Способ диагностики энцефалопатии норок

 

Использование: ветеринария, для раннего выявления вирусных заболеваний животных. Сущность применения: кровь обрабатывают раствором крепкой органической кислоты, к безбелковому фильтрату добавляют марганцево-кислый калий до 0,06 - 0,08%, перегоняют в емкость с реактивом НАША для определения формальдегида и при наличии такового в количестве 0,4 - 1,8 ммоль/л ставят диагноз заболевания. 1 ил., 2 табл.

Изобретение относится к ветеринарии и предназначено для раннего выявления вирусных заболеваний животных.

Как известно, энцефалопатию норок относят к числу вирусных заболеваний с длительным инкубационным периодом. Первые клинические симптомы появляются лишь через 8 9 месяцев после заражения.

В настоящее время прижизненная диагностика энцефалопатии проводится только на основании клинических проявлений болезни, которые частот бывают стертыми и с их помощью невозможно с достаточной точностью определить заболевание. Окончательный диагноз ставят посмертно гистологическим путем, что не позволяет своевременно выбраковывать больных животных и предотвращать распространение инфекции. Недостатком способа является невозможность прижизненной диагностики энцефалопатии (см. Патологические изменения в ц.н.с. норок при энцефалопатии. Труды НИИПЗК, т. 32. 1986).

Целью изобретения является повышение точности прижизненной диагностики энцефалопатии. Поставленная цель достигается тем, что кровь немедленно обрабатывают раствором крепкой органической кислоты (например, трихлоруксусной), к безбелковому фильтрату добавляют марганцево-кислый калий до 0,06 0,08% перегоняют в емкость с реактивом НАША для определения формальдегида и при наличии формальдегида в количестве от 0,4 1,8 ммоль/л ставят диагноз заболевания.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. С целью определения оптимальных параметров метода проведи исследование сыворотки крови 10 норок, находящихся в клинической стадии энцефалопатии. К 1 мл сыворотки крови зараженного животного добавляли двойной объем 30% раствора ТХУ. Смесь тщательно перемешивали и центрифугировали при 30000 об/мин. Надосадочную жидкость переносили в колбу для перегонки и вводили различные количества 2% раствора КМ и O₄ (от 0,02 до 1,6 мл), проводили перегонку в приемную колбу, содержащую 2 мл реактива НАША. Оптическую плотность раствора измеряли на спектрометре СФ-26 при длине волны 412 мм в см кюветах контроля (реактив НАША).

Содержание формальдегида высчитывали из калибровочной кривой (рис. 1).

Таким образом, наиболее высокие цифры формальдегида освобождаются при количестве марганцево-кислого калия в пробах от 0,06 до 0,08% При более высоких концентрациях соединения происходит окисление альдегида, и его содержание в пробах снижается.

Пример 2 подтверждает диагностическую ценность предложенного способа.

Модельный эксперимент был проведен на 40 животных, 20 норок составили контрольную группу, 20 подопытным животным нитрацеребрально ввели по 0,02 мл центрифугата суспензии, приготовленной на растворе Хенкса 1:10 из головного мозга норок, павших от энцефалопатии. От этих животных брали кровь через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 месяцев после заражения, затем через 8 9 месяцев норки заболевали клинически, центрифугировали и белковый фильтрат использовали для определения формальдегида после предварительного окисления марганцево-кислым калием (см. пример 1). Результаты представлены в табл. 1.

Из представленных данных ясно, что содержание альдегида в крови снижается в 3 раза (P 0,001) по сравнению с нормой, а к моменту появления клинических симптомов составляет лишь 17 18% исходного уровня. Во всех случаях содержание формальдегида колебалось в пределах от 0,4 до 1,6 ммоль/л. Имелась тенденция к снижению показателя в зависимости от длительности заболевания. Если в конце 1-го месяца содержание альдегида составляло 1,25±0,31, то спустя 3 месяца снижалось до 0,53±0,12 (различия достоверны). К 8-му месяцу заболевания в разгар клинического проявления болезни животные были убиты, и наличие патологического процесса было подтверждено гистологическим исследованием ткани мозга. При гистологическом исследовании аммонова рога 5 норок, убитых с клиническими признаками энцефалопатии, установлена спонгиформная вакуолизация серого вещества, вакуолизации цитоплазмы нейронов и их отростков, лизис нейронов. Установленные изменения характерны для энцефалопатии норок. Таким образом, при использовании способа точность диагностики энцефалопатии норок приближается к 100% Диагноз заболевания может быть поставлен практически в любой срок после заражения в отличие от существующих способов диагностики энцефалопатии, допускающих регистрацию заболевания лишь после появления первых клинических симптомов.

Выбраковка животных в раннем периоде заболевания позволит провести оздоровление поголовья в зверосовхозах, неблагополучных по энцефалопатии.

Пример 3. Способ апробирован в производственных условиях. В зверосовхозе, неблагополучном по заболеванию, произведено взятие крови от 20 норок, подозреваемых в заболевании (группа риска), из них 3 с клиническими признаками энцефалопатии и от 20 норок условно благополучной бригады.

Из 17 подозреваемых в заболевании норок у 12 установлен низкий уровень формальдегида, колеблющийся в пределах 0,85 1,5 ммоль/л, у норок с клиническими признаками энцефалопатии уровень формальдегида колебался в пределах 0,65 0,44 ммоль/л.

В благополучной группе содержание формальдегида был значительно выше (3,5 19). Таким образом, диагностический тест, примененный в производственных условиях, позволил с полной уверенностью выявить животных, находящихся в клинической стадии болезни и в инкубационном периоде.

Преимущество предлагаемого способа в сравнении с известным состоит в том, что стало возможным осуществлять раннюю прижизненную диагностику заболевания, что позволяет своевременно выбраковывать зараженных животных и предотвращать распространение заболевания.

Формула изобретения

Способ диагностики энцефалопатии норок, включающий исследование биоматериала, отличающийся тем, что, с целью ранней диагностики, исследованию подвергают сыворотку крови, которую предварительно освобождают от белка, далее обрабатывают марганцево-кислым калием с конечной концентрацией 0,06 0,08% затем проводят реакцию для выявления формальдегида и при наличии его в концентрации 0,4 1,8 ммоль/л диагностируют заболевание.

РИСУНКИ

Рисунок 1