Композиции и способы ингибирования пути jak

Группа изобретений относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использована для лечения синдрома сухого глаза. Для этого пациенту вводят эффективное количество соединения формулы I и/или II или его фармацевтически приемлемую солевую форму. Также предложен фармацевтический состав. Группа изобретений обеспечивает эффективное лечение синдрома сухого глаза у пациента, за счет ингибирования пути JAK. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 табл., 10 пр.

 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки США № 61/229191, поданной 28 июля 2009 года, содержание которой включено в настоящую заявку по всей полноте посредством ссылки для всех целей.

Область техники

Настоящее описание относится к соединениям, пролекарствам, их солям и фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, и способам применения указанных соединений, пролекарств и их композиций для лечения глазных заболеваний и/или нарушений.

Уровень техники

JAK киназы (JAnus Kinases, Янус-Киназы) представляют собой семейство цитоплазматических белковых тирозин-киназ, включающее JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2. Каждая из JAK киназ селективна к рецепторам конкретных цитокинов, хотя влиянию конкретного цитокина или сигнального пути могут подвергаться несколько JAK киназ. Исследования предполагают, что JAK3 ассоциирует с общей гамма (γс) цепью ряда рецепторов цитокинов. В частности, JAK3 селективно связывается с рецепторами и является частью сигнального пути цитокина для IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 и IL-21. JAK1, помимо прочего, взаимодействует с рецепторами цитокинов IL-2, IL-4, IL-9 и IL-21, в то же время JAK2, помимо прочего, взаимодействует с рецепторами IL-9 и ФНО-α. В результате связывания конкретных цитокинов с рецепторами (например, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 и IL-21) происходит олигомеризация рецептора, приводящая к получению цитоплазматических «хвостов» ассоциировавших JAK киназ, сблизившихся с рецептором, и способствующая транс-фосфорилированию тирозиновых остатков JAK киназы. Это транс-фосфорилирование приводит к активации JAK киназы.

Фосфорилированные JAK киназы связывают различные STAT белки (переносчики сигнала и активаторы транскрипции). STAT белки, которые представляют собой ДНК-связывающие белки, активированные в результате фосфорилирования тирозиновых остатков, выступают в качестве сигнальных молекул и факторов транскрипции и связываются исключительно со специфическими последовательностями ДНК, присутствующими в промоторах генов, чувствительных к действию цитокинов. Сигнальный путь JAK/STAT приводит к возникновению многих аномальных иммунных ответов, таких как аллергии, астма, аутоиммунные заболевания, такие как отторжение трансплантата (аллотрансплантата), ревматоидный артрит, амиотрофический латеральный склероз и множественный склероз, глазные заболевания и нарушения, а также к злокачественным опухолям тканей и крови, таким как лейкемия и лимфомы.

Синдром сухого глаза (сухой кератит) представляет собой особенно распространенную клиническую проблему. Сухость глаз, как правило, вызвана нарушением испарения слез или недостаточностью слезной жидкости. Нарушение испарения слез встречается и при нормальной слезной функции, но может быть вызвано дисфункцией мейбомиевой железы, потерей нормальной функции век или связано с поверхностью глаза (например, с применением контактных линз или с аллергическими глазными заболеваниями). Недостаточность слезной железы, как правило, вызвана синдромом Шегрена или нарушениями, отличными от синдрома Шегрена. Несмотря на различные причины сухости глаз, исключительным механизмом патологии является разрушение преокулярной слезной пленки в результате дегидратации открытой поверхности роговицы, которое приводит к дискомфорту и раздражению роговицы. По результатам клинических исследований признаки сухости глаз могут включать расширение сосудов бульбарной конъюнктивы, конъюнктивальные складки, уменьшение мениска слезной жидкости, нарушение поверхности роговицы и повышенное содержание инородных частиц на слезной пленке. Как правило, наблюдают диффузное окрашивание роговицы бенгальским розовым или флуоресцеином, в более запущенных случаях можно наблюдать филаменты или слизистые бляшки.

Для диагностики сухости глаз применяют ряд клинических исследований. Эти исследования включают определение высоты мениска слезной жидкости, уменьшения времени разрыва слезной пленки и тест Шримера.

Частой причиной сухости глаз является синдром Шегрена, который представляет собой аутоиммунное нарушение, при котором клетки иммунной системы атакуют и повреждают железы, которые продуцируют слезы и слюну. Отличительными симптомами нарушения являются сухость во рту и сухость глаз. Синдрому Шегрена подвержены 1-4 миллиона человек в Соединенных Штатах, причем у женщин вероятность развития заболевания в девять раз выше. Синдром Шегрена может протекать в виде первичного состояния или вторичного нарушения, связанного с другими аутоиммунными заболеваниями, такими как системная красная волчанка («волчанка») или ревматоидный артрит. Сухость глаз часто наблюдают совместно с другими распространенными нарушениями, такими как розацеа. Сухость глаз также является распространенным побочным эффектом применения многих лекарственных средств, таких как изотретиноин, диуретики, трициклические антидепрессанты, успокоительные средства, противогипертонические средства, пероральные контрацептивы, противогистаминные средства, средства против заложенное носа и многих других.

Несмотря на распространенность состояний, связанных с сухостью глаз, основным способом лечения до сих пор является применение заменителей слезной жидкости (таких как карбоксиметилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза или гидроксипропилцеллюлоза) для увлажнения роговицы и обеспечения временного облегчения симптомов. Другим общим способом лечения является окклюзия слезной точки, при которой отток слез из глаза можно частично прервать путем окклюзии канальцев, которые служат для нормального осушения глаз. Лечение вызывающих сухость глаз нарушений также может улучшить симптомы сухости глаз, как, например, при лечении розацеа соответствующим антибиотиком. Тем не менее желательно предложить способ лечения, который обеспечит облегчение ряда нарушений, связанных с сухостью глаз, включающих (но не ограничивающихся им) иммуногенный сухой кератит.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

С учетом различных состояний, которые можно улучшать путем лечения с применением модуляции пути JAK в настоящее время признается, что соединения, которые модулируют пути JAK, и способы применения этих соединений должны обеспечивать существенное терапевтическое благоприятное действие для широкого ряда пациентов.

В настоящей заявке описаны соединения, пролекарства, соответствующие солевые формы и способы применения этих соединений, пролекарств и солевых форм для лечения глазных заболеваний и/или нарушений.

Согласно одному из вариантов реализации предложено соединение I и его сольваты, пролекарства и фармацевтически приемлемые соли:

Согласно одному из вариантов реализации предложено конкретное пролекарство соединения I и его фармацевтически приемлемые солевые формы, которое представляет собой соединение II:

Согласно одному из аспектов глазные нарушения подвергают лечению с применением эффективного количества соединения I и/или II, а также их солевых форм и фармацевтических композиций, которые содержат указанные соединение или соединения. Согласно одному из вариантов реализации предложен способ лечения глазного заболевания и/или нарушения, включающий введение субъекту количества соединения I и/или II, эффективного для лечения глазного заболевания и/или нарушения. Глазные заболевания и нарушения, которые подвергают лечению с применением описанных в настоящей заявке соединений, включают, но не ограничиваются ими, синдром сухого глаза, диабетическую ретинопатию, макулярную дегенерацию (такую как возрастная макулярная дегенерация), увеит, аллергический конъюнктивит, глаукому и розацеа. Согласно конкретным вариантам реализации нарушение представляет собой сухость глаз, например, кератит или сухой кератоконъюнктивит, например, нарушение вызванное недостаточным продуцированием слез или аномальным составом слезной жидкости, такое как нарушение слезных желез. Согласно конкретньм неограничивающим вариантам реализации нарушение представляет собой аутоиммунное или иммуногенное нарушение, такое как синдром Шегрена. Согласно другим примерам нарушение представляет собой идиопатический сухой кератит или розацеа.

Согласно одному из аспектов описанного способа лечения глазных нарушений введение одного или более описанного в настоящей заявке 2,4-пиримидиндиаминового соединения является эффективным для увеличения объема продуцируемых слез по сравнению с объем продуцируемых слез без лечения, что тем самым облегчает симптом синдрома сухого глаза. Согласно одному из аспектов объем продуцируемых слез увеличивается в течение пяти дней, например, менее чем за четыре дня, а согласно некоторым примерам менее чем за два дня. Согласно одному из вариантов реализации объем продуцируемых слез увеличивается по меньшей мере на 25% по сравнению с первоначальным объемом продуцируемых слез в течение двух дней после начала лечения описанньм в настоящей заявке 2,4-пиримидиндиаминовым соединением. Согласно другим вариантам реализации продуцирование слез увеличивается по меньшей мере на 30%, например, по меньшей мере на 50% по сравнению с начальным продуцированном в течение менее чем двух дней. Увеличение продуцирования слез в результате введения соединений согласно настоящему изобретению приводит, в некоторых случаях, к объему продуцируемых слез, сравнимому с нормальным объемом продуцирования слез.

Согласно другому аспекту соединение формулы I и/или II или его фармацевтически приемлемую солевую форму вводят в комбинации или дополнительно к противовоспалительному средству, противогистаминному средству, антибиотику, противовирусному средству и средству против глаукомы. Согласно конкретным примерам противовоспалительный агент может представлять собой нестероидный противовоспалительный агент (NSAID) или кортикостероид (такой как преднизолон) или иммунодепрессант (такой как циклоспорин А), вводимый системно (например, перорально или парентерально) или местно (в глазных каплях). Также можно применять моноклональное антитело (такое как блокатор цитокина) или агент, который ингибирует генный продукт miR. Согласно другим примерам лечение объединяют с нефармацевтическим лечением, например, с окклюзией слезной точки или с использованием субъектом склеральных или полусклеральных контактных линз, которые создают наполненный жидкостью слой над роговицей. Другие комбинированные способы лечения могут включать сопутствующее или совместное лечение вызывающего сухость глаз нарушения, например, лечение розацеа при помощи лекарственного средства или схемы против розацеа, например, при помощи антибиотика класса тетрациклинов (например, миноциклина или доксициклина) или лазерной хирургии для уменьшения лицевой эритемы или ринофимы.

Как правило, описанные соединения формулы I и/или II в случае местного лечения глазных нарушений вводят по меньшей мере один раз в день, например, два раза в день.

Согласно другому варианту реализации в изобретении предложен фармацевтический состав, содержащий соединение I и/или II в исходной или солевой форме и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель, разбавитель, консервант или стабилизатор или их смеси. Согласно другому примеру фармацевтический состав представляет собой комбинированный состав, который также содержит нестероидный или стероидный противовоспалительный агент или другое средство для лечения сухости глаз, включая комбинированные составы, которые предназначены для лечения состояний, вызывающих сухой кератит (таких, как синдром Шегрена или розацеа). Согласно другим примерам соединение I и/или II вводят в композиции со смазкой, в частности в вязкой композиции, которая содержит носитель для местного введения в глаза лекарственного средства, а также для облегчения симптомов сухости глаз.

Эти и другие варианты реализации описаны более подробно далее.

РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Определения

Следующие определения, используемые в настоящей заявке, нужно применять, если не указано иное.

«Кортикостероиды» представляют собой стероидные гормоны, которые продуцируются в коре надпочечников. Кортикостероиды участвуют в широком диапазоне физиологических систем, таких как стрессовый ответ, иммунный ответ и регуляция воспаления, метаболизм углеводов, катаболизм белков, содержание электролитов в крови и поведение. Примеры кортикостероидов включают кортизол, преднизон и преднизолон. Кортикостероиды можно вводить перорально, парентерально (например, в виде инъекции) или путем непосредственной местной инсталляции в глаз при помощи глазных капель, также Кортикостероиды можно объединять с соединениями формулы I и/или II в комбинированном составе.

«Сухой кератит» или «сухой кератоконъюнктивит» или «синдром сухого глаза» относится к состоянию сухости глаз, связанному с пониженным продуцированном слез или повышенным испарением, имеющему различное происхождение, например, воспалительную, невоспалительную, травматическую, ятрогенную, вызванную лекарственньми средствами, связанную с розацеа или идиопатическую природу. Основной причиной сухости глаз является пониженное продуцирование слез в слезных железах, например, вследствие аутоиммунного состояния, которое нарушает соответствующую функцию слезных желез или мейбомиевых желез. Состояние можно подвергать лечению лекарственньми средствами или нелекарственными воздействиями, такими как окклюзия слезной точки (например, путем введения пробочки-обтуратора в слезный каналец или с применением электрокаустики перекрытых или частично перекрытых выходов слезных канальцев или слезных протоков).

«Нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID)» представляет собой тип противовоспалительного агента, который действует за счет ингибирования продуцирования простагландинов. NSAID обладают противовоспалительным, анальгетическим и жаропонищающим действием. Примеры NSAID включают ибупрофен, кетопрофен, пироксикам, напроксен, сулиндак, аспирин, холина субсалицилат, дифлунизал, фенопрофен, индометацин, меклофенамат, салсалат, толметин и магния салицилат. Эти агенты можно вводить перорально, парентерально (например, в виде инъекции) или путем непосредственной местной инсталляции в глаз при помощи глазных капель, также NSAID можно объединять с соединениями формулы I и/или II в комбинированном составе.

«Субъект» относится к людям и субъектам, отличным от человека.

«Фармацевтически приемлемая соль» относится к фармацевтически приемлемым солям соединения, которые получают из ряда органических и неорганических противоионов,

хорошо известных в данной области.

«Фармацевтически эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» относятся к количеству соединения, достаточному для лечения конкретного нарушения или заболевания или одного или более симптома и/или для профилактики повторного проявления заболевания или нарушения.

Фраза «восстановление нормального продуцирования слез» относится к исчезновению симптомов сухости глаз, описанному в общепринятой офтальмологической практике, например, к получению результата, составляющего 14,5 или менее баллов в анкете McMonnies & Но Dry Eye, или определенному по результатам исследований (например, с применением фенолового красного или флуоресцеина и т.п., известных специалистам в офтальмологической практике) или по комбинации показаний.

Используемая в настоящем описании фраза «значительно увеличивает продуцирование слез» означает статистически значимое (например, р<0,05) увеличение продуцирования слез, измеренное согласно общепринятой офтальмологической практике. Например, продуцирование слез можно измерять при помощи теста Шримера, фенольного теста с красной нитью, времени разрыва слезной пленки (например, при помощи окрашивания флуоресцеином), окрашивания бенгальским розовым и т.д.

Соединения

Описаны соединения, пролекарства, соответствующие солевые формы и способы применения этих соединений, пролекарств и солевых форм для лечения глазных заболеваний и/или нарушений.

Соединения I и II, а также их солевые формы и фармацевтические композиции, содержащие указанные соединения, более подробно описаны далее. Соединение I также

называют N2-(3-aминocyльфoнил-4-мeтилфeнил)-5-фтop-N4-[4-(пpoп-2-инилoкcи)фeнил]-2,4-пиримидиндиамин. Соединение II также называют 5-фтор-К2-(4-метил-3-пропиониламиносульфонилфенил)-N4-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамин.

С целью упрощения описания для любого варианта реализации, в котором соединение I и соединение II названы конкретно, существует соответствующий вариант реализации, в котором применяют солевую форму и/или фармацевтическую композицию, содержащую

соединение I и/или соединение II.

Специалистам в данной области очевидно, что соединение II является пролекарством соединения I и что соединение II не обязательно должно быть фармакологически неактивным до превращения в соединение I. Механизм, согласно которому метаболизируется пропионовая прогруппа, не важен и может проходить, например, в результате гидролиза в кислотной среде желудка и/или под действием ферментов, присутствующих в пищеварительном тракте и/или тканях или органах организма, например, эстераз, амидаз, липолаз, фосфатаз, включая АТФазы и киназы, цитохром Р450 печени и т.д. Согласно конкретным вариантам реализации, описанным в настоящей заявке, соединения I и/или II применяют для лечения глазных нарушений и, следовательно, их можно вводить непосредственно в глаз. Согласно некоторым вариантам реализации введение может включать не только наружное введение, но также инъекцию и т.д. Эти способы введения не исключают, например, благоприятное терапевтическое действие на глаза в результате циркуляции соединения I и/или II в большом круге кровообращения.

Специалистам в данной области будет понятным, что соединения I и II могут проявлять эффекты таутомерии, конформационной изомерии и/или геометрической изомерии. Следует понимать, что изобретение охватывает любые таутомерные, конформационные изомерные и/или геометрические изомерные формы соединений, а также смеси этих различных изомерных форм. Атропоизомеры представляют собой стереоизомеры, получаемые в результате заторможенного вращения вокруг простых связей, в которых барьер вращения достаточно велик для возможности выделения конформеров (Эльель Е.Л., Уилен С.Х. (Eliel, Е.L.; Wilen, S.H.) Stereochemistry of Organic Compounds; Wiley & Sons: New York, 1994;

Chapter 14). Атропоизомерия является значимой, так как она вводит элемент хиральности в отсутствие хиральных атомов. Подразумевается, что изобретение охватывает атропоизомеры, например, в случаях ограниченного вращения вокруг связей между структурой остова 2,4-пиримидиндиамина и группами, присоединенными к ней, или, например, вокруг связей между сульфонамидом и фенильным кольцом, к которому он присоединен. Соединения I и II могут находиться в виде солей. Указанные соли включают соли, подходящие для фармацевтических применений («фармацевтически приемлемые соли»), соли, подходящие для ветеринарных применений и т.д. Подобные соли можно получать из кислот или оснований, что хорошо известно в данной области. Типовые соли, описанные в настоящей заявке, представляют собой натриевые соли, калиевые соли, соли аргинина, соли холина и кальциевые соли, но в целом, в способах, описанных в настоящей заявке, можно применять любые фармацевтически приемлемые соли. Вследствие того что соединение I и соединение II имеют и основные группы, например, атомы азота пиримидина, и кислотные группы, например, кислые протоны сульфонамида и/или атомы азота в положениях N2 и N4 пиримидиндиаминовой системы, указанные соединения могут образовывать фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты или основания.

Согласно одному из вариантов реализации соль представляет собой фармацевтически приемлемую соль. В целом, фармацевтически приемлемые соли представляют собой соли, которые поддерживают, в значительной степени, один или более вид желательной фармакологической активности исходного соединения и которые подходят для введения человеку. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислот, образованные с неорганическими кислотами или органическими кислотами. Неорганические кислоты, подходящие для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот, включают, в качестве примера, без ограничений, галогенводородные кислоты (например, хлороводородную кислоту, бромоводородную кислоту, йодоводородную кислоту и т.д.), серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и т.д. Органические кислоты, подходящие для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот, включают, в качестве примера, без ограничений, уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, пропановую кислоту, гексановую кислоту, циклопентанпропановую кислоту, гликолиевую кислоту, оксалиловую кислоту, виноградную кислоту, молочную кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, малевую кислоту, малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, пальмитиновую кислоту, бензойную кислоту, 3-(4-гидроксибензоил)бензойную кислоту, коричную кислоту, миндальную кислоту, алкилсульфокислоты (например, метансульфокислоту, этансульфокислоту, 1,2-этандисульфокислоту, 2-гидроксиэтансульфокислоту и т.д.), арилсульфокислоты (например, бензолсульфокислоту, 4-хлорбензосульфокислоту, 2-нафталинсульфокислоту, 4-толуолсульфокислоту, камфорсульфокислоту и т.д.), 4-метилбицикло[2.2.2]окт-2-ен-1-карбоновую кислоту, глюкогептоновую кислоту, 3-фенилпропановую кислоту, триметилуксусную кислоту, трет-бутилуксусную кислоту, лаурилсульфокислоту, глюконовую кислоту, глутаминовую кислоту, гидроксинафтойную кислоту, салициловую кислоту, стеариновую кислоту, муконовую кислоту и т.д.

Фармацевтически приемлемые соли также включают соли, образуемые в случае, если кислотный протон, присутствующий в исходном соединении, замещен на ион металла (например, ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла или ион алюминия) или координирует с органическим основанием (например, этаноламином, диэтаноламином, триэтаноламином, N-метилглюкамином, морфолином, пиперидином, диметиламином, диэтиламином, триэтиламином, аммонием и т.д.).

Соединения I и II, а также их соли, также могут находиться в виде сольватов, например, гидратов и N-оксидов, которые хорошо известны в данной области.

Способы

В настоящем изобретении предложены 2,4-замещенные пиримидиндиаминовые

соединения I и II, их пролекарства, соли и фармацевтические композиции, применяемые для лечения глазных заболеваний и/или нарушений. В частности, соединения I и II применяют индивидуально или в комбинации с другими агентами. Согласно описанию соединение I и/или II можно вводить в виде исходного соединения и/или его солевой формы, а также в виде составов, содержащих соединение.

Используемый в настоящем описании и хорошо известный в данной области термин «лечение» представляет собой подход для получения благоприятных или целевых результатов, включая клинические результаты. Для задач настоящего изобретения благоприятные или целевые результаты могут включать, но не ограничиваются ими, один или более результат из представленных далее: снижение или облегчение одного или более симптома, уменьшение степени тяжести состояния, включающего заболевание, стабильная (т.е. не ухудшающаяся) степень тяжести состояния, включающего заболевания, профилактика развития заболевания, задержка или замедление состояния, включающего заболевания, прогрессирование, ослабление или временное облегчение состояния, включающего заболевания, его степени тяжести, и ослабление (частичное или полное), которые могут быть детектируемыми или недетектируемыми. Соединения I и II (по меньшей мере в качестве источника соединения I) являются высокоактивными и, таким образом, их можно вводить местно в очень низких дозах, что тем самым минимизирует системные побочные эффекты.

Соединения I и II являются высокоактивными и селективными ингибиторами JAK киназ и, в частности, являются селективными к сигнальным путям цитокинов, включающих JAK3. Ввиду указанной активности, соединения можно применять в ряде in vitro, in vivo и ex vivo случаев для регуляции или ингибирования активности JAK киназы, сигнальных каскадов, в которых участвует JAK киназа, и биологических ответов, на которые влияют указанные сигнальные каскады. Например, согласно одному из вариантов реализации соединения можно теоретически применять для ингибирования JAK киназы in vitro или т vivo в любых типах клеток, экспрессирующих JAK киназу, например, в гематопоэтических клетках, в которых, например, главным образом экспрессируется JAK3. Также соединения можно применять для регуляции каскадов сигнальной трансдукции, в которых участвуют JAK киназы, в частности JAK3. Указанные JAK-зависимые каскады сигнальной трансдукции включают, но не ограничиваются ими, сигнальные каскады рецепторов цитокинов, которые включают общую гамма-цепь, такие как, например, сигнальные каскады рецепторов IL-4, IL-7, IL-5, IL-9, IL-15 и IL-21 или IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 и IL-21. Соединения также можно применять in vitro или in vivo для регуляции и, в частности, ингибирования, клеточных или биологических ответов, на которые влияют указанные JAK-зависимые каскады сигнальной трансдукции. Указанные клеточные или биологические ответы включают, но не ограничиваются ими, апрегуляцию IL-4/ramos CD23, пролиферацию Т-клеток, опосредованную IL-2 и т.д. Необходимо отметить, что соединения можно применять для ингибирования JAK киназ in vivo в качестве терапевтического подхода для лечения или профилактики заболеваний, опосредованных полностью или частично активностью JAK киназы. Указанные заболевания называют «заболеваниями, опосредованными JAK киназой».

