6,7-модифицированные паклитакселы и промежуточные соединения

 

6,7-Модифицированные паклитакселы формулы I, где R¹ - COR^z, R^z представляет собой RO или R; R² - радикал формулы WR^x, где W - связь, C_2-6-алкендиил или -(CH₂)_t-, t принимает значения от 1 до 6; R^x - фенил или фурил, тиенил или оксазолил; R^а представляет собой -OCOR, -OR, OSO₂R, -OCONR⁰R, -OCOO(CH₂)_tR или -OCOOR; R^b и R^c вместе образуют связь с атомами углерода, к которому они присоединены; R и R⁰ - алкил, алкенил, C_3-6-циклоалкил или фенил, возможно замещенный 1-3 алкилами или атомами галогена. Соединения формулы I обладают противоопухолевой активностью. 2 с. и 5 з.п.ф-лы, 6 ил., 1 табл.

Данная заявка является частичным продолжением заявки США серии N 07/985761, направленной на рассмотрение 4 декабря 1992 г., которая включена в описание изобретения для сведения.

Настоящее изобретение предлагает соединения, обладающие противоопухолевой активностью.

ТАКСОЛ (TAXOL^R) (паклитаксел) был первым продуктом, выделеным из коры побегов тиса коротколистного, Taxus brevifolia Nut. (Тахасеае) и имеет следующее строение (с указанием (C)2'-, 6- 7- и 13-положений): Недавно было одобрено его использование для лечения рака яичников, кроме того, исследования на раке молочной железы, толстой кишки и легкого показали обнадеживающие результаты. См. D.K., Donehower R.C. Ann. Int. Med., 1989, 111, p. 273.

Паклитаксел является уникальным препаратом среди противоопухолевых лекарств, поскольку он активизирует скопление стабильных микротрубочек из тубулина даже в неблагоприятных условиях. Лекарство связывается с микротрубочками, стабилизируя их от деполимеризации, тем самым нарушая равновесия тубулин-микротрубочка и, следовательно, ингибируя митоз. Механизм действия, токсикология, клиническая эффективность и т.д. паклитаксела рассматриваются в ряде статей, например Rownisky et al. Taxol: A Novel Investigational Antimicrotubule Agent, J. Natl. Cancer Inst., 82, pp. 1247-1259 (1990).

Со времени открытия его значительной эффективности при лечении рака многие лаборатории разрабатывали программы получения аналогов паклитаксела с целью поиска лучших фармакологических показателей. Результатом реализации таких программ, например, явилось открытие Таксотера (Taxotere^R) формулы См. Biologically Active Taxol Analogues with Dele A - Ring sute Chain Substituents and Variable C-2 Configuration, J. Med. Chem., 34, pp. 1176-1184 (1991); Relations between the Structure of Taxol Analogues and Their Antimitot Activity, J. Med. Chem. 34, pp. 992 - 998 (1991).

Настоящее изобретение относится к структурно новым производным паклитаксела, обладающим противоопухолевой активностью.

Настоящее изобретение предлагает производные поклитаксела формулы I где заместитель R¹ представляет собой -COR^z, где заместитель R^z представляет собой RO или R; заместитель R² представляет собой C_1-6-алкил, C_2-6-алкенил, C_2-6-алкинил, C_3-6-циклоалкил или радикал формулы -W-R^x, где W представляет собой связь C_2-6-алкендиил или -(CH₂)_t-, в котором t принимает значения от 1 до 6; заместитель R^x собой С_1-6-алкил, С_2-6-алкенил, С_3-6- цилкоалкил, С_2-6-алкинил, или фенил, возможно замещенный одним или тремя одинаковыми или различными С_1-6-алкилами, С_1-6-алкоксигруппами, атомами галогена или -CF₃-группами.

Также настоящее изобретение предлагает фармацевтические препараты (композиции) и способ лечения опухолей млекопитающих с помощью соединений формулы I.

Подробное описание изобретения.

Настоящее изобретение предлагает производные поклитаксела формулы I где заместитель R¹ представляет собой -COR^z, где заместитель R^z представляет собой RO- или R;
заместитель R² представляет собой С_1-6-алкил, С_2-6-алкенил, С_2-6-алкинил, С_3-6-циклоалкил или радикал формулы -W-R^x, где W представляет собой связь С_2-6-алкендиил или -(CH₂)_t-, в котором t принимает значения от 1 до 6; заместитель R^x представляет собой нафтил, фенил или гетероарил и, кроме того, заместитель R^x может быть возможно замещен одним или тремя одинаковыми или различными С_1-6-алкилами, С_1-6-алкоксигруппами, атомами галогена или -CF₃-группами;
заместитель R^a представляет собой -OCOR, H, OH, -OR, - OSO₂R, -OCONR^oR, -OCONHR, -OCOO(CH₂)_tR или -OCOOR;
заместители R^b и R^c оба представляют собой гидроксигруппу или вместе образуют связь с атомами углерода, к которым они присоединены; и
заместители R и R^o независимо друг от друга представляют собой C_1-6-алкил, C_2-6-алкенил, C_3-6-циклоалкил, C_2-6-алкинил или фенил, возможно замещенный одним или тремя одинаковыми или различными C_1-6-алкилами, C_1-6-алкоксигруппами, атомами галогена или -CF₃-группами.

В настоящем описании подстрочное число после символа "C" означает количество атомов углерода, которое может содержать данная группа. Например, C_1-6-алкил относится к линейным или разветвленным алкильным группам, содержащим от 1 до 6 атомов углерода, и в число этих групп входят метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет.-бутил, н-пентил, н-гексил, 3-метилпентил и им подобные алкильные группы; C_2-6-алкенил относится к линейным или разветвленным алкенильным группам, таким как винил, аллил, 1-пропенил, изопропенил, 1-бутенил, 2-бутенил, 3-бутенил, металлил, 1,1-диметилаллил, 1-гексенил, 2-гексенил и им подобные группы; C_3-6-циклоалкил относится к циклопропилу, циклобутилу, циклопентилу и цилкогексилу; C_2-6-алкинил относится к линейным или разветвленным алкинильным группам, таким как этинил, пропаргил (2-пропинил), 1-пропинил, 2-бутинил, 3-бутинил, 1-гексинил, 4-метил-2-пентинил и им подобным группам; C_2-6-алкендиил относится к таким группам, как этилен-1,2-диил (винилиден), 2-метил-2-бутен-1,4-диил, 2-гексен-1,6-диил и им подобным группам; C_1-6-алкилокси (алкокси) относится к линейным или разветвленным алкоксигруппам, таким как метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, трет.-бутокси (трет.-бутилокси), н-пентилокси, н-гексилокси или 3-метилпентилокси и т.д.; гетероарил относится к пятичленным ароматическим кольцам, содержащим по меньшей мере один гетероатом, выбираемый из атомов серы, кислорода или азота, но содержащим до 1 атома серы, 1 атома кислорода или 4 атомов азота; гетероарил также относится к шестичленным ароматическим кольцам, содержащим от 1 до 4 атомов азота; атом галогена означает атомы фтора, хлора, брома или иода. Примерами гетероарильных групп являются тиенил, фурил, пирролил, имидазолил, пиразолил, тиазолил, изотиазолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, тетразолил, тиатриазолил, аксатриазолил, пиридил, пиримидил, пиразинил, пиридазинил, тиазинил, тетразинил и т.д. Азетидинон означает азетидин-2-он. В данном описании все однажды определенные символы сохраняют свое значение по всему описанию.

Синтез соединений формулы I может быть выполнен различными способами. Способы синтеза, описания и конкретные примеры, которые приведены ниже, преследуют только цель проиллюстрировать изобретение и не должны рассматриваться в качестве ограничения получения соединений настоящего изобретения какими-либо другими способами. Способы, описанные в данной заявке, могут быть легко изменены и/или приспособлены для получения дополнительных примеров формулы I, не раскрываемых специально.

В одном из воплощений соединение формулы Ia может быть получено способом, описанным в Схеме 1. В этой схеме при обработке соединения формулы IIa с помощью ДАСТ может быть получено соединение формулы IIIa. Обработка ДАСТ может быть осуществлена в различных растворителях, в том числе метиленхлориде, тетрагидрофуране (ТГФ), диэтиловом эфире, толуоле и любых смесях этих растворителей. Кроме соединения IIIa могут быть получены соединения формул IVa и Va в качестве побочных продуктов при реакции с ДАСТ. Было установлено, что самое высокое соотношение соединения IIIa к соединению IVa или Va получается, когда реакцию проводят в смеси ТГФ и диэтилового эфира. После снятия Cbz-группы с соединения формулы IIIa получают соединение формулы Ia.

В более общем воплощении, описанном в Схеме II, при обработке соединения формулы Ia восстанавливающим эфиры агентом, таким как тетрабутиламмонийборгидрид, восстановительное расщепление боковой цепочки при атоме C-13 приводит к соединению формулы VIa. К соединению формулы VIa может быть присоединен азетидинон формулы VII способом, аналогичным способу, приведенному на Стадии (a) в Схеме IV (см. ниже) с образованием соединения формулы VIII. После удаления гидроксил-защитной группы R³ может быть получено соединение формулы I¹.

