Способ оценки эффективности противоопухолевой терапии

 

Способ может быть использован в медицине для прогнозирования эффективности противоопухолевых воздействий и их коррекций во время лечения злокачественных опухолей шейки матки. В нейтрофилах периферической крови больного до и в процессе лечения определяют уровень активности кислой и щелочной фосфатаз и их соотношение. Повышение последнего по сравнению с исходным дает возможность прогнозировать эффект проводимого лечения, а снижение и отсутствие изменения в соотношении показателей является сигналом необходимости коррекции проводимой терапии. Предлагаемый способ расширяет арсенал способов контроля состояния больного до и в процессе лечения. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении больных раком.

Известен способ выявления эффективности химиолучевого лечения плоскоклеточного рака легкого по изменению уровня 17-кетостероидов, андостерона и кортизола в моче /Чирвина Е.Д., Тютюнова А.М., Карташов С.З. Значение гормональных исследований для контроля за эффективностью лечения больных плоскоклеточным раком легкого. Вопросы онкологии. 1980. 11. 91-95/.

Однако известный способ не обеспечивает возможности выявления эффективности лечения для различных гистологических форм опухоли, длителен и сложен.

Известен способ оценки эффективности лечения больных по уровню экскреции полиаминов с мочой /Бердинских Н.К., Залеток С.П., Зиневич А.К., Евтушенко А.В. Определение экскреции полиаминов в диагностике злокачественных опухолей и для оценки эффективности лечения онкологических больных. Методические рекомендации. Киев. 1980. 12 с/.

Принцип метода заключается в экстракции полиаминов из мочи н-бутанолом, последующем их фракционировании при помощи электрофореза на бумаге и количественном определении колориметрическим методом. Для осуществления способа мочу больного собирают в течение 24 ч. Затем 20 мл мочи выдерживают при 4^oC в течение 18-24 ч. В ампулы наливают 3-5 мл мочи и равный объем 6 н. HCl, запаивают и помещают на 14-16 ч в термостат с температурой 120^oC. После окончания гидролиза проводят экстракцию н-бутанолом. Доводят pH мочи сначала до 9,0 с помощью универсальной индикаторной бумаги, а затем - до 9,5-10,0, контролируя pH по pH-метру. В течение 2 ч н-бутаноловую фракцию встряхивают на шутель-аппарате, а затем выпаривают на кипящей водяной бане. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл 0,1 н. HCl и в количестве 20 мкл наносят на полосу хроматографической бумаги, помещенную в прибор для электрофореза, и в течении 40 мин проводят электрофорез. Электрофореграммы высушивают в термостате при 70^oC в течение 20 мин, затем обрызгивают из распылителя нингидриновым красителем и снова помещают в термостат при 70^oC на 20 мин для проявления окраски. Окрашенные пятна, соответствующие индивидуальным полиаминам, вырезают, помещают в химические пробирки, заливают элюирующим раствором и помещают на 25 мин в темное место. Измеряют величину поглощения растворов на спектрофотометре при длине волны 505 нм. Количество полиаминов определяют по калибровочной кривой, построенной по стандартным полиаминам.

Однако применение известного способа ограничивают и затрудняют такие его недостатки, как длительность проведения исследования, которое затягивается на 4-5 суток. По этой же причине он не может быть использован для коррекции применяемой специфической терапии. Кроме того, применение указанного метода требует большого количества оборудования, реактивов, что влечет за собой большие затраты.

Целью изобретения является ускорение и упрощение контроля эффективности лечения.

Поставленная цель достигается тем, что в нейтрофилах периферической крови больных определяют коэффициент, представляющий собой отношение величины активности кислой фосфатазы к величине активности щелочной фосфатазы, объективно отражающий состояние гидролитической активности лейкоцитов.

Способ осуществляется следующим образом.

Плазму крови больного в количестве 5 мл наслаивают на последовательно налитые в пробирку градиенты плотности фиколлверографин 1126 и 1077. Пробирку центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин. Отбирают нижнее кольцо, содержащее нейтрофилы, в другую пробирку и отмывают клетки физиологическим раствором с последующим центрифугированием. Затем в клетках определяют активности кислой и щелочной фосфатаз унифицированными методами с помощью наборов реактивов фирмы "Olvex".