Не желая связываться какой-либо теорией, полагают, что соединения, описанные в настоящей заявке, являются эффективными для лечения указанных глазных нарушений, вследствие, по меньшей мере отчасти, их активности в отношении ингибирования JAK. Примеры заболеваний, которые опосредованы, по меньшей мере отчасти, JAK киназами, которые можно подвергать лечению или профилактике согласно способам, включают глазные заболевания и нарушения, включающие, но не ограничивающиеся ими, синдром сухого глаза, увеит, аллергический конъюнктивит, глаукому, симпатическую офтальмию и розацеа (глаз). Тем не менее, в результате вышеуказанной активности, несмотря на то, что способы, описанные в настоящей заявке, направлены на лечение нарушений зрения, введение соединений и/или составов может обладать другим благоприятным терапевтическим действием, которое возникает в других тканях или органах организма. Один из вариантов реализации представляет собой способ лечения нарушения зрения, при котором также осуществляется второе благоприятное действие. Как показано, в одном из вариантов реализации предложен способ лечения глазного заболевания и/или нарушения, включающий введение субъекту количества соединения, эффективного для лечения глазного заболевания и/или нарушения, причем соединение выбрано из соединения I и соединения II. Глазные заболевания и нарушения включают, но не ограничиваются ими, синдром сухого глаза, увеит, аллергический конъюнктивит, глаукому и розацеа (глаз). Синдром сухого глаза (ССГ), также известный как сухой кератоконъюнктивит (KCS), сухой кератит, синдром сухости глаз или ксерофтальмия, представляет собой глазное заболевание, вызванное снижением продуцирования слез или увеличения испарения слезной пленки, распространенное у людей и некоторых животных. Увеит или иридоциклит относится к воспалению среднего слоя глаза («сосудистой оболочки», «uvea») и в общем смысле может относиться к любому воспалительному процессу, затрагивающему внутренние области глаза.

Аллергический конъюнктивит представляет собой воспаление конъюнктивы (мембраны, покрывающей белочную оболочку глаза) в результате аллергии. Глаукома относится к группе заболеваний, которые воздействуют на зрительный нерв и включают характерную потерю ганглиозных клеток сетчатки, т.е. представляет собой оптическую невропатию. Повышенное внутриглазное давление является значительньм фактором риска для развития глаукомы (более 22 мм рт.ст. или 2,9 кПа), и воспалительные процессы, например, увеит, могут вызывать увеличение внутриглазного давления.

Розацеа представляет собой хроническое воспалительное состояние, характеризуемое лицевой эритемой, но она может воздействовать на глаза и нос (ринофима). Способы согласно настоящему изобретению включают лечение локальной лицевой эритемы, ринофимы и глазной розацеа. Согласно одному из вариантов реализации глазное заболевание и/или нарушение выбрано из синдрома сухого глаза, диабетической ретинопатии, макулярного разрыва сетчатки, аллергического конъюнктивита, глаукомы, розацеа и их комбинаций. Согласно одному из вариантов реализации глазное заболевание и/или нарушение представляет собой синдром сухого глаза. Согласно другому варианту реализации глазное заболевание и/или нарушение представляет собой увеит. Согласно одному из вариантов реализации глазное заболевание и/или нарушение представляет собой аллергический конъюнктивит. Согласно одному из вариантов реализации глазное заболевание и/или нарушение представляет собой глаукому. Согласно другому варианту реализации глазное заболевание и/или нарушение представляет собой розацеа.

Согласно одному из вариантов реализации соединение I и/или соединение II применяют для лечения любых вышеуказанных заболеваний и/или нарушений зрения. Согласно одному из вариантов реализации соединение I и/или II применяют в солевых формах. Согласно конкретному варианту реализации соединение II применяют в солевой форме. Согласно одному из вариантов реализации соль соединения II выбрана из натриевой соли, калиевой соли, кальциевой соли, соли аргинина и соли холина.

Совместное введение

В случае применения для лечения глазных заболеваний соединения I и II можно вводить индивидуально, в виде смесей и/или в комбинации с другими агентами подходящими для лечения глазных заболеваний и/или нарушений. Соединение I и II можно вводить в смеси или в комбинации с агентами, подходящими для лечения других нарушений или болезней, такими как стероиды, стабилизаторы мембран, ингибиторы 5-липоксигеназы (5LO), ингибиторы синтеза лейкотриенов и лейкотриенового рецептора, ингибиторы переключения изотипа IgE или синтеза IgE, переключения изотипа IgG или синтеза IgG, β-агонисты, ингибиторы триптазы, аспирин, ингибиторы циклооксигеназы (СОХ), метотрексат, лекарственные средства против ФНО (фактора некроза опухолей), ритуксан, ингибиторы PD4, ингибиторы р38 и противогистаминные средства, например. Соединения I и II можно вводить как таковые, в виде пролекарств или в виде фармацевтических композиций, содержащих активное соединение и/или пролекарство.

Конкретные иммуносуппрессивные терапии, которые можно применять в комбинации с соединениями I и II, включают, например, меркаптопурин, кортикостероиды, такие как преднизон, метилпреднизолон и преднизолон, алкилирующие агенты, такие как циклофосфамид, ингибиторы кальцинейрина, такие как циклоспорин, сиролимус и такролимус, ингибиторы инозин монофосфат дегидрогеназы (IMPDH), такие как микофенолат, микофенолата мофетил и азатиоприн, и агенты, разработанные для подавления клеточного иммунитета с сохранением гуморального иммунного ответа потребителя, включающие различные антитела (например, антилимфоцитарный глобулин (ALG), антитимоцитарный глобулин (ATG), моноклональные анти-Т-клеточные антитела (ОКТ3)) и облучение. Указанный ряд агентов можно применять в стандартных или общепринятых дозировках, указанных в инструкциях по применению, прилагаемых к коммерчески доступным формам лекарственных средств (см. также, инструкции по применению в The Physician's Desk Reference издания 2006 года), содержание которых включено в настоящую заявку посредством ссылки. Азатиоприн в настоящее время доступен в Salix Pharmacuticals, Inc. под торговой маркой AZASAN; меркаптопурин в настоящее время доступен в Gate Pharmaceuticals, Inc. под торговой маркой PURINETHOL; преднизон и преднизолон в настоящее время доступны в Roxane Laboratories, Inc.; метилпреднизолон в настоящее время доступен в Pfizer; сиролимус (рапамицин) в настоящее время доступен в Wyeth-Ayerst под торговой маркой RAPAMUNE; такролимус в настоящее время доступен в Fujisawa под торговой маркой PROGRAF; циклоспорин в настоящее время доступен в Novartis под торговой маркой SANDIMMUNE и в Abbott под торговой маркой GENGRAF; ингибиторы IMPDH, такие как микофенолата мофетил и микофеноловая кислота в настоящее время доступны в Roche под торговой маркой CELLCEPT и в Novartis под торговой маркой MYFORTIC; азатиоприн в настоящее время доступен в Glaxo Smith Kline под торговой маркой IMURAN; и антитела в настоящее время доступны в Ortho Biotech под торговой маркой ORTHOCLONE, в Novartis под торговой маркой SIMULECT (базиликсимаб) и в Roche под торговой маркой ZENAPAX (даклизумаб).

Согласно одному из вариантов реализации соединение формулы I и/или II или его фармацевтически приемлемую соль вводят в комбинации или дополнительно к противогистаминному средству, антибиотику, противовоспалительному средству, противовирусному средству и средству против глаукомы. Примеры общепринятых антибиотиков, применяемых для лечения глаз, представляют собой сульфацетамид, эритромицин, гентамицин, тобрамицин, ципрофлоксацин и офлоксацин. Кортикостероиды (иногда называемые «стероиды») аналогичны естественным веществам, продуцируемым надпочечной железой, и являются высокоэффективными противовоспалительными средствами для широкого ряда проблем со зрением. Кортикостероиды можно безопасно применять для лечения глаз, так как они не вызывают большую часть рисков, связанных с пероральными стероидами, например, преднизоном. Кортикостероиды, применяемые для лечения глаз, включают, но не ограничиваются ими, преднизолон, фторметолон и дексаметазон. Нестероидные противовоспалительные средства для лечения глаз включают, но не ограничиваются ими, ибупрофен, диклофенак, кеторолак и флурбипрофен. Общепринятые противогистаминные средства включают ливостин, патанол, кромолин, аломид. Также существуют отпускаемые без рецепта противогистаминные средства для лечения глаз, которые являются менее активными, но могут являться очень полезными при легкой степени заболевания, такие как фенирамин. Общепринятые противовирусные лекарственные средства для лечения глаз включают, но не ограничиваются ими, трифлуртимидин, аденин, арабинозид и идоксуридин. Лекарственные средства против глаукомы, как правило, применяют для снижения внутриглазного давления, давления жидкости внутри глаза, для профилактики повреждений зрительного нерва, приводящих к потере зрения. Эти лекарственные средства могут снижать давление путем снижения количества жидкости, продуцируемой в глазу, путем увеличения количества жидкости, выходящего из глаза естественным образом или путем обеспечения дополнительных путей для вывода жидкости из глаза. Часто применяют более чем одно лекарственное средство против глаукомы одновременно, так как их действия могут объединяться и приводить к снижению давления, даже большему по сравнению со снижением, возможным при применении индивидуального лекарственного средства. Общепринятые лекарственные средства против глаукомы включают, но не ограничиваются ими, бета-блокаторы, такие как тимолол, метипранолол, картеолол, бетаксолол и левобунолол; аналоги простагландина, такие как латанопрост; холинэргические агонисты, такие как пилокарпин и карбахол; альфа-агонисты, такие как бромонидин и иопидин; ингибиторы карбоангидразы, такие как дорзоламид; и адренергические агонисты, такие как эпинефрин и дипивефрин.

Фармацевтические композиции

Фармацевтические композиции, содержащие соединения I и II, описанные в настоящей заявке, можно получать посредством традиционного перемешивания, растворения, гранулирования, растирания для получения драже, эмульгации, заключения в оболочку, наполнения пор или лиофилизации. Композиции можно получать традиционными способами с применением одного или более физиологически приемлемого носителя, разбавителя, наполнителя или вспомогательного вещества, которые способствуют обработке активных соединений с получением препаратов, которые можно применять фармацевтически.

Соединения I и II можно вводить в состав фармацевтических композиций per se или в виде гидрата, сольвата, N-оксида или фармацевтически приемлемой соли, описанных в настоящей заявке. Как правило, указанные соли имеют большую растворимость в водных растворах по сравнению с соответствующими свободньми кислотами и основаниями, но также могут образовываться соли, имеющие меньшую растворимость по сравнению с соответствующими свободными кислотами или основаниями.

Согласно одному из вариантов реализации предложен фармацевтический состав, содержащий соединение I и/или соединение II и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель, разбавитель, консервант или стабилизатор или их смеси.

Согласно одному из вариантов реализации соединения находятся в виде нетоксичных фармацевтически приемлемых солей, отмеченных ранее. Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединений согласно настоящему изобретению включают соли присоединения кислот, образованные с применением хлороводородной кислоты, фумаровой кислоты, n-толуолсульфокислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты, уксусной кислоты, лимонной кислоты, винной кислоты, угольной кислоты или фосфорной кислоты. Соли аминогрупп также могут включать четвертичные аммонийные соли, в которых атом азота аминогруппы содержит подходящую органическую группу, такую как алкил, алкенил, алкинил или аралкильный фрагмент. Кроме того, если соединения, описанные в настоящей заявке, содержат кислотный фрагмент, их подходящие фармацевтически приемлемые соли могут включать соли металлов, такие как соли щелочных металлов, например, натриевые или калиевые соли; и соли щелочноземельных металлов, например, кальциевые или магниевые соли.

Фармацевтически приемлемые соли, описанные в настоящей заявке, можно получать при помощи традиционных способов, например, в результате взаимодействия продукта в виде свободного основания с одним или более эквивалентом соответствующей кислоты в растворителе или среде, в котором соль является нерастворимой, или в растворителе, таком как вода, который удаляют в вакууме или путем сушки на холоду, или путем анионного обмена в соли на другой анион на подходящей ионообменной смоле.

Соединения I и II можно вводить путем перорального, парентерального (например, внутримышечной, интраперитонеальной, внутривенной, интрацеребральной (ICV), интрацистернальной инъекции или инфузии, подкожной инъекции или имплантации), при помощи ингалируемого спрея, путем назального, вагинального, ректального, подъязычного, уретрального (например, в виде уретральных суппозиториев) или местного способа введения (например, в виде геля, мази, крема, аэрозоля и т.д.) и могут входить, индивидуально или совместно, в стандартные дозируемые составы, содержащие традиционные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты, наполнители и вещества-носители, соответствующие каждому способу введения. В дополнение к лечению теплокровных животных, таких как мыши, крысы, лошади, крупный рогатый скот, овцы, собаки, кошки, обезьяны и т.д., соединения, описанные в настоящей заявке, могут быть эффективными для человека.

