Живая туляремийная вакцина nik-sp. francisella tularensis

Изобретение относится к области создания препаратов микробиологического происхождения и может найти применение в здравоохранении, медицине и ветеринарии. Сущность способа: вакцинный штамм Nik-sp. F. tularensis получают путем селекции микробиологическим способом из чистой линии бактерий R-формы штамма 15 НИИЭГ Francisella tularensis. Штамм представляет собой S-форму с максимальной иммунизирующей дозой для лабораторных животных при подкожном введении от 1×10⁴ до 1×10⁸ микробных клеток и способен защищать их от инфицирования Francisella tularensis subsp. tularensis 503. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика за индексом VKPM В-9311. Низкая реактогенность, высокая стабильность, возможность использования стандартных сред и технологий для культивирования, хранения и приготовления позволяют использовать его в качестве живой туляремийной вакцины взамен существующей 15 НИИЭГ F. tularensis, 2 табл.

 

Изобретение относится к области создания препарата микробиологического происхождения и может найти применение в здравоохранении, медицине и ветеринарии.

Известен вакцинный штамм 75 НИИЭГ F. tularensis и его прототип - LVS F. tularensis, используемый на Западе, в США и Канаде против возбудителя туляремии голарктической разновидности - Francisella tularensis subsp. tularensis, в частности F. tularensis subsp. tularensis 503.

Вакцинный штамм 75 НИИЭГ F. tularensis получен путем аттенуации (адаптации) вирулентного штамма F. tularensis subsp. tularensis 503 в 1932-36 гг. Б.Я.Эльбертом и Н.А.Гайским. Показав эффективность вакцинного штамма на лабораторных животных, Н.А.Гайский в 1941-42 гг. проверил созданную им подкожную туляремийную вакцину в очагах инфекции. В 1945 г. Б.Я.Эльберт предложил накожный метод вакцинации, что упростило проведение прививок. С 1949 г. была введена массовая противотуляремийная вакцинация сельского населения в неблагополучных по туляремии районах, приведшая к резкому снижению заболеваемости. В начале 50-х годов вакцинный штамм 75 НИИЭГ F. tularensis был передан в США, после чего через несколько лет появился его прототип LVS F. tularensis, который по своим биологическим, биохимическим, культурально-морфологическим и другим свойствам не отличается от штамма 75 НИИЭГ F. tularensis.

Живая туляремийная вакцина 75 НИИЭГ F. tularensis считается одной из лучших в мире бактериальных вакцин, однако имеет ряд недостатков:

1. Использование в постоянной практике живой туляремийной вакцины 75 НИИЭГ F. tularensis и ее прототипа LVS F. tularensis более 50-ти лет привело не только к изменению свойств первоначально полученной вакцины, но и в значительной степени увеличило риск утраты вакцинного штамма.

2. Высокая остаточная вирулентность туляремийной вакцины на лабораторных животных (Значение LD₅₀ для мышей линии Balb/c составляет 1×10³ микробных клеток на животное) прямо связана с высоким процентом осложнений, возникающих при массовой иммунизации населения.

3. При выращивании туляремийного вакцинного штамма на питательных средах популяция получаемых бактерий способна к диссоциации в авирулентную для лабораторных животных и не формирующую защитного иммунитета R-форму F. tularensis (Западный прототип - LVSR F. tularensis). При высоком проценте бактерий R-формы F. tularensis в популяции живой туляремийной вакцины последняя непригодна к использованию, так как не способна формировать у человека длительный напряженный иммунитет против вирулентных штаммов туляремии.

В качестве наиболее близкого аналога данного изобретения предлагается живая туляремийная вакцина на основе штамма 15 НИИЭГ F. tularensis (Олсуфьев Н.Г. Туляремия. Иммунология // Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. - М., 1966. - Т.VII. - С.196-199). Данная вакцина выбрана в качестве прототипа, потому что она имеет то же назначение, что и заявляемое изобретение, а штамм 75 НИИЭГ F. tularensis используется в заявленном изобретении для получения вакцинного штамма

Технический результат изобретения заключается в получении микробиологическим способом селекционного мутанта R-формы F. tularensis, лишенного вышеперечисленных недостатков, а именно штамма Nik-sp. F. tularensis Nik-sp. Francisella tularensis, который является селекционным мутантом, полученным микробиологическим способом из чистой линии бактерий R-формы F. tularensis.

