Способ сохранения возбудителя ложной мучнистой росы (лмр) подсолнечника

Изобретение предназначено для использования в селекции подсолнечника с устойчивостью к возбудителю ложной мучнистой росы (ЛМР). Собирают ткани больных ЛМР растений для взятия с них возбудителя ЛМР. Затем искусственно заражают возбудителем ЛМР семена восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника. Хранят зараженный резерватор инфекции при низкой температуре и используют его в качестве источника первичной инфекции. Собранные ткани больных ЛМР растений помещают во влажную камеру на 15-18 часов, вынимают для приготовления водной суспензии возбудителя ЛМР путем смывания водой в сосуд с собранных тканей белого налета, содержащего мицелий гриба ЛМР и ооспоры. Концентрацию полученной суспензии доводят до 90000-100000 зооспорангиев в 1 мл воды. В готовую суспензию помещают семена восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника, выдерживают в течение суток при температуре 16-18°С, затем извлекают из суспензии, сушат при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния и помещают в стерильные колбы с пробкой для хранения и используют в качестве источника первичной инфекции ЛМР, т.е. для приготовления инокулюма. Способ позволяет сохранить возбудитель ЛМР подсолнечника в силе до 2-х лет и обеспечивает его использование в любое время года как источник первичной инфекции ЛМР. 10 з.п. ф-лы, 1 табл.

 

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано в селекции подсолнечника на устойчивость к ложной мучнистой росе.

Ложная мучнистая роса (ЛМР) поражает многие сельскохозяйственные культуры. На подсолнечнике это заболевание является одним из наиболее распространенных, вследствие высокого уровня вредоносности ложная мучнистая роса представляет собой значительную проблему во многих странах возделывания подсолнечника. Возбудитель этой болезни на подсолнечнике - гриб Plasmopara helianthi Novot. (син. P.halstedi Farl.).

Одним из эффективных средств борьбы против этого заболевания является селекция сортов и гибридов подсолнечника на устойчивость к ложной мучнистой росе. Оценка устойчивости растений подсолнечника к ложной мучнистой росе в естественных условиях затруднена, так как погодные условия не всегда благоприятны для эпифитотивного развития болезни. В связи с этим зачастую приходится применять искусственное заражение растений возбудителем ложной мучнистой росы. Так как в природе не всегда можно собрать инфекционный материал в нужный момент, очень актуальным является разработка способа сохранения и оживления возбудителя ложной мучнистой росы.

Известен способ сохранения гриба ЛМР в течение зимы в почве, искусственно зараженной возбудителем этой болезни растений подсолнечника, принятый нами за прототип (кн. Н.С.Новотельнова, Ложная мучнистая роса, Изд-во «Наука», Москва - Ленинград, 1966, с.98). Согласно известному способу осенью берут ткани больных растений подсолнечника, содержащие ооспоры возбудителя ЛМР, и ими искусственно заражают почву, зараженную почву помещают на зиму в естественные условия, а весной эту почву используют в качестве резерватора инфекции.

Недостатком известного способа сохранения возбудителя ложной мучнистой росы подсолнечника является отсутствие возможности использования сохраняемого возбудителя ЛМР в любое время года (только весной) и относительно короткий срок его сохранения (в естественных условиях зимы).

Настоящим изобретением решается задача обеспечения возможности оценки подсолнечника на устойчивость к ложной мучнистой росе при его искусственном заражении в любое необходимое для селекционера время.

Цель изобретения - сохранение возбудителя ЛМР подсолнечника в силе в течение длительного периода (до двух лет) и обеспечение возможности его использования в любое время года в виде источника первичной инфекции ЛМР.