Фармацевтические композиции, предназначенные для введения соединений I и II, могут присутствовать в стандартной дозированной форме и могут быть получены при помощи любых способов, хорошо известных в области фармацевтики. Фармацевтические композиции можно, например, получать путем однородного и тщательного смешения активного ингредиента с жидким носителем или мелкодисперсным твердым носителем или с обоими видами носителей, а затем, при необходимости, придания формы продукту в желаемом составе. В фармацевтическую композицию активное соединение включено в количестве, достаточном для оказания желаемого терапевтического действия. Например, фармацевтические композиции, описанные в настоящей заявке, могут теоретически иметь форму, подходящую для любого способа введения, включая, например, местное, введение в глаза, пероральное, трансбуккальное, системное, назальное, введение в виде инъекции, трансдермальное, ректальное, вагинальное и т.д., или форму, подходящую для введения путем ингаляции или инсуффляции.

В случае местного введения JАК-селективное(ые) соединение(я) или пролекарство(а) могут входить в состав растворов, гелей, мазей, кремов, суспензий и т.д., что хорошо известно в данной области. В частности, растворы, гели, мази, кремы и суспензии хорошо подходят для введения непосредственно в глаза. Один из вариантов реализации представляет собой фармацевтический состав, содержащий соединение I и/или соединение II, где состав выбран их раствора, геля, мази, крема и суспензии. Согласно одному из вариантов реализации состав представляет собой раствор. Согласно другому варианту реализации состав представляет собой гель. Согласно другому варианту реализации раствор представляет собой суспензию. Согласно другому варианту реализации раствор представляет собой крем или мазь. Один из вариантов реализации представляет собой любой из вышеуказанных составов в наборе для введения в глаз, например, местного или путем инъекции в глаз. Согласно одному из вариантов реализации состав представляет собой жидкость, например, гомогенную жидкость или суспензию, продаваемую во флаконе, из которого можно дозировать состав в виде глазных капель. Согласно одному из вариантов реализации состав представляет собой крем или мазь, продаваемый в тубе, из которой можно дозировать состав в глаз, например, под веко. Согласно другому варианту реализации 5 соединение представлено в вязкой жидкости (такой как карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, глицерин, поливиниловый спирт или капли, содержащие масло) для инсталляции в глаз. Составы могут содержать консерванты или не содержать консерванты (например, в одноразовом контейнере). Применение не содержащих консерванты составов может обладать особенными благоприятными эффектами для лечения сухости глаз, которые часто являются чувствительными и ослабевают в результате введения консервантов в глаза.

Системные составы включают составы, предназначенные для введения путем инъекции, например, подкожной, внутривенной, внутримышечной, интратекальной или интраперитонеальной инъекции, а также составы, предназначенные для трансдермального, чресслизистого, перорального или внутрилегочного введения.

Подходящие инъецируемые составы включают стерильные суспензии, растворы или эмульсии активного(ых) соединения(й) в водных или масляных носителях. Композиции также могут содержать агенты, такие как суспендирующие агенты, стабилизаторы и/или диспергирующие агенты. Составы для инъекции могут присутствовать в стандартной дозируемой форме, например, в ампулах или контейнера, содержащих несколько доз, и могут содержать добавленные консерванты.

В качестве альтернативы, инъецируемый состав может присутствовать в форме порошка, растворяемого в подходящем носителе, включающем, но не ограничивающемся только ими, стерильную апирогенную воду, буфер, раствор декстрозы и т.д., перед применением. С этой точки зрения активное(ые) соединение(я) можно сушить при помощи любых известных в данной области способов, таких как лиофилизация, и растворять перед применением.

В случае чресслизистого введения в составе применяют смачивающие вещества, подходящие для проницания через барьер. Эти смачивающие вещества хорошо известны в данной области.

В случае перорального введения фармацевтические композиции могут иметь форму, например, пастилок, таблеток или капсул, получаемых при помощи традиционных способов с применением фармацевтически приемлемых наполнителей, таких как связывающие агенты (например, прежелатинизированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); вещества-наполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или гидрофосфат кальция); смазки (например, стеарат магния, тальк или оксид кремния); разрыхлители (например, картофельный крахмал или крахмал натрия гликолят); или увлажнители (например, лаурилсульфат натрия). Таблетки могут быть покрыты оболочкой при помощи способов, хорошо известных в данной области, например, сахарами, пленками или кишечнорастворимьми оболочками. Дополнительно, фармацевтические композиции, содержащие 2,4-замещенный пиримидиндиамин в качестве активного ингредиента или его пролекарство в форме, подходящей для перорального применения, могут также включать, например, формованные пастилки, пастилки, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы или сиропы или эликсиры. Композиции, предназначенные для перорального применения, можно получать согласно любым способам, известным в области производства фармацевтических композиций, и подобные композиции могут содержать один или более агент, выбранный из группы, состоящей из подсластителей, ароматизаторов, красителей и консервантов, для получения фармацевтически простого и привлекательного для потребителя препарата. Таблетки содержат активный ингредиент (включая пролекарство) в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми наполнителями, которые подходят для производства таблеток. Эти наполнители могут представлять собой, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующие агенты и разрыхлители (например, зерновой крахмал или альгиновую кислоту); связывающие агенты (например, крахмал, желатин или камедь); и смазки (например, стеарат магния, стеариновую кислоту или тальк). Таблетки могут быть безоболочечными или покрыты оболочкой при помощи известных способов для задержки распадания и всасывания в желудочно-кишечном тракте и, тем самым, обеспечивают продолжительное действие в течение длительного периода. Например, можно применять вещества для задержки распадания, такие как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат. Таблетки также могут быть покрыты при помощи способов, описанных в патентах США №№4256108; 4166452 и 4265874 с образованием осмотических терапевтических таблеток для управляемого высвобождения. Фармацевтические композиции, описанные в настоящей заявке, также могут находиться в виде эмульсий типа масло-в-воде.

Жидкие препараты для перорального введения могут иметь форму, например, эликсиров, растворов, сиропов или суспензий, или они могут быть представлены в виде сухого продукта, растворяемого в воде или в другом подходящем носителе перед применением. Подобные жидкие препараты можно получать при помощи традиционных способов с применением фармацевтически приемлемых добавок, таких как суспендирующие агенты (например, сорбитовый сироп, производные целлюлозы или гидрогенированные пищевые жиры); эмульгаторы (например, лецитин или камедь); неводные носители (например, миндальное масло, масляные эфиры, этиловый спирт, cremophore™ или фракционированные растительные малса); и консерванты (например, метил- или пропил- и -гидроксибензоаты или сорбиновая кислота). Препараты также могут содержать буферные соли, консерванты, ароматизаторы, красители и подсластители при необходимости.

Препараты для перорального введения можно подходящим образом получать для достижения управляемого высвобождения активного соединения или пролекарства, что хорошо известно.

В случае трансбуккального введения композиции могут иметь форму таблеток или пастилок, полученных традиционным образом.

В случае ректальных и вагинальных способов введения активное(ые) соединение(я) могут входить в состав растворов (для удерживающих клизм), суппозиториев или мазей, содержащих традиционные основы мазей, такие как масло какао или другие глицериды.

В случае назального введения или введения путем ингаляции или инсуффляции активное(ые) соединение(я) или пролекарство(а) можно доставлять в виде аэрозоля, спрея из упаковок под давлением или ингалятора с применением подходящего газа-вытеснителя, например, дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, фторированных углеводородов, диоксида углерода или других подходящих газов. В случае аэрозоля под давлением стандартную дозировку можно определять при помощи установки клапана для доставки измеренного количества. Капсулы и картриджи для применения в ингаляторе или инсуффляторе (например, капсулы и картриджи, состоящие из желатина) могут содержать порошковую смесь соединения и подходящей порошковой основы, такой как лактоза или крахмал.

Фармацевтические композиции могут иметь форму стерильной инъецируемой водной или масляной суспензии. Эта суспензия может быть получена согласно уровню техники с применением подходящих диспергирующих агентов или увлажнителей и суспендирующих агентов, которые упомянуты выше. Стерильный инъецируемый препарат также может представлять собой стерильный инъецируемый раствор или суспензию в нетоксично парентерально приемлемом разбавителе или растворителе. В число приемлемых носителей и растворителей, которые можно применять, входят вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Соединения I и II также можно вводить в виде суппозиториев для ректального и уретрального введения лекарственного средства. Согласно конкретным вариантам реализации соединения могут входить в состав уретральных суппозиториев, например, применяемых для лечения состояний, связанных с фертильностью, в частности и мужчин, например, для лечения нарушений функции яичек.

Согласно изобретению 2,4-замещенные пиримидиндиаминовые соединения можно применять для производства композиции или лекарственного средства, включая лекарственные средства, подходящие для ректального или уретрального введения. Изобретение также относится к способам производства композиций, содержащих 2,4-замещенные пиримидиндиаминовые соединения в форме, которая подходит для уретрального или ректального введения, включая суппозитории.

Для местного введения можно применять кремы, мази, желе, гели, растворы или суспензии и т.д., содержащие соединения I и II. Соединения I и II можно применять для производства композиции или лекарственного средства, включая лекарственные средства, подходящие для местного введения. Согласно конкретным вариантам реализации соединения I и II могут входить в состав для местного введения с полиэтиленгликолем (ПЭГ). Эти составы могут содержать дополнительные фармацевтически активные ингредиенты, такие как разбавители, стабилизаторы и/или адъюванты. Согласно конкретным вариантам реализации составы для местного введения получают для лечения заболеваний и/или нарушений зрения.

В число устройств, которые можно применять для введения конкретных примеров соединений I и II, включены устройства, хорошо известные в данной области, такие как дозирующие ингаляторы, распылители жидких лекарственных средств, ингаляторы, содержащие сухие порошки, распылители, паровые ингаляторы и т.д. Другие подходящие технологии для введения конкретных 2,4-замещенных пиримидиндиаминовых соединений включают электрогидродинамические распылители аэрозолей. Спреи и аэрозоли можно применять для введения соединений, как per se, так и в виде составов, непосредственно в глаз.

Ряд носителей, подходящих для введения соединений I и II в глаз, известен в данной области. Конкретные неограничивающие примеры описаны в патенте США № 6261547;

патенте США №6197934; патенте США №6056950; патенте США №5800807; патенте США №5776445; патенте США №5698219; патенте США №5521222; патенте США №5403841; патенте США №5077033; патенте США №4882150; и патенте США №4738851. Как правило, составы для введения в глаза содержат фармацевтически эффективное количество 2,4-пиримидиндиаминового соединения, описанного в настоящей заявке, например, примерно от 0,0001 до 1,0% по массе (масс./масс.). Согласно конкретным вариантам реализации фармацевтически эффективное количество соединения составляет примерно от 0,0003% до 0,1% (масс./масс.), например, примерно от 0,003% до 0,5% (масс./масс.) или примерно от 0,01% до 0,03% (масс./масс.).

Согласно конкретным примерам композиция для введения в глаза, содержащая описанное в настоящей заявке 2,4-пиримидиндиаминовое соединение, содержит агент, регулирующий тоничность, буфер или оба указанных соединения. Согласно конкретным примерам композиций для введения в глаза агент, регулирующий тоничность, представляет собой простой углевод или сахарный спирт. Как известно специалистам в данной области, агенты, регулирующие тоничность, можно применять в композициях согласно настоящему изобретению для регулирования тоничности композиции, предпочтительно до тоничности обычных слез. Примеры подходящих агентов, регулирующих тоничность, включают без ограничений хлорид натрия, хлорид калия, хлорид магния, хлорид кальция, углеводы, такие как декстроза, фруктоза, галактоза, полиолы, такие как сахарные спирты, включающие в качестве примера, маннит, сорбит, ксилит, лактит, изомальт, мальтит и их комбинации. Композиции, содержащие буфер, содержат, согласно некоторым примерам, фосфат, цитрат или оба указанных соединения.