Для решения поставленной задачи предложена живая туляремийная вакцина, отличающаяся тем, что она включает штамм Francisella tularensis Nik-sp., депонированный во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика за индексом VKPM В-9311, полученный путем селекции микробиологическим способом из чистой линии бактерий R-формы штамма 15 НИИЭГ Francisella tularensis, представляющий собой S-форму с максимальной иммунизирующей дозой для лабораторных животных при подкожном введении от 1×10⁴ до 1×10⁸ микробных клеток и способный защищать их от инфицирования Francisella tularensis subsp. tularensis 503.

До настоящего времени во всем мире принято считать, что при последовательных пересевах живой туляремийной вакцины 15 НИИЭГ F. tularensis (или ее прототипа - LVS F. tularensis) возникающая в популяции диссоциация является естественной (природной) и носит необратимый характер. То есть возникшие в процессе диссоциации туляремийной вакцины бактерии R-формы F. tularensis, утратив остаточную вирулентность для лабораторных животных, способность формировать напряженный Т- и В-клеточный иммунитет, а также ряд других важных свойств (например, способность длительное время сохраняться и частично размножаться в организме чувствительных к туляремии лабораторных животных), являются стойкими природными мутантами. Эти мутантные бактерии ни при каких обстоятельствах не способны вновь полностью или частично восстанавливать свойства туляремийной вакцины, поэтому в разных лабораториях мира выделенную и охарактеризованную чистую линию бактерий R-формы F. tularensis считают «консервативной», «тупиковой» и так далее.

Показано, что данное представление о R-форме F. tularensis является ошибочным. При частых последовательных пересевах популяции бактерий R-формы F. tularensis на питательных средах с изменением рН среды и ряда других параметров с низкой частотой возникают ее «мутантные» формы, которые частично восстанавливают свойства живой туляремийной вакцины 15 НИИЭГ F. tularensis. Чистая линия бактерий, возникшая в результате мутации бактерий R-формы F. tularensis, получила аббревиатуру Nik-sp. Francisella tularensis.

Заключение о видовой принадлежности штамма Nik-sp. с помощью анализа 16S РНК получено в ВКПМ ФГУП ГосНИИГенетика.

Анализ последовательностей 16S рРНК показал, что исследуемый штамм, заявленный как Nik-sp., принадлежит к виду бактерий Francisella tularensis, причем со штаммами Francisella tularensis subsp. holarctica и Francisella tularensis var. tularemia гомология составляет 97%.

Основные свойства штамма Nik-sp. F. tularensis:

Культурально-морфологические. Бактерии представляют собой мелкие кокковидные и палочковидные клетки размерами 0,2-0,7 мкм, неподвижны, грамотрицательны, образуют капсулу. Бактерии Nik-sp. обладают полиморфизмом. Штамм Nik-sp. аэроб, не растет на простых средах, ауксотроф, культивируется при +37°С в средах, богатых витаминами. Посев культуры на питательные среды выдерживают в термостате от двух до семи суток. Штамм Nik-sp. можно выращивать на средах с мозговой, селезеночной, печеночной тканями, экстрактами сердца, гемоглобином или черным альбумином. На плотных питательных средах бактерии Nik-sp. F. tularensis после высева из внутренних органов чувствительных лабораторных животных методом мазков-отпечатков находятся в S-форме и образуют колонии серо-белого цвета. Белый цвет колоний усиливается, если чашки с посевом выдержать 2-3-е суток в холодильнике (+4°С). При пассировании на лабораторных животных с последующим выделением культуры из внутренних органов колонии штамма Nik-sp. F. tularensis приобретают белый цвет и становятся практически неотличимы от колоний вакцинного штамма 15 НИИЭГ F. tularensis.