Гидроксил-защитные группы, используемые здесь, представляют собой фрагменты, которые могут быть использованы для защиты или блокировки гидроксильной функции, и они хорошо известны в данной области. Предпочтительно указанными группами являются группы, которые могут быть удалены способами, не приводящими к заметным разрушениям остальной части молекулы. Примерами таких легко удаляемых гидроксил-защитных групп являются хлорацетильная, метоксиметильная, 2,2,2-трихлорэтоксиметильная, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонильная, тетрагидропиранильная, тетрагидрофуранильная, трет.-бутильная, бензильная, пара-нитробензильная, пара-метоксибензильная, дифенилметильная, три-C_1-6-алкилсилильная, трифенилсилильная, 1-этоксиэтильная и им подобные группы. Предпочтительными защитными группами для 2'-гидроксигруппы паклитаксела и его производных являются 1-этоксиэтильная, триэтилсилильная, 2,2,2-трихлорэтилоксикарбонильная и бензилоксикарбонильная. Наиболее предпочтительной является бензилоксикарбонильная группа, которая может быть удалена путем каталитического гидрогенолиза. Другие подходящие защитные группы, которые могут быть использованы, приведены в Главе 2 книги "Protecting Groups in Organic Synsesis", Second Ed., by T.W. Greene and P.G. M.Wuts (1991, John Wiley & Sons), которая включена в описание для сведения.

В другом общем воплощении соединение формулы II может реагировать с ДАСТ как на Стадии (a) Схемы 1 с образованием соединения формулы III, Схема III. Заместитель R^j, используемый здесь, представляет собой -COOR, H, -OR, -OR³, -OSO₂R, -OCONR^oR, -OCONHR, -OCOO(CH₂)_tR или -OCOOR. После удаления гидроксил-защитной группы (групп) R³ получают соединение формулы 1².

Многие соединения, представленные формулой II, уже известны и могут быть легко получены по известным методикам с небольшими изменениями или без них. Например, соединение формулы II, в котором заместитель R^j представляет собой атом водорода, может быть получен по общим методикам, описанным в Заявке PCT (мировая) 93/06093, опубликованной 01 апреля 1993 г.

В качестве дополнительной иллюстрации изобретения соединения формулы II могут быть легко получены способом, приведенным в Схеме IV. На Стадии (a) этой схемы азетидинон VII реагирует с соединением формулы X (производное баккатина III), в котором заместитель R⁴ представляет собой гидроксил-защитную группу. Соединения класса азетидинонов формулы VII хорошо известны. Их синтез или синтез их прекурсоров описан в Евр. заявке 0400971 A2 (Холтон), опубликованной 5 декабря 1990 г. ; Евр. заявках 0534907 A1, 0534708 A1 и 0534707 A1 (Холтон), которые опубликованы 31 марта 1993 г.; в PCT заявке (мировая) 93/06079 (Холтон), опубликованной 1 апреля 1993 г.; Ojima et al. В Tetrahedron, 48, 34, p. 6985-7012 (1992); J. Org. Chem., 56, p. 1681-1683 (1991); Tetrahedron Lett., 33, 39, p. 5737-5740 (1992); Brieva et al. В J. Org. Chem., 58, p. 1068-1072; Palomо et al. В Tetrahedron Lett., 31, 44,, p. 6429-6432 (1990); в Евр. заявке 552041, опубликованной 21 июля 1993 г.; в нашей, находящейся в процессе одновременного рассмотрения заявке США серии N 092170, направленной на рассмотрение 14 июля 1993 г.: все 12 описаний приведены здесь для справки. Способы, которые могут быть легко изменены для того, чтобы получить другие азетидиноны, подпадающие под формулу VII, но специально не раскрытые здесь или в приведенных выше 12 работах, или описанные где-либо еще, будут очевидны для любого квалифицированного в данной области специалиста.

Евр. заявки 0400971 A2, 0534909 A1, 0534708 A1 и 0534707 A1, а также статьи Tetrahedron, 48, 34, p. 6985-7012 (1992) и Tetrahedron Lett., 34, 26, p. 4149-4152 (1993) также описывают способы, по которым азетидиноны формулы VII реагируют с C-13-гидроксигруппой производных боккатина III или его металлакоксидом с образованием аналогов паклитаксела с различными C-13 боковыми цепочками. На Стадии (a) схемы IV предпочтительно до проведения реакции присоединения превращать гидроксигруппу при атоме C-13 в металлалкоксид. Катион металла указанного выше металлалкосида предпочтительно выбирается из групп IA или IIA. Образование желаемого металлалкоксида может быть осуществлено при взаимодействии соединения формулы II с сильным металлическим основанием, таким как диизопропиламид лития, C_1-6-алкиллитий, бис(триметилсилил)-амид лития, фениллитий, гидрид натрия, гидрид калия, гидрид лития и др. Например, если необходим алкоксид лития, соединение формулы II может реагировать с н-бутиллитием в инертном растворителе, например в тетрагидрофуране.

Соединение формулы X представляет собой или известное в данной области соединение, или может быть получено по известным методикам с минимальными модификациями или без них. Например, соединение формулы Х, в котором заместитель R⁴ представляет собой триэтилсилильную группу, а заместитель R^j - ацетилоксигруппу, описано в Пат. США 4924011, выданном Дэнису и др. 8 мая 1990 г. Кроме того, как и в Схеме V, если соединение формулы IX реагирует с RL, RC(= O)L, R(CH₂)_tOC(= O)L, ROC(=O)L, LSO₂R, LCONR^oR, LCONHR, O=C=N-R или их ангидридным производным, где L представляет собой обычную уходящую группу, такую как хлор, бром, мезил, трифторметансульфонил или тозил, может быть получено соединение формулы X¹, которое подпадает под формулу X. Заместитель R^m, используемый здесь, представляет собой -OR, -COOR, -OSO₂R, -OCONR^OR, -OCONHR, -OCOO(CH₂)_tR или -OCOOR. Обычно в способе Схемы V для первоначального депротонирования C-10-гидроксигруппы необходимо основание. Особенно полезным основанием на Стадии (a) является сильное основание, такое как C_1-6-алкиллитий, бис(триметилсилил)амид лития и им подобные основания, которые используются в количестве 1.1 эквивалента. Депротонирование основанием предпочтительно проводят в протонном растворителе, таком как тетрагидрофуран, при низкой температуре, обычно при температуре от -40 до 0^oC. Синтез соединения формулы IX, в котором заместитель R⁴ представляет собой триэтилсилильную группу, описан в Пат. США 4924011, выданном Дэнису и др. 8 мая 1990 г. Соединения формулы IX, в которых заместитель R⁴ представляет собой отличные от триэтилсилильной группы или известны, могут быть получены по методикам, которые очевидны для любого квалифицированного в данной области специалиста.

Как показано в Схеме VI соединение формулы I³ может быть получено при взаимодействии соединения формулы XIII с тетраоксидом осмия и 4-метилморфолин-N-оксидом с последующим удалением гидроксилзащитной группы R³ из соединения формулы VII.

Структурные формулы, приведенные в данном описании, как полагают, лучше всего представляют строение соединений настоящего изобретения. Однако некоторые соединения, которые подпадают под объем настоящего изобретения, могут существовать в виде других таутомерных форм, в которых атомы водорода мигрируют в другие части молекулы и химические связи между атомами в молекулах соответствующим образом перераспределяются. Следует понимать, что структурные формулы представляют все таутомерные формы соединений, в которых они могут существовать.

Конкретные примеры, которые приведены ниже, служат для иллюстрации синтезов конкретных соединений настоящего изобретения и не должны рассматриваться в качестве ограничения объема изобретения. Способы могут быть подвергнуты различным изменениям для того, чтобы получить соединения, охватываемые настоящим изобретением, но не раскрываемые специально. Кроме того, модификации способов для получения тех же соединений до некоторой степени другим образом также будут очевидны для квалифицированного в данной области специалиста. Если не определено особо, то все температуры указаны в ^oC. Спектральные характеристики в спектрах ядерного магнитного резонанса (ЯМР) относятся к химическим сдвигам δ , выраженных в частях на миллион (м.д.) относительно тетраметилсилана (ТМС), используемого в качестве стандарта. Относительные площади, указанные для различных химических сдвигов в спектрах протонного ЯМР, соответствуют числу атомов водорода конкретной функциональной группы молекулы. Вид сигналов, то есть их мультиплетность, описывается следующим образом: уширенный синглет (уш. с. ), уширенный дублет (уш.д.), уширенный триплет (уш.т.), уширенный квартет квартетов (д. кв.). Для снятия ЯМР использовались следующие растворители: DMCO-d₆ (пердейтерированный диметилсульфоксид), D₂O (дейтерированная вода), CDCl₃ (дейтерохлороформ) и другие обычные дейтерированные растворители. Описание ИК спектров включает только волновое число поглощения (см^-1), относящееся к идентифицируемым функциональным группам.

Целиты представляют собой зарегистрированную торговую марку для диатомовой земли Джонс Манвилле Продактс Корп.

