Способ определения маркера развития ревматоидного артрита на основе выявления укорочения относительной длины теломер на отдельных хромосомах в т-лимфоцитах периферической крови

Авторы патента:

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

Владельцы патента RU 2522961:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт клинической иммунологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИКИ" СОРАМН) (RU)

Изобретение относится к области медицины, включающей исследования биологического материала, и касается определения относительной длины теломер на хромосомах. Способ заключается в выявлении укорочения относительной длины теломер на отдельных хромосомах Т-лимфоцитов периферической крови с помощью метода количественной флуоресцентной гибридизации in situ (Q-FISH). Результативный показатель длины теломер вычисляют как отношение среднего значения интенсивности флюоресценции теломер определенной хромосомы (для каждого из плеч отдельно) к среднему значению интенсивности флюоресценции теломер всех хромосом в метафазе. Укорочение относительной длины теломер на коротком плече 4 хромосомы у пациентов с ревматоидным артритом в сравнении с донорами расценивают как маркер развития заболевания. Изобретение позволяет с достаточной информативностью и специфичностью определить риск развития данного вида аутоиммунной патологии. 3 ил., 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к исследованиям биологического материала, в частности к определению относительной длины теломер на хромосомах.

В настоящее время во всем мире отмечается рост числа аутоиммунных заболеваний, обусловленный, с одной стороны, бурным прогрессом социально-экономических условий жизни, урбанизацией и индустриализацией общества с резким увеличением скученности населения, с другой - влиянием экологически неблагоприятных факторов. Наряду с сердечно-сосудистой и онкологической патологией аутоиммунные заболевания, в частности ревматоидный артрит, представляют особый интерес. Пик заболеваемости иммунопатологическими заболеваниями приходится на вторую половину жизни населения: среди лиц моложе 35 лет распространенность ревматоидного артрита составляет 0,38%, в возрасте 55 лет и старше - 1,4%, а средняя продолжительность жизни у данной категории граждан снижена до 58 лет. До сих пор нет однозначного объяснения причин и механизмов развития заболеваний, связанных с аутоиммунными реакциями против собственных клеток организма. Это делает невозможным проведение эффективных профилактических и лечебных мероприятий у данной группы больных, что обусловливает широкий поиск как средовых, так и генетических факторов, ответственных за этиологию аутоиммунных заболеваний.

Последние исследования показали, что вклад генетических факторов в детерминацию ревматоидного артрита превалирует над вкладом средовых факторов. Наследуемость РА колеблется от 50 до 90%. Одним из первых исследовался главный комплекс гистосовместимости (МНС), вклад которого в развитие РА оценивается от 30% до 70% от общего генетического эффекта (наиболее вероятная ассоциация с HLA-DR4 гаплотипом).

Остальной вклад приходится на гены из других частей генома и по этой причине ведутся обширные исследования во всем мире по картированию этих генов. Такими генами «предрасположенности» к РА являются ген рецепторов фактора некроза опухоли (ФНО) и ген лиганда CD 40, которые находятся на одном из участков Х-хромосомы. Еще одним генетическим маркером ревматоидного артрита считается ген IDDM9 (3 хромосома). Наличие данного гена повышает риск развития ревматоидного артрита на 27%.

Немаловажную роль в этиологии и патогенезе заболевания играет Т-клеточный иммунитет. В связи с этим ген TCRD на 17 хромосоме (рецепторов Т-клеток) также является ответственным за возникновение ревматоидного артрита.

Результаты целого ряда исследований показали, что мутация гена р53 приводит к возникновению его аномальных функций, что вызывает развитие костной деструкции. При ревматоидном артрите у многих пациентов отмечается аномальный биосинтез Fas-белка, вызванный мутацией Fas-гена.

На сегодняшний день известно, что активность гена может быть изменена не только вследствие его мутации, но и действия на него, так называемого, позиционного эффекта теломер “telomeric position effect” (ТРЕ). Данный феномен относительно генов определяется как «сайленсинг» - подавление экспрессии генов, расположенных в субтеломерных регионах ДНК, через блокирование промоторов этих генов теломерным гетерохроматином [3]. Таким образом, укорочение теломер должно сопровождаться потерей репрессирующей активности теломерного гетерохроматина на гены субтеломерного региона ДНК и повышению их экспрессии. Например, одним из генетических маркеров тяжелого течения РА является повышение экспрессии гена BST1 (bone marrow stromal cell antigen) в синовиальных клетках пациентов с РА [2]. Тем не менее, причины увеличения экспрессии данного гена установлены не были.

