Фармацевтические композиции 3-замещенных 2-оксиндол-1- карбоксамидов, способ ингибирования активации коллагеназы, способ вызова анальгезирующей реакции, способ лечения воспалительных заболеваний

 

Изобретение относится к медицине. Фармацевтическая композиция содержит по крайней мере один триглицерид или сложный пропиленгликолевый эфир жирных кислот фракционированного кокосового масла и по крайней мере одно соединение формулы где R₁, R₂ и R₃ каждый независимо представляет водород, фтор, бром или хлор, или фармацевтически приемлемую соль. Предложены также способы ингибирования коллагеназы, вызова анальгезирующей реакции и лечения воспалительных заболеваний путем введения композиции в эффективном количестве. Предложенные композиции обладают превосходной сохранностью и длительном сроком годности. 4 н. и 15 з.п.ф-лы, 2 табл.

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим определенные 3-замещенные 2-оксиндол-1-карбоксамиды, триглицериды и сложные пропиленгликолевые диэфиры жирных кислот со средней длиной цепи (C₈-C₁₀). Эти карбоксамиды пригодны для использования в качестве анальгетиков для таких млекопитающих, как человек, и для снятия или облегчения болей после хирургических операций или других травм, или для снятия симптомов таких хронических заболеваний, как воспаления, и болей, связанных с ревматоидными артритами и остеоартритами, что показано в патентах США 4556672 и 5047554. Карбоксамиды полезны также для лечения заболеваний и болезненных состояний, связанных с коллагеназой, таких, как заболевания, связанные с рассасыванием костной ткани, поражениями роговицы, периодонтитом, воспалительными заболеваниями и ранами и ожогами у млекопитающих, что раскрыто в патенте США 5008283.

Раскрытые в формуле изобретения карбоксамиды формулы I химически нестабильны в воде. Известно, что скорость гидролитического разложения (гидролиза) можно снизить, защищая лабильные лекарства, например, за счет заключения в гидрофобное ядро мицелл, или за счет композиций с носителями на основе неводных растворителей, неактивных в воде, например, в незаменимых маслах. В дополнение к гидролитической нестабильности карбоксамиды также подвержены окислительному разложению в водных носителях, например в воде и в неводных носителях, например в маслах. Окислительную нестабильность можно снизить в насыщенных маслах, например, за счет включения антиоксидантов или за счет создания композиций в ненасыщенных маслах, которые защищают лекарства от их существенного самоокисления. Однако карбоксамиды, описанные в формуле I, нелегко стабилизировать в маслах, которые обычно используют в фармацевтических препаратах, например в кунжутном масле, арахисовом масле, подсолнечном масле и хлопковом масле.

Краткое содержание изобретения Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим: A) по крайней мере один триглицерид или сложный пропиленгликолевый диэфир жирных кислот фракционированного кокосового масла; B) по крайней мере одно соединение формулы I где R₁, R₂ и R₃ каждый независимо представляет водород, фтор, бром или хлор, или их фармацевтически приемлемые соли; где весовое отношение A к B находится в интервале от 5,6 до 999.

Фармацевтические композиции включают от 85 до 99 вес.% A и от 0,1 до 15 вес.% B.

Предпочтительно, чтобы каждый из R₁, R₂ и R₃ независимо представлял фтор или хлор.

Предпочтительные соединения формулы I включают: 5-хлор-2,3-дигидро-2-оксо-(2-тиенилкарбонил)-индолкарбоксамид, 6-хлор-5-фтор-2,3-дигидро-2-оксо-3-(2-тиенилкарбонил)-индолкарбоксамид; и 6-хлор-5-фтор-2,3-дигидро-2-оксо-3-[2-(4-хлор)- тиенилкарбонил]индолкарбоксамид.

Настоящее изобретение также включает способ ингибирования активации колланназы.

Настоящее изобретение включает также способ лечения воспалительных заболеваний.

Настоящее изобретение включает также способ, позволяющий вызвать анальгетическую реакцию.