Используемые в описании аббревиатуры являются обычными и широко используются в данной области. Ниже приведены некоторые из них:
MS - масс-спектроскопия
МСВР - масс-спектр высокого разрешения
ДАСТ - диэтиламиносератрифторид
Ac - ацетил
Ph - фенил
Ar - арил
ДХИ - десорбционная химическая ионизация
Y - выход
об./об. - объем-объем
ББА - бомбардировка быстрыми атомами
НБС - мета-нитробензиловый спирт
мин - минута(ы)
ч - час(ы)
tBu - трет.бутил
Cbz - бензилоксикарбонил
Bz - бензоил
ТЭС - триэтилсилил
Пример 1.

2'-O-(Бензилоксикарбонил)паклитаксел (IIа)

К раствору паклитаксела (150 мг, 0,176 ммоля) и N,N-диизопропилэтиламина (0,93 мкл, 0,534 ммоля, 3 эквивалента) в безводном метиленхлориде (4 мл) при перемешивании и комнатной температуре добавляли бензилхлорформиат (75 мкл, 0,525 ммоля, 3 эквивалента). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь упаривали до объема 2 мл и продукт очищали на колонке с силикагелем (элюент этилацетат/гексан 1:1), получали 150 мг (0,152 ммоля, выход 86%) названного соединения, IIа, в виде белого порошка: т. пл. 140-150^oC (разл.); [α]²_D⁰ - 53,5^oC ( с 0,2, 95% EtOH); Спектр ¹H ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆), δ, м.д.: 1,18 (3H, с, 17-H₃), 1,92 (3H, с, 16-H₃), 1,66 (3H, с, 19-H₃), 1,96 (3H, с, 18-H₃), 2,16 (3H, с, 10-OAc), 2,5 (3H, с, 4-OAc), 3,53 (1H, д, J = 5,89 Гц, 7-OH, обменивается с D₂O), 3,85 (1H, д, J = 7,19 Гц, 3-H), 3,9 (1H, с, 1-OH, обменивается с D₂O), 4,17 (2H, ABq, 20-H₂), 4,25 (1H, м, 7-H), 4,97 (1H, д, J = 9,56 Гц, 5-H), 5,19 (2H, ABq, OCH₂C₆H₅), 5,54 (1H, д, J = 5,5 Гц, 2'-H), 5,68 (1H, д, J = 7,13 Гц, 2-H), 6,01 (1H, дд, J = 5,5, 9,05 Гц, 3'-H), 6,17 (1H, уш.т., J = 9,0 Гц, 13-H), 6,42 (1H, с, 10-H), 7,28-7,69 (16H, м), 7,87 (2H, "д", J = 8 Гц, 3'-NHCOPh), 8,14 (2H, "д", J = 8 Гц, 2-CO₂Ph), 8,55 (1H, д, J = 9,06 Гц, NH, обменивается с D₂O); Масс-спектр (ББА-НБС/Na1+K1) m/e: 1010 (M+Na)⁺, 1026 (M+K)⁺; Спектр ИК (KBr) ν_max : 3448, 1748 (O=O), 1726 (CONH), 1250 (C-O) см^-1; Спектр УФ (MeOH:H₂O 1:1) λ_max : 198 ( ε 7,3 · 10⁴), 230 нм ( ε 2,7 · 10⁴); По данным МСВР вычислено для C₅₅H₅₈NO₁₆ (MH)⁺: 988,3756, найдено 988,3766.

Элементный анализ: вычислено для C₅₅H₅₈NO₁₆ · H₂O : C 65,67, H 5,92, N 1,40. Найдено: C 65,99, H 5,64, N 1,33.

Пример 2.

2'-O-(Бензилоксикарбонил)-6,7-дегидропаклитаксел (IIIa)

2'-O-(Бензилоксикарбонил)паклитаксел (Па) (514 мг, 0,521 ммоля) растворяли в ТГФ (3 мл) в диэтиловом эфире (6 мл). Полученный раствор охлаждали до -78^oC и по каплям добавляли ДАСТ (0,143 мл, 1,040 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при -78^oC в течение 3 ч и оставляли при комнатной температуре на ночь. По завершении реакции растворитель частично упаривали в вакууме, а остаток хроматографировали (элюент 30-40% этилацетат в гексане), получали 73 мг (выход 14,5%) названного соединения. Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц), δ , м. д.: 8,15 (д, J = 7,1 Гц, 2H), 7,71 (д, J = 7,1 Гц, 2H), 7,63-7,24 (м, 16H), 6,90 (д, обмениваемый, J = 9,3 Гц, 1H), 6,25 (уш.т., 1H), 6,21 (с, 1H), 6,05 (дд, J₁ = 9,9 Гц, J₂ = 5,6 Гц, 1H), 5,96 (дд, J₁ = 9,9 Гц, J₂ = 2,7 Гц, 1H), 5,86-5,82 (м, 2H), 5,42 (д, J = 2,5 Гц, 1H), 5,18-5,09 (м, 3H), 4,37 (ABq, J = 8,2 Гц, 2H), 4,00 (д, J = 6,6 Гц, 1H), 2,48-1,12 (м, 21H, включая синглеты при 2,44, 3H; 2,18, 3H; 1,86, 3H; 1,84, 3H; 1,23, 3H; 1,13, 3H); Спектр ¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц), δ , м.д.: 205,5, 169,5, 169,1, 167,8, 167,1, 167,0, 154,1, 141,9, 139,9, 136,8, 134,3, 133,7, 133,5, 132,0, 130,2, 129,2, 129,1, 128,9, 128,7, 128,4, 127,2, 126,6, 126,2, 81,2, 81,1, 78,8, 76,9, 76,3, 75,9, 75,7, 71,9, 70,7, 55,4, 52,7, 43,1, 41,4, 35,8, 26,4, 22,8, 22,1, 21,0, 20,8, 20,5, 14,5.

Пример 3.

6,7-Дигидропаклитаксел (Ia)

2'-O-(Бензилоксикарбонил)-6,7-дегидропаклитаксел (IIIa) (19,6 мг, 0,020 ммоля) растворяли в этилацетате (0,5 мл), добавляли каталитическое количество Pd/C (6,4 мг, 10%, 0,006 ммоля) и подвергали гидрогенолизу при атмосферном давлении. Через 4 ч смесь фильтровали, фильтрат упаривали, сырой продукт очищали хроматографированием (элюент 60%-ный этилацетат в гексане), получали 16,7 мг (выход 98,8%) соединения Iа. Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц), δ , м.д.: 8,14 (д, J = 8,7 Гц, 2H), 7,73 (д, J = 8,7 Гц, 2H), 7,71-7,24 (м, 11H), 7,00 (д, обмениваемый, J = 9,0 Гц, 1H), 6,18 (м, 2H), 6,04 (дд, J₁ = 9,9 Гц, J₂ = 5,6 Гц, 1H), 5,86-5,76 (м, 3H), 5,07 (д, J = 5,6 Гц, 1H), 4,75 (м, 3H), 4,35 (ABq, J = 8,2 Гц, 2H), 3,97 (д, J = 6,4 Гц, 1H), 3,53 (д, J = 4,8 Гц, 1H), 2,37-1,12 (м, 21H, включая синглеты при 1,36, 3H; 2,21, 3H; 1,85, 3H; 1,71, 3H; 1,22, 3H; 1,13, 3H); Спектр ¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц), δ , м. д. : 205,3, 172,5, 169,7, 169,6, 167,9, 141,1, 139,9, 138,0, 133,9, 133,8, 133,7, 132,0, 130,2, 129,2, 129,0, 128,7, 128,3, 127,0, 126,9, 126,3, 81,2, 78,6, 77,2, 76,4, 75,8, 75,5, 73,2, 72,2, 55,5, 54,8, 43,0, 41,6, 35,9, 26,4, 22,7, 21,6, 20,8, 20,3, 14,6. Масс-спектр (ББА): 836 (MH).

Пример 4.

6,7-Дигидробаккатин III (VIa)

Раствор 6,7-дегидропаклитаксела (1,13 г, 1,35 ммоля) в 2%-ном растворе метанола в дихлорметане (60 мл) обрабатывали тетрабутиламмонийборгидридом (694 мг, 2,70 ммоля) и выдерживали при комнатной температуре в течение 5 ч. Реакцию останавливали добавлением насыщенного водного раствора хлорида аммония (10 мл), органический слой сушили (MgSO₄) и упаривали. Сырой продукт хроматографировали на силикагеле (элюент 10%-ный этилацетат в гексане), выделяли твердое вещество белого цвета, которое затем перекристаллизовывали из метанола (630 мг, выход 82%); т. пл. 224-230^oC (разл.). Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц), δ , м.д.: 8,15-8,09 (м, 2H), 7,64-7,58 (м, 1H), 7,51-7,45 (м, 2H), 6,46 (с, 1H), 6,05 (дд, 1H, J = 6,0 и 9,0 Гц), 5,86 (д, 1H, J = 12,0 Гц), 5,79 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 5,11 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 4,89-4,82 (м, 1H), 4,35 (ABq, 2H, J = 6,0 и 36,0 Гц), 4,09 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 2,35-2,18 (м, 10H, включая синглеты при 2,26, 2,21), 2,01 (с, 3H), 1,83 (с, 3H), 1,10-1,07 (м, 6H). Спектр ¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц), δ, м.д.: 205,4, 170,2, 169,5, 166,8, 145,3, 139,7, 133,5, 132,4, 129,9, 129,2, 128,5, 126,1, 81,1, 80,9, 78,9, 76,3, 76,2, 75,3, 67,7, 55,4, 44,1, 42,5, 41,6, 38,9, 26,2, 22,6, 20,9, 20,7, 20,1, 14,8, 14,5.

