Способ повышения качественных показателей спермы
Владельцы патента RU 2311912:
Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (RU)
Изобретение относится к области медицины, а именно к урологии, андрологии, акушерству и гинекологии, и может быть использовано для лечения бесплодия, при внутриматочной инсеминации и экстракорпоральном оплодотворении. Для осуществления способа проводят разведение 0,4 мл эякулята в 0,4 мл физиологического раствора (0,9% раствор NaCl), затем добавляют 0,3-0,6 мл перфторана и выдерживают при перемешивании и встряхивании в течение 3 минут. Изобретение позволяет повысить качественные показатели спермы: увеличить число подвижных сперматозоидов в эякуляте, увеличить дыхательную способность сперматозоидов, увеличить расчетный показатель Фарриса, что повышает эффективность лечения и вероятность оплодотворения. 3 табл.
Изобретение относится к области медицины, в частности к экспериментальной медицине, урологии, андрологии, акушерству и гинекологии.
Бесплодный брак - это отсутствие беременности у супругов детородного возраста в течение 1 года регулярной половой жизни без применения каких-либо контрацептивных средств. Согласно данным эпидемиологических исследований частота бесплодных пар колеблется до 25%, а в ряде регионов Российской Федерации имеет тенденцию к увеличению. Таким образом, проблема фертильности является одной из актуальных проблем гинекологии и андрологии, а при бесплодии супружеской пары имеется крайне редкое сочетание социального, психического и, практически всегда, физического нездоровья в семье.
На долю мужского бесплодия приходится до 40% случаев. Различают секреторную и экскреторную формы мужского бесплодия.
При экскреторной форме яички не производят достаточного количества сперматозоидов, необходимого для достижения и оплодотворения яйцеклетки, или у сперматозоидов нарушена подвижность, или же большинство сперматозоидов имеют дефекты строения.
В основе секреторной формы бесплодия всегда лежит то или иное воздействие на яички. По современным представлениям следует учитывать многие факторы, которые в результате могут обусловить мужское бесплодие. Однако наиболее частой причиной мужского бесплодия являются воспалительные процессы органов половой сферы, инфекции, передаваемые половым путем.
За последние годы, как в мире, так и в России, усилилось внимание специалистов к эпидемиологии, диагностике, терапии и профилактике урогенитальных инфекций (УГИ) в связи с их широким распространением среди всех категорий населения. Одно из ведущих мест в структуре УГИ занимает урогенитальный хламидиоз (УГХ), микоплазмоз, уреаплазмоз уровень их регистрации высок и имеет тенденцию к росту.
Наиболее часто данные заболевания протекают без ярко выраженной клинической картины, вследствие чего пациенты не обращаются к врачу. Поэтому очень часто хламидиоз приобретает хроническую форму и протекает с осложнениями (эпидидимит, орхоэпидидимит, простатит, парауретрит, проктит и др.).
По данным ВОЗ в настоящее время принято считать нормой количество 40 млн/мл и более, а уменьшение этого показателя расценивается как олигозооспермия. Общее количество подвижных форм спермиев должно быть не ниже 80%, а активно-подвижные формы не ниже 55-60%. Снижение количества форм с активным поступательным движением называют астенозооспермией.
Практическими врачами при назначении лечения и оценке результатов проведенного лечения, как правило, не учитывается состояние репродуктивной функции пациента, что зачастую приводит к бесплодию.
Методики лечения бесплодия на сегодняшний день не очень эффективны, что заставляет искать новые методы и способы коррекции репродуктивной функции.
Известен СПОСОБ УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА СПЕРМЫ [Патент RU №2187306, М. кл. А61К 31/496; А61Р 15/08 Аляев Ю.Г., Винаров А.З., Локшин К.Л., Аленов С.П., Спивак Л.Г. БИПМ №23, 20.08.2002, с.321], заключающийся в введении больному доксазозина в течение 4-5 недель.
Недостатком способа является то, что доксазозин вызывает артериальную гипотензию, может быть причиной обострения стенокардии, инфаркта миокарда, цереброваскулярного инсульта, нарушений сердечного ритма, тромбоцитопении, гепатита, холестаза, гематурии.