Подробное описание изобретения Было обнаружено, что фармацевтические композиции, содержащие карбоксамиды формулы I, и триглицериды и сложные пропиленгликолевые диэфиры C₈-C₁₀ насыщенных жирных кислот, обладают превосходной сохранностью и длительным сроком годности. В результате использования таких композиций карбоксамиды менее подвержены гидролизу и окислению, которые могли бы повредить их и тем самым сделать их неэффективными. Стабилизация этих карбоксамидов в таких препаратах не требует добавления антиоксиданта или других вспомогательных стабилизаторов.

Триглицериды, которые используют в заявленном изобретении, представляют собой нейтральные масла, которые состоят из сложных эфиров жирных кислот со средней длиной цепи (C₈-C₁₀), которые также называют фракционированным кокосовым маслом. Эти жирные кислоты этерифицируют либо глицерином, либо пропиленгликолем и продают под торговой маркой MIGLYOL® (например, MIGLYOL®810, MIGLYOL®812 и MIGLYOL® 840). MIGLYOL описывают так же как триглицериды жирных кислот фракционированного кокосового масла или триглицериды каприловой кислоты /каприновой кислоты. Фракционированное кокосовое масло получают из фиксированных масел, полученных из высушенных твердых частей эндосперм Cocos nucifera L в результате гидролиза, фракционирования выделенных жирных кислот, и переэтерификации глицерином или пропиленгликолем. Оно состоит из смеси насыщенных жирных кислот с короткими или средней длины цепями, главным образом октановой и декановой кислот. Miglyol® представляет собой торговую марку для фракционированного кокосового масла или триглицеридов каприловой кислоты/каприновой кислоты от Dynamit Nobel Ltd Germany and UK. Эти носители продемонстрировали стабильность против окисления и прогоркания (порчи), а также прекрасную стабильность и биосовместимость. Более того, так как используют только насыщенные жирные кислоты, масла не создают пероксидов или других свободных радикалов, которые могли бы дестабилизировать содержащиеся в них лекарственные препараты. Низкое содержание воды также сводит к минимуму гидролиз карбоксамидов. В предпочтительной композиции карбоксамид формулы I диспергируют в масляном носителе, содержащем Migliol®812 и другие маслорастворимые добавки, описываемые далее, при перемешивании до получения гомогенной суспензии лекарственного вещества в масляном носителе.

Другие добавки, которые могут присутствовать в фармацевтических препаратах, могут также включать такие агенты, предотвращающие образование осадка, как, например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, глицерин, сорбит, бензиловый спирт, лецитин или стеарат алюминия. Количество агента, предотвращающего образование осадка, может составлять примерно от 0,05 до 5 вес.%. Фармацевтическая композиция может также содержать консервант в количестве от 0,5 до 2,0 вес.%. Такие консерванты могут включать, например, фенол, бензиловый спирт, парабены, хлорбутанол и бензилбензоат. Такие желирующие агенты, как моностеарат алюминия, также могут быть включены в фармацевтические композиции в количестве от 0,5 до 3,0 объемных %. Стабильность этих фармацевтических композиций можно оценить,например,в ужесточенных условиях хранения после того, как суспензию карбоксамидов (6 вес.% лекарственного вещества), помещенную в стеклянные ампулы, подвергают действию высоких температур вплоть до 70^oC в течение вплоть до 9 недель. Во время испытания на стабильность уровень интанктного лекарства, остающегося в препарате, а также содержание продуктов гидролитического и окислительного разложения, определяют количественно с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Для анализа суспензию разбавляют смесью метанол/триэтиламин 100/1/объем/объем до получения окончательной концентрации лекарства от 0,6 до 1,2 мг/мл. Этот растворитель растворяет суспензию лекарства до получения раствора, который можно непосредственно вводить в ВЭЖХ колонку. Мобильной фазой для хроматографиии является смесь метанол/вода 90/10 объем/объем + 1% триэтиламина; колонка представляет обращенную фазу октадекасилана, а скорость потока составляет 1 мл/мин. Лекарство детектируют за счет УФ поглощения на 246 нм. Этот анализ показывает, что в течение девяти недель практически не происходит разложения карбоксамида.