Пример 5.

6,7-Дегидро-2'-O-триэтилсилил-3'-(2-фурил)-3'-N-дебензоил-N-трет. - бутоксикарбонилпаклитаксел (VIIIa)

Рствор 6,7-дегидробаккатина III (42 мг, 0,074 ммоля) в сухом тетрагидрофуране продували инертным газом и охлаждали до -55^oC в бане сухой лед/ацетон. К раствору с помощью шприца по каплям добавляли литийгексаметилдисилазин (0,5 М раствор в ТГФ, 0,24 мл, 0,8 ммоля). Полученный раствор палево-желтого цвета перемешивали 5 мин, после чего в течение 5 мин добавляли раствор рацемического N-трет.-бутоксикарбонил-4-(2-фурил)-азетидинона (VIIa) (130,8 мг, 0,35 ммоля) в тетрагидрофуране (2 мл). Охлаждающую баню заменяли на баню лед/рассол и полученный раствор перемешивали при температуре 0^oC в течение 1 ч. Реакцию останавливали добавлением насыщенного раствора NH₄Cl (2 мл), разбавляли этилацетатом (25 мл) и промывали водой (2 · 10 мл). Органический слой сушили (MgSO₄) и упаривали, получали названный продукт в виде бесцветного масла. Сырой продукт очищали хроматографированием на силикагеле (элюент гексан-этилацетат 7:3), в результате получали продукт в виде бесцветного стеклообразного вещества (59,5 мг, выход 86%). Спектр ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃), δ, м. д.: 8,14 (д, 2H, J = 9,0 Гц), 7,60-7,37 (м, 3H), 6,35-6,33 (м, 1H), 6,24-6,20 (м, 3H), 6,06 (дд, 1H, J = 6,0 и 9,0 Гц), 5,87-5,84 (м, 2H), 5,30 (д, 2H, J = 6,0 Гц), 5,11 (д, 1H, J = 3,0 Гц), 4,75 (с, 1H), 4,36 (ABq, 2H, J = 6,0 и 39,0 Гц), 4,04 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 2,47 (с, 3H), 2,45-2,25 (м, 2H), 2,22 (с, 3H), 1,90-1,14 (м, 23H, включая синглеты при 1,86, 1,82, 1,34, 1,25, 1,14), 0,87-0,73 (м, 9H), 0,55-0,37 (м, 6H). Спектр ¹³C ЯМР (CDCl₃, 75 МГц), δ , м.д.: 205,5, 171,1, 169,5, 166,9, 155,3, 152,0, 142,0, 141,8, 139,9, 133,6, 133,4, 130,1, 129,1, 128,6, 126,1, 110,6, 107,2, 81,2, 80,9, 80,1, 78,6, 76,5, 76,3, 75,9, 75,6, 72,3, 71,9, 55,4, 52,7, 43,0, 41,3, 35,6, 28,1, 26,0, 22,8, 21,9, 20,7, 20,3, 14,5, 6,4, 4,2.

Пример 6.

6,7-Дегидро-3'-(2-фурил)-3'-N-дебензоил-N-трет. - бутоксикарбонилпаклитаксел (Iб)

Раствор 2'-силил-защищенного соединения VIIIa (59,5 мг, 0,063 ммоля) в ацетонитриле (2 мл) охлаждали до 0^oC на бане лед/рассол. К раствору добавляли 1 н. соляную кислоту (0,5 мл, 6 эквивалентов) и перемешивали в течение 1 ч при этой температуре. Затем растворитель упаривали в вакууме, остаток обрабатывали смесью этилацетата (25 мл) и воды (10 мл). Органический слой сушили (MgSO₄), упаривали и получали белую пену. Сырой продукт очищали хроматографированием на силикагеле (элюент 10%-ный ацетонитрил в метиленхлориде), названный продукт выделяли в виде белой пены (46 мг, выход 88%). Спектр ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 8,14 (д, 2H, J = 6,0 Гц), 7,62-7,46 (м, 3H), 6,37-6,30 (м, 2H), 6,31-6,20 (м, 2H), 6,06 (дд, 1H, J = 6,0 и 12,0 Гц), 5,87-5,83 (м, 2H), 5,35-5,23 (м, 2H), 5,10 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 4,02 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 3,31 (уш.с., 1H), 2,40-1,15 (м, 31H, включая синглеты при 2,40, 2,23, 1,85, 1,79, 1,35, 1,25, 1,15). Спектр ¹³C ЯМР (CDCl₃, 75,6 МГц), δ , м. д. : 205,2, 169,4, 166,9, 142,3, 141,3, 139,7, 133,5, 130,0, 129,0, 128,5, 126,1, 110,5, 107,2, 81,1, 80,9, 78,5, 76,2, 75,4, 72,2, 71,6, 55,3, 51,5, 42,9, 41,4, 35,5, 28,0, 22,5, 21,6, 20,6, 20,1, 14,4.

Пример 7.

6,7-Дегидро-3'-(2-фурил)паклитаксел (Iс)

Раствор 6,7-дегидробаккатина III (VIa) (191,4 мг, 0,33 ммоля) в сухом тетрагидрофуране (5 мл) продували инертным газом и охлаждали до -55^oC на бане сухой лед/ацетон. К раствору с помощью шприца по каплям добавляли литийгексаметилдисилазан (0,5 М раствор в гексане, 0,4 мл, 0,4 ммоля). Полученный раствор палево-желтого цвета перемешивали 5 мин, после чего в течение 5 мин добавляли раствор (3R,4S)-N-бензоил-4-(2-фурил)азетидинона (VIIa') (150,0 мг, 0,4 ммоля) в тетрагидрофуране (2 мл). Охлаждающую баню заменяли на баню лед/рассол и полученный раствор перемешивали при температуре 0^oC в течение 1 ч. Реакцию останавливали добавлением насыщенного раствора NH₄Cl (2 мл), разбавляли этилацетатом (25 мл) и промывали водой (2 · 10 мл). Органический слой сушили (MgSO₄) и упаривали, получали 6,7-дегидро-2'-O-триэтилсилил- 3'-(2-фурил)паклитаксел в виде бесцветного масла.

Раствор сырого 6,7-дегидро-2'-O-триэтилсилил-3'-(2-фурил)- паклитаксела (189 мг) в ацетонитриле (2 мл) охлаждали до 0^oC на бане лед/рассол. К раствору добавляли 1 н. соляную кислоту (0,5 мл) и перемешивали в течение 1 ч при этой температуре. Затем растворитель упаривали в вакууме, остаток обрабатывали смесью этилацетата (25 мл) и воды (10 мл). Органический слой сушили (МgSO₄), упаривали и получали белую пену. Сырой продукт очищали хроматографированием на силикагеле (элюент 20%-ный ацетонитрил в метиленхлориде), названный продукт выделяли в виде белой пены (140 мг, выход 51%). Спектр ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 8,15 (д, 2H, J = 9,0 Гц), 7,61-7,37 (м, 6H), 6,92 (д, 1H, J = 9,0 Гц), 6,38 (д, 2H, J = 1,3 Гц), 6,21 (с, 2H), 6,06 (дд, 1H, J = 6,0 и 9,0 Гц), 5,89-5,84 (м, 2H), 5,10 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 4,80 (дд, 1H, J = 3,0 и 6,0 Гц), 4,36 (ABq, 2H, J = 9,0 и 36,0 Гц), 4,01 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 3,58 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 2,43-1,74 (м, 17H включая синглеты при 2,42, 2,22, 1,99, 1,86, 1,76), 1,23-1,10 (м, 6H, включая синглеты при 1,23, 1,14). Спектр ¹³H ЯМР (CDCl₃, 75,6 МГц), δ, м.д.: 205,1, 172,0, 169,6, 169,4, 166,9, 166,8, 150,7, 142,5, 141,0, 139,7, 133,8, 133,6, 133,2, 131,9, 130,0, 129,1, 128,5, 126,9, 126,1, 110,6, 107,8, 81,1, 81,0, 78,4, 76,3, 75,7, 75,4, 72,1, 71,5, 55,3, 50,0, 42,9, 41,5, 35,7, 26,9, 26,2, 22,5, 21,5, 20,6, 20,2, 14,4.

Пример 8.