Согласно одному из аспектов композиции для введения в глаза, содержащие описанные в настоящей заявке 2,4-пиримидиндиаминовые соединения, возможно содержат поверхностно активное вещество, полимерный стабилизатор или оба указанных соединения. Поверхностно активные вещества применяют в конкретных композициях для облегчения доставки наиболее высоких концентраций вводимого 2,4-пиримидиндиаминового соединения. Подобные поверхностно активные вещества могут способствовать растворению соединения. Типичные поверхностно активные вещества включают полисорбат, полоксамер, полиосил 40 стеарат, полиоксил касторовое масло, тилоксапол, тритон и сорбитана монолаурат. Согласно конкретным вариантам реализации поверхностно активное вещество выбрано из Triton XI 14, тилоксапола и их комбинаций. Согласно другому варианту реализации композиций для введения в глаза полимерный стабилизатор представляет собой Carbomer 974р.

2,4-3амещенное(ые) пиримидиндиаминовое(ые) соединение(я) или пролекарство(а), описанные в настоящей заявке, или композиции, их содержащие, в целом, применяют в количестве, эффективном для достижения предполагаемого результата, например, в количестве, эффективном для лечения или профилактики конкретного состояния, требующего лечения. Соединение(я) можно вводить терапевтически для достижения терапевтического благоприятного действия или профилактически для достижения профилактического благоприятного действия. Под терапевтическим благоприятным действием понимают ликвидацию или облегчение первичного нарушения, требующего лечения, и/или ликвидацию или облегчение одного или более симптомов, связанных с первичным нарушением, в результате чего пациент сообщает об улучшении самочувствия или состояния, несмотря на то, что пациент может подвергаться действию первичного нарушения. Например, введение соединения пациенту, страдающему от глазного нарушения, вызванного аллергической реакцией, оказывает терапевтическое благоприятное действие не только в случае, если первичный аллергический ответ ликвидирован или облегчен, но также если пациент сообщает о снижении степени тяжести или длительности симптомов, связанных с аллергией, вызванной воздействием аллергена. Терапевтическое благоприятное действие также включает прекращение или замедление прогрессирования заболевания вне зависимости от фактического улучшения симптомов.

Для профилактического введения соединение можно вводить пациенту с риском развития одного из описанных выше состояний. Например, если неизвестно, имеет ли пациент аллергию к конкретному лекарственному средству, то соединение можно вводить перед введением лекарственного средства для предотвращения или облегчения аллергического ответа на лекарственное средство. В качестве альтернативы, профилактическое введение можно применять для предотвращения проявления симптомов у пациента, у которого диагностировано первичное нарушение. Например, соединение можно вводить страдающему от аллергии перед ожидаемым воздействием аллергена. Соединения также можно вводить профилактически здоровым индивидуумам, которые повторно подвергаются действию агентов, вызывающих вышеописанные болезни, для профилактики проявления нарушения. Например, соединение можно вводить здоровому индивидууму, который повторно подвергается действию аллергена, который индуцирует аллергическую реакцию в глазах, такому как пыльца, для профилактики развития аллергии у индивидуума.

Количество вводимого соединения зависит от ряда факторов, включающих, например, конкретное состояние, требующее лечения, способ введения, тяжесть состояния, требующего лечения, и возраст и массу тела пациента, биодоступность конкретного вводимого соединения и т.д. Определение эффективной дозировки входит в рамки способностей специалистов в данной области. Практикующий специалист способен определять оптимальную дозу для конкретного индивидуума. Эффективные дозировки можно оценивать изначально по данным исследований in vitro. Например, исходную дозировку, применяемую у животных, можно регулировать в составе для достижения концентрации активного соединения в большом круге кровообращения или в сыворотке, которая представляет собой IС₅₀ конкретного соединения, измеренной в исследовании in vitro, или более. Расчет дозировок для достижения подобных концентраций в большом круге кровообращения или в сыворотке с учетом биодоступности конкретного соединения входит в рамки способностей специалистов. Руководство см. например в Fingi & Woodbury, "General Principles," In: Goodman and Oilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Chapter 1, pp. 1-46, последнее издание, Pergamon Press, и ссылки, представленные в этой работе.

Исходные дозировки также можно оценивать по данным in vivo, например, на животных моделях. Животные модели, подходящие для исследования эффективности соединений при лечении или профилактике различных заболеваний, описанных выше, хорошо известны в данной области. Дозируемые количества, как правило, находятся в диапазоне примерно от 0,0001 или 0,001 или 0,01 мг/кг/день до 100 мг/кг/день, но могут быть выше или ниже в зависимости, помимо прочих факторов, от активности соединения, его биодоступности, способа введения и ряда факторов, обсуждаемых выше. Дозируемое количество и интервал введения можно регулировать индивидуально для достижения концентрации соединения(й) в плазме, которая является достаточной для поддержания терапевтического или профилактического действия. Например, соединения можно вводить один раз в неделю, несколько раз в неделю (например, через день), один раз в день или несколько раз в день в зависимости, помимо прочего, от способа введения, конкретного симптома, требующего лечения, и решения лечащего врача. В случаях локального введения или селективного захвата, например, локального местного введения, эффективная локальная концентрация активного(ых) соединения(й) может быть не связана с концентрацией в плазме. Специалисты способны оптимизировать эффективные локальные дозировки без дополнительных исследований.

Представленное выше описание, относящееся к требованиям к дозировкам 2,4-замещенных пиримидиндиаминовых соединений, относится к дозировкам, требуемым для пролекарств, при этом специалистам в данной области очевидно, что количество вводимого(ых) пролекарства(ств) зависит от ряда факторов, включающих, например, биодоступность конкретного(ых) пролекарства(ств), скорости и эффективности превращения в активное лекарственное соединение при выбранном способе введения и т.д. Определение эффективной дозировки пролекарства(ств) для конкретного применения и способа введения входит в рамки способностей специалистов в данной области.

Эффективные дозировки можно оценивать изначально по данным исследований активности in vitro и метаболизма. Например, исходную дозировку пролекарства, применяемую у животных, можно регулировать в составе для достижения концентрации метаболита активного соединения в большом круге кровообращения или в сыворотке, которая представляет собой IC₅₀ конкретного соединения, измеренной в исследовании in vitro, таком как исследования w vitro СНМС или ВММС и другие исследования т vitro, описанные в заявке на патент США №10/355543, поданной 31 января 2003 года (US2004/0029902A1), международной заявке согласно РСТ №PCT 7US03/0,022, поданной 31 января 2003 года (WO 03/063794), заявке на патент США №10/631029, поданной 29 июля 2003 года, международной заявке согласно РСТ №PCT/US03/24087 (W02004/014382), заявке на патент США №10/903263, поданной 30 июля 2004 года и международной заявке согласно РСТ №PCT/US2004/24716 (W005/016893), или более. Расчет дозировок для достижения концентраций в большом круге кровообращения или в сыворотке с учетом биодоступности конкретного пролекарства при желательном способе введения находится в рамках способностей специалистов. Руководство см. в Fingi & Woodbury, "General Principles," In: Goodman and Oilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Chapter 1, pp. 1-46, последнее издание, Pergamon Press, и ссылки, представленные в этой работе. Для введения в глаза эффективные дозировки могут представлять собой дозировки, при которых в результате введения в глаза не происходит поступление значительного количества соединения в большой круг кровообращения, например, в случае если глазные капли добавляют в глаза для лечения глазного нарушения, применяют сильно локализованную дозу, в результате чего не происходит поступление значительного количества соединения в большой круг кровообращения.

Дополнительные соединения, которые могут заменять соединения I и II в описанных способах, отдельно рассматриваются в настоящей заявке и описаны в патенте США № 7491732 (автор Аргад с соавторами (Argade et al.)), опубликованном 17 февраля 2009 года и в опубликованной заявке на патент США № 2007/0203161, опубликованной 30 августа 2007 года, содержание каждой из которых включено в настоящую заявку посредством ссылки.

Синтез соединений

Соединения I и II, а также соли III-VII получали согласно представленному далее описанию или по аналогии со способами синтеза, описанными далее. Альтернативные способы синтеза будут очевидны специалистам в данной области.

Пример 1

I:N2-(3-aминocyльфoнил-4-мeтилфeнил)-5-фтop-N4-[4-(пpoп-2-инилoкcи)фeнил]-2,4-пиримидиндиамин 4-Нитрофенол (1,00 г, 7,19 ммоль), пропаргилбромид (80 масс.% в толуоле, 0,788 мл, 7,09 ммоль) и К₂СО₃ (1,08 г, 7,84 ммоль) объединяли и перемешивали в ацетоне (16,0 мл) при 60°С в течение 18 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой (200 мл). Выделяли 4-(проп-2-инилокси)нитробензол в виде белого твердого вещества путем вакуумного фильтрования (1,12 г).¹Н ЯМР (CDCl₃): δ 8,22 (d, J=9,0 Гц, 2H), 7,05 (d, J= 9,0 Гц, 2Н), 4,80 (d, J= 2,4 Гц, 2Н), 2,59 (t, J- 2,4 Гц, 1Н).

4-(проп-2-инилокси)нитробензол (0,910 г, 5,13 ммоль), железо (1,42 г, 25,3 ммоль) и NH₄Cl(0,719г, 12,8 ммоль) интенсивно перемешивали в смеси EtOH/вода (1:1, 55 мл) при 70°С в течение 15 минут. Теплую реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю и концентрировали в вакууме. Остаток суспендировали в 10% 2н насыщенным аммиаком метанолом в дихлорметане, обрабатывали ультразвуком и фильтровали через диатомитовую землю. Концентрированно приводило к получению 4-(проп-2-инилокси)анилина в виде маслянистой жидкости, которую применяли без дополнительной очистки.¹H ЯМР (CDCL₃):δ 6,82 (d, J= 8,7 Гц, 2Н), 6,64 (d, J= 8,7 Гц, 2Н), 4,61 (d, J= 2,4 Гц, 2Н),2,50(и=2,4Гц,1Н).

4-(проп-2-инилокси)анилин (0,750 г, 5,10 ммоль) и 2,4-дихлор-5-фторпиримидин (1,27 г, 0,760 ммоль, коммерчески доступен в Sigma-Aldrich, Milwaukee, Wisconsin, USA) перемешивали в смеси МеОН/вода (4:1, 35 мл) при комнатной температуре в течение 18 часов. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (200 мл) и промывали 1н. НСl (50 мл) и солевым раствором (50 мл). Органический слой сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем колоночной хроматографии (силикагель, градиент от гексана до EtOАстексан (1:10)) с получением 2-хлор-5-фтор-М4-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-4-пиримидинамина в виде светло-коричневого твердого вещества (0,514 г). ¹Н ЯМР (CDCl₃): δ 8,03 (d, J=2,7 Гц, 1Н), 7,53 (d, J= 8,7 Гц, 2Н), 7,02 (d, J= 8,7 Гц, 2H), 6,86 (s, 1Н), 4,71 (d, J= 2,4 Гц, 2Н), 2,55 (t, J= 2,4 Гц, 1Н); ЖХМС: чистота: 99%; МС

(m/е):279 (МН⁺).

2-Хлор-5-фтор-Н4-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-4-пиримидинамин (0,514 г, 1,85 ммоль), 3-(аминосульфонил)-4-метиланилин (0,689 г, 3,70 ммоль, получен путем восстановления коммерчески доступного 2-метил-5-нитробензолсульфонамида или синтезировали согласно описанию, представленному далее) и трифторуксусную кислоту (0,186 мл, 2,41 ммоль) объединяли с i-PrOH (6,0 мл) в герметичной пробирке и нагревали при 100°С в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли 1н. НСl (80 мл). Выделяли Н2-(3-аминосульфонил-4-метилфенил)-5-фтор-Н4-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамин (I) в виде белого твердого вещества с помощью вакуумного фильтрования (0,703 г). ¹Н ЯМР (ДМСО-d₆,): δ 10,08 (bs, 2Н), 8,19 (d, J= 4,5 Гц, 1Н), 7,89 (s, 1Н), 7,74 (dd, J= 2,4 и 8,4 Гц, 1Н), 7,58 (d, J= 8,7 Гц, 2Н), 7,32 (bs, 2Н), 7,23 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 6,97 (d, J= 8,4 Гц, 2Н), 4,79 (d, J= 2,1 Гц, 2Н), 3,59-3,55 (m, 1Н), 2,53 (s, 3H);

ЖХМС: чистота: 97%; МС (т/е): 428 (МН⁺).