Известен СПОСОБ УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА СПЕРМЫ ПРИ ПАТОС-ПЕРМИИ В ПРОГРАММЕ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ОПЛОДОТВОРЕНИЯ [Патент RU №2205047, М. кл. А61N 5/067; Гаврилов Ю.А., Кузьмичев Л.Н., Леонов Б.В., Левчук Т.Н. БИПМ №15, 27.05.2003, с.353], заключающийся в проведении в течение 2 недель 7-10 процедур лазерной стимуляции в импульсном режиме предстательной железы путем установления датчиков одновременно на промежность и надлобковую область с частотой 0,6 Гц, мощностью 3,5 Вт, длительностью 8-10 минут, и яичек с частотой 0,3 кГц, мощностью 1,5 Вт, длительностью 7-9 минут, 5-7 процедур стимулирующего массажа простаты. Назначают аминокислотный хелат цинка по 22 мг и селен по 200 мкг 2 раза в сутки, пурегон по 50 ME внутримышечно ежедневно в течение месяца.
Недостатком способа является то, что лазеротерапия имеет противопоказания при острых воспалительных процессах, злокачественных новообразованиях и туберкулезе. Кроме того, назначение пурегона противопоказано при выраженных нарушениях функции печени и/или почек. Противопоказаниями хелата цинка являются: острый гломерулонефрит, обострение язвенной болезни, брадикардия.
Наиболее близким является СПОСОБ ОБРАБОТКИ СПЕРМЫ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ [Патент RU №2056808, М. кл. А61D 19/00; Самарский П.А., БИПМ №9, 27.03.1996, с.156], заключающийся в обработке спермы импульсом однонаправленного магнитного поля, изменяющегося в пространстве и во времени. Для генерации магнитного поля используется устройство, содержащее емкостный накопитель с соленоидом, заряжаемый от однофазной электросети.
Недостатком способа является то, что при обработке спермы импульсом однонаправленного магнитного поля подвижность сперматозоидов увеличивается лишь на 10% - низкая эффективность способа.
ЗАДАЧА ДАННОГО ИЗОБРЕТЕНИЯ: повышение качественных показателей спермы, таких как: увеличение числа подвижных сперматозоидов в эякуляте, увеличения дыхательной способности сперматозоидов, увеличение расчетного показателя Фарриса (расчетный показатель, равный количеству общего числа сперматозоидов, умноженный на количество активно подвижных и разделенный на 100) за счет обработки спермы медикаментозными препаратами.
Поставленная задача достигается тем, что проводят разведение 0,4 мл эякулята в 0,4 мл физиологического раствора 0,9% раствор NaCl, затем добавляют 0,1-0,6 мл перфторана и выдерживают при перемешивании и встряхивании в течение 3 минут.
НОВИЗНА СПОСОБА заключается в том, что:
- проводят разведение 0,4 мл эякулята в 0,4 мл физиологического раствора 0,9% раствор NaCl. Такое разведение снижает вязкость эякулята и увеличивается общий объем полученного субстрата, что создает в дальнейшем лучшие условия для взаимодействия с перфтораном.
- добавляют 0,1-0,6 мл перфторана, обладающего газотранспортной функцией, улучшающего газообмен и метаболизм на уровне тканей.
- выдерживают полученную массу при перемешивании и встряхивании в течение 3 минут, это обеспечивает более полное взаимодействие сперматозоидов с перфтораном.
Совокупность существенных признаков изобретения позволяет повысить качественные показатели спермы: увеличить число подвижных сперматозоидов в эякуляте, увеличить дыхательную способность сперматозоидов, увеличить расчетный показатель Фарриса.
Перфторан - перфторуглеродное соединение - эмульсия-кровезаменитель, обладающий газотранспортной функцией, улучшающий газообмен и метаболизм на уровне тканей, повышающий кислородный транспорт крови, обладающий мембраностабилизирующей функцией, восстанавливающий центральную гемодинамику, обладающий протекторным действием на миокард и блокирующий медленно входящие токи. Обладает сорбционными, диуретическими свойствами, улучшает динамику кровотока и периферическую микроциркуляцию крови. Кислородная емкость перфторана в 3 раза выше кислородной емкости цельной крови (Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Иваницкий Г.Р., Пущино; 1999; 1: с.225.; Местное применение перфторана в лечении больных распространенным гнойным перитонитом. Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино; 2001. с.137-141; Биофизические основы создания перфторуглеродных сред и газотранспортных кровезаменителей (обзор) / Перфторорганические соединения в биологии и медицине. Пущино; 2001. с.44-48).
Утвержден к клиническому применению фармкомитетом РФ 24.06.1999 г. Производитель - ОАО НПФ "Перфторан" (Регистрационное удостоверение №96/50/10). 142299, г.Пущино Московской области, ИТЭБ РАН, корпус "Искусственной крови".
Состав: перфтордекалин - 13 г, префторметилциклогексила пиперидин - 6,5 г, проксанол - 4 г, натрия хлорид - 0,6 г, магния хлорид - 0,019 г, калия хлорид - 0,039 г, натрия гидрокарбонат - 0,065 г, глюкоза - 0,2 г, натрия гидрофосфат - 0,02 г, вода для инъекций до 100 мл.
Растворимость О2 6-7 об.% при рО2=760 мм рт.ст., вязкость - 2,5 сП, осмолярность - 280-310 мОсм/л, рН 7,22-7,8.
Фармакологические свойства: перфторан - кровезаменитель с газотранспортной функцией, применяется в качестве противошокового и противоишемического средства. Перфторан обладает реологическими, гемодинамическими, диуретическими, мембраностабилизирующими, кардиопротекторными и сорбционными свойствами.
Фармакокинетика: период полувыведения перфторана из кровяного русла составляет 24 часа. Поверхностно-активное вещество полностью покидает организм через почки в течение первых суток. Перфторуглероды химически инертны и в организме не метаболизируются. Перфторуглероды полностью выводятся из организма в течение 18-24 месяцев.
Показания: применяется в качестве кровезаменителя с газотранспортной функцией при шоковых состояниях, больших кровопотерях, множественных травмах, ожогах больших поверхностей тела, циррозах печени, множественных скелетных травмах, отравлениях угарным газом, комбинированных поражениях, перитонитах, состояниях клинической смерти, а также в трансплантологии при пересадке органов.
Выпускается во флаконах из стекла по 50, 100, 200, 400 мл.
Нами впервые перфторан был применен для обработки спермы для улучшения ее качественных показателей, повышения жизнеспособности и активности сперматозоидов.
Способ осуществляется следующим образом:
Методика получения и исследования эякулята унифицирована. Эякулят получают путем мастурбации после 3-4-дневного воздержания. Исследование начинается спустя 30 минут после сбора эякулята. Макроскопическое исследование: оценка объема, вязкости, запаха, цвета, реакции (рН). Микроскопическое исследование определяет количество, качество и подвижность сперматозоидов.
Для микроскопического исследования использовался бинокулярный микроскоп МС-50 (micros Austria), с увеличением до 1600х, ахромат объективы (4х, 10х, 40х, 100х). Исследование проводилось при комнатной температуре (не ниже +20°С). Для обзорной микроскопии использовали нативный препарат, приготовленный из свежего эякулята. Для подсчета процента подвижных и неподвижных форм использовали камеру Горяева с физиологическим раствором, а также разводящей жидкостью А.А.Рубенкова для подсчета общего числа сперматозоидов.
Обработку эякулята проводят следующим образом: на предметном стекле проводят разведение 0,4 мл эякулята в 0,4 мл физиологического раствора (0,9% раствор NaCl) и добавляют 0,1-0,6 мл перфторана, выдерживают при перемешивании и встряхивании в течение 3 минут. После этого эякулят повторно микроскопируют с подсчетом процента подвижных и неподвижных форм с использованием камеры Горяева.
По данной методике нами обработан 31 образец спермы.
Пример 1. Больной К., № ист. бол. К 8148, 25 лет, обратился в поликлинику на прием к урологу по поводу бесплодия в браке в течение 5 лет.
В анамнезе - перенес смешанный (микст-инфекцию) уреаплазменно-хламидийно-трихомонадный уретрит 7 лет назад, который осложнился орхоэпидидимитом. По данному поводу принимал лечение, которое не закончил.
При исследовании эякулята: количество сперматозоидов - 160 млн (в норме - более 40 млн). Живых - 81% (норма - 89-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 52% (норма - более 80%). Дыхательная способность сперматозоидов - 10 минут (норма 23-75 минут). Показатель Фарриса - 83,2.
Заключение: значительное снижение двигательной активности сперматозоидов.