Если соединение формулы I или его соль используют для людей, дневная доза обычно определяется практикующим врачом. Более того, доза будет меняться в зависимости от возраста, веса и реакции отдельного пациента, а также от серьезности симптомов пациента и эффективности конкретного соединения, которое вводят. Однако для введения при острых приступах боли эффективная доза в большинстве случаев составляет от 0,01 до 0,25 г по необходимости (например, 1-4 раза в день). Для приема хроническими больными в большинстве случаев эффективная доза составляет от 0,01 до 0,5 г/день и предпочтительно от 0,1 до 0,25 г в день в виде отдельных доз или в единой дозе. С другой стороны, иногда может оказаться необходимым использовать дозы вне этих пределов.

Предпочтительные фармацевтические композиции настоящего изобретения представляют собой парэнтеральные фармацевтические композиции. Фармацевтические композиции настоящего изобретения можно получить, приготавливая соединение формулы I (в качестве активного ингредиента) в единичной дозировочной форме. Некоторые примеры единичных дозировочных форм представляют собой стерильные суспензии для внутримышечных, подкожных, внутрисуставных инъекций, стерильные офтальмологические суспензии для поверхностного нанесения на глаз, капсулы для перорального приема, ректальные суппозитории или лосьоны для поверхностного нанесения на кожу или на область волосяного покрова.

Примером подходящей фармацевтической дозированной формы для перорального приема могут служить желатиновые капсулы. Суспензии для перорального приема можно поставлять, например, после инкапсулирования суспензии соединения формулы I в масле, например в Miglyol 812, в мягких желатиновых капсулах. Ректальные суппозитории можно получить, диспергируя карбоксамид в нейтральном масле, наряду с совместимыми основаниями суппозиториев, такими, как кокосовое масло или Wlutepsol W35, температура плавления которых выше температуры тела. Продукты для поверхностного нанесения на кожу должна содержать карбоксамид в качестве активного ингредиента, диспергированный в нейтральном масле, например в Miglyol 812, и также содержать один или более из фармацевтически неактивных ингредиентов, таких как: цетиловый спирт, стеариновая кислота, пропиленгликоль, моностеарат алюминия, бензиловый спирт, в качестве разбавителей или консервантов. Парэнтеральные композиции предпочтительно представляют собой суспензию карбоксамида в нейтральном масле, и могут также содержать другие неактивные фармацевтические компоненты, такие, как бензиловый спирт в качестве консерванта, моностеарат алюминия в качестве желирующего агента и пропиленгликоль в качестве диспергирующего агента.

Нижеследующие примеры иллюстрируют, как можно приготовить фармацевтические композиции. Коммерческие реагенты можно использовать без дополнительной очистки.

Пример 1. 800 мг Miglyol 812 нагревают до 45^oC в смесителе, снабженном мешалкой и гомогенизатором. К маслу добавляют 10 г бензилового спирта при перемешивании (около 60-80 об/мин). Масляный раствор стерильно фильтруют в стерильный смеситель, снабженный мешалкой и гомогенизатором. 120 г микронизированного стерильного порошка карбоксамида диспергируют в масляной фазе при перемешивании. Суспензию гомогенизируют с высоким сдвигом в течение 10 минут, а затем оставляют охлаждаться при комнатной температуре при умеренном перемешивании (60-80 об/мин). Суспензию доводят до полного количества 1000 г, добавляя необходимое количество Miglyol 812 г к суспензии для получения окончательной композиции. Эту суспензию в асептических условиях заполняют в 50 см³, типа 1, флинтглассовые ампулы, используя автоматизированный аппарат для заполнения. Ампулы закрывают резиновыми пробками с тефлоновым покрытием и сверху закрывают алюминиевыми оболочками.

