Способ определения концентрации гепарина в водном растворе
Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии. Способ осуществляют следующим образом: спектрофотометрическим методом исследуют поглощение гепарина в ультрафиолетовой части спектра при длине волны 258 нм, на которой наблюдается линейная зависимость оптической плотности от концентрации гепарина. Способ позволяет просто и доступно определить концентрацию гепарина. 1 табл. , 2 ил.
Гепарин относится по химической структуре к полисахаридам (3; 4). Официальный раствор гепарина содержит стабилизатор (2), поэтому следует уточнить, что полученный спектр является суммарным спектром данной многокомпанентной смеси. Однако это не является принципиальным препятствием определения истинной концентрации гепарина при условии, что в лаборатории есть стандарты: это может быть химически чистый гепарин или официнальный раствор гепарина с известной концентрацией.
При использовании в качестве стандарта кристаллического гепарина исследование проводят в режиме мультикомпонентного анализа. Все расчеты в мультикомпонентном анализе основаны на том, что абсорбция в любой точке спектра является суммой индивидуальных абсорбций каждого компонента пробы (5). Простейший мультикомпонентный анализ предполагает использование одной длины волны на каждый компонент. Более точное определение предполагает исследование на большем количестве длин волн, чем компонентов в пробе. Таким образом, возможно применение предлагаемого способа как для определения концентрации гепарина в однокомпанентном растворе, так и в смеси с другими веществами. Целью изобретения является определение малых количеств гепарина в водном растворе. Поставленная цель осуществляется при использовании спектрофотометрии в режиме сканирования в ультрафиолетовой части спектра с построением спектральной кривой поглощения (абсорбции) и нахождения на ней характерных длин волн. Определение малых доз гепарина осуществляют следующим образом: анализы выполняют на спектрофотометре "DU 7500" фирмы "Beckman". Для исследования используют препарат - натриевую соль гепарина во флаконах по 5 мл (5000 Ед/мл) - официнальный раствор гепарина для инъекций производства Федерального унитарного предприятия "Московский эндокринный завод" (Россия), регистрационный номер 70/307 - 1998 г. Ход исследования. 1. Определение спектра поглощения рабочих растворов гепарина и их идентификация. Для определения спектра поглощения рабочих растворов гепарина и их идентификации анализируют растворы гепарина следующих концентраций: 1. к 2,5 тыс. ед. (0,5 мл) гепарина добавляют 9,5 мл дистиллированной воды. Конечная концентрация - 250 ед. /мл. 2. к 5 тыс. ед. (1 мл) гепарина добавляют 9 мл дистиллированной воды. Конечная концентрация - 500 ед. /мл. 3. к 7,5 тыс. ед. (1,5 мл) гепарина добавляют 8,5 мл дистиллированной воды. Конечная концентрация - 750 тыс. ед. /мл. 4. к 10 тыс. ед. (2 мл) гепарина добавляют 8 мл дистиллированной воды. Конечная концентрация - 1000 ед. /мл. Анализируемые растворы гепарина прозрачные, бесцветные, поэтому исследуют только ультрафиолетовый диапазон от 220 нм до 300 нм. Получают идентичные графики с максимумами поглощения на характерных длинах волн: 253 нм, 258 нм, 262 нм. Пропорционально концентрации растворов меняется оптическая плотность, но общий профиль спектра поглощения остается идентичным с характерными вышеуказанными точками перегиба (см. график 1, фиг. 1). Это свидетельствует о том, что исследуют разные концентрации одного и того же вещества. Поэтому правомочным является построение калибровочного графика по УФ спектру поглощения эталонных растворов гепарина. 2. Построение калибровочного графика. Для индикации и идентификации гепарина и определения количества единиц гепарина в растворах построена калибровочная кривая по фармакопейному раствору гепарина. Концентрацию гепарина в опытных образцах определяют автоматически по тангенсу угла наклона калибровочного графика с допустимой погрешностью в 1%. Исследуемые растворы гепарина имеют следующие концентрации: 1. к 2,5 тыс. ед. (0,5 мл) гепарина добавляют 9,5 мл дистиллированной воды. Конечная концентрация - 250 ед. /мл. 2. к 5 тыс. ед. (1 мл) гепарина добавляют 9 мл дистиллированной воды. Конечная концентрация - 500 тыс. ед. /мл. 3. к 7,5 тыс. ед. (1,5 мл) гепарина добавляют 8,5 мл дистиллированной воды. Конечная концентрация - 750 тыс. ед. /мл. 4. к 10 тыс. ед. (2 мл) гепарина добавляют 8 мл дистиллированной воды. Конечная концентрация - 1000 ед. /мл. 5. к 15 тыс. ед. (3 мл) гепарина добавляют 7 мл дистиллированной воды. Конечная концентрация - 1500 ед. /мл. См. график 2 (фиг. 2). Данные калибровочного графика сохраняются в "памяти" компьютера и на основании их математической обработки (в используемой модели спектрофотометра, обеспеченном