Теломерами называют специализированные функциональные комплексы, которые находятся на концах эукариотических хромосом и защищают последние от слияния друг с другом, тем самым, поддерживая целостность генома клетки [1]. Каждое клеточное деление сопровождается прогрессивным укорочением теломер, которое, достигая определенного порогового уровня, приводит к нестабильности генома, старению и апоптозу клетки.

Изобилие генов-кандидатов, так или иначе связанных с развитием РА, определяет развитие исследовательских работ в области изучения влияния разнообразных генетических факторов на экспрессию данных генов. Одним из этих факторов является укорочение длины теломер на определенных хромосомах в норме и при патологии. Определение длины теломер на отдельных хромосомах при ревматоидном артрите, таким образом, позволяет установить особенности распределения и укорочения длины теломер при данном виде аутоиммунной патологии, а закономерности, выявленные на уровне определенных хромосом, служат дополнительным маркером развития данного заболевания. Выявленный таким образом маркер развития ревматоидного артрита позволяет улучшить эффективность как популяционно-ориентированных профилактических программ (скрининговое определение ревматоидного фактора, например), так и индивидуальных превентивных мероприятий (противовоспалительная терапия, проводимая у пациентов с очень высоким риском развития аутоиммунной патологии).

Целью изобретения является создание способа определения маркера развития ревматоидного артрита, основанного на выявлении укорочения относительной длины теломер на отдельных хромосомах Т-лимфоцитов периферической крови, который позволяет с достаточной информативностью и специфичностью определить риск развития данного вида аутоиммунной патологии.

С помощью цитогенетического метода количественной гибридизации in situ (Quantitative Fluorescent in situ hybridization (Q-FISH)) определяют относительную длину теломер на отдельных хромосомах Т-лимфоцитов периферической крови больного как отношение среднего значения интенсивности флюоресценции теломер определенной хромосомы (для каждого из плеч отдельно) к среднему значению флюоресценции теломер всех хромосом в метафазе. Относительную длину теломер хромосом больных сравнивают с относительной длиной теломер у здоровых доноров, соответствующим им по возрасту. Укорочение относительной длины теломер на коротком плече 4 хромосомы больного относительно аналогичного показателя здорового донора расценивают как маркер развития ревматоидного артрита.

Описание способа с примерами конкретной реализации.

5 мл периферической крови, стабилизированной с гепарином, центрифугируют в градиенте фиколл-верографин в течение 20 мин при 2,7 тыс.об/мин в медицинской лабораторной центрифуге, после чего кольцо мононуклеарных клеток собирают и отмывают дважды с 5 мл забуференного физиологического раствора с ЭДТА и азидом Na (ЗФР-ЭА) по 5 мин при 1 тыс.об/мин. Осадок ресуспендируют в 1 мл ЗФР-ЭА и подсчитывают количество клеток в камере Горяева.

Для гибридизации используют 2·10⁶ клеток на одну пробу. Исходя из этого, необходимое количество клеток снова осаждают центрифугированием и ресуспендируют осадок в полной среде RPMI 1640 с добавлением 2 мг тиенама, 125 мкл гентамицина и 30 мг L-глютамина на 100 мл среды и помещают в лунки 24-луночного планшета из расчета 2 млн клеток на 1 мл полной среды с 10% FBS и митогеном для Т-лимфоцитов (РНА-Р в конечной концентрации 10 мкг/мл). Тщательно пипетируют, планшет помещают в СO₂-инкубатор с температурой 37°С на 72 ч. За 7,5 ч до конца культивирования добавляют раствор бромистого этидия (в конечной концентрации 10 мкг/мл), за 6 ч до окончания - раствор колхицина (в конечной концентрации 0,1 мкг/мл). По окончании культивирования суспензию клеток переносят в пробирки, центрифугируют, сливают культуральную среду.