Пример 2. 800 мл Miglyol 812 нагревают до 45^oC в смесителе, снабженном мешалкой и гомогенизатором. К маслу добавляют 10 г бензилового спирта при перемешивании (60-80 об/мин). Масляный раствор стерильно фильтруют в стерильный смеситель, снабженный мешалкой и гомогенизатором. К масляной суспензии добавляют 20 г стерильного порошка моностеарат алюминия отдельными порциями при перемешивании до получения геля масла. Желированное масло оставляют остывать до комнатной температуры и оставляют выстаиваться в течение 6 часов без перемешивания. Затем в желированном масле диспергируют при перемешивании 120 г микронизированного стерильного порошка карбоксамида. Полный вес суспензии доводят до 1000 г, добавляя нужное количество стерильной желированной суспензии Miglyol 812 до получения окончательной концентрации 12 вес. % карбоксамида в конечной композиции. Эту суспензию асептически заполняют в 50 см³ типа 1 флинтглассовые ампулы, используя автоматический аппарат для заполнения. Ампулы закрывают резиновыми крышками с тефлоновым покрытием и сверху закрывают алюминиевыми оболочками.

Пример 3. 800 мл Miglyol 812 нагревают до 45^oC в смесителе, снабженном мешалкой и гомогенизатором. К маслу добавляют 10 г бензилового спирта при перемешивании (60-80 об/мин). В масляной фазе при перемешивании диспергируют 120 г микронизированного стерильного порошка карбоксамида. Суспензию гомогенизируют с высоким сдвигом в течение 10 минут, а затем оставляют остывать до комнатной температуры при умеренном перемешивании (60-80 об/мин). Полный вес суспензии доводят до 1000 г при перемешивании, добавляя необходимое количество Miglyol 812 к суспензии, до получения конечной концентрации 12 вес. % карбоксамида в окончательной композиции. Суспензию заполняют в мягкие желатиновые капсулы для перорального применения, используя автоматизированный аппарат для заполнения капсул.

Пример 4. 200 г Miglyol 812 и 800 г Whitepsol W35 нагревают до 60^oC в смесителе, снабженном мешалкой и гомогенизатором. Порошок карбоксамида диспергируют в полученном масляном растворе при перемешивании. Суспензией заполняют формы для суппозиториев и охлаждают до комнатной температуры.

Использование Migliol позволяет получить наиболее стабильные суспензии.

Данные по биологической активности соединений I.

Способность ингибировать активацию коллагеназы и ингибировать активность миелопероксидазы определяли по описанным ниже методикам.

Цельную человеческую кровь от здоровых добровольцев получали путем венопункции в гепаренизированные шприцы. Большую часть эритроцитов удаляли седиментацией с декстрином и нейтрофилы отделяли центрифугированием в градиенте плотности над гипаковым фиколлом. Фракцию с большим содержанием нейтрофилов промывали и оставшиеся эритроциты удаляли гипотоническим лизисом в соответствии с методикой, описанной Brackburn W.D. и др., Arthritis Rheum. 30: 1006-1014 (1987). Полученные таким образом нейтрофилы использовали в описанных ниже испытаниях и убеждались в жизнеспособности клеток путем определения их способности исключать типановый синий. В каждом испытании жизнеспособность клеток обычно превышала 95%.

Для того чтобы оценить ингибирование выделения активированной коллагеназы нейтрофилами, было проведено следующее испытание. Суспензии нейтрофильных клеток инкубировали при 37^oC в течение 15-30 минут в присутствии различных концентраций тенидапа или другого исследуемого соединения. Тенидап растворяли, разбавляли водой и добавляли непосредственно к клеткам. Другие испытываемые соединения вначале растворяли в 0,1 М NaOH, а затем разбавляли водой перед добавлением к клеткам. После того, как клетки инкубировали в присутствии тенидапа или другого исследуемого соединения, суспензии клеток (5·10⁶ клеток/мл, 125 мкл/лунку) добавляли в покрытые IgG и блокированные бычьим сывороточным альбумином (БСА) лунки титрационных микропланшетов и инкубировали их в течение 45 минут при 37^oC. В качестве контрольных испытаний были проведены подобные инкубации в отсутствие IgG. После инкубации суспензии клетки центрифугировали (750·g) в течение 5 минут при 4^oC. Супернатанты удаляли и добавляли ДФФ (диизопропилфторфосфат) до конечной концентрации 10^-3 М, чтобы инактивировать серинпротеазы.