прикладными программами, этот процесс совершается автоматически) вычисляется количество гепарина в исследуемой пробе. Для проверки правильности выполнения анализа концентрации малых доз гепарина в растворах проанализирована серия опытных растворов гепарина слепым методом (см. таблицу). Таблица демонстрирует высокий уровень достоверности получаемых результатов. Среднее значение погрешности не превышает 5% во всем диапазоне исследования, что входит в допустимый предел погрешности измерений (6; 7). Таким образом, метод может быть рекомендован для определения малых доз гепарина в медицинской и экспериментальной практике. Источники информации 1. Р. Досон, Д. Эллиот, У. Эллиот, К. Джонс "Справочник биохимика" - М. , 1991 г. , 464 с. 2. Фармакопейная статья 42-1331-87 ГФХ. 3. Е. П. Иванов. Диагностика нарушений гемостаза. - Минск, 1983 г. , 222 с. 4. Руководство по гемотологии. Под ред. А. И. Вороева, - М. , 1985, том 1, 447 с. 5. Справочник "Лабораторные методы исследования в клинике". Под ред. Меньшикова В. В. , -М. , 1987, 368 с. 6. Методические разработки Госстандарта России "Система аккредитации аналитических лабораторий". Прилож. 2: Требование к "Руководству по качеству" - М. , 1993. 7. Bradford. M. , "Analytical Biochemistry", 1976, 278 p.Формула изобретения
Способ определения концентрации гепарина в водном растворе методом спектрофотометрии, отличающийся тем, что исследуют количество гепарина в ультрафиолетовой части спектра на длине волны 258 нм, на которой наблюдается линейная зависимость оптической плотности от концентрации водного раствора гепарина и максимум поглощения.РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3
Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к способам и композициям для обнаружения предраковых оральных повреждений и оральных карцином
Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторным методам исследования
Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской экологии, гигиене, токсикологии, профпатологии, может быть использовано для прогнозирования преморбидного состояния
Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии, и может быть использовано в качестве диагностического способа при хроническом аденоидите по динамике показателей инфракрасного спектра слюны
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии
Способ определения показаний к лазеротерапии у больных неспецифическими заболеваниями легких // 2177153
Изобретение относится к области медицины, а именно к внутренним болезням
Способ дифференциальной диагностики ишемического и геморрагического инсульта в острейшем периоде // 2175446
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии
Изобретение относится к биохимии, может быть использовано для определения активности протеолитических ферментов
Изобретение относится к области медицины и биохимии, а именно к способам определения концентрации адреналина, норадреналина, дофамина и диоксифенилаланина (ДОФА) в биологическом материале: в крови и в моче
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики хронического простатовезикулита
Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской экологии, гигиене, токсикологии, профпатологии, может быть использовано для прогнозирования преморбидного состояния
Изобретение относится к медицине, а именно к психотерапии и неврологии
Изобретение относится к области медицины, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для диагностики хронического панкреатита, сочетанного с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки
Изобретение относится к области медицины, а именно нейрореаниматологии, нейрохирургии (нейротравматологии), и может быть использовано для прогнозирования течения травматической болезни головного мозга (ТБГМ) у пострадавших с черепно-мозговой травмой (ЧМТ)
Способ диагностики почечной патологии // 2178174
Изобретение относится к медицине, в частности, к функциональной диагностике в уронефрологии, и может быть использовано для определения нарушения деятельности почек
Изобретение относится к области медицины и, в частности, касается обнаружения инфекционных и онкогенных вирусов, интегрированных в хромосомы инфицированных клеток
Способ контроля нейтрализации эффекта воздействия электромагнитного поля на организм человека // 2178172
Изобретение относится к медицине, биологии, биофизике
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для селективного выделения бактерий рода Lactobacillus из клинического материала (фекалий, вагинального отделяемого)
Способ диагностики гнездной алопеции // 2178170
Изобретение относится к медицине, в частности к дерматологии
Способ определения концентрации кальция в сыворотке крови и других биологических жидкостях // 2172491
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике
