Питательная среда для выделения бактерий рода yersinia

 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано для бактериологической диагностики заболеваний, вызываемых бактериями рода Yersinia. Среда содержит сухой питательный агар, в качестве стимулятора роста витаминный препарат “ЭКД”, содержащий аминокислоты и комплекс витаминов, маннит, расщепляемый бактериями рода Yersinia с образованием кислоты, ингибитор грамположительной микрофлоры, желчные соли и кристаллический фиолетовый, в качестве индикатора кислотообразования - нейтральный красный, воду дистиллированную в заданном соотношении компонентов. Преимущество предлагаемой среды заключается в том, что среда полностью ингибирует рост грамположительной микрофлоры, обеспечивает рост штаммов Proteus vulgaris в О-форме. Кроме того, среда обладает высокой чувствительностью, отмечается рост колоний иерсиний при посеве из разведения 10^-7. 1 табл.

Изобретение относится к медицины, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано для бактериологической диагностики заболеваний, вызываемых бактериями рода Yersinia.

Наиболее употребительной средой для выделения иерсиний являются среда Эндо и среда Серова (1).

Недостатком этих сред является то, что на среде Эндо выделение иерсиний затруднено из-за недостаточно четких дифференцирующих свойств среды, а также слабоселективных свойств, а среда Серова сложна в приготовлении и включает в состав дефицитный реактив (конго красный).

Наиболее близким к предложенной питательной среде является питательная среда для выделения иерсиний, описанная в SU 1482944, кл. С 12 Q 1/04, 30.05.1989, содержащая источник питательного агара - среда Эндо, источник углерода - Д(-) маннит, в качестве ингибитора посторонней микрофлоры - желчь сухая, индикатор кислотообразования генцианвиолет, воду дистиллированную.

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, является многоступенчатость способа выделения иерсиний, которая требует обязательного предварительного подращивания бактерий в фосфатно-буферном растворе на холоду, низкая чувствительность среды, не обеспечивающая рост иерсиний при посеве единичных клеток, недостаточная селективность.

Кроме того, среда является многокомпонентной, сложна в приготовлении, что затрудняет выпуск данной среды в качестве коммерческого препарата в промышленном масштабе.

Задача предлагаемого изобретения - повышение дифференцирующих и селективных свойств среды.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что в качестве основного источника азотистого питания в предлагаемой среде используется сухой питательный агар, в качестве стимулятора роста витаминный препарат “ЭКД”, содержащий аминокислоты и комплекс витаминов, а также многоатомный спирт маннит, расщепляемый бактериями рода Yersinia с образованием кислоты, как ингибиторы грамположительной микрофлоры в состав среды введены соли желчных кислот и кристаллический фиолетовый, в качестве индикатора кислотообразования - нейтральный красный, при следующем соотношении компонентов, г/л:

Сухой питательный агар 30,0-40,0

Витаминный препарат "ЭКД" 1,0-3,0

Д(-) маннит 15,0-25,0

Желчные соли, сухие 7,5-9,5

Нейтральный красный 0,02-0,04

Кристаллический фиолетовый 0,001-0,002

Вода дистиллированная остальное

Содержание в предлагаемой среде желчных солей и кристаллического фиолетового полностью ингибирует рост грамположительной микрофлоры, обеспечивает рост штаммов Proteus vulgaris в O-форме. Вместе с тем среда обладает высокой чувствительностью, отмечается рост колоний иерсиний при посеве из разведения 10^-7. Среда сконструирована из отечественных гостированных ингредиентов на основе сухого питательного агара и витаминного препарата “ЭКД”, имеющих промышленный выпуск на предприятии НПО “Питательные среды” (3, 4).

Среду получают следующим образом.

Пример 1. В 0,9 л дистиллированной воды растворяют следующие ингредиенты, взятые в количестве (минимальное): сухой питательный агар - 30,0 г, витаминный препарат “ЭКД” - 1,0 г, Д(-) маннит - 15,0 г, желчные соли, сухие - 7,5 г, нейтральный красный - 0,02 г, кристаллический фиолетовый - 0,001 г. Среду доводят до кипения, кипятят 2-3 мин. Остужают до 45°С, разливают в чашки Петри, подсушивают в термостате 1,5 ч.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 0,9 л дистиллированной воды растворяют следующие ингредиенты среды, взятые в количестве (оптимальное): сухой питательный агар - 35,0 г, витаминный препарат “ЭКД” - 2,0 г, Д(-) маннит - 20,0 г, желчные соли, сухие - 8,5 г, нейтральный красный - 0,03 г, кристаллический фиолетовый - 0,002 г. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. Отличается от примеров 1 и 2 тем, что в 0,9 л дистиллированной воды растворяют следующие ингредиенты среды, взятые в количестве (максимальное): сухой питательный агар - 40,0 г, витаминный препарат “ЭКД” - 3,0 г, Д(-) маннит - 25,0 г, желчные соли, сухие - 9,5 г, нейтральный красный - 0,04 г, кристаллический фиолетовый - 0,003 г. Далее согласно примеру 1.

Каждый вариант среды получали отдельно.

Результаты испытания биологических показателей предлагаемой и известной сред приведены в таблице.

Из данных таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество, так как на питательной среде задерживается ползучий рост протеев, подавляется рост грамположительной микрофлоры.

Состав среды и технология ее приготовления просты, также среда удобна, обладает хорошими ростовыми свойствами.

Источники информации

1. Этиология, эпидемиология, клиника и лабораторная диагностика человека. Методические рекомендации для эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов, М., 1982 г., с.17.

2. Г.Я. Ценева. Иерсинез и псевдотуберкулез. С-П., 1992 г., с.12-13 (прототип).

3. ФС 42-3520-98.

4. ФС 42-3441-97.

Формула изобретения

Питательная среда для выделения бактерий рода Yersinia, содержащая источник питательного агара, источник углерода, ингибитор посторонней микрофлоры, ингибитор кислотообразования, воду дистиллированную, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит в качестве стимулятора роста витаминный препарат “ЭКД”, в качестве источника питательного агара - сухой питательный агар, в качестве источника углерода - Д(-)маннит, в качестве ингибитора посторонней микрофлоры - желчные соли и кристаллический фиолетовый, в качестве индикатора кислотообразования - нейтральный красный при следующем соотношении компонентов, г/л:

Сухой питательный агар 30,0 - 40,0

Витаминный препарат “ЭКД” 1,0 - 3,0

Д(-)Маннит 15,0 - 25,0

Желчные соли сухие 7,5 - 9,5

Нейтральный красный 0,02 - 0,04

Кристаллический фиолетовый 0,001 - 0,02

Вода дистиллированная Остальное