II: 5-фтор N₂-(4-метил-3-пропиониламиносульфонилфенил)-N4-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиидиамин N2-(3-аминосульфонил-4-метилфенил)-5-фтор-К4-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамин, I (0,200 г, 0,467 ммоль), DMAP (40 мг, 0,33 ммоль) и триэтиламин (0,118мл, 0,847 ммоль) перемешивали в ТГФ (6,0 мл). Пропионовый ангидрид (0,180 мл, 1,40 ммоль) добавляли к раствору по каплям. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Раствор разбавляли этилацетатом (50 мл) и промывали водой (5х25 мл) и солевым раствором (10 мл). Органический слой сушили (MgSO₄), фильтровали и выпаривали. Остаток суспендировали в этилацетате (25 мл), обрабатывали ультразвуком, а твердое вещество собирали путем фильтрования с получением 5-фтор-N2-(4-метил-3-пропиониламиносульфонилфенил)-N4-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамина, II (0,20 г). ¹Н ЯМР (ДМСО-d₆): δ 12,01 (s, 1Н), 9,44 (s, 1Н), 9,26 (s, 1Н), 8,16 (d, J= 2,4 Гц, 1Н), 8,06 (dd, J= 0,3 и 3,3 Гц, 1Н), 8,00 (dd, J= 2,1 и 7,8 Гц, 1Н), 7,69 (d, J= 8,7 Гц, 2Н), 7,19 (d, J= 8,4 Гц, 1Н), 6,95 (d, J= 8,7 Гц, 2Н), 4,77 (d, J= 2,1 Гц, 2Н), 3,56 (t, J=2,1 Гц, 1Н), 2,49 (s, 3H), 2,24 (q, J= 7,2 Гц, 2Н), 0.89 (t, J= 7,2 Гц, 3H); ЖХМС: чистота: 98%; МС (m/e): 484 (МН⁺).

III: мононатриевая соль 5-фтор N2-(4-метил-3-пропиониламиносульфонилфенил)-N4-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамина 5-Фтор-N2-(4-метил-3-пропиониламиносульфонилфенил)-N4-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамин, II (0,125 г, 0,258 ммоль) суспендировали в ацетонитриле (1,5 мл) и воде (1,5 мл) и охлаждали на ледяной бане. Водный раствор 1н. NaOH (0,260 мл) добавляли по каплям. Реакционную смесь перемешивали до образования прозрачной смеси, фильтровали через стеклянную вату и лиофилизировали с получением натриевой соли П. ¹Н ЯМР (ДМСОd₆): δ 9,17 (bs, 2H), 8,01 (d, J= 3,6 Гц, 1Н), 7,89 (s, 1Н), 7,78-7,69 (m, 3H), 6,99-6,92 (m, 3H), 4,76 (d, J= 2,1 Гц, 1Н), 2,43 (s, 3), 1,95 (q, J= 7,2 Гц, 2H), 0.86 (t, J-7,2 Гц, 3Н); ЖХМС: чистота: 98%; МС (т/е):484 (МН⁺).

Следующие соединения получали аналогично описанным выше.

IV: калиевая соль 5-фтор N2-[4-метил-3-(N-пропиониламиносульфонил)фенил]-N4-[4-(2-пpoпинилoкcи)фeнил]-2,4-пиpимидиндиaминa

¹Н ЯМР (ДМСО-D₆): δ 9,16 (s, 1Н), 9,14 (s, 1Н), 8,01 (d, J= 3,6 Гц, 1Н), 7,85 (d, J= 2,1 Гц, 1Н), 7,75-7,70 (m, 3Н), 6,97-6,92 (m, 3Н), 4,76 (d, J= 1,8 Гц, 2H), 3,55 (t, J= 2,4 Гц, 1Н), 2,42 (s, 3Н), 1,91 (q, J- 7,5 Гц, 2H), 0,85 (t, J= 7,5 Гц, 3Н); ЖХМС: чистота: 97%; МС (m/z): 484 (исходное, МН⁺).

V: кальциевая соль 5-фтор N2-[4-метил-3-(N-пропиониламиносульфонил)фенил]-N4-[4-(2-пpoпинилoкcи)фeнил]-2,4-пиpимидиндиaминa

¹Н ЯМР (ДМС-d₆: δ 9,16 (s, 2H), 8,00 (d, J= 3,6 Гц, 1Н), 7,88 (d, J= 1,8 Гц, 1Н), 7,75-7,69 (m, 3H), 6,97-6,92 (m, 3H), 4,76 (d, J= 1,8 Гц, 2H), 3,55 (t, J= 2,1 Гц, 1Н), 2,43 (s, 3H), 1,94 (q, J- 7,5 Гц, 2H), 0,87 (t, J= 7,5 Гц, ЗН); ЖХМС: чистота: 98%; МС (m/z): 484 (исходное, МН⁺).

VI: соль 5-фтор N2-[4-метил-3-(N-пропиониламиносульфонил)фенил] -N4- [4-(2 -пропинилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамина и аргинина

¹Н ЯМР (D₂O): δ 7,61 (d, J= 3,9 Гц, 1Н), 7,57-7,55 (m, 1Н), 7,36-7,31 (m, 1Н), 7,12 (d, J=8,7 Гц, 2H), 6,88 (d, J= 8,7 Гц, 1Н), 6,72 (d, J= 9,0 Гц, 2H), 4,77-4,75 (m, 2H), 3,60 (t, J= 6,0 Гц, 1Н), 3,09 (t, J= 6,9 Гц, 2H), 2,84-2,81 (m, 1Н), 2,35 (s, 3Н), 2,03 (q, J=5,7 Гц, 2H), 1,80-1,72 (m, 2H), 1,61-1,48 (m, 2H), 0,855 (t, 3=7,5 Гц, ЗН); ЖХМС: чистота: 98%; МС (m/z): 484 (исходное, МН⁺).

VII: соль 5-фтор N2-[4-метил-3-(N-пропиониламиносульфонил)фенил]N4-[4-(2-пропинилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамина и холина

¹Н ЯМР (ДМСОd₆: δ 9,16 (s, 2H), 8,00 (d, J= 3,6 Гц, 1Н), 7,85 (d, J= 1,8 Гц, 1Н), 7,75-7,69 (m, 3H), 6,97-6,90 (m, 3H), 5,27 (t, J= 4,8 Гц, 1Н), 4,76 (d, J= 1,8 Гц, 2H), 3,86-3,77 (m, 2H), 3,56-3,54 (m, 1H), 3,40-3,54 (m, 2H), 3,08 (s, 9H), 2,42 (s, 3H); ЖХМС: чистота: 99%; МС (m/z): 484 (исходное, MH⁺).

Пример 2

5-амино-2-метилбензолсульфонамид

4-метилнитробензол (20 ммоль) обрабатывали при 0°С хлорсульфокислотой (5,29 мл, 80 ммоль), а затем после нагревания гомогенного раствора до комнатной температуры его перемешивали при 110°С в течение 24 часов. Полученную суспензию затем выливали в ледяную воду (100 г), экстрагировали в диэтиловом эфире (3×75 мл), а органическую фазу промывали водой (75 мл) затем сушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель затем удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного сульфонилхлорида, который помещали в этилацетат и перемешивали с гидроксидом аммония в течение ночи при комнатной температуре. После отделения слоя в этилацетате водный слой экстрагировали в этилацетате. Органические слои объединяли, сушили над безводньм сульфатом натрия, а растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученную маслянистую жидкость очищали путем колоночной хроматографии (силикагель, гексан, затем 10%, 20% и до 50% этилацетата в гексане) с получением 3-аминосульфонил-4-метилнитробензола, ЖХМС:

чистота: 95%; МС (т/е): 217 (МН⁺).

К раствору 3-аминосульфонил-4-метилнитробензола в дихлорметане и метаноле добавляли 10% Pd/C и смесь встряхивали в атмосфере водорода при 50 psi в течение 15 минут. Смесь фильтровали через диатомитовую землю и осадок на фильтре промывали метанолом. Объединенные органические растворы концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, которые дополнительно очищали путем колоночной флэш-хроматографии (этилацетаттексан, 1:1) с получением 3-аминосульфонил-4-метиланилина, ЖХМС: чистота: 87%; МС (т/е): 187 (МН⁺).

Пример 3

Исследование В-клеточной линии Ramos, стимулированной IL-4

Одним из способов исследования ингибирования JAK является определение действия соединений I и II на повышение экспрессии генных продуктов. В исследовании Ramos/IL-4 В-клетки стимулируют цитокином интерлейкин-4 (IL-4), что приводит к активации пути JAK/Stat в результате фосфорилирования киназ семейства JAK, JAK1 и JAK3, которые в свою очередь фосфорилируют и активируют транскрипционный фактор Stat-6. Одним из генов, экспрессия которых повышается с помощью активированного Stat-6, является низкоаффинный рецептор IgE, CD23. Для исследования действия ингибиторов (например, 2,4-замещенных пиримидиндиаминовых соединений, описанных в настоящей заявке) на JAK1 и JAK3 киназы В клетки Ramos человека стимулировали IL-4 человека. Через 20-24 часа после стимулирования клетки окрашивали для определения повышения экспрессии CD23 и анализировали путем проточной цитометрии (FACS). Снижение количества присутствующего CD23 по сравнению с контрольными условиями показывало, что исследуемое соединение активно ингибировало путь JAK киназы. Типовой вариант исследования этого вида описан более подробно далее.

В-клетки, стимулированные цитокином интерлейкин-4 (IL-4), активируют путь JAK/Stat в результате фосфорилирования киназ семейства JAK, JAK1 и JAK3, которые в свою очередь фосфорилируют и активируют транскрипционный фактор Stat-6. Одним из генов, экспрессия которого повышается с помощью активированного Stat-6, является низкоаффинный рецептор IgE, CD23. Для исследования действия ингибиторов на JAK1 и JAK3 киназы В клетки Ramos человека стимулировали IL-4 человека.

В-клеточную линию Ramos приобретали в АТСС (АТСС номер по каталогу CRL-1596). Клетки культивировали в RPMI 1640 (Cellgro, MediaTech, Inc., Hemdon, VA, номер по каталогу 10-040-CM), содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки (ЭБС), термоинактивированной (JRH Biosciences, Inc., Lenexa, Kansas, номер по каталогу 1206-500М) согласно инструкции по активированию АТСС. Клетки поддерживали при плотности 3,5×10⁵. За день до эксперимента В-клетки Ramos разбавляли до 3,5×10⁵ клеток/мл для подтверждения того, что клетки находились в логарифмической фазе роста.

Клетки осаждали и суспендировали в RPMI, содержащей 5% сыворотки. Применяли 5×10 клеток на лунку в 96-луночном планшете для тканевых культур. Клетки предварительно инкубировали с соединением или контрольным носителем ДМСО (Sigma-Aldrich, St-Louis, МО, номер по каталогу D2650) в течение 1 часа в инкубаторе при 37°С. Затем клетки стимулировали IL-4 (Peprotech Inc., Rocky Hill, NJ, номер по каталогу 200-04) для достижения конечной концентрации 50 частиц/мл в течение 20-24 часов. Затем клетки осаждали и окрашивали aнти-CD23-PE (BD Pharmigen, San Diego, CA, номер по каталогу 555711) и анализировали путем FACS. Детектирование проводили с применением проточного цитометра BD LSR I System, приобретенного в Becton Dickinson Biosciences, San Jose, California. Значения ГСзо, рассчитанные на основании результатов этого исследования, представлены в Таблице 1.

Пример 4

Исследование пролиферации зародышевых Т-клеток человека, стимулированных IL-2

Активность соединений, описанных в настоящей заявке, в отношении JAK можно дополнительно характеризовать путем исследования действия соединений I и II, описанных в настоящей заявке, на пролиферативный ответ зародышевых Т-клеток человека. В этом исследовании зародышевые Т-клетки человека, полученные из периферической крови и предварительно активированные путем стимуляции рецептора Т-клеток и CD28, пролиферируют в культуре в ответ на цитокин интерлейкин-2 (IL-2). Этот пролиферативный ответ зависит от активации тирозинкиназ JAK1 и JAK3, которые фосфорилируют и активируют транскрипционный фактор Stat-5. Зародышевые Т-клетки человека инкубировали с соединениями I и II в присутствии IL-2 в течение 72 часов и при завершении исследования измеряли концентрации внутриклеточного АТФ для определения жизнеспособности клеток. Снижение пролиферации клеток по сравнению с контрольными условиями являлось показателем ингибирования пути JAK киназы. Типовое исследование этого вида описано более подробно далее.