Стабильность популяции. При пересевах на плотных питательных средах культура Nik-sp. очень стабильна и практически не диссоциирует в другие формы. При частых пересевах (более 20 раз), а также после длительного хранения в лиофильно высушенном состоянии возможно появление мутантов R-формы F. tularensis, с частотой 10^-7-10^-8.

Биохимические. Клетки штамма Nik-sp. F. tularensis расщепляют белки с выделением сероводорода, на среде Даунса ферментируют глюкозу и мальтозу, не ферментируют глицерин, сахарозу и лактозу, непостоянно ферментируют декстрозу и фруктозу. Нечувствительны к эритромицину, олеандомицину, полимиксину, пенициллину, стрептомицину, не обладает цитруллинуреидазной активностью. Все биохимические свойства селекционного мутанта до конца не изучены.

Иммунохимические и серологические. Штамм Nik-sp. F. tularensis легко агглютинирует с коммерческой лошадиной сывороткой по типу агглютинации вакцинного штамма 15 НИИЭГ F. tularensis, а в реакциях иммунодиффузии (РИД) и иммуноэлектрофореза с коммерческой сывороткой формирует линии преципитации, характерные для антигенов вакцинного штамма. Экспериментальные сыворотки, полученные против штамма Nik-sp. F. Tularensis, бедны специфическими антителами в сравнении с коммерческой и экспериментальной кроличьей сыворотками, полученными против штамма 75 НИИЭГ F. tularensis.

Отношение к фагам данного вида. Штамм Nik-sp. F. tularensis, как и все семейство Francisella, собственных фагов не имеет.

Генетические особенности. Клетки штамма Nik-sp. F. tularensis обладают природной устойчивостью к пенициллинам, полимиксинам, макролидам. Для удобства работы с селекционным мутантом Nik-sp. он маркирован хромосомной устойчивостью к стрептомицину (Sm^R).

Продуктивность. Селекционный мутант Nik-sp. F. tularensis является продуцентом фактора вирулентности гликопротеиновой природы F. tularensis subsp. tularensis 503, который локализован во внешней мембране клетки и капсульном веществе. Данный комплекс способен формировать у лабораторных животных длительный напряженный В- и Т-клеточный иммунитет против F. tularensis subsp. tularensis 503.

Патогенность для лабораторных животных. Штамм Nik-sp. F. tularensis обладает низкой остаточной вирулентностью для беспородных мышей и хомяков в сравнении с вакцинным штаммом 75 НИИЭГ F. tularensis (Согласно «Заключения по проверке лиофильно высушенной культуры Nik. F. tularensis на остаточную вирулентность», проведенную в НИЦ Токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов, значение LD₅₀ для линейных мышей Balb/c составило 5,6×10⁵ микробных клеток на мышь, значение LD₅₀ для золотистых хомяков составило 9,2×10 микробных клеток на мышь). Штамм Nik-sp. F. tularensis авирулентен для морских свинок и кроликов (значение LD₅₀>1×l0⁹ микробных клеток на животное). Заметно сниженная остаточная вирулентность вакцинного штамма Nik-sp. F. tularensis дает основание полагать, что его реактогенность при массовой иммунизации населения будет также снижена, что является безусловным преимуществом перед существующей вакциной 75 НИИЭГ F. tularensis.

Протективные (защитные) свойства. Как показали исследования, при сниженной остаточной вирулентности бактерии Nik-sp. F. tularensis обладают высокой способностью длительное время (более 10 дней) не только сохраняться, но и частично размножаться в чувствительных лабораторных животных, формируя напряженный преимущественно Т-клеточный иммунитет.

Другие свойства. Штамм Nik-sp. F. tularensis в высокой степени чувствителен к бактерицидному действию сыворотки крови и не способен к росту при +42°С.

