкобелок попадает в кровь и разносится по всему организму. Онкобелок обладает канцерогенными свойствами аналогично онковирусу, он может проникать в нормальные клетки и вызывать опухоль.

Для доказательства того, что онкобелок обладает свойствами онковируса, он был выделен из клеток саркомы Плисса и введен интактным крысам. При этом была получена саркома Плисса.

Наличие онкобелка в сыворотке крови крыс носителей опухоли впервые было обнаружено в лаборатории Манойлова С.Е. На основании экспериментальных данных был разработан метод обнаружения онкобелка в сыворотке онкологических больных с помощью экзогенного цитохрома C.

В начале были проведены многочисленные эксперименты с сывороткой крови здоровых людей (доноров). В результате этой работы были определены средние величины окислительно-восстановительной способности сыворотки по отношению к экзогенному цитохрому C. Степень восстанавливаемости была от 150 до 200 единиц. Как правило цитохром C с такими сыворотками не образовывает белое кольцо.

Затем были исследованы сыворотки крови раковых больных с различными локализациями. Сыворотка крови больных опухолевыми заболеваниями образовывала белое кольцо и в значительной степени восстанавливала цитохром C. Была выявлена следующая шкала:
от 220-250 единиц +
от 250-300 единиц ++
от 300-350 единиц +++
от 350- и выше ++++
Помимо сыворотки крови здоровых людей были исследованы сыворотки некоторых неопухолевых заболеваний (воспаление легкого, язва желудка, гастриты, сердечные заболевания и т.д.). Во всех случаях, за исключением ранних стадий ишемической болезни и инфаркта миокарда, реакция была в пределах здоровых людей. При сердечных заболеваниях реакция оценивалась на один + и в некоторых случаях на два ++.

Соотношения низкоспиновой и высокоспиновой форм цитохром C, полученные экспериментально, приведены в таблице.

Следует отметить что система диагностики злокачественных опухолей включает два основных этапа. Вначале простыми и недорогостоящими способами проводят предварительную оценку онкологического статуса обследуемого. Пи подозрении на наличие злокачественной опухоли обследуемого направляют на второй этап более детальное обследование на предмет подтверждения и уточнения диагноза злокачественной опухоли. На этом этапе обосновано применение сложных дорогостоящих и травматических способов исследования (цитологического и гистологического способов оценки клеток и тканей).

Предлагаемый способ обеспечивает повышение достоверности диагностики злокачественных опухолей и одновременно совмещает два вышеуказанных этапа, не используя сложных дорогостоящих и травматических способов исследования. Это достигается за счет использования в качестве признака заболевания онкобелка в крови обследуемого, который является универсальным признаком для всех злокачественных опухолей и, соединяясь с антигеном (цитохромом C), приводит к неспецифической иммунобиологической реакции преципитации.

По мере эффективности лечения больных сыворотка крови дает те же результаты, что и сыворотка здоровых людей. Следовательно, предлагаемый способ позволяет также судить об эффективности лечения.

Формула изобретения

Способ диагностики злокачественных опухолей, включающий исследование сыворотки крови пациента, отличающийся тем, что на сыворотку негемолизированной крови наслаивают раствор цитохрома С, визуально определяют реакцию преципитации, затем смешивают указанные жидкости, определяют спектрофотометрически уровень низко- и высокоспиновой форм цитохрома М, рассчитывают их соотношение и при наличии реакции преципитации и отношения форм цитохрома С в пределах 225 633 ед. плотности диагностируют злокачественную опухоль.

РИСУНКИ

Рисунок 1