Комбинированная вакцина против сибирской язвы животных

 

Изобретение относится к ветеринарной биологии и иммунологии, в частности к производству и применению биологических препаратов для вакцинации животных. Предложенная вакцина включает протективный антиген вакцинного штамма 55 ВНИИВВиМ в концентрации (17,5 ± 2,5) иммунизирующих доз и живые споры вакцинного штамма СТИ-1 в концентрации (2,5 ± 0,3)•10⁷ в 1 мл физиологического раствора. Предложенная вакцина безвредна, обеспечивает создание напряженного антитоксического и антимикробного иммунитета против сибирской язвы. Изобретение может быть использовано для специфической профилактики сибирской язвы. 6 табл.

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной биотехнологии и иммунологии, в частности к производству вакцин для специфической профилактики сибирской язвы животных.

Сибирская язва - болезнь, протекающая в виде кожной, кишечной и легочной формы, встречающаяся в виде единичных и групповых заболеваний. К сибирской язве восприимчивы многие виды домашних и диких животных. Из домашних животных болеют крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, верблюды, буйволы, овцы, олени, собаки и кошки.

Сибирская язва до сих пор имеет распространение, нанося огромный экономический и социальный ущерб, поэтому разработка высокоэффективных вакцин, обеспечивающих напряженный и длительный иммунитет против этой инфекции, является актуальной.

В настоящее время широко известна "Вакцина СТИ живая против сибирской язвы животных". Она может выпускаться в двух формах.

- Сухая вакцина СТИ представляет собой высушенную под вакуумом однородную пористую таблетку, состоящую из живых спор бескапсульной слабовирулентной культуры сибиреязвенного штамма СТИ-1 и наполнителя.

- Жидкая вакцина СТИ представляет собой взвесь живых спор бескапсульной слабовирулентной культуры сибиреязвенного штамма СТИ в 30-ном нейтральном растворе глицерина (1).

Известна вакцина против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула живая ассоциированная, включающая суспензию спор сибиреязвенного авирулентного вакцинного штамма 55 ВНИИВВиМ в исходной концентрации (2,0-2,5)•10⁹ спор в 1 см³ и (2,0-2,1)•10⁹ жизнеспособных клеток штамма эмфизематозного карбункула и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, мас.%: Споры сибиреязвенного штамма 55 ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (2,0-2,5)•10⁹ спор в 1 см³ - 1,0 - 1,1 Суспензия штамма эмфизематозного карбункула в концентрации 2,1•10⁹ - 95,0 - 97,0 Физиологический раствор - Остальное Вакцину вводят подкожно в области средней трети шеи крупному рогатому скоту в возрасте от 3 до 6 мес. 1,0-1,1 см³ (2).

Известна комбинированная сибиреязвенная вакцина для людей, включающая живые споры штамма СТИ-1 и протективный антиген (ПА), полученный при определенных условиях культивирования этого вакцинного штамма. Срок формирования напряженного иммунитета у людей против сибиреязвенной инфекции составляет 7-10 суток после однократной иммунизации.

Сравнительные испытания данной вакцины на лабораторных и сельскохозяйственных животных показали ее существенные преимущества перед используемыми в настоящее время в ветеринарной практике противосибиреязвенными вакцинами на основе отдельных штаммов 55 ВНИИВВиМ или СТИ. Степень продуктивности была невысокой (3).

В задачу наших исследований входило - разработать комбинированную вакцину против сибирской язвы на основе бинарной комбинации живых спор вакцинного штамма СТИ-1 и протективного антигена, полученного из микробной культуры вакцинного штамма 55 ВНИИВВиМ, обеспечивающую создание в организме привитых животных напряженного и длительного иммунитета, безвредной и с высоким выходом продуцирования протективного антигена.

Предложенная вакцина включает живые споры вакцинного штамма СТИ-1 с концентрацией (2,5±0,3)•10⁷ протективный антиген на основе микробных культур вакцинного штамма 55 ВНИИВВиМ с активностью (17,5±2,5) иммунизирующих доз в 1 мл при следующим соотношении компонентов: протективный антиген вакцинного штамма 55 ВНИИВВиМ в концентрации (17,5±2,5) иммунизирующих доз и живые споры вакцинного штамма СТИ-1 в концентрации (2,5±0,3)•10⁷ cпор в 1 мл физиологического раствора.

Вакцину готовят следующим образом.

Технологическая схема производства включает в себя следующие основные стадии.

- Приготовление рабочей культуры производственного штамма СТИ-1 обычным способом при условии содержания в 1 см³ культуральной среды не менее 2,5 млрд. спор., оптимально (2,5±0,3)•10⁷.

- Приготовление питательных сред и дополнительных растворов.

- Выращивание нативной споровой культуры.

Выращивание проводят в культиваторах. Посевную культуру из одной ампулы перед посевом активируют путем прогрева в ультратермостате.