Условия и состав сред для хранения и поддержания селекционного мутанта. Музейная культура штамма Nik-sp. F. tularensis хранится при температуре +4°С на косяках среды МакКоя до 6 месяцев, в лиофильно высушенном состоянии до 5 лет.

Среда для культивирования. Штамм Nik-sp. F. tularensis культивируется на плотной среде с черным альбумином и жидкой среде Шерера.

Технологические особенности при культивировании. - Технологических особенностей при культивировании штамма Nik-sp. F. tularensis в сравнении с вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis нет.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Изучение остаточной вирулентности селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis.

На плотные питательные среды с гидролизованным гемоглобином (Состав среды: сердечно-мозговой агар, гемоглобин, цистеин, глюкоза) или FT-агар (Производство ФГУП ГНЦ ПМ, Оболенск, Россия)) петлей делают высев культуры Nik-sp. F. tularensis и инкубируют в термостате при +37°С в течение двух суток. Двухсуточную культуру Nik-sp. F. tularensis смывают физиологическим раствором и готовят суспензию бактерий в концентрации 5×10⁹ микробных клеток (м.к.) в одном миллилитре. (По оптическому стандарту мутности). Далее готовят серию последовательных разведении суспензии бактерий из расчета, чтобы в 0,2 мл раствора на каждое животное (мыши линии Balb/c или золотистые хомяки) попало от 10 до 10⁸ м.к. Для морских свинок подобные концентрации бактерий готовят в 0,5 мл раствора. Как правило, в каждой группе должно быть не менее 4 мышей или золотистых хомяков, морских свинок не менее двух. При заражении животных параллельно проводят определение количества живых микробных клеток методом высева разведении на питательные среды для получения единичных колоний.

Для каждого вида животных в качестве контроля используют группу, которая не подвергалась заражению. Заражение проводят подкожно в паховую область задней лапки.

Срок наблюдения за экспериментальными и контрольными группами животных составил 35 дней.

В течение всего периода наблюдения был отмечен падеж животных (мышей линии Balb/c в экспериментальных группах от доз 2×10⁸, 2×10⁷ и 2×10⁶ м.к.).

В контрольных группах падежа не отмечено. Со второй недели наблюдения из групп линейных мышей и золотистых хомяков часть животных выводили из эксперимента и изучали персистенцию бактерий Nik-sp. F. tularensis (способность бактерий длительное время сохраняться и размножаться в животном), а также возможное поражение паренхиматозных органов (легкие, печень, почки, селезенка) путем выделения бактерий на плотных питательных средах методом мазков отпечатков, приготовления суспензии из паренхиматозных органов, приготовления гистологических препаратов.

По окончании эксперимента все животные (включая контроль) подвергались вскрытию и изучению паренхиматозных органов на возможное наличие бактерий Nik-sp. F. tularensis и поражение паренхиматозных органов.

В результате проведенных исследований установлено наличие остаточной вирулентности (патогенности) штамма Nik-sp. F. tularensis для мышей Balb/c и золотистых хомяков. Значение LD₅₀ для линейных мышей Balb/c составило 5,6×10⁵ м.к. на мышь. Значение LD₅₀ для золотистых хомяков составило 9,2×10⁶ м.к. на хомяка. Для морских свинок штамм Nik-sp. F. tularensis оказался авирулентным во всех проверяемых дозах.

Специфичность развития заболевания животных двух видов была подтверждена наличием роста культуры Nik-sp. F. tularensis из мазков отпечатков паренхиматозных органов на питательных средах в проверяемые сроки от двух до пяти недель.

Пример 2. Изучение персистенции селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis и формирование у животных Т-клеточного иммунитета.

