Индуктор интерферона ридостин
Изобретение относится к медицине и ветеринарии. С целью получения немутагенного препарата со сниженной токсичностью, хорошей переносимостью и высокоактивного в отношении индукции интерферона предложена композиционная форма препарата - Ридостин, имеющая в своем составе двуспиральную PHK из киллерных штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae в количестве 5-15% и однонитевую PHK дрожжей как основные компоненты. 7 табл.
Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для лечения и профилактики вирусных заболеваний.
Индукторы интерферона, стимулирующие выработку в организме человека и животных эндогенного интерферона, имеют ряд преимуществ перед препаратами экзогенного интерферона и являются перспективными средствами профилактики и терапии вирусных инфекций. К наиболее активным индукторам интерферона относятся синтетические полирибонуклеотиды и двуспиральные (дс)PHK природного происхождения. Однако наряду с высокой эффективностью их как индукторов интерферона эти препараты обладают высокой токсичностью и проявляют мутагенную активность. Известен индуктор интерферона двуспиральный полирибонуклеотидный комплекс поли И: поли Ц, оказывающий ингибирующее действие в отношении широкого круга вирусов. Однако препарат поли И: поли Ц также является высокотоксичным и обладает мутагенной активностью. Наиболее близким к заявляемому препарату (прототипом) является индуктор интерферона до PHK киллерных штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae, индуцирующий высокие титры интерферона и проявляющий выраженную противовирусную активность в отношении широкого круга инфекций (грипп, герпес, ВИЧ, клещевой энцефалит и др.), причем на ряде моделей он демонстрирует преимущества перед другими индукторами интерферона, такими, как ларифан, поли Г: поли Ц. Недостатками индуктора интерферона дсPHK из дрожжей Saccharomeces cerevisiae являются: 1. Высокая токсичность препарат относится к классу сильно действующих ядовитых веществ (ЛД50 при внутрибрюшинном введении мышам 5,1 9,7 мг/кг). 2. Наличие слабого, но статистически достоверного мутагенного эффекта в виде повышения числа хромосомных аберраций в 2-2,5 раза по сравнению с контролем (интактными животными). Целью изобретения является создание нового препарата индуктора интерферона на основе дсPHK киллерных штаммов дрожжей S.cerevisiae - ридостина, обладающего высокой эффективностью, сниженной токсичностью, хорошей переносимостью и на обладающего мутагенной активностью. Цель достигается путем создания оптимальной лекарственной формы индуктора интерферона (ридостина), в состав которой входят дcPHK дрожжей S.cerevisiae и однонитевая PHK дрожжей как основные компоненты, при этом содержание дсPHK ограничивается 5-15% Ридостин представляет собой стерильный лиофилизованный препарат, содержащий дcPHK в количестве 5 15% и дополнительно однонитевую PHK дрожжей. Партии препарата имеют следующие характеристики: интерферониндуцирующая активность не менее 640 ИЕ50/мл; значения среднесмертельных доз для мышей при внутрибрюшинном способе введения 45 120 мг/кг; количество метафаз с хромосомными аберрациями не превышало значений этого показателя у контрольных животных. Новыми существенными отличительными признаками предлагаемого препарата являются введение в состав препарата однонитевой высокополимерной PHK дрожжей и снижение содержания высокотоксичного компонента дсPHK до 5-15% Экспериментальными данными установлено, что дсPHK дрожжей проявляет слабый, но статистически достоверный мутагенный эффект, повышая частоту хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей после внутрибрюшинного введения дсPHK в дозе 1/4 ЛД50 (1,5 мг/кг) (табл. 1), что существенно ограничивает возможность применения препарата как лечебно-профилактического средства для медицины и ветеринарии. Как видно из данных табл. 1, введение только дсPHK приводит к статистически достоверному повышению количества хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей. В случае введения комплексного препарата, содержащего дополнительно однонитевую высокополимерную PHK, повышение частоты хромосомных нарушений не выявляется. Введение нового биологически активного компонента однонитевой PHK могло отразиться на целевом свойстве интерферониндуцирующей активности. В связи с этим авторы исследуют интерферониндуцирующую активность образцов препарата, содержащих однонитевую PHK в отношении к дсPHK 1:1 40:1. Образцы препаратов вводят внутрибрюшинно белым беспородным мышам в дозах, содержащих одинаковое количество дсPHK (0,5 мг/кг). Результаты приведены в табл. 2. Как видно из данных табл. 2, однонитевая PHK в любом соотношении, вплоть до 40: 1, не приводит к потере интерферониндуцирующих свойств препарата дсPHK. Поскольку сохранение эффективности при снижении содержания активного начала не являлось очевидным, то проведено изучение зависимости интерферониндуцирующей активности от содержания дсPHK в препарате. Определение интерферониндуцирующей активности препаратов с различным содержанием дсPHK проводят на беспородных мышах. Все препараты вводят внутрибрюшинно в одинаковой дозе 5 мг/кг (табл. 3). Как видно из данных табл. 3, титры интерферона, стабильно превышающие уровень 640 ИЕ50/мл, позволяющие отнести препарат к высокоактивным индукторам интерферона, получают при использовании образцов с содержанием дсPHK выше 2,5% В то же время увеличение процентного содержания дсPHK в препарате выше 10-15% не дает существенного прироста титров продуцируемого интерферона, что позволяет ограничить содержание дсPHK в препарате 10-13% Экспериментальными данными установлено, что препараты с содержанием дсPHK выше 50% являются высокотоксичными и сильно действующими ядовитыми веществами (СДЯВ) ЛД50 менее 50 мг/кг. Корреляционный анализ связи состава препарата и его токсичности показывает, что уровень токсичности определяется содержанием дсPHK в нем имеется тесная обратная корреляционная связь среднесмертельной дозы препарата с содержанием дсPHK (табл. 4). ЛД50 образцов препарата с содержанием дсPHK 5 15% и содержащих в своем составе однонитевую PHK колебалась в пределах 45 120 мг/кг при внутрибрюшинном способе введения, т.е. препараты относились к высоко- или среднетоксичным соединениям. Результаты экспериментального изучения биологических свойств препарата ридостин в сравнении с его прототипом дсPHK дрожжей, суммированные в табл. 1-4, свидетельствуют о том, что предлагаемое изменение состава индуктора интерферона приводит к устранению нежелательных побочных эффектов устранению мутагенности, снижению токсичности препарата, уменьшению расхода дорогостоящего компонента дсPHK при сохранении его целевых свойств - интерферониндуцирующей активности. Именно использование отличительных существенных признаков заявляемой композиции препарата: содержание дсPHK в количестве 5-15% и введение в состав препарата однонитевой PHK -позволяет получить качественно новый эффект, а именно: 1. Высокая интерферониндуцирующая активность. 2. Сниженная по сравнению с прототипом токсичность. 3. Отсутствие мутагенной активности. 4. Снижение стоимости дозы препарата, что в совокупности делает его перспективным для клинического использования. Пример 1. Состав приготавливают при следующем соотношении компонентов, мас. дсPHK 9% однонитевая PHK 30% NaCl остальное. Остальные примеры состава приготавливают аналогичным образом. Серия препарата с приведенным выше составом имеет следующие характеристики: интерферониндуцирующая активность - 108864 ИЕ50/мл; среднесмертельная доза при внутрибрюшинном введении мышам 71 мг/кг; мутагенная активность не выявляется (количество хромосомных аберраций 1,0% в опыте по сравнению с 1,8% в контроле, которым служили животные, получившие 0,9% NaCl). Пример 2. Берут следующие соотношения компонентов: дсPHK 8% однонитевая PHK 41% NaCl остальное. Серия препарата с приведенным выше составом имеет следующие характеристики: интетрферониндуцирующая активность - 1180 ИЕ50/мл; среднесмертельная доза 120 мг/кг; количество хромосомных аберраций 2,5% (по сравнению с 2,0% в контроле), что свидетельствует об отсутствии мутагенной активности. Пример 3. Берут следующее соотношение компонентов, мас. дсPHK 15% однонитевая PHK 45% NaCl остальное. Серия препарата с приведенным выше составом имеет следующие характеристики: интерферониндуцирующая активность - 1051392 ИЕ50/мл, среднесмертельная доза 80 мг/кг, количество хромосомных аберраций 1,8% (по сравнению с 1,5% у интактных животных), что свидетельствует об отсутствии мутагенной активности. Пример 4. Берут следующее соотношение компонентов, мас. дсPHK 5,0% однонитевая PHK 52% NaCl остальное. Серия препарата с таким составом имеет следующие характеристики: интерферониндуцирующая активность - 12800; среднесмертельная доза при внтурибрюшинном введении мышам 90 мг/кг; количество хромосомных аберраций 2,0% (по сравнению с 1,5% у интактных животных). Пример 5. Интерферониндуцирующую активность образцов ридостина изучают при внутрибрюшинном введении белым мышам колонии ICR. Препараты вводят в дозе 5 мг/кг. Кровь из ретроорбитального синуса мышей забирают через 6 ч после введения. О наличии интерферона судят по подавлению цитопатического действия (ЦПД50) тест-вируса (вирус везикулярного стоматита штамм Индиана) в культуре L-929 мышинных фибробластов методом титрования в микроплатах. За титр сывороточного интерферона (в ИЕ50/мл) принимают величину, обратную его наибольшему разведению, при котором наблюдают защиту 50% клеток культуры от цитопатического действия 100 ЦПД50 тест-вируса. Результаты представлены в табл. 5. Из данных табл. 5 видно, что образцы препарата, содержащие 5-15% дсPHK и однонитевую PHK, являются активными индукторами интерферона. Пример 6. Определение среднесмертельных доз 3 серий ридостина и 4 серий дсPHK с различным содержанием основных компонентов проводят экспресс-методом по Прозоровскому на белых рандомбредных мышах при внутрибрюшинном введении. Результаты представлены в табл. 6. Значения среднесмертельных доз ридостина составляют 71% 90% что позволяет отнести их к классу среднетоксичных соединений в отличие от препаратов, содержащих дсPHK в количестве более 15% относящихся к высокотоксичным и сильнодействующим соединениям. Пример 7. Мутагенную активность образцов ридостина оценивают по методу анализа хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей линии C 57 BL/6 массой 18-20 г возраcтом 2-3 мас. Препараты вводят внутрибрюшинно в дозах, равных по содержанию дсPHK и соответствующих приблизительно 1/4 ЛД50. Мутагенный эффект оценивают по наличию хромосомных аберраций в клетках костного мозга, учитывая структурные аберрации (фрагменты) через 24 ч после введения. На каждую точку анализа берут по 4 самца, у каждого животного анализируют по 100 метафаз. Достоверность отличия опыта от контроля определяют по критерию Стьюдента с поправкой Фишера. Результаты приведены в табл. 7. Как видно из представленных данных, препараты, содержащие дсPHK в выбранном интервале (5-15%) и дополнительно однонитевую PHK, не проявляют мутагенной активности в отличие от прототипа. Препарат Ридостин прошел полный цикл доклинических испытаний.
Формула изобретения
Однонитевая высокополимерная РНК 30 52
NaCl Остальное
РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2QZ4A - Регистрация изменений (дополнений) лицензионного договора на использование изобретения
Лицензиар(ы): Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Роспотребнадзора
Вид лицензии*: НИЛ
Лицензиат(ы): Закрытое акционерное общество "Вектор - Медика"
Характер внесенных изменений (дополнений):
Внесены изменения
Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения:
28.11.2002 № 15584
Извещение опубликовано: 10.10.2006 БИ: 28/2006
* ИЛ - исключительная лицензия НИЛ - неисключительная лицензия
PD4A - Изменение наименования обладателя патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение
(73) Новое наименование патентообладателя:
Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)
Адрес для переписки:
630559, Новосибирская обл., Новосибирский р-н, р.п. Кольцово, ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора
Извещение опубликовано: 27.02.2009 БИ: 06/2009
QZ4A Государственная регистрация изменений в зарегистрированный договор
Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения:
15.06.1998 № 3822
Вид договора: лицензионный
Лицо(а), передающее(ие) исключительное право:
Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Роспотребнадзора (RU)
Лицо, которому предоставлено право использования:
Общество с ограниченной ответственностью "Диафарм" (RU)
Дата и номер государственной регистрации изменений, внесенных в зарегистрированный договор:
20.05.2011 РД0081187
Изменения:
Изменен вид лицензии на исключительную. Предмет договора дополнен патентом на изобретение 2083221. Договор заключен на срок действия патента на изобретение 2083221. Лицензиату предоставлено право выдачи сублицензий в порядке, определенном в п.7 договора. Внесены изменения.
Дата публикации: 27.06.2011
QZ4A Государственная регистрация изменений в зарегистрированный договор
Дата и номер государственной регистрации договора, в который внесены изменения:
15.06.1998 № 3822
Вид договора: лицензионный
Лицо(а), передающее(ие) исключительное право:
Федеральное бюджетное учреждение науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» (RU)
Лицо, которому предоставлено право использования:
Общество с ограниченной ответственностью "Диафарм" (RU)
Дата и номер государственной регистрации изменений, внесенных в зарегистрированный договор:
15.05.2012 РД0099107
Изменения:
Изменен объем предоставляемых прав: вид лицензии изменен на неисключительную. Лицензиат не вправе предоставлять сублицензии. Внесены изменения.
Дата внесения записи в Государственный реестр: 15.05.2012
Дата публикации: 20.06.2012