6,7-Дегидро-2'-O-триэтилсилил-3'-(2-тиенил)-3'-N-дибензоил- N-трет. -бутоксикарбонилпаклитаксел (VIIIб)

Названное соединение было получено по методике, аналогичной описанной для соединения VIIIa в Примере 5 по методике, аналогичной описанной для соединения VIIIa в Примере 5. Спектр ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 8,14 (д, 2H, J = 9,0 Гц), 7,63-7,58 (м, 1H), 7,49 (т, 2H, J = 9,0 Гц), 7,26-7,23 (м, 1H), 6,99-6,93 (м, 2H), 6,23-6,19 (м, 2H), 6,06 (дд, 1H, J = 3,0 и 9,0 Гц), 5,87-5,84 (м, 2H), 5,52-5,40 (м, 2H), 5,10 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 4,55 (д, 1H, J = 1,8 Гц), 4,38 (ABq, 2H, J = 9,0 и 42,0 Гц), 4,03 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 2,47-2,20 (м, 8H, включая синглеты при 2,42, 2,22), 1,88-1,73 (м, 7H, включая синглеты при 1,86, 1,81), 1,43-1,14 (м, 15Н, включая синглеты при 1,32, 1,26, 1,14), 0,90-0,81 (м, 9H), 0,59-0,42 (м, 6H). Спектр ¹³C ЯМР (CDCl₃, 75,6 МГц), δ, м.д.: 205,4, 171,0, 169,5, 169,2, 166,9, 141,9, 139,9, 133,6, 133,4, 130,1, 129,1, 128,6, 126,8, 126,1, 124,6, 124,5, 81,2, 81,0, 80,1, 78,7, 76,2, 75,8, 75,7, 75,2, 71,2, 55,3, 53,7, 43,0, 41,3, 35,7, 28,1, 26,1, 22,9, 22,0, 20,0, 20,7, 20,4, 14,5, 6,5, 4,4.

Пример 9.

6,7-Дегидро-3'-(2-тиенил)-3'-N-дебензоил-N-трет. -бутоксикарбонилпаклитаксел (Id)

Названное соединение было получено по методике, аналогичной описанной для соединений 1б в Примере 6. Спектр ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 8,13 (д, 2H, J = 6,0 Гц), 7,63-7,58 (м, 1H), 7,49 (т, 2H, J = 6,0 Гц), 7,26-7,24 (м, 1H), 7,06 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 6,99-6,96 (м, 1H), 6,22-6,19 (м, 2H), 6,04 (дд, 1H, J = 3,0 и 10,0 Гц), 5,86-5,81 (м, 2H), 5,47-5,37 (м, 2H), 5,08 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 4,61 (дд, 1H, J = 2,1 и 5,4 Гц), 4,35 (ABq, 2H, J = 8,1 и 39,0 Гц), 4,00 (д, 1H, J = 6,0 Гц), 3,56-3,53 (м, 1H), 2,37-2,20 (м, 8H, включая синглеты при 2,37, 2,22), 1,98-1,72 (м, 7H, включая синглеты при 1,96, 1,86, 1,75), 1,39-1,14 (м, 15H, включая синглеты при 1,33, 1,24, 1,14). Спектр ¹³H ЯМР (CDCl₃, 75,6 МГц), δ, м.д.: 205,2, 169,5, 169,4, 166,9, 154,9, 141,3, 139,8, 133,7, 133,6, 133,5, 130,1, 129,9, 129,1, 128,6, 126,9, 126,2, 125,3, 125,2, 81,1, 81,0, 80,3, 78,5, 76,3, 75,8, 75,5, 73,3, 72,3, 55,4, 52,7, 43,0, 41,5, 35,6, 28,1, 26,2, 22,6, 21,6, 20,7, 20,2, 14,4.

Пример 10.

Получение гидробензамида PhCH(-N=CHPh)₂
В трехгорлую колбу на 3 л, снабженную механической мешалкой и термометром, загружали 1 л концентрированного раствора NH₄OH (30%) (14,8 ммоля). Затем в одну порцию добавляли раствор бензальдегида (265 г, 2,5 ммоля) в 500 мл 2-пропанола. Смесь энергично перемешивали при 22^oC в течение 48 ч. Полученную суспензию отфильтровывали и осадок на фильтре промывали водой (1 л). После высушивания в вакууме получили 242,4 г гидробензамида в виде белого твердого продукта. Т. пл. 100 - 102^oC, выход 97,4%.

По описанной выше методике могут быть получены бис-имины общей формулы R²CH(-N= chr²)₂, например гидрофурамид (R² = 2-фуранил), гидротиенамид (R² = 2-тиенил).

Пример 11.

(±)-цис-3-Ацетилокси-1-[(фенил)(бензилиденимино)метил] -4- фенилазетидин-2-он (XIVa)

В трехгорлую колбу на 1 л, снабженную термометром, магнитной мешалкой и капельной воронкой, загружали гидробензамид (30.00 г, 100.5 ммоля) и этилацетат (150 мл). В атмосфере аргона при перемешивании реакционную смесь охлаждали до 5^oC и добавляли триэтиламин (16.8 мл, 121 ммоля). Затем по каплям в течение 90 мин добавляли раствор ацетоксиацетилхлорида (12.4 мл, 116 ммоля) в этилацетате (300 мл). Через 16 ч выдерживания при этой температуре реакционную массу оставляли нагреваться до 20^oC (1.5 ч) и перегружали в делительную воронку. Органический слой тщательно промывали насыщенным водным раствором NH₄Cl (150 мл и 100 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO₃ (120 мл). С целью описания названное соединение может быть выделено на этой стадии путем высушивания органической фазы MgSO₄, фильтрации и упаривания растворителя в вакууме, Это приводит к требуемому продукту с количественным выходом сырого продукта в виде красной стеклообразной массы.

Чистота по ВЭЖХ (по площади): 87.9% (1:1 смесь диастереомеров). Спектр ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ, м.д.: 8.45 (с, 1H, N=CH), 7.80 - 7.86 (м, 1H, Ph), 7.60 - 7.65 (м, 1H, Ph), 7.25 - 7.50 (м, 9H, Ph) 7.00 - 7.10 (м, 4H, Ph), 6.28 (с, 0.5H, NCHN), 6.23 (с, 0.5H, NCHN), 5.81 (д, J = 4.8 Гц, 0.5H, H-3), 5.76 (д, J = 4.8 Гц, 0.5H, H-3), 5.30 (д, J = 4.8 Гц, 0.5H, H-4), 4.75 (д, J = 4.8 Гц, 0.5H, H-4), 1.63 (с, 3H, CH₃CO). Спектр ИК (KBr). ν , см^-1: 1763 (C=O). 1641 (C=N). Спектр УФ (метанол), λ_max (нм): 216. 252.

Пример 12.

(±)-цис-3-Ацетилокси-фенилазетидин-2-он (XVa)

Раствор соединения, полученного в Примере 11, в этилацетате (500 мл) аккуратно в атмосфере аргона загружали в прибор Парра на 2 л, содержащий 10% палладий на активированном угле (6.00 г). Эту смесь обрабатывали водородом (4 атм) в течение 20 ч, после чего катализатор отделяли фильтрованием через целиты. Осадок смешивали с этилацетатом (200 мл), перемешивали 10 мин и фильтровали. Осадок на фильтре промывали этилацетатом (100 мл) и фильтраты объединяли. Органический слой промывали 10%-ной HCl (300 мл) и оба слоя фильтровали через стеклянный фильтр для отделения белого осадка (хлоргидрата дибензиламина), который промывали этилацетатом (100 мл). Фазы разделяли и органический слой промывали дополнительной порцией 10%-ной HCl (200 мл). Промывные солянокислые воды объединяли и реэкстрагировали этилацетатом (200 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃ (300 мл) и рассолом (250 мл). Органический слой сушили MgSO₄, фильтровали и упаривали в вакууме до объема 75 мл. Эту смесь охлаждали до 4^oC и выпавший осадок отделяли фильтрацией. Осадок на фильтре промывали гексаном (200 мл), получали 16.12 г (общий выход из гидробензамида 78.1%) названного соединения в виде белых игольчатых кристаллов. Т. пл. 150 - 151^oC. Чистота по ВЭЖХ (по площади): 99.8%. Спектр ¹Н ЯМР (200 МГц, CDCl₃), δ , м.д.: 7.30 - 7.38 (м, 5H, Ph), 6.54 (уш. с, обмениваемый, 1H, NH), 5.87 (дд, J = 2,7 и 4,7 Гц, 1H, H-3), 5.04 (д, J = 4,7 Гц, 1H, H-4), 1.67 (с, 3H, CH₃CO). Спектр ИК (KBr), ν , см^-1: 3210 (N-H), 1755, 1720 (C=O). KF: 0.17%.

Элементный анализ. Вычислено для C₁₁H₁₁NO₃: C 64.38, H 5.40, N 6.83. Найдено C 64.07, H 5.34, N 6.77.

Пример 13.

