Способ выделения гиалуроновой кислоты из шкур
Владельцы патента RU 2420295:
Федеральное государственное учреждение "Российский научный центр "Восстановительная травматология и ортопедия" имени академика Г.А. Илизарова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" (RU)
Изобретение относится к области медицины, косметологии и к производству биологически активных веществ. Для выделения гликозаминогликанов из шкур проводят экстракцию, протеолиз и осаждение. Для экстракции используют 0,9%-ный раствор NaCl, для ферментативного протеолиза используют фермент папаин, для осаждения используют 4% спиртовый раствор калия ацетата. Использование способа позволяет получить целевой продукт с наименьшими затратами на его производство. 1 ил.
Изобретение относится к области медицины, косметологии и к производству биологически активных веществ. Получаемый в результате его осуществления продукт предназначен для восстановления структуры кожных покровов, а также для получения препаратов хндропротекторного действия.
Известен способ получения гиалуроновой кислоты включающий многостадийную экстракцию измельченных петушиных гребней, в котором для осаждения уксусной кислотой используют пятую и последующие вытяжки, а после обработки щелочью последовательно производят ферментный гидролиз белка, ультрафильтрацию, спиртоосаждение этанолом и последующее растворение осадка в водном растворе последнего (Пат. №2157381 RU. Опубл. 2000.10.10).
Однако известный способ имеет малодоступное сырье, имеет большие затраты по времени и реактивам, трудоемок в осуществлении.
Задачей настоящего изобретения является разработка экономичного по расходу времени и реактивов адекватного способа получения гиалуроновой кислоты.
Поставленная задача решается тем, что в способе выделения гиалуроновой кислоты из шкур, включающем измельчение, экстракцию, протеолиз и осаждение, шкуры замораживают и измельчают до стружки, после этого замораживают повторно и осуществляют экстракцию нагретым до 80°С раствором 0,9%-ного хлорида натрия в тройном объеме от количества стружки, а для ферментативного протеолиза используют фермент папаин из расчета 100 мг на 1 л экстракта термостатируя экстракт при температуре 40°С 24 часа, затем осаждают гиелуроновую кислоту из протеолизата добавлением равного объема 4%-ного калия ацетата в этаноле, осадок отделяют декантацией и вновь растворяют в дистиллированной воде, после чего раствор гиалуроновой кислоты подвергают низкотемпературной вакуумной сушке.
Настоящее изобретение поясняют подробным описанием, примером его осуществления и схемой, на которой иллюстрированы основные этапы осуществления способа.
Способ осуществляют следующим образом
После предварительной механической очистки шкур свиней от сала и жира шкуры замораживают и измельчают до стружки. Полученную таким образом стружку свиных шкур вновь замораживают, после чего прибавляют нагретый до 80°С раствор 0,9%-ного хлорида натрия в тройном объеме от количества стружки. Полученный экстракт фильтруют на складчатом фильтре. После чего помещают в емкость и добавляют папаин из расчета 100 мг на 1 л экстракта. Емкость помещают в термостат при температуре 40°С на 24 часа. Осаждение гиалуроновой кислоты из протеолизата осуществляют добавлением равного объема 4%-ного калия ацетата в этаноле. Осадок отделяют декантацией и вновь растворяют в дистиллированной воде. Раствор гиалуроновой кислоты подвергают низкотемпературной вакуумной сушке.
Пример лабораторного выполнения. Этапы отражены на схеме.
Шкуру свиньи весом 100 г очищают скальпелем от остатков сала и жира и замораживают при температуре -76°С. Замороженную шкуру измельчают на бытовой терке и вновь замораживают в тех же условиях. Замороженную стружку шкуры свиньи помещают в термостойкий стакан и приливают 300 мл 0,9%-ного натрия хлорида, нагретого до температуры 80°С. Содержимое стакана перемешивают и декантацией сливают надосадочный раствор. К оставшейся части стружки вновь приливают 300 мл 0,9%-ного натрия хлорида, нагретого до температуры 80°С, и так же декантируют. Экстракты объединяют. Затем к полученному экстракту прибавляют 60 мг папаина и помещают в термостат при 40°С на 24 часа. После чего к полученному протеолизату прибавляют 600 мл 4%-ного калия ацетата в этаноле. Полученный осадок декантируют и осушают на воронке Бюхнера. Помещают полученный осадок в химический стакан и растворяют в дистиллированной воде. Раствор гиалуроновой кислоты подвергают низкотемпературной вакуумной сушке, в результате чего получают лиофилизат гиалуроновой кислоты.
Предлагаемый способ прост в осуществлении, позволяет воспроизводить его в не только условиях лаборатории научно-исследовательского учреждения, но и для промышленного производства, так как в качестве сырья используют шкуры животных.
Для его осуществления не требуется применения дорогостоящих реактивов - специфических осадителей ГАГ и большого количества протеолитических ферментов.
Кроме того, этот способ экономичен по времени, дает возможность повторного использования этанола при его повторном использовании, после последующий перегонки и позволяет получить очищенный целевой продукт.
Предлагаемый способ разработан и используется в лаборатории биохимии клинико-экспериментального отдела ФГУ «РНЦ «ВТО» им. академика Г.А.Илизарова.
Способ выделения гиалуроновой кислоты из шкур, включающий измельчение, экстракцию, протеолиз и осаждение, отличающийся тем, что шкуры замораживают и измельчают до стружки, после этого замораживают повторно и осуществляют экстракцию нагретым до 80°С раствором 0,9%-ного хлорида натрия в тройном объеме от количества стружки, а для ферментативного протеолиза используют фермент папаин из расчета 100 мг на 1 л экстракта, термостатируя экстракт при температуре 40°С 24 ч, затем осаждают гиалуроновую кислоту из протеолизата добавлением равного объема 4%-ного калия ацетата в этаноле, осадок отделяют декантацией и вновь растворяют в дистиллированной воде, после чего раствор гиалуроновой кислоты подвергают низкотемпературной вакуумной сушке.