Зародышевые Т-клетки человека, полученные из периферической крови и предварительно активированные путем стимуляции рецептора Т-клеток и CD28, пролиферируют in vitro в ответ на цитокин интерлейкин-2 (IL-2). Этот пролиферативный ответ зависит от активации тирозинкиназ JAK1 и JAK3, которые фосфорилируют и активируют транскрипционный фактор Stat-5.

Зародышевые Т-клетки человека получали, как показано далее. Цельную кровь получали у здоровых добровольцев, смешивали в соотношении 1:1 с ФБР, наслаивали на Ficoll Hypaque (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ, номер по каталогу 17-1440-03) в соотношении кровь/ФБР :фиколл 2:1 и центрифугировали в течение 30 минут при 4°С при 1750 об./мин. Лимфоциты на поверхности раздела кровь:фиколл отделяли и дважды промывали 5 объемами ФБР. Клетки повторно суспендировали в среде Иссела (Gemini Bio-products, Woodland, CA, номер по каталогу 400-103), содержащей 40 частиц/мл рекомбинантного IL2 (R and D Systems, Minneapolis, MN, номер по каталогу 202-IL (20 мкг)) и помещали в колбу, предварительно покрытую 1 мкг/мл анти-СВ3 (BD Pharmingen, San Diego, CA, номер по каталогу 555336) и 5 мкг/мл анти-С028 (Immunotech, Beckman Coulter, Brea California, номер по каталогу 1М1376). Зародышевые Т-клетки стимулировали в течение 3-4 дней, затем переносили в чистую колбу и выдерживали в RPMI с 10% ЭБС и 40 частиц/мл IL-2.

Зародышевые Т-клетки промывали дважды ФБР для удаления IL-2 и повторно суспендировали в среде Иссела в концентрации 2×10⁶ клеток/мл. 50 мкл клеточной суспензии, содержащей 80 частиц/мл IL-2 добавляли в каждую лунку плоскодонного 96-луночного черного планшета. Для контрольного опыта без стимуляции IL-2 не добавляли в лунки последнего ряда планшета. Соединения серийно разбавляли в диметилсульфоксиде (ДМСО, 99,7% чистоты, подтвержден для применения на клеточных культурах, Sigma-Aldrich, St. Louis, МО, номер по каталогу D2650), начиная с 5 мМ, при помощи трехкратных разбавлений, а затем разбавляли 1:250 в среде Иссела. Добавляли 50 мкл 2Х соединения на лунку (в двух повторностях) и клетки оставляли пролиферировать на 72 часа при 37°С.

Пролиферацию измеряли при помощи люминесцентного исследования жизнеспособности клеток Cell-Titer-Glo® (Promega), в котором определяют число живых клеток в культуре на основании количества присутствующего АТФ, которое является показателем количества метаболически активных клеток. Субстрат размораживали и оставляли нагреваться до комнатной температуры. После смешивания реагента Cell-Titer Glo и разбавителя 100 мкл добавляли в каждую лунку. Планшеты перемешивали на орбитальном шейкере в течение двух минут для индуцирования лизиса и дополнительно инкубировали при комнатной температуре в течение десяти минут для установления равновесного сигнала. Детектирование проводили при помощи многофункционального анализатора Wallac Victor2 1420 Multilabel Counter, приобретенного в Perkin Elmer, Shelton, СТ. Значения IС₅₀, рассчитанные на основании результатов этого исследования, представлены в Таблице 1.

Пример 5

Эпителиальная линия А549, стимулированная ИФКу

Активность соединений, описанных в настоящей заявке, в отношении JAK также можно характеризовать путем исследования действия соединений I и II, описанных в настоящей заявке, на клетки эпителия легких А549 и клетки U937. Клетки эпителия легких А549 и клетки U937 повышают поверхностную экспрессию ICAM-1 (CD54) в ответ на ряд различных стимулов. Следовательно, применяя экспрессию ICAM-1 в качестве системы исчисления, можно определять действие исследуемого соединения на различные сигнальные пути указанного типа клеток. Стимуляция IL-1R через рецептор IL-lp активирует путь TRAF6/NFxB, что приводит к повышению экспрессии ICAM-1. ИФНу индуцирует повышение экспрессии ICAM-1 в результате активации пути JAK1/JAK2. Повышение экспрессии ICAM-1 можно количественно оценивать путем проведения проточной цитометрии для полного диапазона дозировок соединения и расчета значений ЕС5о. Типовые исследования этого типа описаны более подробно далее и в Примере 6.

Клетки эпителия легких А549 повышают поверхностную экспрессию ICAM-1 (CD54) в ответе на ряд различных стимулов. Следовательно, применяя экспрессию ICAM-1 в качестве системы исчисления, можно определять действие исследуемого соединения на различные сигнальные пути указанного типа клеток. ИФНу повышает экспрессию ICAM-1 в результате активации пути JAK/Stat. Согласно этому примеру определяют повышение экспрессии

ICAM-1 ИФНγ.

Клеточную линию карциномы эпителия легких А549 приобретали в American Type Culture Collection. Культивирование проводили в среде F12K (Mediatech Inc., Lenexa, KS, номер по каталогу 10-025-CV), содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 100 ME пенициллина и 100 нг/мл стрептомицина (полная среда F12k). Клетки инкубировали во влажной атмосфере 5% CO₂ при 37°С. Перед проведением исследования клетки А549 промывали ФБР и трипсинизировали (Mediatech Inc., номер по каталогу 25-052-CI) для отделения клеток. Суспензию клеток в трипсине нейтрализовали полной средой F12K с получением сгустка клеток. Сгусток клеток повторно суспендировали в полной среде F12K в концентрации 2,0×10⁵/мл. Клетки помещали в количестве 20000 на лунку, с общим объемом 100 мкл, в плоскодонный планшет для тканевых культур и оставляли отстаиваться на ночь.

На второй день клетки А549 предварительно инкубировали с 2,4-замещенным пиримидиндиаминовым исследуемым соединением или ДМСО (контроль) (Sigma-Aldrich, St. Louis, МО, номер по каталогу D2650) в течение 1 часа. Затем клетки стимулировали ИФНу (75 нг/мл) (Peprotech Inc., Rocky Hill, NJ, номер по каталогу 300-02) и оставляли инкубироваться в течение 24 часов. Конечный диапазон дозировок исследуемого соединения составлял от 30 мкМ до 14 нМ в 200 цл среды F12K, содержащей 5% ЭБС, 0,3% ДМСО.

На третий день клеточную среду удаляли и клетки промывали 200 мкл ФБР (фосфатный буферный солевой раствор). Каждую лунку трипсинизировали для диссоциации клеток, затем нейтрализовали путем добавления 200 мкл полной среды F12K. Клетки сгущали и окрашивали античеловеческим ICAM-1 мышиным (CD54) (BD Pharmingen, San Diego, CA, номер по каталогу 559771) антителом, конъюгированным с АПК, в течение 20 минут при 4°С. Клетки промывали ледяным буфером FACS (ФБР + 2% ЭБС) и анализировали поверхностную экспрессию ICAM-1 путем проточной цитометрии. Детектирование проводили при помощи проточного цитометра BD LSR I System, приобретенного в BD Biosciences, San Jose, California. События делили по фактическому значению коэффициента рассеяния и рассчитывали среднее геометрическое (программное обеспечение Becton-Dickinson CellQuest версия 3.3. Franklin Lakes, NJ). Строили зависимость среднего геометрического от концентрации соединения для получения кривой зависимости «эффект-доза». Значения IС₅₀, рассчитанные на основании результатов этого исследования, представлены в Таблице 1.

Пример 6

Исследование FACS U937 ИФНγ ICAM1

Моноциты человека U937 повышают поверхностную экспрессию ICAM-1 (CD54) в ответ на ряд различных стимулов. Следовательно, применяя экспрессию ICAM-1 в качестве системы исчисления, можно определять действие исследуемого соединения на различные сигнальные пути указанного типа клеток. ИФНγ повышает экспрессию ICAM-1 в результате активации пути JAK/Stat. Согласно этому примеру определяют повышение экспрессии ICAM-1 ИФНγ.

Моноцитную клеточную линию человека U937 получали в АТСС, Rockville Maryland, номер в каталоге CRL-1593.2, и культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10% (об./об.) ЭТС (эмбриональной телячьей сыворотки). Клетки U937 выращивали в 10% RPMI. Затем клетки помещали в лунки в концентрации 100000 клеток на 160 мкл в 96-луночные плоскодонные планшеты. Затем разбавляли исследуемые соединения согласно представленному описанию: 10 мМ исследуемое соединение разбавляли 1:5 в ДМСО (3 мкл 10 мМ исследуемого соединения в 12 мкл ДМСО), затем серийно разбавляли исследуемое соединение в соотношении 1:3 в ДМСО (6 мкл исследуемого соединения серийно разбавляли в 12 мкл ДМСО, что приводило к трехкратному разбавлению). Затем 4 мкл исследуемого соединения переносили в 76 мкл 10% RPMI, что приводило к 10-кратному разбавлению (100 мкМ соединение, 5% ДМСО). В контрольных лунках 4 мкл ДМСО разбавляли в 76 мкл 10% RPMI.

Исследование проводили в двух повторностях для 8 точек (8 концентраций, получаемых в результате трехкратных разбавлений, начиная с 10 мкл) и с применением 4 лунок, содержащих исключительно ДМСО (контрольные лунки), в условиях стимуляции и 4 лунок, содержащих исключительно ДМСО, без стимуляции.

Планшет с разбавленным соединением перемешивали дважды при помощи мультимека (Beckman Coulter, Brea, California), а затем 20 мкл разбавленных соединений переносили в 96-луночный планшет, содержащий 160 мкл клеток, которые затем снова перемешивали дважды с низкой скоростью. Клетки и соединения предварительно инкубировали в течение 30 минут при 37°С с 5% СО₂.

Стимулирующую 10-кратную смесь готовили путем получения 100 нг/мл раствора ИФНγ человека в 10% RPMI. Клетки и соединение затем стимулировали 20 мкл стимулирующей смеси ИФНγ с получением конечной концентрации 10 нг/мл ИФНу, 10 мМ исследуемого соединения и 0,5% ДМСО. Клетки выдерживали в условиях стимуляции в течение 18-24 часов при 37°С с 5% СO₂.

Клетки переносили в 96-луночный круглодонный планшет для окрашивания, затем

выдерживали во льду в течение процедуры окрашивания. Клетки осаждали при 1000 об./мин в течение 5 минут при 4°С, после чего надосадочную жидкость удаляли. После удаления надосадочной жидкости добавляли 1 мкл конъюгированного с АПК античеловеческого ICAM-1 мышиного антитела на 100 мкл буфера FACS. Клетки затем инкубировали во льду без доступа света в течение 30 минут. После инкубации добавляли 150 мкл буфера FACS и клетки центрифугировали при 1000 об./мин в течение 5 минут при 4°С, после чего надосадочную жидкость удаляли. После удаления надосадочной жидкости добавляли 200 мкл буфера FACS и клетки повторно суспендировали. После суспендирования клетки центрифугировали при 1000 об./мин в течение 5 минут при 4°С. Надосадочную жидкость затем удаляли перед повторньм суспендированием клеток в 150 мкл буфера FACS.

Детектирование проводили при помощи проточного цитометра BD LSR I System, приобретенного в BD Biosciences, San Jose, California. Живые клетки делили по фактическому значению коэффициента рассеяния и измеряли среднее геометрическое ICAM-APC (программное обеспечение Becton-Dickinson CellQuest, версия 3.3, Franklin Lakes, NJ). Анализировали % содержание живых клеток и экспрессию ICAM-1. Исследования исследуемых соединений проводили параллельно с контрольным соединением с известной активностью. ЕС₅₀ контрольного соединения составляло, как правило, 40-100 нМ. Значения EС₅₀, рассчитанные на основании результатов этого исследования, представлены в Таблице 1.