Технический результат достигается тем, что в известном способе, включающем сбор тканей больных ЛМР растений подсолнечника, искусственное заражение возбудителем ЛМР резерватора инфекции, хранение зараженного резерватора инфекции ЛМР при низкой температуре и использование его в качестве источника первичной инфекции ЛМР, согласно изобретению в качестве резерватора инфекции ЛМР используют семена восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника, для заражения же резерватора инфекции возбудителем ЛМР собранные ткани больных ЛМР растений подсолнечника помещают во влажную камеру, через 15-18 часов их вынимают из камеры и используют для приготовления водной суспензии возбудителя ЛМР, для чего с вынутых из влажной камеры тканей больных ЛМР растений смывают водой в сосуд белый налет и доводят концентрацию суспензии до 90000-100000 зооспорангиев в 1 мл воды, в приготовленную водную суспензию возбудителя ЛМР помещают семена восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника, выдерживают их в ней в течение суток при температуре 16-18°С, затем их извлекают из суспензии, высушивают при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния, помещают в стерильные колбы с пробкой для хранения, причем в качестве тканей больных ЛМР растений используют листья с пораженных возбудителем ЛМР растений подсолнечника с белым налетом на их нижней стороне, сбор же листьев с белым налетом возбудителя ЛМР осуществляют весной в поле с пораженными ЛМР растениями подсолнечника, собранные же листья транспортируют до влажной камеры в бумажных пакетах, не допуская их высыхания, и смывают белый налет с них в сосуд дождевой водой, приготовленную же водную суспензию возбудителя ЛМР перед помещением в нее резерватора инфекции (семян восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника) выдерживают в течение 1,5-2 часов при температуре не выше 20°С, а после извлечения резерватора инфекции ЛМР (зараженных семян подсолнечника) из суспензии его высушивают до влажности не более 7%, колбы же с резерватором инфекции ЛМР хранят при температуре +3-+5°С, например в холодильнике, хранят резерватор инфекции ЛМР не более двух лет и используют его в качестве источника первичной инфекции ЛМР в любое время года, а в качестве пробки для колбы с резерватором инфекции ЛМР используют ватно-марлевый тампон.

Сопоставительный анализ заявляемого технического решения с прототипом позволяет сделать вывод, что заявляемый способ сохранения возбудителя ложной мучнистой росы подсолнечника отличается от известного совокупностью действий и условиями осуществления действий (режимом и используемым веществом - сырьем):

- используемым веществом:

- в прототипе в качестве резерватора инфекции используют почву, а в заявляемом изобретении - семена восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника;

- действиями, осуществляемыми при искусственном заражении резерватора инфекции: в прототипе собранные ткани больных ЛМР растений смешивают с почвой, а в заявляемом изобретении собранные ткани больных ЛМР растений помещают во влажную камеру, через 15-18 часов их вынимают из влажной камеры и используют для приготовления водной суспензии возбудителя ЛМР концентрацией 90000-100000 зооспорангиев в 1 мл воды и в приготовленную водную суспензию помещают семена восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника, выдерживают их в водной суспензии в течение суток при температуре 16-18°С, затем их извлекают из суспензии, высушивают при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния и помещают в стерильные колбы с пробкой для хранения;

- режимом хранения зараженного резерватора инфекции: в прототипе зараженную почву помещают на зиму в природные условия, а весной эту почву с перезимовавшими ооспорами используют в качестве источника первичной инфекции ЛМР, а в заявляемом изобретении зараженные семена восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника помещают в стерильные колбы с пробкой, хранят при температуре +3-+5°С, например в холодильнике, в течение не более 2-х лет и используют в качестве источника первичной инфекции ЛМР в любое время года.

Таким образом, заявляемый способ соответствует критерию патентоспособности НОВИЗНА.

Исследуя уровень техники в процессе проведения патентного поиска по всем видам сведений, общедоступных в печати, мы не обнаружили тождественных заявляемому способу решений, а заявляемый способ сохранения возбудителя ложной мучнистой росы подсолнечника, включающий заявленную совокупность признаков, для специалиста в области селекции подсолнечника явным образом не следует из известного на сегодня существующего уровня техники. На основании этого можно сделать вывод о соответствии заявляемого изобретения критерию патентоспособности ИЗОБРЕТАТЕЛЬСКИЙ УРОВЕНЬ.

Заявляемое техническое решение соответствует и критерию патентоспособности ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ, так как оно может быть использовано в сельском хозяйстве.