Выращивание культуры Nik-sp. F. tularensis и приготовление рабочих разведении проводили, как описано в Примере 1. Мышей Balb/c инфицировали подкожно в паховую область задней лапки суспензией бактерий в концентрациях, близких к значению LD₅₀ - 1×10⁵ и 1×10⁶ м.к. на животное. К началу второй недели (8-й - 9-й день) и далее животных выводили из эксперимента путем эвтаназии и определяли способность бактерий длительное время сохраняться и размножаться в животном путем выделения их на плотных питательных средах методом мазков отпечатков, получения и высева суспензии из паренхиматозных органов. Визуально исследовали возможные изменения паренхиматозных органов (легкие, печень, почки, селезенка), изучали приготовленные из паренхиматозных органов гистологические препараты.

В результате проведенных исследований установлено, что при инфицировании мышей дозой клеток 1×10⁶ м.к. на животное с помощью мазков отпечатков и высева суспензии паренхиматозных органов на 10-й день после инфицирования выделяли единичные колонии Nik-sp. F. tularensis из печени, почки и селезенки. На 14-й день после инфицирования мышей дозой клеток 1×10⁶ м.к. на животное культура Nik-sp. F. tularensis из паренхиматозных органов не выделяется. Визуальное изучение внутренних органов показало увеличение размеров селезенки мышей в среднем в 1,5 раза, что косвенно говорит о наличии в ней пролиферативных процессов, направленных на формирование специфического Т-клеточного иммунитета. Наличие пролиферативных процессов в селезенке подтверждается при исследовании гистологических препаратов. Визуальное и гистологическое изучение печени, легких и почки не показало серьезных поражений этих органов.

Пример 3. Изучение биологической активности бактерий вакцинного кандидата Nik-sp. F. tularensis определяется по двум критериям:

1. Остаточная вирулентность для чувствительных к туляремии животных (мыши, золотистые хомяки, морские свинки).

Для этих животных одна микробная клетка (бактерия) возбудителя туляремии вызывает их гибель.

Вакцинный кандидат Nik-sp. F. tularensis способен убивать мышей в дозе 5,6×10⁵ микробных клеток на животное, золотистых хомяков - 9,2×10⁶ микробных клеток на животное. Для морских свинок доза в 2×10⁸ микробных клеток на животное не вызывала гибели, что указывает на авирулентность данных бактерий по отношению к морским свинкам. Это очень важно потому, что именно морская свинка считается моделью, адекватной для человека.

2. Способность к персистенции (сохранению и некоторому размножению бактерий в организме чувствительных животных).

Этот показатель определяется следующим образом. Лабораторным животным вводится доза бактерий ниже той, которая способна вызвать их гибель. Затем через определенное время (как правило, на 7-й, 14-й и 21 день) животных эвтанизируют (умерщвляют) и из их внутренних органов выделяют введенные бактерии. Если изучаемый штамм (например, Nik-sp. F. tularensis) обладает вакцинными свойствами, то он будет выделяться из лабораторных животных до 14-18 дня после иммунизации, но не больше. Этого времени вполне достаточно, чтобы сформировался защитный клеточный иммунитет.

Таким образом, при определении защитных свойств вакцинного кандидата Nik-sp. F. tularensis для каждого вида животных определяется своя доза иммунизации, которая всегда должна быть ниже дозы остаточной вирулентности.

Для мышей максимальная доза может составлять 1×10⁴ микробных клеток на животное, для золотистых хомяков - 1×10 микробных клеток на животное, для морских свинок - 1×10 микробных клеток на животное.

Время, необходимое для формирования защитного иммунитета, после которого возможна проверка вакцинных свойств штамма, должна составлять не менее четырех недель. После четырех недель возможно заражение иммунных животных вирулентным штаммом.

Для существующего вакцинного штамма 15 НИИЭГ F. tularensis, имеющего более высокую остаточную вирулентность, максимальные иммунизирующие дозы для лабораторных животных значительно снижены: для мышей и золотистых хомяков они составляют не более 100 микробных клеток на животное (1×10² м.к. на животное), для морских свинок - 1×10⁶ м.к. на животное.

Сроки, необходимые для формирования защитного иммунитета, также составляют не менее четырех недель после иммунизации.