Проводили разведение 0,4 мл эякулята в 0,4 мл физиологического раствора (0,9% раствор NaCl). Добавляли перфторан, изменяя его количество от 0,1 мл до 0,6 мл. Выдерживали при перемешивании и встряхивании в течение 3 минут. После этого эякулят повторно микроскопировали с подсчетом процента подвижных и неподвижных форм с использованием камеры Горяева.
| Таблица 1 Показатели спермограмм после добавления перфторана | ||||||
| Показатели спермограммы | Количество перфторана (мл) | |||||
| 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 0,6 | |
| Количество сперматозоидов | 160 млн | 160 млн | 160 млн | 160 млн | 160 млн | 160 млн |
| Живых | 81% | 81% | 81% | 81% | 81% | 81% |
| Нормокинезис | 58% | 66% | 72% | 79% | 84% | 84% |
| Дыхательная способность | 12 мин | 16 мин | 26 мин | 29 мин | 33 мин | 36 мин |
| Показатель Фарриса | 92,8 | 105,6 | 115,2 | 126,4 | 134,4 | 134,4 |
Отмечено значительное улучшение качественных показателей спермы.
Пример 2. Больной С., № ист. бол. К 5622, 29 лет, обратился в поликлинику на прием к урологу по поводу бесплодия в браке в течение 7 лет.
В анамнезе - хронический простатит. По данному поводу принимает лечение в настоящее время.
При исследовании эякулята: количество сперматозоидов - 86 млн (в норме - более 40 млн). Живых - 68% (норма - 89-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 32% (норма - более 80%). Дыхательная способность сперматозоидов - 17 минут (норма 23 - 75 минут). Показатель Фарриса - 27,6.
Заключение: значительное снижение двигательной активности сперматозоидов. Проводили обработку спермы предложенным способом.
| Таблица 2 Показатели спермограмм после добавления перфторана | ||||||
| Показатели спермограммы | Количество перфторана (мл) | |||||
| 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 0,6 | |
| Количество сперматозоидов | 86 млн | 86 млн | 86 млн | 86 млн | 86 млн | 86 млн |
| Живых | 68% | 68% | 68% | 68% | 68% | 68% |
| Нормокинезис | 38% | 40% | 58% | 66% | 72% | 73% |
| Дыхательная способность | 17 мин | 17 мин | 31 мин | 43 мин | 46 мин | 49 мин |
| Показатель Фарриса | 32,7 | 34,4 | 49,8 | 56,8 | 61,9 | 62,8 |
Отмечено значительное улучшение качественных показателей спермы.
Пример 3. Больной А., № ист. бол. К 6311, 36 лет, наблюдается в поликлинике по поводу бесплодия в браке в течение 10 лет.
В анамнезе - хронический простатит, эпидидимит. По данному поводу принимает лечение в настоящее время.
При исследовании эякулята: количество сперматозоидов - 69 млн (в норме - более 40 млн). Живых - 52% (норма - 89-90%). Нормокинезис (активно поступательные движения) - 42% (норма - более 80%). Дыхательная способность сперматозоидов - 11 минут (норма 23-75 минут). Показатель Фарриса - 28,9.
Заключение: значительное снижение двигательной активности сперматозоидов. Проводили обработку предложенным способом.
| Таблица 3 Показатели спермограмм после добавления перфторана | ||||||
| Показатели спермограммы | Количество перфторана (мл) | |||||
| 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 0,6 | |
| Количество сперматозоидов | 69 млн | 69 млн | 69 млн | 69 млн | 69 млн | 69 млн |
| Живых | 52% | 52% | 52% | 52% | 52% | 52% |
| Нормокинезис | 42% | 44% | 58% | 77% | 82% | 84% |
| Дыхательная способность | 19 мин | 21 мин | 31 мин | 42 мин | 44 мин | 44 мин |
| Показатель Фарриса | 28,9 | 30,3 | 40,1 | 53,1 | 56,6 | 57,9 |
Отмечено значительное улучшение качественных показателей спермы.
Таким образом, при добавлении в эякулят перфтораном от 0,1 до 0,6 мл увеличивается двигательная активность сперматозоидов в 1,5-2 раза, дыхательная способность в 2-2,5 раза, показатель Фарриса.
Наиболее оптимальным количеством перфторана является 0,3-0,4 мл. Так как при добавлении в данном количестве перфторана наблюдается наибольшее увеличение двигательной активности и дыхательной способности сперматозоидов. При увеличении количества перфторана до 0,5-0,6 мл наблюдается увеличение двигательной активности и дыхательной способности сперматозоидов, но не столь значительно. Это связано с насыщением эякулята кислородом, поэтому увеличение количества перфторана более 0,6 мл нецелесообразно.
Способ повышения качественных показателей спермы, отличающийся тем, что берут эякулят в количестве 0,4 мл, разводят в 0,4 мл физиологического раствора (0,9%-ной раствор NaCl), добавляют 0,3-0,6 мл перфторана и выдерживают при перемешивании и встряхивании в течение 3 мин.