Осажденные клетки ресуспендируют, к оставшемуся осадку аккуратно добавляют 1-2 мл гипотонического раствора КСl, осторожно взбалтывая пробирку. Затем доводят гипотоническим раствором до общего объема 9 мл. Суспензию тщательно перемешивают и помещают на 30-50 мин в термостат или на 8-10 мин на водяную баню с температурой 37°С. По истечении времени гипотонии проводят предфиксацию: в суспензию добавляют несколько капель свежеприготовленного фиксирующего раствора (18 капель на 9 мл суспензии), аккуратно перемешивают и выдерживают 10-15 мин в холодильнике при 4°С. Затем центрифугируют, сливают надосадочную жидкость, клеточный осадок ресуспендируют и аккуратно «капля-за-каплей» заливают небольшим количеством (1-2 мл) свежеприготовленного охлажденного до -20°С фиксатора, осторожно взбалтывая пробирку, и оставляют в холодильнике при -20°С на 30 мин. По истечении времени центрифугируют, добавляют свежий фиксатор в нужном объеме (400-500 мкл), переносят в пробирки эппендорф и хранят в морозильной камере при -20°С до использования.

Для приготовления препаратов используют обезжиренные чистые тонкие (76×26×1 мм) стекла фирмы Menzel GmbH+Со KG. Перед приготовлением препаратов стекла выдерживают в концентрированной соляной кислоте не менее 30 мин, затем стекла тщательно ополаскивают водопроводной и дистиллированной водой, помещают в стакан с дистиллированной водой и охлаждают в холодильнике.

Перед приготовлением препаратов суспензию ядер центрифугируют, ресуспендируют в небольшом объеме фиксатора (100 мкл). На влажное предметное стекло наносят 15 мкл суспензии хромосом и высушивают на водяной бане при 50°С. Затем сверху капают 15 мкл фиксатора, стекло выдерживают на водяной бане при той же температуре до полного высыхания. После подсушивания препарат проверяют на фазово-контрастном микроскопе на предмет качества распластывания хромосом. После раскапывания препарат прогревают 1 ч в термостате при 65°С.

Перед проведением гибридизации проводят регидратацию препаратов путем погружения в 150 мл PBS буфера на 15 мин при комнатной температуре. Затем фиксируют слайды в 4% растворе параформальдегида в течение 2 мин с последующей трехкратной отмывкой в PBS буфере по 5 мин каждая. Препараты метафазных хромосом обрабатывают пепсином в растворе 0,01 N НСl, рН 2,0 в течение 10 мин при 37°С. Отмывают дважды в PBS буфере по 2 мин. Повторяют фиксацию в 4% растворе параформальдегида с последующими отмывками. Затем препараты проводят через серию растворов этилового спирта возрастающей концентрации (70%, 90%, 96%) и высушивают при комнатной температуре. На сухую поверхность препарата наносят 2 капли по 10 мкл гибридизационного раствора В под покровное стекло размером 24×60. Затем проводят денатурацию ДНК в термостате при 80°С в течение 10 мин. Далее переносят препараты во влажную камеру и гибридизуют 2 ч при комнатной температуре в темноте. После гибридизации препараты отмывают 2 раза по 15 мин в отмывочном растворе №1 и 3 раза по 5 мин в отмывочном растворе №2 на шейкере. Затем препараты дегидратируют в растворах этилового спирта возрастающей концентрации (70%, 90%, 96%) и высушивают грушей. Препараты окрашивают DAPI (0,1 мкг/мл) под покровное стекло в течение 20 мин в темноте, затем осторожно снимают покровное стекло, наносят раствор Antifade Pro Long Gold, покрывают новым покровным стеклом и скрепляют клеем.

Препараты анализируют на микроскопе “Axioplan 2 Imaging E-mot” (ZEISS), оснащенном лампами флуоресцентного и видимого света, с комплектом интерференционных фильтров фирмы CHROMA, для проведения 24-цветной FISH. Ввод цифровой информации с помощью CCD-камеры CV М300; JAI Corporation, Japan, матрица 752 на 582 пиксела. PC (P-IV, 1,7 GH, 128 MB, 40 GB). Пакеты программного обеспечения ISIS4 фирмы MetaSystems GmbH, для работы с флуоресценцией (FISH, 24-хцветная FISH, многоцветный бэндинг, сравнительная геномная гибридизация, псевдоцвета). Для обработки изображений используют программу «TFL-Telo» компании «British Columbia Cancer Research Center».

