Способ оценки интенсивности воспалительной реакции в операционной ране

Изобретение относится к области медицины, а именно ранней диагностике инфекционно-воспалительных осложнений в хирургии. Способ позволяет провести оценку интенсивности воспалительной реакции в операционной ране путем исследования бактерицидной активности раневого отделяемого. Берут 20 мкл рекомбинантного тест-штамма Е.coli, несущего гены lux-оперона морской люминесцирующей бактерии Photobacterium leiognathi, в концентрации 10⁷-10⁸ КОЕ/мл, смешивают с равным объемом раневого отделяемого (опыт) и 0,85% раствора хлорида натрия (контроль). Обе пробы выдерживают при 37°С в течение 20 минут. Наносят на предметное стекло и подсчитывают количество светящихся клеток на единицу площади. Рассчитывают коэффициент бактерицидности по формуле: , где Ак и Ао - среднее значение количества светящихся объектов, определенное при автоматизированном обсчете 10 полей зрения в контроле и в опыте соответственно. При значении K_б>60% интенсивность воспалительной реакции оценивают как высокую, соответствующую развитию инфекционно-воспалительного осложнения в зоне хирургического вмешательства. Изобретение позволяет использовать способ при любых заболеваниях, требующих хирургического лечения, при этом исключаются инвазивные процедуры, повышается специфичность способа.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно ранней диагностике инфекционно-воспалительных осложнений в хирургии.

Известен способ определения интенсивности воспалительной реакции по лейкоцитарному индексу интоксикации (Колкер И.И., Жумадилов Ж.Ш. Профилактика послеоперационных гнойно-воспалительных осложнений. - Алма-Ата: Наука, 1988).

Недостатки прототипа: применим только к частным видам патологии, невысоко специфичен, требует инвазивных вмешательств не позволяет дифференцировать воспаление в послеоперационной ране от других инфекционно-воспалительных процессов.

Изобретение направлено на решение задачи: использование способа при любых заболеваниях, требующих хирургического лечения, исключение инвазивных процедур, упрощение при высокой точности.

Технический результат: повышение специфичности способа за счет расчета коэффициента бактерицидности раневого отделяемого; объективизация учета результатов благодаря регистрации изучаемых эффектов посредством микрофотосъемки и компьютерной обработке полученных изображений.

Указанные задачи достигаются путем определения коэффициента бактерицидности (К_б), величина которого зависит от активности бактерицидных компонентов раневого отделяемого, которая, согласно В.И.Зак и соавт.(Факторы естественной резистентности в хирургической клинике // В кн. Факторы естественного иммунитета. - Куйбышев. - 1983. - С.48-52), коррелирует со степенью воспаления в хирургической ране.

Для этого образцы раневого отделяемого, отобранные неинвазивным способом, смешивают с рекомбинантным тест-штаммом E.coli «Эколюм-5», разработанный на основе E.coli K12TG1 в МГУ им. М.В.Ломоносова, несущим гены lux-оперона морской люминесцирующей бактерии Photobacterium leiognathi. Уровень подавления люминесценции выражают в процентах, сравнивая количество светящихся бактериальных клеток в контроле и опыте.

Рассчитывают коэффициент бактерицидности по формуле

где

Значения К_б>60% указывают на развитие воспалительной реакции в зоне хирургического вмешательства. Раневое отделяемое обладает бактерицидными свойствами и при отсутствии воспаления, однако у большинства обследованных при неосложненном течении послеоперационного периода К_б<40%.

Ситуации, при которых 40%≤K_б≤60% характеризуют состояние повышенного риска развития осложнения в послеоперационном периоде.

