Способ определения маркеров вирусных инфекций

 

Использование: медицина, для определения маркеров вирусных инфекций. Сущность изобретения: проводят РИА на плоском непористом адсорбенте, в качестве которого используют радиолюминесцентный материал, представляющий собой полимерную пленку, содержащую радиолюминофор в количестве 3% вес.ед. и, при необходимости, смеситель люминесценции в количестве 0,01% вес.ед., а иммунологический комплекс выявляют излучающим трейсером. 1 табл.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики вирусных инфекций.

Известен способ определения маркеров вирусных инфекций путем проведения радиоиммунологического анализа РИА, где используют в качестве адсорбента шарики с люминофором, помещенные в жидкую не сцинтиллирующую среду [1] Способ позволяет применять в качестве трейсера тритий.

Этот способ обладает следующими недостатками: большой трудоемкостью; низкой производительностью; высокой стоимостью единичного анализа; экологической опасностью, обусловленной радиоактивностью жидкости, остающейся во флаконе.

За прототип принимаем способ определения маркеров вирусных инфекций путем проведения радиоиммунологического анализа на плоском непористом нелюминесцирующем сорбенте [2] Данный способ не позволяет использовать радиационно безопасный чистый В-излучатель третий, т.к. излучаемые им малоэнергетические электроны проникают в рентгеновскую пленку на глубину, недостаточную для выявления фотоэффекта.

Недостатком способа также является радиационная опасность, связанная с использованием в качестве трейсера йода-125, излучающего кроме В-излучения, индуцирующего авторадиографический эффект, еще и неиспользуемое для данного типа регистрации проникающее гамма-излучение. Кроме того, время хранения РИА-тест-системы (период полураспада йода 125 60 суток).

Целью изобретения является обеспечение радиационной безопасности способа выявления маркеров вирусных инфекций методом радиоиммунологического анализа.

Данная цель достигается тем, что радиоиммунологический анализ выполняют на плоском твердом радиолюминесцирующем адсорбенте, а иммунологический комплекс выявляют любым В-излучающим трейсером.

Способ осуществляется следующим образом.

В качестве твердого радиолюминесцирующего адсорбента (ТРЛА) используют полимерную пленку толщиной 40 100 мкм, содержащую в качестве радиолюминофора паратерфенил в количестве 3% в.ед. а в качестве смесителя спектра люминесценции 1,4-ди-(5-фенилоксазол)-бензол (РОРОР) в количестве 0,01% в ед.

ТРЛА изготавливают из органического полимера, обладающего свойством хорошо переносить поглощенную энергию электронов на растворенный в полимере люминофор. Таким полимером может быть, например стирол или сополимер метилметакрилата с бутилакрилатом и стиролом. Спектр излучения люминофора должен быть близок к области максимальной спектральной чувствительности фотоприемника, регистрирующего это излучение, как, например, у производных тиофена при использовании в качестве фотоприемника фотоумножителя. Если эти спектры не совпадают, то в состав ТРЛА вводят смеситель спектра, например люминофорпаратерфинил, смеситель спектра-1,4-ди/5'-фенилоксазол-2'-ил/-бензол. Пленку изготавливают методом полива из раствора полимера с внесенными в раствор добавками люминофора в количестве 2 3% от веса сухого полимера и смесителя спектра в количестве 0,01% на плоскопараллельную стеклянную пластину с последующей сушкой и отделением свободной пленки от подложки (см. например, а.с. 743404 от 28.02.1980).

Нерабочая поверхность ТРЛА расчерчивается взаимно-перпендикулярными линиями, точки пересечения которых обозначают локусы для внесения реагентов. Для сенсибилизации поверхности пленку ТРЛА погружают в раствор, содержащий реагент ловушку антигена. Для лучшего контакта рабочей поверхности с раствором погружение производят рабочей поверхностью ТРЛА вниз. После сорбции реагента-ловушки пленку вынимают, прополаскивают под струей водопроводной воды и высушивают контактом с фильтрованной бумагой. Далее аналогичным образом пленку погружают в раствор с 1% бычьим сывороточным альбумином для блокирования неспецифически сорбирующей поверхности, отмывают, высушивают. Далее в точки пересечения линий последовательно вносят реагенты иммунного комплекса и радиоактивно меченый трейсер, отмывая и высушивая после соответствующей инкубации. Затем пленку разрезают на отдельные образцы, соответствующие положению РИА-локусов и просвечивают в бета-спектрометре.

Параллельно исследовали образцы общепринятым методом РИА на твердом сорбенте без люминофоров.

Результаты представлены в таблице.

Вирусосодержащими считаются образцы, которые демонстрируют отношение радиоактивности Образец/отриц.контр. > 2,1 Из таблицы следует, что РИА на Т.Р.-Л.А. с использованием ЗН-трейсера обеспечивает аналогичные результаты по сравнению с классическим вариантом РИА на безлюминесцентном сорбенте и трейсером 125-1.

Таким образом, метод РИА на ТРЛА, с применением в качестве трейсера слабого В-излучателя З-Н, пригоден для выявления маркеров вирусных инфекций.

Положительный эффект рекомендуемого метода заключается в том, что он позволяет вместо гамма-излучателя 125-1 использовать в РИА слабый В-излучатель ЗН, который, благодаря использованию ТРЛА, может быть просчитан в сухом виде. В результате замены 125-1 на ЗН рекомендованный метод РИА радиационно безопасен, а в результате возможности "сухой" регистрации ЗН-трейсера в использованном методе он исключает применение радиоактивно загрязненных сцинтиллирующих жидкостей; приобретает большую пропускную способность и высокую технологичность при выполнении.

Формула изобретения

Способ определения маркеров вирусных инфекций, включающий проведение радиоиммунологического анализа на плоском непористом адсорбенте, отличающийся тем, что в качестве адсорбента используют радиолюминисцентный материал, представляющий собой полимерную пленку толщиной 40 100 мкм, содержащую радиолюминофор в количестве 3 мас. и при необходимости сместитель люминисценции в количестве 0,01 мас. а иммунологический комплекс выявляют бета-излучающим трейгером.

РИСУНКИ

Рисунок 1