Завершающим этапом данного метода является получение цифровой фотографии хромосом в метафазе клеточного цикла, окрашенных DAPI (синее свечение) и прошедших гибридизацию с Су³ -PNA зондом (красное свечение теломерных областей ДНК) На фиг.1 дано цифровое изображение in situ гибридизации с Су³ - PNA зондом одной метафазы Т-лимфоцита человека с помощью флуоресцентной микроскопии (окраска хромосом DAPI), увеличение × 1000 (А); кариотипирование по DAPI-бэндам (В). Приведен типичный результат анализа данных одного из исследуемых образцов.

Следующий этап анализа - проведение кариотипирования полученных метафаз по DAPI-бэндам. Далее с помощью специальной программы вычисляется флуоресценция каждой из теломер. Результативный показатель длины теломер вычисляется как отношение среднего значения интенсивности флюоресценции теломер определенной хромосомы (для каждого из плеч отдельно) к среднему значению интенсивности флюоресценции теломер всех хромосом в метафазе (184 сигнала). Для каждого индивидуума проведен анализ в среднем пяти метафазных пластинок.

В исследование были включены 10 пациентов с ревматоидным артритом, средний возраст 41,7 (min 24, max 61) и 11 соответствующих им по возрасту доноров, средний возраст 39 лет (min 24, max 58). Известно, что длина теломер в лимфоцитах не зависит от стадии и стажа заболевания, терапевтического статуса, в связи с этим основным критерием включения является верифицированный по МКБ-10 диагноз ревматоидного артрита и соответствующий группе доноров возраст пациентов.

Ниже приведены результаты, поясняющие данный способ определения маркера развития ревматоидного артрита на основе выявления укорочения относительной длины теломер на отдельных хромосомах в Т-лимфоцитах периферической крови.

Пример 1.

Определена относительная длина теломер на отдельных хромосомах в Т-лимфоцитах у здоровых доноров. Была выявлена достоверная разница между длиной теломер разных хромосом в группе доноров. Высокая значимость различий показателей длины теломер была подтверждена тестом Фридмана, который для всех индивидуумов в целом показывал р-уровень менее 0,001. На фиг.2 показано хромосомспецифическое распределение длины теломер у доноров (отдельно для р и q плеч). На диаграмме для каждой переменной отображены: медиана, квартальный размах (25%, 75% процентили). Достоверность различий между теломерами разных хромосом р<0,01 (тест Фридмана), о.е. - относительные единицы.

При детальном анализе значений медиан каждой из теломер, были выявлены хромосомы с наименьшей относительной длиной теломер (<0,9 относительных единиц (о.е.)) и хромосомы с самыми длинными теломерами (>1,1 о.е.) (табл.1). В таблице данные представлены в виде: ME, Р25-Р75 - медиана и квартили распределения признаков (25-75%), о.е. - относительные единицы. Как видно из таблицы, хромосома с минимальной длиной теломер - 20q, с максимальной длиной - 1р.

Пример 2.

Определена относительная длина теломер на отдельных хромосомах в Т-лимфоцитах у пациентов с ревматоидным артритом. Данные представлены на фиг.3. На диаграмме для каждой переменной отображены: медиана, квартальный размах (25%, 75% процентили). Достоверность различий между теломерами разных хромосом р<0,01 (тест Фридмана), о.е. - относительные единицы. При сравнении полученных данных по каждой из хромосом с аналогичными показателями у здоровых доноров было установлено достоверное укорочение длины теломер на коротком плече 4 хромосомы при ревматоидном артрите: относительная длина у доноров составила (Me [LQ; UQ]) - 1,14 [0,99; 1,22] относительных единиц (о.е.), у пациентов с ревматоидным артритом - 0,97 [0,89; 1,0] о.е. (р<0,05). Сравнение вариационных рядов осуществлялось с помощью непараметрического U критерия Манна-Уитни.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о возможности применения метода для определения маркера развития ревматоидного артрита, основанного на выявлении укорочения относительной длины теломер на отдельных хромосомах Т-лимфоцитов периферической крови.