Для более ясного понимания постановки экспериментов по определению защитного эффекта штамма Nik-sp. F. tularensis в Таблицу из Примера 3 можно ввести дополнительную графу и тогда она будет выглядеть следующим образом.

Таблица 1
Эффективность иммунизации морских свинок вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis u Nik-sp. F. tularensis.
Штаммы	n	Доза	Заражение	Доза	л	Т
F. tularensis 15	5	106	F. tularensis 503	102	0/5	-
F. tularensis 15	5	106	F. tularensis 503	103	0/5	-
F. tularensis Nik-sp.	5	108	F. tularensis 503	102	0/5	-
F. tularensis Nik-sp.	5	108	F. tularensis 503	103	0/5	-
Контроль	5	-	F. tularensis 503	101	4/5	10
Контроль	5	-	F. tularensis 503	102	5/5	9
Контроль	5	-	F. tularensis 503	103	5/5	7

Пример 4. Изучение протективных (защитных) свойств штамма Nik-sp. F. tularensis.

Как описано в Примере 1, штаммы Nik-sp. F. tularensis и 15 НИИЭГ F. tularensis выращивали в течение 4-х суток и готовили рабочие концентрации суспензий бактерий 2×10⁸ м.к. в объеме 0,5 мл. Иммунизацию морских свинок каждой вакциной проводили подкожно в паховую область задней лапки. При иммунизации животных параллельно проводили определение количества живых микробных клеток методом высева разведении до единичных колоний на питательные среды. Заражение животных суспензией бактерий вирулентного туляремийного штамма F. tularensis subsp. tularensis 503 проводили ипсилатерально в другую заднюю лапку через 21 день после иммунизации. Культуру выращивали в течение 2-х суток на плотной питательной среде и готовили рабочие концентрации растворов, как описано в примере 1. При заражении животных параллельно проводили определение живых микробных клеток методом высева до единичных колоний на питательные среды. Срок наблюдения за морскими свинками составил 30 дней. Контрольная (неиммунизированная) группа морских свинок представлена 15 животными. Результаты эксперимента представлены в Таблице 2.

Таблица 2
Эффективность иммунизации морских свинок вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis и Nik-sp. F. tularensis.
Штаммы	n	Заражение	Доза	л	Т
F. tularensis 15	5	F. tularensis 503	102	0/5	-
F. tularensis 15	5	F. tularensis 503	103	0/5	-
F. tularensis Nik-sp.	5	F. tularensis 503	102	0/5	-
F. tularensis Nik-sp.	5	F. tularensis 503	103	0/5	-
Контроль	5	F. tularensis 503	101	4/5	10
Контроль	5	F. tularensis 503	102	5/5	9
Контроль	5	F. tularensis 503	103	5/5	7

Срок наблюдения за морскими свинками - 30 суток, n - количество животных в группе; л - летальность животных. В числителе - количество погибших, в знаменателе - количество инфицированных животных;

Т - время гибели животных (в сутках) в течение всего срока наблюдения.

Как видно из представленной таблицы 2, все неиммунизированные (контроль) морские свинки погибли. Срок гибели животных от десяти бактерий вирулентного штамма F. tularensis subsp. tularensis 503 составил в среднем 10 дней. Все морские свинки, предварительно иммунизированные живой туляремийной вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis и штаммом Nik-sp. F. tularensis, остались живы при заражении их 1×10³ м.к. на животное в течение всего срока наблюдения.

Таким образом, можно считать, что защитный (протективный) эффект обоих штаммов составляет 1000 DCL (1000 безусловно смертельных доз), что является очень хорошим показателем напряженности специфического иммунитета.

Культурально-морфологические, биологические и другие характеристики селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis как новой живой туляремийной вакцины до настоящего времени в литературе не опубликованы.

Как показал комплекс проведенных исследований, селекционный мутант Nik-sp. F. tularensis, полученный из чистой линии бактерий R-формы F. tularensis, только частично восстановил свойства живой туляремийной вакцины 75 НИИЭГ F. tularensis.