Культивирование проводят при непрерывном механическом перемешивании, аэрации стерильным воздухом при температуре 32-34^oС в течение 36-48 часов, периодически проверяя степень спорообразования и отсутствие посторонней микрофлоры.

Затем при достижении в культуре 70-75% прекращают перемешивание, подачу воздуха. Далее нативную культуру подогревают до 36-37^oС и выдерживают при периодическом перемешивании 3-5 часов, после чего охлаждают культуру до 15-20^oС.

Отобранная нативная культура должна отвечать следующим требованиям: - не содержать посторонней микрофлоры; - содержать не менее 90% нормально окрашенных спор; - иметь общую концентрацию спор - не менее 1,5 млрд в 1 см³ культуральной среды; - иметь значение рН среды 8,2-8,9 ед. рН.

Получение спорового концентрата.

Получение спорового концентрата осуществляют обычным способом, при следующих условиях:
- не содержать посторонней микрофлоры;
- общая концентрация спор в суспензии должна составлять не менее 12 млрд. спор в 1 см³;
- содержать не менее 90% спор и иметь рН 7,0-8,5 ед. рН.

При необходимости концентрат разводят дист. водой и проводят повторный контроль.

Затем отдельно выделяют протективный антиген из культуральной среды вакцинного штамма 55 ВНИИВВиМ.

Далее проводят смешивание компонентов вакцины: споры из штамма СТИ-1 с концентрацией (2,5±0,3)•10⁷ спор и протективный антиген из штамма 55 ВНИИВВиМ с содержанием (17,5±2,5) иммунизирующих доз в 1 мл физиологического раствора.

Вакцину вводят с профилактической целью однократно для профилактических прививок всех видов сельскохозяйственных животных. Первично прививаемых животных (молодняк) иммунизируют двукратно.

Вакцину при подкожном введении применяют в следующих дозах:
- овцам и козам - в область средней трети шеи или внутренней поверхности бедра в объеме 0,5 мл разведенной вакцины;
- крупному рогатому скоту, оленям и ослам - в область средней трети шеи в объеме 1,0 мл разведенной вакцины;
- свиньям - в область внутренней поверхности бедра или за ухом в объеме 1,0 мл разведенной вакцины;
- пушным зверям - в область внутренней поверхности бедра или в подхвостовое зеркало в объеме 1,0 мл разведенной вакцины.

Конкретные примеры по испытанию предложенной вакцины отражены в таблицах 1-6.

Кроме того, к заявке прилагаются еще четыре таблицы 3-6 по сравнительной характеристике иммуногенных свойств сибиреязвенных вакцин на морских свинках, напряженность иммунитета у морских свинок после иммунизации различными сибиреязвенными вакцинами, а также напряженность иммунитета по уровню антител у овец и крупного рогатого скота, иммунизированных против сибирской язвы.

Предложенная комбинированная вакцина против сибирской язвы животных за счет содержания в ней вакцинного штамма СТИ-1 обеспечивает создание антимикробного иммунитета, а наличие протективного антигена, полученного на основе микробных культур вакцинного штамма 55 ВНИИВВиМ, обеспечивает создание антитоксического иммунитета.

Вакцина безвредна, не требует больших затрат и при однократном введении в организме животного обеспечивает создание длительного и напряженного иммунитета (антимикробного и антитоксического) против сибирской язвы.

Предложенная вакцина апробирована с положительным результатом с 1998 по 2001 г. в Азербайджане на 900 тыс. головах крупного и на 5 млн. голов мелкого рогатого скота.

Кроме того, вакцина апробирована с 1998 но 2000 г. на 100000 голов крупного и 3 млн. голов мелкого рогатого скота в животноводческих хозяйствах Туркмении.

Предложенная вакцина найдет применение в животноводческих хозяйствах страны для борьбы с одним из опаснейшим заболеваний - сибирской язвой животных, а также обеспечит эпидемиологическое благополучие населения.

Источники информации
1. "Вакцина СТИ живая против сибирской язвы животных". ТУ ГОСТ 15991 - 86 Госкомитет по стандартам, Москва.

2. Патент РФ 2112544, кл. А 61 К 39/116, 1998.

3. Приказ Минздрава РФ 132 от 16.04.92. "О разрешении применения в практике здравоохранения новых медицинских иммунологических препаратов", п. 23, с.4 и с.27.

Формула изобретения

Комбинированная вакцина против сибирской язвы животных на основе живых спор вакцинного штамма СТИ-1, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит протективный антиген вакцинного штамма 55 ВНИИВВиМ, при этом компоненты, входящие в вакцину, берут в следующих соотношениях: живые споры вакцинного штамма СТИ-1 в концентрации (2,5 ± 0,3)·10⁷ спор и протективный антиген вакцинного штамма 55 ВНИИВВиМ в концентрации (17,5 ± 2,5)ИД₅₀ (иммунизирующих доз для белых мышей) в 1 мл физиологического раствора.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6