Способ осуществляют следующим образом: начинают со сбора тканей больных ЛМР растений подсолнечника, для этого весной в поле с посевами подсолнечника собирают листья с белым налетом с пораженных ЛМР растений. Собранные ткани больных ЛМР растений помещают во влажную камеру на 15-18 часов, после чего их вынимают из влажной камеры и используют для приготовления водной суспензии возбудителя ЛМР, для чего из вынутых из влажной камеры тканей больных ЛМР растений смывают водой в сосуд белый налет, доводят концентрацию суспензии до 90000-100000 зооспорангиев в 1 мл воды и ею заражают резерватор инфекции, в качестве которого используют семена восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника. Для искусственного заражения резерватора инфекции возбудителем ЛМР семена помещают в приготовленную суспензию, выдерживают их в ней в течение суток при температуре 16-18°С, затем извлекают их из суспензии, высушивают при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния, помещают в стерильные колбы с пробкой, которые хранят при низкой температуре, например при +3-+5°С, и используют в качестве источника первичной инфекции ЛМР в любое время года на протяжении не более двух лет.

Пример осуществления способа.

Опыт проводили в условиях Краснодарского края. Весной на посевах подсолнечника отбирали больные растения в фазе второй пары настоящих листьев с признаками поражения ложной мучнистой росой и с них собирали листья с хлоротичными пятнами на верхней стороне листьев и белым войлочным налетом с нижней их стороны. Собранные листья помещали в бумажные пакеты и транспортировали в лабораторию, не допуская их высыхания, там листья помещали во влажную камеру на 15-18 часов при температуре 16-18°С, для прорастания зооспорангиев, находящихся в белом налете листьев. Затем листья вынимали из влажной камеры и кисточкой смывали с них белый налет в химический стакан дождевой водой. Путем разведения суспензии водой (15-18°С) концентрацию зооспорангиев доводили до 90000-100000 тыс. в 1 мл воды, что приблизительно соответствует 90 конидиям в 225 клетках камеры Горяева. Полученную водную суспензию возбудителя ЛМР с температурой до 18°С оставляли на 1,5 часа для отрождения зооспор. После этого семена восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника ВНИИМК 8883 улуч. полностью погружали в эту суспензию и оставляли на 5, 18 и 24 часа для заражения. Затем зараженные семена извлекали из суспензии и раскладывали на фильтровальной бумаге, высушивали их до воздушно-сухого состояния при комнатной температуре. Высушенные семена помещали в стерильные колбы с ватно-марлевой пробкой и хранили их в течение различного количества времени в холодильнике при температуре +3-+5°С. Результаты эксперимента помещены в таблицу.

Распространенность возбудителя ложной мучнистой росы в зависимости от времени замачивания и длительности хранения инфицированных возбудителем ЛМР семян подсолнечника, %

Длительность хранения, месяц	Время замачивания семян, ч
5	18	24
5	8,8	19,6	28,7
10	5,3	15,9	26,2
16	1,4	10,0	23,2
24	0	2,5	7,3

Для использования резерватора инфекции ЛМР в качестве источника первичной инфекции ЛМР и размножения возбудителя ложной мучнистой росы зараженные семена подсолнечника вынимали из колбы и проращивали в чашках Петри в течение 2-х дней, затем их высевали в ящики, заполненные смесью земли и песка в соотношении 1:1. выращивали из этих семян растения в ящиках в течение 10-12 дней, после чего создавали им влажную камеру и через 12-15 часов получали спороношение гриба ЛМР на семядольных листьях этих растений подсолнечника, достаточное для приготовления инокулюма.

В результате исследований пришли к выводу, что при замачивании семян в водной суспензии возбудителя ЛМР не менее 24 часов указанная инфекция может сохраняться в холодильнике до двух лет без потери жизнеспособности и патогенных свойств.

Помещение во влажную камеру на 15-18 часов собранных тканей больных ЛМР растений подсолнечника обеспечивает условия для прорастания зооспорангиев и появления спороношения на них, что, в свою очередь, обеспечивает получение сильного и качественного возбудителя ЛМР, необходимого для эффективного искусственного заражения им резерватора инфекции ЛМР.

