Способ количественного определения алифатических аминокислот

 

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам количественного определения алифатических аминокислот, используемым для контроля качества продукции, выпускаемой фармацевтическими производствами и изготавливаемой аптеками. Сущность изобретения: определение проводят путем обработки исследуемого образца 1%-ным спиртовым раствором нингидрина в среде фосфатного буферного раствора с pH от 6,4 до 7,6 в присутствии 1 мг аскорбиновой кислоты. Полученный окрашенный раствор разбавляют водой и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 568 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Техническим результатом является повышение чувствительности, упрощение и удешевление определения. 2 табл.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно - к способам количественного определения алифатических аминокислот, используемым для контроля качества продукции, выпускаемой фармацевтическими производствами и изготавливаемой аптеками.

Ближайшими аналогами являются способы определения аминокислот с использованием в качестве цветореагента аллоксангидрата [А.с. 1191790 СССР, МКИ⁴ G 01 N 21/78; А.с. 731362 СССР, МКИ² G 01 N 21/24], аллоксантина с последующим добавлением соли кальция [А.с. 1325335 СССР, МКИ⁴ G 01 N 21/78], перинафтиндантриона-1,2,3 с последующим введением сульфата меди [А. с. 1432392 СССР, МКИ⁵ G 01 N 21/78]. Реакция ведется в среде диметилформамида, которого на одно определение расходуется от 70 до 250 мл.

Использование в качестве цветореагента нингидрина и проведение реакции в среде фосфатного буферного раствора с pH от 6,4 до 7,6 в присутствии 2 мл 0,05% водного раствора (1 мг) аскорбиновой кислоты позволяет повысить чувствительность, сделать определение более простым и дешевым. Аскорбиновая кислота, являясь достаточно сильным восстановителем (E^o +0,18 В), восстанавливает часть нингидрина, что способствует повышению чувствительности реакции и стабильности образующегося окрашенного продукта.

Пример 1. Количественное определение аминалона в субстанции. Точную навеску вещества, предварительно высушенного до постоянной массы, в пределах 0,035-0,065 г растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 250 мл, доводят объем раствора до метки этим же растворителем и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 4 мл воды, 4 мл фосфатного буферного раствора с pH 6,8 [5], 2 мл 1% раствора нингидрина в 95% этиловом спирте и 2 мл 0,05% водного раствора аскорбиновой кислоты. Реакционную массу нагревают на кипящей водяной бане в течение 25 мин, быстро охлаждают, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Параллельно проводят опыт с раствором рабочего стандартного образца (РСО) аминалона (0,05 г в 250 мл воды) и контролем. Оптическую плотность окрашенных растворов измеряют на фоне контроля на спектрофотометре при 568 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.

Содержание аминалона (X), в процентах, вычисляют по формуле: где A - оптическая плотность анализируемого раствора; A₀ - оптическая плотность стандартного раствора; a₀ - навеска РСО аминалона, г; a - навеска субстанции аминалона, г.

Результаты количественного определения аминалона в субстанции приведены в табл. 2.

Пример 2. Количественное определение аминалона в таблетках по 0,25 г, покрытых оболочкой. Точную навеску порошка растертых таблеток, содержащую аминалон в пределах 0,035-0,065 г, помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл воды и перемешивают содержимое колбы в течение 10 мин. Объем раствора в колбе доводят водой до метки, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата. 1 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 4 мл воды, 4 мл фосфатного буферного раствора с pH 6,8 и далее поступают, как указано в примере 1.

Содержание аминалона (X) в одной таблетке, в граммах, вычисляют по формуле: где A, A₀, a₀ - см. пример 1; a - навеска порошка растертых таблеток, г; P - средняя масса одной таблетки, г.

Результаты количественного определения аминалона в таблетках по 0,25 г, покрытых оболочкой, приведены в табл. 2.