(±)-цис-3-Ацетилокси-1-[(2-фурил)(2-фурилметилененимино)метил] - 4-(2-фурил)азетидин-2-он (XIVб)

Названное соединение было получено по методике, описанной в Примере 11, за исключением того, что вместо гидробензамида использовали гидрофурамид и реакцию проводили из расчета на 18.6 ммоля (вместо 100 ммолей). Таким образом, гидрофурамид (5.00 г, 18.6 ммоля), триэтиламин (3.11 м л, 22.3 ммоля) и ацетоксиацетилхлорид (2.30 мл, 21.4 ммоля) давали 6.192 г (выход 90.4%) названного соединения в виде палево-красного сиропа. Выделен в виде 1:1 смеси диастереомеров. Спектр ¹Н ЯМР (200 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 8.211 (с, 0.5H, N= CH), 8.208 (с, 0.5H, N=CH), 7.14 - 7.59 (м, 3H, фурил), 6.90 (д, J = 3.5 Гц, 0.5H, фурил), 6.83 (д, J = 3.5 Гц, 0.5H, фурил), 6.10 - 6,53 (м, 6H, фурил, NCHN), 5.90 (д, J = 4.9 Гц, 0.5H, H-3), 5.86 (д, J = 4.8 Гц, 0.5H, H-3), 5.35 (д, J = 4.8 Гц, 0.5H, H-4), 5.86 (д, J = 4.8 Гц, 0.5H, H-3), 5.35 (д, J = 4.8 Гц, 0.5H, H-4), 4,90 (д, J = 4.9 Гц, 0.5H, H-4), 1.91 (с, 1.5H, CH₃CO), 1.88 (с, 1.5H, CH₃CO). Спектр ИК (пленка), ν, см^-1: 1778 )C=O), 1642 (C=N). Спектр УФ (метанол), λ_max (нм): 220, 278.

Пример 14.

(±)-цис-3-Ацетилокси-4-(2-фурил)азетидин-2-он (XVб)

Названное соединение было получено по методике, описанной в Примере 12, за исключением того, что продукт был выделен с помощью препаративной ТСХ и реакцию проводили из расчета на 2.7 ммоля первоначального количества гидрофурамида. Таким образом, сырой продукт Примера 13 (1.00 г) был растворен в этилацетате (50 мл) и добавлен к 10% палладию на активированном угле (150 мг). Очистка сырого твердого продукта с помощью препаративной ТСХ (на 2 мм силикагеле, элюент - 1:1 этилацетат/гексан) давала 386 мг (скорректированный общий выход из гидрофурамида 65.8%) названного соединения в виде желтого твердого вещества. Продукт затем перекристаллизовывали из смеси этилацетат/гексан. Т. пл. 118 - 119^oC. Чистота по ВЭЖХ (по площади): 99.4%. Спектр ¹Н ЯМР (200 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 7.44 (т, J - 1.3 Гц, 2H, фурил), 6.39 (д, J = 1.3 Гц, 1H, фурил), 6.21 (уш. с, обмениваемый, 1H, NH), 5.88 (дд, J = 2.2 и 4.6 Гц, 1H, H-3), 5.05 (д, J = 4.6 Гц, 1H, H-4), 1.92 (с, 3H, CH₃CO). Спектр ИК (KBr), ν, см^-1: 3203 (N-H), 1756, 1726 (C=O). Спектр УФ (метанол), λ_max (нм): 222.

Пример 15.

(±)-цис-3-Ацетилокси-1-[(2-тиенил)(2-тиенилметилененимино) метил] -4-(2-тиенил)азетидин-2-он (XIVс)

Названное соединение было получено по методике, описанной в Примере 11, за исключением того, что вместо гидробензамида использовали гидротиенамид. Таким образом, гидротиенамид (30 г, 94.7 ммоля), триэтиламин (15.84 мл, 114 ммолей) и ацетоксиацетилхлорид (11.6 мл, 108 ммолей) давали названное соединение в виде вязкого масла. Продукт содержал смесь диастереомеров. Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃), δ, м.д.: 8.52 (с, 1H), 8.502 (с, 1H), 7.51 (д, J = 4.9 Гц, 1H), 7.45 (д, J = 4.9 Гц, 1H), 7.41 (д, J = 3.1 Гц, 1H), 7.37 (д, 1H), 7.30 (м, 3H), 7.16 (м, 3H), 7.16 (м, 3H), 7.09 (м, 2H), 6.94 (м, 1H), 6.89 (м, 1H), 6.81 - 6.74 (м, 4H), 6.48 (с, 1H), 6.43 (с, 1H), 5.85 (м, 2H), 5.59 (д, J = 4,8 Гц, 1H), 5.17 (д, J = 4.8 Гц, 1H), 1.87 (с, 3H), 1.86 (с, 3H).

Пример 16.

(±)-цис-3-Ацетилокси-4-(2-тиенил)азетидин-2-он (XVc)

К раствору соединения XIVc (0.431 г, 1.03 ммоля) в дихлорметане (2.93 мл) при перемешивании в одну порцию добавляли 70%-ный водный раствор уксусной кислоты (0.35 мл ледяной уксусной кислоты и 0.15 мл воды) при температуре 25^oC. Реакционную массу кипятили при перемешивании в течение 2.5 ч. Смесь разбавляли 50 мл дихлорметана и затем промывали двумя порциями по 75 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и затем одной порцией 50 мл насыщенного рассола. Органический слой упаривали в вакууме до коричневого масла, растворяли в минимальном количестве дихлорметана и затем загружали в колонку с силикагелем размером 4 на 0.5 дюйма. Использовали градиентное элюирование раствором от 10 до 60% этилацетата в гексане, благодаря чему сначала выходили менее полярные побочные продукты, а затем названное соединение (0.154 г, выход 75%), которое выделено в виде белого твердого вещества. Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃), δ, м.д.: 7.32 (дд, J = 4.7 и 1.5 Гц, 1H), 7.03 (м, 2H), 6.75 (уш. с, 1H), 5.86 (дд, J = 4.6 и 2.7 Гц, 1H), 5.27 (д, J = 5,3 Гц, 1H), 1.83 (с, 3H). Спектр ¹³С ЯМР (CDCl₃), δ, м.д.: 169.3, 165.5, 138.4, 127.1, 127.07, 126.2, 78.3, 54.0, 20.0.

Пример 17.

(±)-цис-3-Триэтилсилилокси-4-(2-фурил)азетидин-2-он (XVIa)

Ацетоксилактам XVб (3.78 г, 19.4 ммоля) в 60 мл метанола перемешивали с K₂CO₃ (20 мг, 0.14 ммоля) в течение 90 мин, после чего раствор нейтрализовали Dowex 50W-X8 и фильтровали. Фильтрат упаривали, остаток растворяли в 80 мл безводного ТГФ и перемешивали при 0^oC с имидазолом (1.44 г, 21.2 ммоля) и ТЭСХ (триэтилсилилхлоридом, 3.4 мл, 20.2 ммоля) в течение 30 мин. Раствор разбавляли этилацетатом, промывали рассолом, сушили MgSO₄ и упаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (элюент гексан/этилацетат 3:1), получали 4.47 г (выход 86%) названного соединения в виде бесцветного масла. Спектр ИК (пленка), ν, см^-1: 3276 (широкая), 1768, 1184, 732. Спектр ¹H ЯМР (200 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 7.38 (с, 1H). 6.39 (уш.с, 1H), 6.35 (с, 2H), 5.05 (дд, J = 4.6 и 2.3 Гц, 1H), 4.78 (д, J = 4.6 Гц, 1H), 0.82 (т, J = 8.5 Гц, 6H), 0.50 (д.кв., J = 8.5 и 1.8 Гц, 9H). Спектр ¹³С ЯМР (CDCl₃), 75.5 МГц), δ, м. д. : 169.6, 150.4, 142.6, 110.5, 109.1, 79.6, 53.2, 6.4, 4.4. MC ББА (ДХИ) M+H вычислено для C₁₃H₂₁NO₃Si: 268. Найдено: 268.

Пример 18.

(±)-цис-3-Триэтилсилилокси-4-(2-фурил)-N-трет. - бутилоксикарбонилазетидин-2-он (VIIa)

Смесь азетидинона XVIa (2.05 г, 7.7 ммоля), диизопропилэтиламина (1.5 мл, 8.6 ммоля) и ди-трет.-бутилдикарбоната (2.0 г, 9.2 ммоля) в 30 мл дихлорметана перемешивали в присутствии каталитического количества диметиламинопиридина (ДМАП) при температуре 0^oC. Раствор разбавляли дихлорметаном, промывали рассолом, сушили MgSO₄ и упаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (элюент гексан/этилацетат 8:1), получали 2.0 г (выход 70%) названного соединения в виде воскообразного твердого вещества. Спектр ИК (KBr), ν, см^-1: 1822, 1806, 1712, 1348, 1016. Спектр ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃), δ, м. д. : 7.38 (м, 1H), 6.34 (м, 2H), 5.04 (ABq, J = 12.4 и 5.5 Гц, 2H), 1.39 (с, 9H), 0.82 (т, 9H), 0.50 (м, 6H). Спектр ¹³С ЯМР (CDCl₃, 75.5 Гц), δ, м.д.: 165.7, 148.0, 147.7, 142.8, 110.5, 109.7, 83.4, 77.4, 56.0, 27.8, 6.3, 4.4. MC (ДХИ) M+H вычислено для C₁₈H₂₉NO₅Si: 368. Найдено: 368.9.

Пример 19.