Использование семян восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника в качестве резерватора инфекции и их искусственное заражение возбудителем ЛМР путем помещения на сутки в водную суспензию последнего при температуре 16-18°С обеспечивают однородность заражения возбудителем ЛМР по всей массе резерватора инфекции ЛМР.

Приготовление водной суспензии возбудителя ЛМР путем смыва водой в сосуд белого налета с тканей больных ЛМР растений подсолнечника и доведение концентрации суспензии до 90000-100000 зооспорангиев в 1 мл воды обеспечивают необходимую и достаточную концентрацию возбудителя ЛМР для оптимального нанесения его на частички резерватора инфекции ЛМР и сохранения его в «силе».

Извлечение зараженных возбудителем ЛМР семян из суспензии, высушивание их при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния, помещение их в стерильные колбы с пробкой обеспечивают сохранение действующих свойств возбудителя ЛМР на протяжении длительного периода (до двух лет) и возможность его использования в любое время года.

Эти отличительные от прототипа признаки заявляемого изобретения необходимы и достаточны для того, чтобы сохранять возбудитель ЛМР в силе в течение длительного периода (до двух лет) и обеспечивать возможность его использования в любое время года в виде источника первичной инфекции ЛМР, что, в свою очередь, обеспечивает возможность оценки подсолнечника на устойчивость к ЛМР при его искусственном заражении в любое необходимое для селекционера время.

Итак, совокупность существенных признаков заявляемого изобретения обеспечивает достижение поставленной цели и решение поставленной задачи.

1. Способ сохранения возбудителя ложной мучнистой росы (ЛМР) подсолнечника, включающий сбор тканей больных ЛМР растений подсолнечника, искусственное заражение возбудителем ЛМР резерватора инфекции, хранение зараженного резерватора инфекции ЛМР при низкой температуре и использование его в качестве источника первичной инфекции ЛМР, отличающийся тем, что в качестве резерватора инфекции ЛМР используют семена восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника, а для заражения резерватора инфекции возбудителем ЛМР собранные ткани больных ЛМР растений подсолнечника помещают во влажную камеру на 15-18 ч и после извлечения из камеры используют для приготовления водной суспензии возбудителя ЛМР, для чего с извлеченных из камеры тканей больных растений смывают водой в сосуд белый налет и доводят концентрацию суспензии до 90000-100000 зооспорангиев в 1 мл воды, в приготовленную водную суспензию возбудителя ЛМР помещают семена восприимчивого к ЛМР сорта подсолнечника, выдерживают их в ней в течение суток при температуре 16-18°С, затем их извлекают из суспензии, высушивают при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния и помещают в стерильные колбы с пробкой для хранения.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве тканей больных ЛМР растений используют листья с пораженных возбудителем ЛМР растений подсолнечника с белым налетом на их нижней стороне.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что сбор листьев с белым налетом возбудителя ЛМР осуществляют весной в поле с пораженными ЛМР растениями подсолнечника.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что собранные с пораженных ЛМР растений подсолнечника листья транспортируют до влажной камеры в бумажных пакетах и помещают в последнюю, не допуская высыхания листьев.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что белый налет с собранных листьев смывают в сосуд дождевой водой.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что приготовленную водную суспензию возбудителя ЛМР перед помещением в нее резерватора инфекции выдерживают в течение 1,5-2 ч при температуре не выше 20°С.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что после извлечения резерватора инфекции из суспензии его высушивают до влажности не более 7%.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что колбы с резерватором инфекции ЛМР хранят при температуре (+3)-(+5)°С, например в холодильнике.

9. Способ по п.1, отличающийся тем, что хранят резерватор инфекции ЛМР не более двух лет.

10. Способ по п.1, отличающийся тем, что хранящийся резерватор инфекции ЛМР используют в качестве источника первичной инфекции ЛМР в любое время года.

11. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве пробки для колбы с резерватором инфекции ЛМР используют ватно-марлевый тампон.