Пример 3. Количественное определение кислоты аминокапроновой в растворе для инъекций состава:
Кислоты аминокапроновой - 5 г
Натрия хлорида - 0,9 г
Воды для инъекций - до 100 мл
1 мл раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 4 мл воды, 4 мл фосфатного буферного раствора с pH 7,6 [5], 2 мл 1% раствора нингидрина в 95% этиловом спирте и 2 мл 0,05% водного раствора аскорбиновой кислоты. Далее поступают, как указано в примере 1. Параллельно проводят опыт с раствором РСО кислоты аминокапроновой (0,05 г в 100 мл воды) и контролем.

Содержание кислоты аминокапроновой (X) в 1 мл раствора, в граммах, вычисляют по формуле:

где A, A₀, - см. пример 1;
a₀ - навеска РСО кислоты аминокапроновой, г.

Результаты количественного определения кислоты аминокапроновой в растворе для инъекций приведены в табл. 2.

Пример 4. Количественное определение фенибута в таблетках по 0,25 г. Точную навеску порошка растертых таблеток, содержащую фенибут в пределах 0,025-0,055 г, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл воды и перемешивают содержимое колбы в течение 10 мин. Объем раствора в колбе доводят водой до метки, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата. 1 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 4 мл воды, 4 мл фосфатного буферного раствора с pH 6,4 [5], 2 мл 1% раствора нингидрина в 95% этиловом спирте и 2 мл 0,05% водного раствора аскорбиновой кислоты и далее поступают, как указано в примере 1. Параллельно проводят опыт с раствором РСО фенибута (0,05 г в 100 мл воды) и контролем.

Содержание фенибута (X) в одной таблетке, в граммах, вычисляют по формуле:

где A, A₀, - см. пример 1;
a, P - см. пример 2;
a₀ - навеска РСО фенибута, г.

Результаты количественного определения фенибута в таблетках по 0,25 г приведены в табл. 2.

Сравнительная характеристика предлагаемого способа с известными представлена в табл. 1.

При сравнении открываемых минимумов видно, что предлагаемый способ является более чувствительным (в 2-4 раза). Применение в качестве цветореагента нингидрина способствует доступности и широкому внедрению разработанного способа в практику работы лабораторий и аптек. Исключается использование диметилформамида, что делает метод более экономичным.

Источники информации
1. А.с. 1432392 СССР, МКИ⁵ G 01 N 21/78. Способ определения аминалона / В. Д. Янчук, В. В. Петренко, Ю.Т. Ротберг (СССР). - N 3974618/28-4; Заявл. 10.11.85; Опубл. 23.10.88; Бюл. N 39.

2. А.с. 1191790 СССР, МКИ⁴ G 01 N 21/78. Способ определения аминокапроновой кислоты / Л.Д. Рябых, В.В. Трохимчук (СССР). - N 3722585/23-04; Заявл. 06.04.84; Опубл. 15.11.85; Бюл. N 42.

3. А.С. 1325335 СССР, МКИ⁴ G 01 N 21/78. Способ определения глютаминовой кислоты / В.Д. Янчук, В.В. Петренко, Н.А. Клюев (СССР). - N 3988025/28-04; Заявл. 12.12.85; Опубл. 23.07.87; Бюл. N 27.

4. А.с. 731362 СССР, МКИ² G 01 N 21/24. Способ количественного определения метионина/В. В. Петренко (СССР). - N 2557305/23-04; Заявл. 05.12.77; Опубл. 30.04.80; Бюл. N 16.

5. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987.

6. Петренко В.В. Поликарбонильные соединения в фармацевтическом анализе азотсодержащих лекарственных средств. Авт. дисс. ... докт. фарм. наук. - Харьков, 1984. - 38 с.

7. ФС 42-1768-96. Таблетки фенибута ® 0,25 г.

Формула изобретения

Способ количественного определения алифатических аминокислот путем обработки анализируемой пробы цветореагентом при нагревании с последующим спектрофотометрированием полученного окрашенного раствора, отличающийся тем, что пробу обрабатывают 1%-ным спиртовым раствором нингидрина в среде фосфатного буферного раствора с рН = 6,4 - 7,6, в присутствии 1 мг аскорбиновой кислоты, разбавляют полученный окрашенный раствор водой, а оптическую плотность измеряют при длине волны 568 нм.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2