Поскольку ревматоидный артрит является мультифакториальным заболеванием с полигенным типом наследования, выявление новых генетических факторов, вносящих свой вклад в развитие заболевания, дополняет и раскрывает неизвестные звенья патогенеза патологического процесса. Выявленный таким образом маркер развития ревматоидного артрита позволяет улучшить эффективность как популяционно-ориентированных профилактических программ (скрининговое определение ревматоидного фактора, например), так и индивидуальных превентивных мероприятий (противовоспалительная терапия, проводимая у пациентов с очень высоким риском развития аутоиммунной патологии).

Источники информации.

1. Blackburn Е. Switching and signaling at the telomere // Cell. - 2001. - Vol.106. - P. 661-673.

2. Lee В., Ishihara K., Denno K. Elevated levels of the soluble form of bone marrow stromal cell antigen 1 in the sera of patients with severe rheumatoid arthritis // Arthritis Rheum. - 1996. - Vol.39. - P. 629-637.

3. Wright W., Shay J. Telomere positional effects and the regulation of cellular senescence // Trends Genet. - 1992. - Vol.8. - P. 193-197.

Таблица 1.
Относительная длина теломер с минимальными и максимальными показателями у здоровых доноров
Хромосомы	o.e.(ME)	P25-P75
2q	0,869	0,784-0,996
3q	0,877	0,808-0,987
12р	0,840	0,737-1,0005
16р	0,846	0,714-1,008
17q	0,886	0,806-0,929
18р	0,856	0,8008-1,0015
19q	0,802	0,665-0,946
20q	0,797	0,620-0,978
21q	0,840	0,745-1,002
1P	1,151	1,027-1,22
3р	1,103	1,032-1,262
4p	1,118	0,913-1,187
Xp	1,102	0,953-1,234

Способ определения маркера развития ревматоидного артрита, отличающийся тем, что с помощью метода количественной флуоресцентной гибридизации in situ (Q-FISH) выявляют укорочение относительной длины теломер на отдельных хромосомах Т-лимфоцитов периферической крови пациентов; результативный показатель длины теломер вычисляют как отношение среднего значения интенсивности флюоресценции теломер определенной хромосомы (для каждого из плеч отдельно) к среднему значению интенсивности флюоресценции теломер всех хромосом в метафазе и укорочение относительной длины теломер на коротком плече 4-й хромосомы у пациентов с ревматоидным артритом в сравнении с соответствующими им по возрасту донорами расценивают как маркер развития заболевания.

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для раннего выявления дисметаболической нефропатии у детей 3-7 лет. Способ заключается в исследовании пробы мочи после взаимодействия мочи с 10% водным раствором хлорида кальция фотометрически на микропланшетном ридере при длине волны 620 нм и количественном определении кристаллообразующей способности мочи по формуле: Соп-(Dn-Dn-1)·13,4/(D4-D3), где D4 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с 10% раствором хлористого кальция, D3 - оптическая плотность стандартного раствора 13,4 г/л оксалата натрия с дистиллированной водой, Dn - оптическая плотность опытной пробы пациента №Х с 10% раствором хлористого кальция, Dn-1 - оптическая плотность опытной пробы пациента с дистиллированной водой, 13,4 г/л - концентрация стандартного раствора оксалата натрия.

Способ прогнозирования развития кардиопатии и энцефалопатии в неонатальном периоде у новорожденных от женщин с фетоплацентарной недостаточностью // 2521287

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и неонатологии, и может быть использовано для прогнозирования патологического течения неонатального периода.

Способ интраоперационной диагностики рака щитовидной железы // 2521239

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для экспресс-диагностики злокачественных опухолей в условиях больницы на интраоперационном этапе.

Способ раннего выявления возможности инфекции мочевыделяющих путей у детей 3-7 лет фотометрическим методом // 2521201

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для скрининга детей дошкольного возраста с целью раннего выявления у них возможности инфекции мочевыводящих путей.

Применение бактериальной бета-лактамазы для диагностики in vitro и визуализации, диагностики и лечения in vivo // 2520661

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к использованию бактериальной бета-лактамазы для диагностики in vitro и визуализации, диагностики и лечения in vivo.