Для определения кислой фосфатазы в 0,5 мл п-нитрофенилфосфата (pH 4,8) вносят 0,1 мл исследуемого материала, инкубируют 30 мин при 37^oC. После этого в пробу добавляют 2 мл раствора едкого натра и фотометрируют при длине волны 405 нм против холостой пробы. Расчет активности производят по калибровочной кривой в условных единицах активности фермента на 1 мг белка клеток.

Для определения щелочной фосфатазы в 0,5 мл п-нитрофенилфосфата (pH 10,4) вносят 0,05 мл исследуемого материала, инкубируют 30 мин при 37^oC. После этого в пробу добавляют 5 мл раствора едкого натра и фотометрируют при длине волны 405 нм против холостой пробы. Расчет активности производят по калибровочной кривой в условных единицах активности фермента на 1 мг белка клеток.

Затем вычисляют величину коэффициента K = A_к.ф / A_щ.ф, где A_к.ф - величина активности кислой фосфатазы; A_щ.ф - величина активности щелочной фосфатазы.

Предлагаемым способом было проведено исследование 40 больных раком шейки матки до и после проводимой химиотерапии, а также 20 здоровых доноров.

Данные исследования представлены в таблице.

Как видно из таблицы, показатель K при эффективном лечении приближается к таковому у доноров, тогда как при отсутствии клинического эффекта он не изменяется по сравнению с исходными данными, что подтверждается состоянием больных.

Анализ известных способов определения эффективности противоопухолевой терапии дает основание говорить о новизне предлагаемого способа, которая представлена соотношением объективных показателей исследования в нейтрофилах периферической крови больных уровней активности кислой и щелочной фосфатов "до" и в процессе лечения.

В отличие от прототипа предлагаемый "Способ оценки эффективности противоопухолевой терапии" осуществляется в течение одного рабочего дня и дает возможность проводить коррекцию лечебных воздействий в соответствии с исследуемой объективной реакцией организма на эти воздействия.

Разработанный способ обладает изобретательским уровнем, т.к. явным образом не следует для специалиста из известного уровня развития медицины и оценки эффективности противоопухолевой терапии. В известных источниках информации России, стран СНГ и за рубежом подобный способ не обнаружен.

Изобретение является промышленно применимым, так как оно может быть многократно воспроизведено в лечебных учреждениях онкологического профиля, располагающих биохимическими лабораториями.

Примеры конкретного применения предлагаемого способа представляют выписки из историй болезни.

Пример 1. Больная Ф., 1966 года рождения, ист. болезни N 144/ж, поступила в радиологическое отделение РНИОИ 6.01.98 с диагнозом: рак шейки матки. Гистологический анализ N 97100 от 6.01.98 г. плоскоклеточной рак без ороговения, проведена эндолимфатическая полихимиотерапия.

При поступлении (до начала лечения) величина коэффициента отношения активности кислой фосфатазы к активности щелочной фосфатазы - K - составлял 1,9. После завершения полного курса лечения при выписке с выздоровлением /III клиническая группа/ коэффициент K = 43,8.

Пример 2. Больная Т., 1927 года рождения, и.б. 5404/ж поступила в РНИОИ с диагнозом рак шейки матки. Гистологический анализ N 501036 от 6.04.98 г. - плоскоклеточной рак без ороговения. Проведена эндолимфатическая полихимиотерапия.

При поступлении коэффициент КФ/ШФ был равен 3,7. После двух введений химиопрепаратов величина коэффициента стала 2,9.

После завершения курса эндолимфатической полихимиотерапии коэффициент КФ/ШФ возрос до 4,3. Лечение без эффекта /II клиническая группа/.

Таким образом, данные клинического наблюдения вполне коррелируют с показателями коэффициента K, который может служить критерием эффективности проводимой терапии.

Использование предлагаемого способа по сравнению с известными позволяет: - индивидуализировать для каждого больного специфическое лечение и вносить необходимые коррективы на его этапах; - избавить больного от токсического действия малоэффективных для него препаратов; - объективизировать результаты специфической терапии; - значительно ускорить и упростить проведение анализа.

Формула изобретения

Способ оценки эффективности противоопухолевой терапии больных раком шейки матки путем биохимического исследования периферической крови, отличающийся тем, что исследования проводят в нейтрофилах периферической крови, определяют уровень активности кислой и щелочной фосфатаз до и в процессе лечения, вычисляют отношение первого показателя к второму и при повышении его по сравнению с исходным определяют эффективное лечение, а при снижении или неизменности - отсутствие эффекта.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2