Штамм Nik-sp. F. tularensis способен достаточно длительное время сохраняться и размножаться внутри клеток макроорганизма. Этого времени вполне достаточно для формирования напряженного, прежде всего Т-клеточного иммунитета, способного в дальнейшем защитить человека или животное от возбудителя туляремии.

Другого качества живой туляремийной вакцины 75 НИИЭГ F. tularensis - способности сохраняться и размножаться в крови в лабораторных животных, вызывая их быструю гибель, а у людей высокий процент осложнений, - у штамма Nik-sp. F. tularensis нет.

Таким образом, штамм Nik-sp. F. tularensis имеет значительное преимущество перед уже существующей живой вакциной 15 НИИЭГ F. tularensis, которое дополняется его высокой стабильностью при выращивании на плотных и жидких питательных средах и использованием уже известных традиционных технологий хранения, культивирования и применения вакцины.

Очевидный низкий процент реактогенности вакцинного штамма Nik-sp. F. tularensis при иммунизации населения, его высокая стабильность, использование стандартных сред и технологий для культивирования хранения и приготовления открывает следующие возможности:

1. Для здравоохранения и медицины - использование в качестве живой туляремийной вакцины Nik-sp. F. tularensis взамен существующей 15 НИИЭГ F. tularensis (или ее западного прототипа LVS F. tularensis} или сохранение ее как вакцины резерва. На основе штамма Nik-sp. F. tularensis разработка новых высокоэффективных биологических вакцин, высокоспецифичных диагностикумов, лечебных сывороток, а также иммуномодуляторов.

2. Для ветеринарии - использование в качестве живой туляремийной вакцины Nik-sp. F. tularensis для иммунизации животных особо ценных и редких пород (при их разведении), а также животных в заповедниках, зоопарках и т.д.

Вакцина 15 НИИЭГ F. tularensis (или ее западный прототип LVS F. tularensis) не могут использоваться для этих целей в силу их высокой остаточной вирулентности для большинства диких животных.

Учитывая свойства селекционного мутанта Nik-sp. F. tularensis, данный микроорганизм 29.11.05 года депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП ГосНИИГенетика за индексом VKPM В-9311.

Источники информации

1. Olsufjev, N.G. (1975) Taxonomy, Microbiology and Laboratory Diagnosis of Tularemia Pathogen, pp.192. Medicine, Moscow.

2. Eigelsbach, H.T. and Downs, C.M. (1961) Prophylactic effectiveness of live and killed tularemia vaccines. I. Production of vaccine and evaluation in the white mouse and guinea pig. J. Immunol. 87, 415-425.

3. Cherwonogradzky, J.W., Knodel, M.H. and Spence, M.R. (1994) Increased encapsulation and virulence of Francisella tularensis live vaccine stain (LVS) by subculturing on synthetic medium. Vaccine 12, 773-775.

4. Kormilitsyna, M.I. and Meshcheryakova, I.S. (1996) The new vaccine strains (or variants) of Francisella tularensis. FEMS Immunology and Medical Microbiology 13, 215-219.

5. Мещерякова И.С. Антигены туляремийного микроба, их серологическая характеристика и применение в реакции гемагглютинации. Дисс. канд. 1968.

6. Мещерякова И.С. Таксономия, идентификация и иммунологическая диагностика туляремии. Дисс.докт. 1991.

7. Олсуфьев Н.Г. Туляремия. Иммунология // Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. - М., 1966. - Т.VII. - С.196-199

Живая туляремийная вакцина, отличающаяся тем, что она включает штамм Francisella tularensis Nik-sp., депонированный во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика за индексом VKPM В-9311, полученный путем селекции микробиологическим способом из чистой линии бактерий R-формы штамма 15 НИИЭГ Francisella tularensis, представляющий собой S-форму с максимальной иммунизирующей дозой для лабораторных животных при подкожном введении от 1·10⁴ до 1·10⁸ микробных клеток, и способный защищать их от инфицирования Francisella tularensis subsp. tularensis 503.