Способ оценки воздействия на организм животных низкоинтенсивного лазерного облучения крови // 2519725

(57) Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для оценки воздействия на организм животных низкоинтенсивного лазерного облучения крови. У животного проводят забор венозной крови до, во время и после низкоинтенсивного лазерного облучения крови, получают из нее плазму.

Способ определения вероятности образования пятна крови от живого лица // 2519187

Изобретение относится к области медицины, а именно к судебной медицине, и может быть использовано для определения вероятности образования пятна крови от живого лица.

Способ определения давности пятна крови // 2519183

Изобретение относится к медицине, а именно к судебной медицине, и может быть использовано для определения давности пятна крови. Способ включает измерение оптической плотности вытяжки из пятна крови и дополнительное определение вида ткани предмета-носителя.

Способ дифферециальной диагностики новообразований головного мозга // 2519151

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к способам дифференциальной диагностики, и может использоваться для дифференциальной диагностики новообразований головного мозга.

Способ определения 4-нитроанилина в биологическом материале // 2519048

Изобретение относится к биологии, экологии, токсикологической и санитарной химии, а именно к способам определения 4-нитроанилина в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических и экологических лабораторий.

Способ прогнозирования наступления беременности // 2524650

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения высокого тромбогенного риска у беременных при проведении экстракорпорального оплодотворения в плазме крови. Сущность способа: определяют пиковую концентрацию тромбина в тесте генерации тромбина и при его значении свыше 360 нмоль/л беременную относят в группу высокого тромбогенного риска и за 2-3 дня до выполнения пункции фолликулов яичника проводят гепаринотерапию. Способ прост в исполнении, является высокоинформативным и позволяет выявить группу высокого тромбогенного риска, дифференцировать назначение антикоагулянтной терапии у пациенток при проведении ВРТ и найдет широкое применение в практическом здравоохранении, в частности акушерстве и гинекологии. 1 пр., 2 ил.

Способ комплексной оценки содержания продуктов окислительной модификации белков в тканях и биологических жидкостях // 2524667

Изобретение относится к медицине, в частности к биологической химии, и предназначено для более полной оценки окислительной модификации белков (ОМБ) и анализа соотношения альдегид-динитрофенилгидразонов (АДНФГ) и кетон-динитрофенилгидразонов (КДНФГ) основного и нейтрального характера в плазме и клетках крови, а также в тканях животных с целью определения степени выраженности и стадии окислительного стресса. Способ основывается на том, что спектр ОМБ делится на отдельные геометрические фигуры, представляющие собой прямоугольные трапеции. Площадь под кривой спектра окислительной модификации белков складывается из площадей под кривой АДНФГ и КДНФГ основного и нейтрального характера и определяется по формуле. Предложенный способ позволяет не только оценить общее значение ОМБ, определить количество АДНФГ и КДНФГ основного и нейтрального характера, но и сопоставить первичные и вторичные маркеры ОМБ и в результате этого выявить путь нарушения нативной конформации белков. 3 ил., 2 пр.

Способ прогнозирования эффективности лечения больных раком легкого // 2526120

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности комплексного лечения больных раком легкого в раннем послеоперационном периоде. Сущность изобретения заключается в том, что в течение суток после операции и периоперационной аутохимиоиммунотерапии в плазме крови больного определяют активность α-1-протеиназного ингибитора. При ее повышении на 28% и выше по отношению к общепринятой норме прогнозируют эффективность лечения, а при изменении менее 28%, отсутствии изменений или снижении по сравнению с нормой прогнозируют неэффективность лечения. Применение способа обеспечивает высокую специфичность, возможность срочной объективной оценки эффективности воздействия начальных этапов комплексного лечения, проведения анализа по cito, также позволяет своевременно назначать адекватные лечебные мероприятия или заменять лечение. Специфичность способа для срочного прогнозирования эффективности начальных этапов комплексной терапии - 80,9%, для прогнозирования отсутствия эффективности - 97%. 4 пр.

