Штамм actinomyces sp. 1-96а, усваивающий нефть и продукты ее переработки

 

Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии, ремедиации загрязненных земель. Получен новый штамм Actinomyces sp. 1-96А методом аналитической селекции природных изолятов по принципу деструкции нефтепродуктов. Штамм разлагает гудрон и мазут в культуральной жидкости, содержащей их по 5%, в течение 10 суток. Штамм может быть использован в качестве ремедианта при очистке поверхностей и площадей, загрязненных нефтепродуктами. 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при биовосстановлении почв и водоемов, загрязненных нефтепродуктами.

Известны штаммы, используемые для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов, например Rhodococcous erythropolis [1] окисляет нефтепродукты при низких концентрациях: в течение 40 суток содержание нефтепродуктов снижается с 3 до 1%.

Известен штамм Acinetobacter oleovarum [2], окисляющий ароматические углеводороды нефти.

Штамм Actinomyces sp. 1-96A получен методом ступенчатой аналитической селекции. Изолят выделен из образцов почвы Ярославского нефтепeрерaбатывающего завода (г. Тутаев). Штамм хранится в пколлекции АОЗТ "Биофлора", N B-05. Штамм Actinomyces sp. 1-96A относится к классу Actinomycetes, семейству Actinomycetaceae. Штамм депонирован в музее культур микроорганизмов АОЗТ "Биофлора", имеет коллекционный N B-05.

Культурально-морфологические признаки.

На твердой (агаризованной) среде Чапека, имеющeй состав: cахароза - 30 г; NaNO₃ - 2 г; K₂HPO₄ - 1 г; MgSO₄·7H₂O - 0,5 г; KCl - 0,5 г; FeSO₄ - 0,01 г; агар - 20 г; дистиллированная вода - 1000 мл, pH - 7,2, t = 29±1^oC, образует беловатый воздушный мицелий, на 3-4-e сутки выделяет серовато-бурые вещества. Спороносцы длинные, слабо закручены в спирали; споры - овальные и шаровидные. На 8-10-e сутки на поверхности вокруг колоний наблюдаются кристаллоподобные образования, при боковом освещении дающие блеск. Аналогичные признаки наблюдаются при выращивании на среде Чапека, содержащей органический азот.

Культурально-морфологические признаки не изменяются при выращивании на агаризованной среде Чапека в интервале от 12 до 29^oC.

Физиолого-биохимические признаки.

Протеолитическая активность - слабая, желатину разжижает медленно, молоко свертывает слабо, хорошо гидролизует крахмал. Усваивает органический и минеральный азот, растет на жирах, парафине, нафтенах и асфальтенах, медленный рост на клетчатке.

На жидкой среде N 65 DSM, имеющeй состав: глюкоза - 4 г; дрожжевой экстракт - 4 г; мальтозный экстракт - 10 г; CaCO₃ - 2 г; вода дистиллированная - 1000 мл, pH 7,2 (доводится KOH), выращивается с добавлением в среду 1-0.1% гудрона или мазута. На 3-и сутки ферментации при 29±1^oC на качалке n = 180 об/мин^-1 обнаруживаются следы внесенного углеводорода, культуральная жидкость вязкая, с образованием светлых хлопьев при отстаивании (t = 4, 10^oC).

Штамм сохраняется на агаризованной питательной среде N 65 с добавлением гудрона 0,1%.

Штамм может использоваться для ремедиации площадей и поверхностей, загрязненных тяжелыми фракциями нефтепродуктов.

Пример 1. Штамм Actinomyces sp. 1-96A выращивали на жидкой питательной среде Чапека с использованием минерального азота. Перед стерилизацией в колбу с питательной средой вносили гудрон в количестве 5%.

В качестве прототипа выращивали Acinetobacter oleovarum ВСБ-712 на жидкой питательной среде, имеющей состав: (NH₄)₂SO₄ - 3,5 г; KH₂PO₄ - 6.5 г; MgSO₄ - 0,7 г; FeSO₄·7H₂O - 12,5 мг; MnSO₄·5H₂O - 12.5 мг; ZnSO₄·7H₂O - 12,5 мг; CuSO₄·H₂O - 3 мг; вода дистиллированная - 1000 мл. Перед стерилизацией в среду вносили гудрон в количестве 5%.

Результаты опыта представлены в табл. 1.

Пример 2. Штамм Actinomyces sp. 1-96A выращивали на жидкой питательной среде N 65 DSM, имеющeй состав: глюкоза - 4 г; дрожжевой экстракт - 4 г; кукурузный экстракт - 10 г; CaCO₃ - 2 г; вода дистиллированная 1000 мл. Перед стерилизацией в среду вносили мазут в количестве 5%.

В качестве прототипа использовали штамм Acinetobacter oleovarum ВСБ-712 на жидкой питательной среде (см. пример 1). Перед стерилизацией в колбу с питательной средой вносили мазут в количестве 5%.

Культуры выращивали при 29±1^oC на качалке (n = 180 об/мин).

Результаты опыта представлены в табл. 2.

Таким образом, установлено, что штамм Actinomyces sp. 1-96A является перспективным для использования при ремедиации площадей и поверхностей, загрязненных нефтепродуктами.

Источники информации 1. А.с. 1805097, БИ N 18, 1993 г.

2. А.с. 1809822, БИ N 14, 1993 г.

Формула изобретения

Штамм Actinomyces sp. 1 - 96 A (коллекционный В-05 АОЗТ "Биофлора"), усваивающий в качестве источника углерода сырую нефть и продукты ее переработки, например гудрон, мазут, отработанные масла, и предназначенный для биовосстановления почв и водоемов, загрязненных нефтепродуктами.

РИСУНКИ

Рисунок 1