Способ осуществляется следующим образом: раневое отделяемое отбирают стерильными меланжерами (неинвазивная процедура) и в течение двух часов доставляют в лабораторию. Затем рекомбинантный тест-штамм «Эколюм-5» в концентрации 10⁷-10⁸ КОЕ/мл в объеме 20 мкл смешивают с равным объемом раневого отделяемого (опыт). В контроле используют 0,85% раствор хлорида натрия. Пробы, периодически встряхивая, выдерживают при 37°С в течение 20 мин, после чего наносят 5 мкл смеси на стандартное предметное стекло с лункой и подсчитывают количество "светящихся" клеток на единицу площади с помощью морфометрической установки OLYMPUS, предусматривающей возможность фотосъемки в лучах УФ-света. Анализ полученных изображений проводят в программе «Морфология-Мастер», используя в качестве основного критерия показатель интенсивности свечения анализируемых объектов. Трансформируя полученное изображение в бинарное с учетом порога яркости дифференцируют «нежизнеспособные» клетки и рассчитывают коэффициент бактерицидности по вышеуказанной формуле.

Примеры конкретного выполнения:

Пример 1

Больная С., 65 лет, поступила в отделение экстренной хирургии ГКБ №2 г. Перми 25.07.2006 с жалобами на интенсивные разлитые боли но всему животу, больше в нижних отделах. Из анамнеза известно, что больна около 2 суток. Боли в животе возникли на фоне полного здоровья, за медицинской помощью не обращалась.

Объективно. Состояние больной ближе к тяжелому. Вялая, адинамичная, занимает вынужденное положение в постели с приведенными ногами к животу. Температура тела 37,8°. Черты лица заострены, язык сухой, обложен желтым налетом. Пульс 108 ударов в минуту, ритмичный, слабого наполнения. АД 100/60 мм рт.ст. При осмотре брюшной стенки отмечается равномерное вздутие, резкая болезненность в нижних отделах живота, больше справа, мышечное напряжение. Положительны симптомы Щеткина-Блюмберга, Воскресенского.

В общем анализе крови лейкоцитоз 7,9×10⁹, незначительный сдвиг лейкоцитарной формулы влево.

УЗИ брюшной полости: признаки воспалительного инфильтрата в правой подвздошной области, жидкость в малом тазу.

Ds: Острый деструктивный аппендицит. Диффузный перитонит.

Операция 25.07.2006 года: нижне-срединная лапаротомня, аппендэктомия, санация и дренирование брюшной полости. В послеоперационном периоде лечение в отделении реанимации. Назначен цефтриабол по 2 г в сутки, метрогил по 100 мл×3 раза в сутки, инфулионная и симптоматическая терапия.

Клиническое течение послеоперационного периода в первые 4 суток не отличалось особенностями, лейкоцитоз крови колебался от 10×10⁹ до 7,0×10⁹. Температура тела была субфебрильной. В течение 4 суток ежедневно исследовалось раневое отделяемое из брюшной полости. Определялся коэффициент бактерицидности. В течение 3 дней отмечалось его увеличение: 1 день - 42%, 2 - 59,9%, 3 - 67%, 4 - 71%. Принимая во внимание высокие значения K_б, выполнена послеоперационная лапароскопия: выявлено наличие прогрессирующего вялотекущего послеоперационного перитонита. Брюшная полость лапароскопически промыта и осушена, дополнительно дренирована. В дальнейшем на протяжении 5 дней коэффициент бактерицидности не превышал 40%. Больная выписана с выздоровлением на 14 сутки.

Пример 2

Пациента И., 58 лет, поступила в экстренной хирургии ГКБ №2 г. Перми 6.08.2006 года с жалобами на сильные боли в правом подреберье, рвоту, желтушность склер глаз. Заболела остро после употребления в пищу жареной картошки за 12 часов до поступления.

Объективно: Температура тела 38°С. Состояние больной средней степени тяжести. Кожные покровы физиологической окраски, сухие. Субиктеричность склер. Пульс 84 удара в минуту, ритмичный. АД 130/90 мм рт.ст. В легких дыхание везикулярное, хрипов нет. Передняя брюшная стенка участвует в акте дыхания. При пальпации отмечается напряжение мышц и резкая болезненность в правом подреберье. Пальпируется напряженный болезненный желчный пузырь. Положительные симптомы Ортнера-Грекова, Мерфи.