Способ спекрофотометрического определения ионов металлов // 2526176

Изобретение относится к мониторингу окружающей среды и биологических объектов на предмет определения содержания ионов металлов в жидких средах с использованием фотохромных соединений. В способе спектрофотометрического определения ионов металлов в жидких средах с использованием фотохромных соединений из класса хроменов за счет образования комплексов между фотоиндуцированной мероцианиновой формой этих соединений и ионами металлов в качестве хроменов используются бисхромены, такие как 2,2,11,11-тетракис(4-метоксифенилфенил)диокса(1,12)трифенилен, 2,2,8,8-тетракис(4-метоксифенил)диокса(1,7)хризен, 3,3,11,11-тетра-(4-метоксифенил)-3,11-дигидро-4,10-диоксадибензо[a,h]антрацен, 3,3,10,10-тетра-(4-метоксифенил)-3,10-дигидро-4,11-диоксадибензо[а,h]антрацен. Достигается повышение селективности определения. 24 пр., 1 табл., 6 ил.

Способ оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений // 2526817

Изобретение относится к медицине, касается способа оценки токсической опасности антихолинэстеразных соединений (АнХЭС). Суть заявляемого способа заключается в определении антихолинэстеразного эффекта растворов исследуемых АнХЭС на препарат холинэстеразы - фермент пропионилхолинэстераза мозговой ткани кальмара (ПХЭ), а именно в оценке процента угнетения активности ПХЭ в растворах малой - 0,04 Е/мл и высокой - 4 Е/мл концентрации. Токсическую опасность растворов исследуемых АнХЭС определяют по различию их воздействия на активность ПХЭ в растворах малой и высокой концентрации. Если процент угнетения активности ПХЭ в растворе высокой концентрации падает до нуля или не превышает 5-10%, делают заключение о том, что анализируемый раствор содержит высокотоксичное АнХЭС 1 класса опасности. Если величина ингибирующего эффекта остается постоянной или падает не более чем на 10%, делают заключение о наличии малотоксичного АнХЭС. Использование заявленного способа позволяет в течение 30-60 минут оценить токсическую опасность АнХЭС в самых различных ситуациях, когда их состав не известен и они находятся в виде растворов неизвестной концентрации. 1 табл., 2 пр.

Способ диагностики тромбоэмболии легочных артерий // 2527346

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, кардиологии и сердечно-сосудистой хирургии, и может быть использовано для диагностики тромбоэмболии легочных артерий (ТЭЛА). Сущность способа: предварительно готовят образец сыворотки крови пациента путем высушивания сыворотки крови, измельчения сухого осадка и суспензирования его в вазелиновом масле. Подготовленный образец исследуют методом ИК-спектроскопии путем определения высоты пиков полос поглощения с максимумами 1165; 1160; 1150; 1100; 1070; 1050 и 1025 см-1. Затем вычисляют значение отношения высот пиков: отношение высоты пика с максимумом при 1160 см-1 к высоте пика с максимумом при 1165 см-1; отношение высоты пика с максимумом при 1165 см-1 к высоте пика с максимумом при 1070 см-1; отношения высоты пика с максимумом 1165 см-1 к высоте пика с максимумом 1150 см-1, отношения высоты пика с максимумом при 1165 см-1 к высоте пика с максимумом 1050 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1100 см-1 к высоте пика с максимумом 1050 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1025 см-1 к высоте пика с максимумом 1165 см-1. На основании полученных значений отношений строят дифференциально-диагностический профиль образца сыворотки крови пациента, получая плоский многоугольник, образованный 6 лучами, соответствующих 6 отношениям, и сравнивают с многоугольником, являющимся эталонным дифференциально-диагностическим профилем ТЭЛА, где значения 6 отношений составляют: 1 (1,85±0,26), 2 (0,28±0,13), 3 (0,39±0,07), 4 (0,25±0,13), 5 (0,58±0,10), 6 (4,47±1,70). При наличии сходства полученного дифференциально-диагностического профиля пациента с эталонным профилем и совпадении всех 6 значений отношений образца сыворотки крови пациента со значениями отношений эталонного профиля диагностируют у пациента ТЭЛА. Изобретение обладает высокой точностью, прост в исполнении и не требует больших материальных и временных затрат, при этом позволяет диагностировать тромбоэмболию всех легочных артерий, как при наличии клинически значимых симптомов данного заболевания, так и в их отсутствии. 2 пр., 3 ил.