После этого определяли активность коллагеназы в обработанных ДФФ супернатантах путем инкубирования трех аликвот по 200 мкл супернатанта с меченными ³H восстановленными фибриллами коллагена типа 1 в 7-мм плоскодонных лунках для культуры тканей ( Lindbro®, Cat #76-032-05, Flow Laboratories McLean, Va), как описано Johnson-Wint, B, Anal. Biochem., 104: 175-181 (1980). Восстановленные фибриллы в каждой лунке содержали 75 мкг смеси меченного ³H и немеченного коллагена с активностью 7000 импульсов в минуту. Для того, чтобы определить суммарную радиоактивность, которая потенциально может выделиться из фибрилл в каждом эксперименте, восстановленные фибриллы также инкубировали со смесью клостридиальной коллагеназы (250 мг/мл ССРХ (сбалансированного солевого раствора Хенка, GIBCO, Grand Island, N.Y.)). Чтобы максимально повысить чувствительность и специфичность анализа, образцы трижды инкубировали в течение восемнадцати часов при 37^oC. В конце инкубационного периода из каждой лунки отбирали супернатант и определяли радиоактивность путем подсчета в сцинтилляционном счетчике. Из лунок, инкубированных с бактериальной коллагеназой, получали более 99% радиоактивности, внесенной в каждую лунку. Среднее число импульсов в минуту из фибрилл, инкубированных только с буфером (ССРХ), вычитали из числа импульсов в минуту, измеренных для каждого супернатанта. Три полученные величины для каждого супернатанта усредняли и делили на среднее число импульсов в минуту, выделяемых бактериальной коллагеназой, для того, чтобы определить процент лизиса фибрилл, происходящего в каждом супернатанте. После этого рассчитывали общее количество активированного коллагена, выделившегося при инкубации в течение восемнадцати часов, и делили его на время инкубирования, чтобы получить значения активности коллагеназы (нг разложившегося коллагена/мин) в каждом супернатанте.

В параллельных экспериментах определяли выделение всей коллагеназы в супернатантах путем активации латентной коллагеназы в супернатантах с помощью 1.0 мМ мерсалила (Harris, E.D. и Vater, C.A., Methodology of collagenase research: substrate purification, enzyme yctivation and purification. Collagenase in Normal Pathological Connective Tissues. Edited by D.E. Woolley, J. M. Evanson, Chichester, John Wiley & Sons, 1980) перед добавлением супернатантов к меченным радиоактивной меткой коллагеновым фибриллам. Чтобы избежать недооценки общего количества коллагеназы, выделенной вследствие ингибирования протеазной активности окислительными метаболитами, генерируемые во время активации нейтрофилов, используемые для этих определений супернатанты получали из нейтрофилов, активированных в присутствии 1,0 мМ азида натрия (ингибитора миелопероксидазы). Инкубирование и расчет активности коллагеназы в обработанных мерсалилом супернатантах осуществляли так, как было описано выше.

С использованием вышеописанного испытания с тенидапом, пироксикамом, индометацином, ибупрофеном и напроксаном, при максимальных концентрациях лекарств получены данные, приведенные ниже в табл. 2.

Как показано в табл.2, ибупрофен и напроксен, которые оба являются ингибиторами циклооксигеназы, не обладали ингибирующим действием на выделение активированной коллагеназы нейтрофилами. Пироксикам и индометацин, которые также являются ингибиторами циклооксигеназы, обладают некоторым ингибирующим действием на выделение активированной коллагеназы, но при концентрациях, превышающих физиологические для данных соединений. Тенидап в концентрациях, соответствующих клиническим, значительно ингибировал выделение активированной коллагеназы из нейтрофилов.

Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция, включающая 3-замещенный 2-оксиндол-1-карбоксамид и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что включает в качестве фармацевтически приемлемого носителя по крайней мере один триглицерид или сложный пропиленгликолевый диэфир жирных кислот фракционированного кокосового масла (A) и в качестве 3-замещенного 2-оксиндол-1-карбоксамида по крайней мере одно соединение формулы I (B)
где R₁, R₂ и R₃ каждый независимо представляет водород, фтор, бром или хлор,
или его фармацевтически приемлемую соль, где весовое соотношение A и B находится в интервале от 1 : 5,6 до 1 : 999.

2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что композиция включает от 85 до 99 вес.% компонента A и от 0,1 до 15 вес.% компонента B.

3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что каждый из R₁, R₂ и R₃ независимо представляет фтор или хлор.

4. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что соединение формулы I выбирают из группы, состоящей из 5-хлор-2,3-дигидро-2-оксо-3-(2-тиенилкарбонил)-индолкарбоксамида, 6-хлор-5-фтор-2,3-дигидро-2-оксо-3-(2-тиенилкарбонил)-индолкарбоксамида и 6-хлор-5-фтор-2,3-дигидро-2-оксо-3-[2-(4-хлор)-тиенилкарбонил] индолкарбоксамида.

5. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что соединение формулы I представляет 5-хлор-2,3-дигидро-2-оксо-3-(2-тиенилкарбонил)-индолкарбоксамид.

6. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что соединение формулы I представляет 6-хлор-5-фтор-2,3-дигидро-2-оксо-3-(2-тиенилкарбонил)-индолкарбоксамид.

7. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что соединение формулы I представляет 6-хлор-5-фтор-2,3-дигидро-2-оксо-3-[2-(4-хлор)-тиенилкарбонил] индолкарбоксамид.

8. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанные жирные кислоты кокосового масла включают C₈ - C₁₀ жирные кислоты.

9. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что указанные жирные кислоты кокосового масла включают каприловую кислоту, каприновую кислоту, лауриновую кислоту и линолевую кислоту.

10. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит от 0,05 до 5 вес.% агента, препятствующего образованию осадка.

11. Композиция по п. 10, отличающаяся тем, что указанный агент, препятствующий образованию осадка, представляет собой пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, глицерин, сорбит, бензиловый спирт, лецитин, или стеарит алюминия.

12. Композиция по п.10, отличающаяся тем, что дополнительно включает от 0,5 до 2,0 вес.% консерванта.

13. Композиция по п.12, отличающаяся тем, что указанный консервант представляет собой фенол, бензиловый спирт, парабен, хлорбутанол или бензилбензоат.

14. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанная фармацевтическая композиция представлена в форме, пригодной для перорального, местного, офтальмического, парэнтерального или ректального введения.

15. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что фармацевтическая композиция включает от 0,01 до 1,0 г соединения формулы I.

16. Композиция по п.15, отличающаяся тем, что фармацевтическая композиция включает от 20 до 250 мг соединения формулы I.

17. Способ ингибирования активации коллагеназы у млекопитающего, нуждающегося в нем, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей 3-замещенный 2-оксиндол-1-карбоксамид, отличающийся тем, что включает введение указанному млекопитающему фармацевтической композиции по п.1 в эффективном количестве.

18. Способ вызова анальгезирующей реакции у млекопитающего, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей 3-замещенный 2-оксиндол-1-карбоксамид, отличающийся тем, что включает введение указанному млекопитающему фармацевтической композиции по п.1 в эффективном количестве.

19. Способ лечения воспалительных заболеваний у млекопитающих, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей 3-замещенный 2-оксиндол-1-карбоксамид, отличающийся тем, что включает введение указанному млекопитающему фармацевтической композиции по п.1 в эффективном количестве.

РИСУНКИ

Рисунок 1