В общем анализе крови лейкоцитоз 12×10⁹ со сдвигом лейкоформулы влево.

УЗИ: имеется увеличенный желчный пузырь, стенка его утолщена до 6 мм, в просвете камень 2 см в диаметре, блокирующий шейку пузыря.

Ds: ЖКБ. Острый обтурационный деструктивный калькулезный холецистит.

Консервативная терапия без успеха. 7.08.2006 г. больная оперирована: холецистэктомия из мини-доступа, дренирование брюшной полости. Течение послеоперационного периода тяжелое - длительная фебрильная температура до 38°, боли в подреберье и животе, лейкоцитоз крови в течение 5 дней свыше 10×10⁹. Больной со второго дня выполнялось исследование раневою отделяемого из дренажа для определения коэффициента бактерицидности. В течение этого периода он не составлял более 40%, что позволило не вмешиваться повторно, а продолжить антибактериальную терапию. К 6 суткам температура тела нормализовалась. Больная выписана на 10 сутки послеоперационного периода с выздоровлением.

Пример 3

Больной П., 47 лет обратился в центр колопроктологии 12.09.06 с жалобами на резкую боль при дефекации, ректальные кровотечения. При обследовании выявлена гипертрофия наружных геморроидальных узлов, пролапс внутренних при натуживании. При ректальном исследовании в анальном канале на 6 часах имеется щелевидной формы дефект слизистой с фиброзированными краями и выраженной болезненностью при пальпации.

Диагноз: Хронический комбинированный геморрой третьей стадии.

Хроническая задняя анальная трещина.

После общеклинических тестов, которые не выявили значительных отклонений от нормы, больной оперирован. Выполнена закрытая геморроидэктомия по Фергюсону, боковая внутренняя сфинктеротомия, V-Y пластика. Назначения после операции ципролет по 0,5 два раза в день, кетанов при болях, сидячие ванночки, повязки с левосином. В послеоперационном периоде проводили исследование интенсивности воспалительной реакции. Отделяемое из анального канала забирали с помощью меланжера через 6, 18, 48 часов после операции. Коэффициент бактерицидности в исследуемых образцах составил соответственно 65%-63%-71%. Течение послеоперационного периода осложнилось субфебрильной лихорадкой с 3-го по 7-й день, местно отмечался выраженный перианальный отек, больной отмечал значительную болезненность в области раны. С 6-го дня дополнительно назначен парентеральный антибиотик, метронидазол, НВПС. С 10 дня отмечалась положительная динамика. На листке нетрудоспособности больной находился 23 дня.

Всего обследовано 73 пациента с неосложненным и 5 человек с осложненным течением послеоперационного периода.

Положительный эффект заявляемого способа состоит в следующем: способ высокоспецифичен и информативен при низкой себестоимости и трудоемкости, позволяет дифференцировать интенсивность воспалительной реакции в послеоперационной ране, выявляя инфекционно-воспалительное осложнение в ранние сроки, исключает травмирующие инвазивные вмешательства, а также обеспечивает экспрессность и объективность оценки получаемых результатов.

Способ оценки интенсивности воспалительной реакции в операционной ране путем исследования бактерицидной активности раневого отделяемого, отличающийся тем, что 20 мкл рекомбинантного тест-штамма Е.Coli, несущего гены lux-оперона морской люминесцирующей бактерии Photobacterium leiognathi, в концентрации 10⁷-10⁸ КОЕ/мл смешивают с равным объемом раневого отделяемого (опыт) и 0,85% раствора хлорида натрия (контроль), обе пробы выдерживают при 37°С в течение 20 мин, наносят на предметное стекло и подсчитывают количество светящихся клеток на единицу площади, затем рассчитывают коэффициент бактерицидности по формуле:

где А_к и А_о - среднее значение количества светящихся объектов, определенное при автоматизированном обсчете 10 полей зрения в контроле и в опыте соответственно и при значении K_б>60% интенсивность воспалительной реакции оценивают как высокую, соответствующую развитию инфекционно-воспалительного осложнения в зоне хирургического вмешательства.