Способ прогнозирования рецидива рака яичников // 2530556

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования течения заболевания у больных раком яичников. Сущность способа: в опухолевой ткани яичников определяют долю клеток в S фазе клеточного цикла, при значении этого показателя менее 15,9% прогнозируют благоприятный исход, а при значении этого показателя более 15,9% прогнозируют неблагоприятный исход. Изобретение может быть использовано многократно в гинекологических клиниках и специализированных стационарах онкоучреждений для прогнозирования развития рецидива рака яичников по данным ДНК-цитометрического анализа опухолевой ткани. 2 пр.

Способ прогнозирования гнойных послеоперационных осложнений у больных колоректальным раком // 2530571

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования гнойных послеоперационных осложнений у больных раком толстой кишки (колоректальный рак) путем динамического исследования крови. У больного раком толстой кишки на вторые и пятые сутки после операции определяют уровень С-реактивного белка (СРБ) в плазме крови. При значении уровня СРБ на пятые сутки менее 10,0 мг/дл прогнозируется относительно гладкое течение послеоперационного периода. В случае снижения уровня СРБ относительно вторых послеоперационных суток риск развития осложнений низкий. При нарастании уровня СРБ относительно вторых послеоперационных суток или сохранении его на одном уровне - риск развития осложнений средний. При значении уровня СРБ на пятые сутки более 10,0 мг/дл риск развития гнойных послеоперационных осложнений высокий. Изобретение обеспечивает эффективное прогнозирование развития гнойных осложнений у пациентов на вторые и пятые сутки после операции по поводу колоректального рака. 3 пр.

Способ ускоренной окраски гистологических препаратов для выявления микобактерий туберкулеза // 2530574

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ ускоренной окраски гистологических препаратов для выявления микобактерий туберкулеза, включающий приготовление гистологических препаратов по общепринятой методике, окрашивание их по Циль-Нильсону, отличающийся тем, что после стандартной подготовки препаратов к окраске срезы проходят процедуру депарафинизации путем последовательного помещения их в ксилол и спирты нисходящей концентрации по 5 минут в термостат при температуре 54°C с последующим помещением их в воду, затем в 1% раствор йодной кислоты на 2 минуты и промыванием в проточной воде в течение 10 секунд, после чего на срез, покрытый фильтровальной бумагой, наливают карбол-фуксин Циля и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров в течение 2 минут, оставляют краску на срезе после прекращения подогревания на 3-5 минут, убирают фильтровальную бумагу и ополаскивают срезы в воде, дифференцируют их 1% кислотным буфером, ополаскивают в водопроводной воде в течение 1 минуты, после чего на срез помещают раствор метиленового синего по Лефлеру и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров, промывают в воде, дифференцируют в 1% кислотном буфере и хорошо промывают водой, обезвоживают в спиртах восходящей крепости в течение 1 минуты, помещают в ксилол и заключают в бальзам. 1 пр.

Способ проведения иммунохроматографического анализа для серодиагностики // 2532352

Изобретение относится к иммунологии и медицинской диагностике и представляет собой способ проведения иммунохроматографического анализа для серодиагностики. Предложенное изобретение предназначено для иммунохроматографического определения в жидких пробах антител к возбудителям инфекционных заболеваний или другим антигенам, например, таким как аллергены. Отличительной особенностью предлагаемого способа определения антител является то, что раствор для разбавления пробы содержит специфические антитела против иммобилизованной в аналитической зоне тест-полоски антигена (или антигенов). Используемая концентрация антител в разбавляющем растворе меньше нижнего предела определения антител данным методом при использовании разбавляющего раствора, не содержащего специфических антител, вследствие чего в отсутствие специфических антител в пробе окрашивания аналитической зоны тест-полоски не наблюдается. Если же проба содержит специфические антитела, то наличие в разбавляющем растворе дополнительного количества специфических антител приводит к усилению интенсивности окраски аналитической зоны тест-полоски. Применение изобретения позволяет регистрировать суммарную концентрацию специфических антител в пробе и в разбавляющем растворе, что приводит к снижению предела обнаружения анализа вследствие смещения рабочего диапазона определяемых тестом концентраций в область более низких значений. 3 ил., 1 пр.