(±)-цис-3-Триэтилсилилокси-4-(2-тиенил)азетидин-2-он (XVIб)

3-Ацетоксилактам XVc (2.5 г, 11.8 ммоля) растворяли в метаноле (10 мл), обрабатывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (20 мл) и промывали водой (15 мл). Водный слой несколько раз экстрагировали этилацетатом, органические фазы объединяли, сушили (MgSO₄), упаривали и получали желтое твердое вещество (выход 1.7 г). Сырой продукт растворяли в сухом тетрагидрофуране (20 мл) и раствор охлаждали до 5^oC на бане лед/вода, после чего добавляли имидазол (752 мг, 1.1 эквивалента). Через 5 мин перемешивания по каплям добавляли триэтилхлорсилан (1.85 мл, 1.1 эквивалента). Полученную суспензию перемешивали при той же температуре в течение 3 ч, затем отфильтровывали осадок. Фильтрат промывали водой 2 х 20 мл), сушили (MgSO₄) и упаривали. Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент гексан/этилацетат 7:3), получали названное соединение в виде бесцветного твердого вещества (1.5 г, выход 45%). Т. пл. 70 - 71^oC. Спектр ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 7.32 - 7.30 (м, 1H), 7.05 - 6.98 (м, 2H), 5.06 - 5.05 (м, 2H), 0.82 (т, 9H, J = 8 Гц), 0.55 - 0.46 (м, 6H). Спектр ¹³С ЯМР (CDCl₃, 75.6 МГц), δ, м.д.: 169.1, 139.7, 126.4, 125.8, 79.4, 55.1, 6.3, 4.4.

Альтерантивный метод получения.

Ацетоксилактам XVc (2.0 г, 9.37 ммоля) в 40 мл метанола перемешивали с K₂CO₃ (60 мг, 0.43 ммоля) в течение 90 мин, после чего раствор нейтрализовали Dowex 50W-X8 и фильтровали. Фильтрат упаривали, остаток растворяли в 50 мл безводного ТГФ и перемешивали при 0^oC с имидазолом (0.85 г, 11.3 ммоля) и ТЭСХ (1.9 мл, 12.5 ммоля) в течение 30 мин. Раствор разбавляли этилацетатом, промывали рассолом, сушили MgSO₄ и упаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (элюент гексан/этилацетат 3:1), получали 2.13 г (выход 86%) названного соединения в виде бесцветного масла.

Пример 20.

(±)-цис-3-Триэтилсилилокси-4-(2-тиенил)-N-трет. - бутоксикарбонилазетидин-2-он (VIIб)

Расствор силилазетидинона XVIб (425.7 мг, 1.48 ммоля) в 10 мл дихлорметана охлаждали на 5^oC на бане вода/лед. К смеси последовательно добавляли каталитическое количество ДМАП, ТЭСХ (0.25 мл, 1.0 эквивалент) и ди-трет.-бутилдикарбонат (388.4 мг, 1.2 эквивалента). Смесь перемешивали в течение 2 с при той же температуре, встряхивали с насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (5 мл), органическую фазу промывали водой (5 мл), сушили (MgSO₄), пропускали через небольшой слой силикагеля, упаривали и получали названное соединение в виде бесцветного масла (525.3 мг, выход 93%). Спектр ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 7.31 - 7.29 (м, 1H), 7.08 - 7.07 (м, 1H), 7.00 - 6.58 (м, 1H), 5.31 (д, 1H, J = 6 Гц), 5.03 (д, 1H, J = 6 Гц), 1.40 (с, 9H), 0.83 (т, 9H, J = 8 Гц), 0.56 - 0.47 (м, 6H). Спектр ¹³С ЯМР (CDCl₃, 75.6 Гц), δ, м. д.: 165.5, 147.5, 136.4, 127.6, 126.2, 126.1, 83.3, 77.3, 57.9, 27.7, 6.2, 4.3.

Пример 21.

Конкретный пример селективного получения производного по С-10 положению 10-дезацетилбаккатина III
10-Бензоил-10-дезацетил-7-триэтилсилилбаккатин III (X¹a)
Производное баккатина формулы IX, в котором R⁴ представляет собой SiEt₃, растворяли в сухом тетрагидрофуране (1.0 мл) в атмосфере аргона. Раствор охлаждали до -40^oC и медленно добавляли n-BuLi (0.050 мл, 0.82 ммоля, 1.6 М раствор). Через 5 мин перемешивания добавляли бензоилхлорид (0.030 мл, 0.26 ммоля) и реакционную смесь нагревали до температуры 0^oC и выдерживали при перемешивании в течение 1.5 ч. Реакцию останавливали насыщенным раствором хлорида аммония (2 мл). Водную смесь экстрагировали этилацетатом (2 х 5 мл), органический слой сушили сульфатом магния, упаривали и получали масло. Быстрой хроматографией на силикагеле (элюент 50%-ный этилацетат/гексан) выделяли названное соединение формулы X¹, в котором R⁴ = Si(Et)₃, R^m = OCOC₆H₅), в виде пены. Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃), δ, м.д.: 8.17 - 8.05 (м, 4H), 7.64 - 7.42 (м, 6H), 6.67 (с, 1H), 5.67 (д, 1H), 4.95 (д, 1H), 4.81 (м, 1H), 4.56 (дд, 1H), 4,30 (д, 1Н), 4.14 (д, 1H), 3.92 (д, 1H), 2.50 (м, 1H), 2.30 - 2.00 (м, 18H), 1.92 - 1.80 (м, 1H), 1.72 - 1.62 (уш.с, 4H), 1.30 (с, 3H), 0.89 (т, 3H), 0.56 (кв. , 6H). MCBP (ББА/НБС): Вычислено для C₄₂H₅₄O₁₁Si (MH⁺): 762.3435. Найдено: 762.3427.

С использованием этой методики могут быть получены С-10 карбонаты, сульфонаты, карбаматы, эфиры и т. д. При этом выходы будут выше, чем при использовании литий гексаметилдисилазана.

Пример 22.

2'-O-Бензилоксикарбонил-6α-гидрокси-7α-гидроксипаклитаксел (XIIa)

Раствор 2'-O-Бензилоксикарбонил-6,7-дегидропаклитаксела (100 мг, 0.1 ммоля) в сухом тетрагидрофуране (3 мл) охлаждали до 5^oC на бане вода/лед. Раствор обрабатывали пиридином (24 мкл, 0.3 ммоля) и 4-метилморфолин-N-оксидом (12 мг, 0.1 ммоля). После полного растворения добавляли каталитическое количество тетрахлорида осмия (2.5 мг, 0.01 ммоля) и полученный желтый раствор помещали в холодильник на 96 ч. Затем полученный раствор разбавляли этилацетатом (10 мл) и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (5 мл), затем водой (10 мл). Органическую фазу сушили (MgSO₄), упаривали и получали сырой продукт в виде бесцветной пены. Продукт очищали хроматографированием на силикагеле (элюент 20% CH₃CN в CH₂Cl₂), получали названный продукт в виде белой пены (47 мг, выход 47%). Спектр ¹H ЯМР (CDCl₂, 300 МГц), δ, м.д.: 8.12 (д, 2H, J = 6.0 Гц), 7.68 (д, 2H, J = 6.0 Гц), 7.60 - 7.29 (м, 16H), 6.93 (д, 1H, J = 9.0 Гц), 6.80 (с, 1H), 6.24 (т, 1H, J = 9.0 Гц), 5.99 (дд, 1H, J = 3.0 и 9.0 Гц), 5.71 (д, 1H, J = 6.0 Гц), 5.45 (д, 1H, J = 3.0 Гц), 5.27 - 5.13 (м, 2H), 4.67 - 4.63 (м, 2H), 4.16 - 4.12 (м, 1H), 3.85 (д, 1H, J = 6.0 Гц), 3.65 (дд, 1H, J = 3.0 и 12.0 Гц), 2.87 - 2.84 (м, 1H), 2.52 (с, 3H), 2.42 - 2.33 (м, 1H), 2.20 - 2.12 (м, 4H), 2.01 (с, 1H), 1.89 (с, 3H), 1.61 (с, 3H), 1.16 (с, 3H), 1.11 (с, 3H). Спектр ¹³С ЯМР (CDCl₃, 75.6 МГц), δ, м. д. : 205.9, 172.3, 169.3, 167.6, 167.1, 166.9, 154.0, 140.5, 136.6, 134.2, 133.7, 133.4, 132.9, 132.0, 130.2, 129.1, 128.9, 128.8, 128.7, 128.6, 128.5, 128.4, 127.1, 126.4, 91.5, 84.1, 79.1, 77.9, 77.7, 77.6, 76.8, 76.6, 74.8, 72.0, 71.8, 70.7, 60.4, 57.6, 52.6, 42.6, 39.7, 36.0, 25.9, 22.5, 21.4, 21.0, 20.8, 15.4, 14.7, 14.1. MCBP: Вычислено для C₅₅H₅₈NO₁₇: 1004.3705. Найдено: 1004.3691.

Пример 23.