Таблица 1
Соединение	Пример 3	Пример 4	Пример 5	Пример 6
I	0,056	0,181	11,338	0,565
II	9,655
III	3,972
IV	2,318	5,560
V	0,373			25,126
VI	0,104	0,262	4,973	0,424
VII	0,022	0,053		0,140

Пример 7

Фармацевтические составы

В этом примере описаны фармацевтические составы, содержащие соединение I или II (необходимо понимать, что они также включают соли этих соединений). Подобные составы получают при помощи способов, известных специалистам в данной области, а дополнительные составы будут очевидны специалистам в данной области после рассмотрения этого Примера и дополнительного представленного описания.

№ состава	Компоненты состава
1	50 мМ рН 7,4 фосфатный буфер, 0,05% Tween 80, 0,5% NaCl
2	50 мМ рН 7,4 фосфатный буфер, 0,36% ГПМЦ, 0,2% глицерина, 1% ПЭГ400, 0,35% NaCl
3	5 мМ рН 7,4 фосфатный буфер, 0,36% ГПМЦ, 0,2% глицерина, 1% ПЭГ400, 5% Cremophor ELP, 4,3% маннита
4	10 мМ рН 5,8 цитратный буфер, 4,2% маннита
5	10 мМ рН 5,8 цитратный буфер, 4,2% маннита, 0,36% ГПМЦ, 0,2% глицерина
6	0,3% тилоксапола, 0,5% Carbopol974P, 2,25% маннита, 50мМ рН 6,5 фосфатный буфер, 230 мОсм/кг
7	0,3% тилоксапола, 0,1% Carbopol974P, 2,25% маннита, 50 мМ рН 6,5 фосфатный буфер, 230 мОсм/кг

Каждый из представленных выше составов, 1-7, получали с соединением I или II в трех дозируемых концентрациях: 0,001%, 0,003% и 0,01% (масс./масс.). Каждый состав получали путем добавления конкретного количества агента, регулирующего тоничность (маннит), в колбу, нагревания примерно до 50°С примерно в половине конечного объема конкретного буфера (фосфат или цитрат). После нагревания соответствующее количество соединения I или II добавляли совместно с дополнительными наполнителями (глицерин и/или ПЭГ400), как показано в таблице. Добавляли достаточное количество очищенной воды. Смесь перемешивали до достижения гомогенности (примерно пять минут), а затем фильтровали через стерильный мембранный фильтр в стерильный сосуд. При необходимости рН регулировали путем добавления 1,0н NaOH.

Возможно, составы, имеющие высокую концентрацию соединения I или II (например, 0,03% (масс./масс.)) могут содержать поверхностно активное вещество и полимерный стабилизатор. По данным для составов 6 и 7 предпочтительные поверхностно активные вещества включают Triton X114 и тилоксапол, которые коммерчески доступны в Sigma-Aldrich (St. Louis, МО) и Pressure Chemical Company (Pittsburgg, PA), соответственно. Предпочтительные полимерные стабилизаторы включают карбомер Carbopol 974p (коммерчески доступен в Lubrizol, Wickliffe, ОН).

Составы 6 и 7 получали путем диспергирования карбомера сначала в буфере, содержащем поверхностно активное вещество в 10-кратной конечной концентрации (например, 3% тилоксапола в 50 мМ фосфатном буфере при рН 6,5, содержащем 2,5% маннита и 5% Carbomer 974p). Затем соединение I или соединение II диспергировали в этом концентрате также в 10-кратной конечной концентрации. Смесь гомогенизировали, конечный состав получали путем 10-кратного разбавления отфильтрованного концентрата в соответствующем буфере.

Пример 8

Модель индуцированной сухости глаз у мышей

В этом примере описано лечение симптомов на модели сухости глаз у мышей. Получали раствор для инъекции, содержащий 2,5 мг/мл скополамина (Sigma-Aldrich) в инъецируемом солевом растворе (1-1,5 мл на животное). Мышам линии С 5 7 инъецировали 200-250 мкл раствора скополамина четыре раза каждые 2,5 часа попеременно в задние лапы. Мышей помещали в специальные клетки (с отверстиями спереди и сзади) и помещали в бокс. Помещали вентиляторы напротив каждой клетки и включали на 16 часов на ночь в течение пяти последовательных дней. Измерения продуцирования слез проводили ежедневно, а через пять дней считали, что у всех мышей индуцировалась сухость глаз. Животных подвергали лечению 1 мкл лекарственного средства или носителя (один из составов 1-7, описанных выше) один раз в день в течение двух недель. Продуцирование слез измеряли, при этом результаты лечения измеряли по частичному или полному восстановлению нормального значения продуцирования слез.

Продуцирование слез можно измерять при помощи количественных способов или можно проводить качественную оценку роговицы животных, например, при помощи биомикроскопической оценки флуоресцеина или бенгальского розового красителя в глазах подвергавшихся лечению животных. Снижение окраски является показателем успешного лечения состояния сухости глаз.

Пример 9

Другие животные модели

Для подтверждения активности описанных агентов для лечения указанного состояния можно применять другие животные модели сухости глаз. Например, были разработаны некоторые модели синдрома Шегрена, которые симулируют раннюю активацию и инфильтрацию автореактивных лимфоцитов, наблюдаемые в этом состоянии. Модель нежирных диабетических (NOD) мышей показывает лимфатическую инфильтрацию преимущественно CD4⁺ Thl клеток в слезной железе, а также в других органах, включающих поджелудочную, подчелюстную и щитовидную железу. У самцов NOD-мышей показано наличие значительных очагов воспаления слезной железы в возрасте от 8 недель, при этом у самок NOD-мышей не обнаружены изменения вплоть до возраста 30 недель. Такахаши с соавторами (Takahashi et al.), High incidence of autoimmune dacryoadenitis in male non-obese diabetic (NOD) mice depending on sex steroid, din Exp Immunol. 1997; 109:555-561. Модели синдрома Шегрена MRL/MpJ-fas⁺/fas⁺(MRL/+) и MRL/MpJ-fas^lpr/fas^lpr (MRL/lpr) у мышей показывают наличие инфильтратов слезных желез, характеризуемых преимущественным содержанием CD4⁺ Т-клеток. Ван Блокланд и Верснель (Van Blokland and Versnel), Pathogenesis of Sjogren's syndrome: characteristics of different mouse models for autoimmune exocrinopathy. din Immunol. 2002; 103:111-124.

В следствие значительно большей открытой поверхности глаза у кроликов по сравнению с мышами, типичные клинические исследования сухости глаз, такие как время разрушения слезной пленки и окрашивание флуоресцеином или бенгальским красным поверхности глаза, легче проводить на кроликах. Аутоиммунное заболевание кроликов, аналогичное синдрому Шегрена, можно возбуждать путем инъекции в слезную железу аутогенных лимфоцитов периферийной крови, пролиферировавших в культуре с клетками эпителия, полученными из удаленной контралатеральной железы.

Эти и другие животные модели применяют для исследования соединений согласно настоящему изобретению, а также комбинированных составов, например, описанных в настоящей заявке. Составы вводят животному, при этом исследуют увеличение продуцирования слез или снижение сухости глаз.

Пример 10

Способы лечения и комбинированные составы

Субъекты, которые требуют лечения составами согласно настоящему изобретению, выбирают на основании клинических проявлений или офтальмологического исследования, которые показывают наличие сухости глаз. Например, субъект может жаловаться на дискомфорт или чувство жжения в глазах. В некоторых случаях даже могут присутствовать фотофобия или нечеткость зрения. История болезни пациента также может предполагать развитие сухости глаз, например, у пациентов, предрасположенных к кератит-розацеа, радиотерапии, ревматоидному артриту, системной красной волчанке или склеродермии или другому аутоиммунному заболеванию. Биомикроскопическое исследование при помощи щелевой лампы, как правило, проводят для определения мейбомита, расширения конъюнктивы, уменьшенного мениска слезной жидкости, повышенного содержания инородных веществ в слезах, слизистых нитей или окрашивания, соответствующего сухому кератоконъюнктивиту. Время разрушения слезной пленки, составляющее менее 10 секунд, также можно определять, тест Шримера часто проводят для более объективной идентификации субъектов, у которых возможно возникновение благоприятного действия в результате лечения агентами согласно настоящему изобретению.

Можно выбирать конкретные группы пациентов для лечения, например, пациентов, у которых снижено продуцирование слез в слезных железах (например, пациентов, у которых данные теста Шримера предполагают гипофункцию слезной железы вследствие иммуногенных или других нарушений). Композиции согласно настоящему изобретению инсталлируют в глаза с применением глазных капель или мазей от двух до четырех раз в день. Лечение можно продолжать по меньшей мере в течение недели, месяца или года, а у некоторых субъектов лечение можно проводить в течение нескольких лет.

В конкретных случаях субъектов выбирают для совместного лечения с другими фармацевтическими или нефармацевтическими воздействиями. Например, окклюзию слезной точки проводят для снижения вывода слез из глаза, в то же время композиция согласно настоящему изобретению увеличивает продуцирование слез в слезной железе.

Также предложены комбинированные терапии, в которых объединяют соединения формулы I и/или II (которые также включают их соли) с другим агентом, которым подвергают лечению другое состояние, например, состояние, связанное с сухостью глаз. В некоторых примерах у субъекта диагностировано нарушение, вызывающее сухость глаз, при этом субъекту проводят комбинированную терапию. В одном из примеров у субъекта обнаружен мейбомит, который чувствителен к местному применению кортикостероидов, таких как 1% глазная суспензия преднизолона ацетата. Соединения формулы I и/или II (которые включают их соли) суспендируют в составе преднизолона и инсталлируют в глаза от 2 до 4 раз в день. Согласно другим примерам сухость глаз связана с сезонной аллергией или другими воспалительными состояниями, а глазные капли вводят совместно с составом или в составе, который содержит противогистаминные средства (такие как фенирамин, эмедастин или азеластин), противоотечные средства (такие как тетрагидрозолина гидрохлорид или нафазолин) или нестероидный противовоспалительный агент (такой как непафенак или кеторолак), кортикостероиды (такие как фторметолон или лотепреднол), стабилизаторы тучных клеток (такие как азеластин, кромал, эмедастин, кетотифен, лодоксамин, недокромил, олопатадин или пемироласт). Если сухость глаз связана с инфекционным бактериальным состоянием (таким как инфекция мейбомиевой железы или инфекция роговицы), глазные капли вводят совместно с составом или в комбинированном составе, который может содержать соответствующие антибиотики (такие как ципрофлоксацин, эритромицин, джентамицин, офлоксацин, сульфацетамид, тобрамицин или монофлоксацин). Если сухость глаз связана с вирусной инфекцией, глазные капли вводят совместно с составом или в комбинированном составе, содержащем противовирусный агент, такой как трифлуридин или идоксуридин.

Другой пример комбинированной терапии представлен у субъекта, у которого диагностирована розацеа глаза в результате раздражения глаз и лицевой эритемы с телеангиэктазией. Субъекта подвергают лечению с применением глазных капель, которые содержат соединения формулы I и/или II, а также субъекта подвергают лечению пероральным антибиотиком, таким как тетрациклиновый антибиотик, например, миноциклин.

Согласно другому примеру у субъекта обнаружена сухость глаз, а также предрасположенность к аутоиммунному заболеванию, и субъекта подвергают лечению с применением глазных капель, которые содержат соединения формулы I и/или II. Субъекта также подвергают лечению системной (например) пероральной терапией кортикостероидами, например, путем постепенного снижения дозы преднизолона.

1. Способ лечения синдрома сухого глаза, включающий введение субъекту эффективного количества соединения формулы I и/или II или его фармацевтически приемлемой солевой формы.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемая солевая форма представляет собой соль соединения II.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что соль соединения II выбрана из натриевой соли, калиевой соли, кальциевой соли, соли аргинина и соли холина.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что соединение формулы I и/или II или его фармацевтически приемлемую солевую форму вводят в комбинации с или дополнительно к противовоспалительному средству, противогистаминному средству, антибиотику, противовирусному средству и средству против глаукомы.

5. Фармацевтический состав для лечения синдрома сухого глаза, содержащий соединение I и/или соединение II, при этом указанный состав выбран из раствора, геля, мази, крема и суспензии.

6. Фармацевтический состав по п.5, являющийся частью набора для введения фармацевтического состава в глаз.