6α-Гидрокси-7α-гидроксипаклитаксел (Ie)

Раствор 2'-O-бензилоксикарбонил-6α-гидрокси-7α-гидроксипаклитаксела (47 мг, 0.047 ммоля) в этилацетате (3 мл) загружали в прибор Парра и продували аргоном. Добавляли паллаций на угле (20 мг) и полученную суспензию встряхивали при давлении водорода 40 фунтов/кв.дюйм. Через 3 ч реакционную массу продували, фильтровали через целиты и упаривали. Сырой продукт очищали хроматографированием на силикагеле (элюент 20%-ный CH₃CN в CH₂Cl₂), выделяли названный продукт в виде белой пены (20.2 мг, выход 99% с учетом выделенного исходного вещества). Спектр ¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц), δ, м.д.: 8.15 (дд, 2H, J = 0.9 и 8.0 Гц), 7.72 (дд, 2H, J = 0.9 и 9.0 Гц), 7.76 - 7.26 (м, 11H), 7.02 (д, 1H, J = 9.0 Гц), 6.79 (с, 1H), 6.23 (т, 1H, J = 9.0 Гц), 5.80 (дд, 1H, J = 2.1 и 8.7 Гц), 5.73 (д, 1H, J = 7.2 Гц), 5.73 (д, 1H, J = 7.2 Гц), 4.82 - 4.79 (м, 1H), 4.68 - 4.4 (м, 2H), 4.34 (с, 2H), 4.15 (кажущийся т, 1H, J = 5.4 Гц), 3.85 (д, 1H, J = 9.0 Гц), 3.69 - 3.60 (м, 2H), 2.83 (д, 1H, J = 8.1 Гц), 2.50 (с, 3H), 2.43 - 2.35 (м, 1H), 2.28 - 2.23 (м, 1H), 2.19 (с, 3H), 2.00 (с, 1H), 1.80 (с, 3H), 1.63(с, 3H), 1,19 (с, 3H), 1.13 (с, 3H). Спектр ¹³С ЯМР (CDCl₃, 75.6 МГц), δ, м.д.: 205.6, 172.6, 172.5, 139.9, 137.8, 133.6, 133.1, 131.8, 130.1, 128.9, 128.7, 128.5, 128.2, 126.9, 126.7, 91.4, 83.9, 78.9, 77.7, 77.5, 74.6, 73.0, 72.0, 71.8, 57.5, 54.7, 42.5, 39.5, 36.0, 25.9, 22.4, 21.1, 20.7, 15.2, 14.6.

Пример 24.

В соответствии с методиками и Примерами настоящего изобретения могут быть синтезированы следующие конкретные производные (см. в конце описания) паклитаксела формулы I²:

Пример 25.

В соответствии с методиками и Примерами настоящего изобретения могут быть синтезированы следующие конкретные производные (см. в конце описания) паклитаксела формулы I³:

Пример 26.

Биологические данные
Мыши вида М109
Гибридные мыши Balb/c x DBA/2 были имплантированы внутрибрюшинно по методике, описанной William Rose в Evaluation of Madison 109 Lung Carcinoma as a Model for Screening Antitumor Drugs, Cancer Treatment Reports, 65, N 3-4 (1981), с использованием 0.5 мл 2%-ного (мас./об.) М109 легочного рака.

Мыши были обработаны исследуемым соединением путем внутрибрюшинных инъекций различными дозами или на 1, 5 и 9 дни после имплантации опухоли, или на 5 и 8 дни после имплантации. Мыши подвергались ежедневному контролю приблизительно 75 - 90 дней после имплантации опухоли. Одну группу мышей на один эксперимент не подвергали обработке и использовали в качестве контрольной группы.

Среднее время выживания мышей, обработанных соединением, (Т) сравнивалось со средним временем выживания контрольной группы мышей (С). Отношение двух значений для каждой обработанной соединением группы мышей умножали на 100 и выражали в процентах (то есть % Т/С) в таблице 1 для соответствующего соединения.

Соединения настоящего изобретения обладают активностью по ингибированию опухолей у млекопитающих. Следовательно, еще один предмет настоящего изобретения относится к способу ингибирования опухолей у млекопитающих, чувствительных к соединению формулы I.

Настоящее изобретение также предлагает фармацевтические препараты (композиции), содержащие соединения формулы I в сочетании с одним или несколькими фрамацевтически приемлемыми, инертными или физиологически активными носителями, наполнителями, разбавителями или адъювантами (вспомогательными добавками). Примеры рецептур паклитаксела или его близких производных (в том числе возможные дозировки) описаны в литературе, например в Пат. США N 4960790 и 4814470, можно следовать этим примерам при рецептурировании соединений настоящего изобретения. Например, новые соединения могут быть использованы в виде таблеток, пеллет, порошкообразных смесей, капсул, впрыскиваемых растворов, свечей, эмульсий, дисперсий, пищевых добавок и в других приемлемых формах. Фармацевтические препараты, которые содержат соединение, обычно смешиваются с нетоксичным фармацевтическим органическим носителем или нетоксичным фармацевтическим неорганическим носителем обычно в количестве приблизительно от 0.01 мг до 2500 мг или в более высоких единичных дозах, предпочтительно 50 - 500 мг. Обычными фармацевтически приемлемыми носителями являются, например, манитол, мочевина, декстраны, лактоза, картофельный и кукурузный крахмалы, тальк, стеарат магния, растительные масла, полиалкиленгликоли, этилцеллюлоза, поливинилпирролидон, карбонат кальция, этилолеат, изопропилмиристат, бензилбензоат, карбонат натрия, желатин, карбонат калия, кремниевая кислота и другие обычно используемые приемлемые носители. Фармацевтический препарат может содержать нетоксичные вспомогательные вещества, такие как эмульгатор, консервант, смачиватель и другие подобные добавки, как, например, сорбитанмонолаурат, триэтаноламинолеат, полиоксиэтиденмоностеарат, глицерилтрипальмитат, диокстилсульфосукцинат натрия и др. Соединения настоящего изобретения могут также быть высушены вымораживанием и, если необходимо, смешаны с другими фармацевтически приемлемыми наполнителями для получения препаратов, приемлемых для парентального инъекционного применения. Для указанного применения такой препарат может быть снова смешан с водой (обычно с рассолом) или со смесью воды и органического растворителя, такого как пропиленгликоль, этанол и им подобным.

Соединения настоящего изобретения могут быть использованы, как и паклитаксел, для лечения опухолей у млекопитающих. Способ, доза и схема применения паклитаксела в лечении рака у людей широко исследованы. (см., например, Ann. Int. Med. , 111, p. 273 - 279 (1989). Для соединений настоящего изобретения вводимая доза, единичная ли доза, многократная или дневная доза, будет, конечно, изменяться в зависимости от конкретного используемого соединения вследствие изменения активности соединения, выбранного способа применения, веса пациента и его состояния. Границы доз, которые должны использоваться, нельзя определить, но они будут представлять собой эффективное количество или молярный эквивалент фармацевтически активной свободной формы, образующейся из дозирующей рецептуры при метаболитическом высвобождении активного лекарства для того, чтобы был достигнут желаемый фармакологический и физиологический эффекты. Дозы, которые должны использоваться, будут обычно лежать в интервале от 0.8 до 8 мг/кг веса тела или приблизительно 50 - 275 мг/м² пациента. Квалифицированные в области лечения рака онкологи будут способны установить без чрезмерного экспериментирования подходящую схему для эффективного применения соединений настоящего изобретения, опираясь на более ранние исследования паклитаксела и его производных.

Формула изобретения

1. 6,7-модифицированные паклитакселы формулы I

где заместитель R¹ представляет собой -COR^z, а заместитель R^z представляет собой RO или R;
заместитель R² представляет собой радикал формулы WR^x, где W представляет собой связь, C_2-6-алкендиил или -(CH₂)_t-, в котором t принимает значения от 1 до 6;
заместитель R^x представляет собой фенил или фурил, тиенил или оксазолил, кроме того, заместитель R^x может быть возможно замещен одним или тремя одинаковыми или различными C_1-6-алкилами;
заместитель R^a представляет собой -OCOR, -OR, OSO₂R, -OCONR^oR, -OCOO(CH₂)_tR или -OCOOR;
заместители R^b R^c вместе образует связь с атомами углерода, к которым они присоединены;
заместители R и R^o независимо друг от друга представляет собой C_1-6-алкил, C_2-6-алкенил, C_3-6-циклоалкил или фенил, возможно замещенный одним или тремя одинаковыми или различными C_1-6-алкилами или атомами галогена.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что заместитель R¹ представляет собой бензоил или трет.бутоксикарбонил; заместитель R² представляет собой фенил, фурил или тиенил; заместитель R^a представляет собой ацетилоксигруппу, а заместители R^b R^c вместе образует связь с атомами углерода, к которым они присоединены.

3. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что оно представляет собой 6,7-дегидропаклитаксел.

4. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что оно представляет собой 6,7-дегидро-3'-(2-фурил)-3'-N-дебензоил-N-трет.бутоксикарбонилпаклитаксел.

5. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что оно представляет собой 6,7-дегидро-3'-(2-фурил)-паклитаксел.

6. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что оно представляет собой 6,7-дегидро-3'-(2-тиенил)-3'-N-дебензоил-трет.бутоксикарбонилпаклитаксел.

7. 6,7-дегидробаккатин III формулы Via

где Ac - ацетил.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13