Способ подготовки периферической крови для иммуноферментного определения спонтанной продукции цитокинов

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2615354:

Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Свердловской области "Центр специализированных видов медицинской помощи "Уральский институт травматологии и ортопедии имени В.Д. Чаклина" (ГБУЗ СО "ЦСВМП "УИТО им. В.Д. Чаклина") (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике. Сущность способа: осуществляют забор крови в пробирку, содержащую антикоагулянт, перемешивают и оставляют на 20 мин для свободного осаждения эритроцитов при комнатной температуре, после седиментации эритроцитов берут 0,5 мл лейкоцитарной взвеси и определяют в ней количество лейкоцитов любым способом (рутинным или автоматизированным), доводят ее концентрацию до величины 5*10⁹лейкоцитов/л дистиллированной водой, биологическую жидкость помещают в морозильную камеру при температуре -20°С до полного замораживания и используют ее после процесса размораживания для иммуноферментного определения спонтанной продукции цитокинов. Применение изобретения обеспечивает точность определения концентрации цитокинов методом ИФА, снижается индивидуальная вариабельность показателей. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике, и касается способа подготовки биологической жидкости, а именно периферической крови, к определению концентрации медиаторов межклеточных взаимодействий (цитокинов) методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Известно, что уровень цитокинов при разных патологических состояниях позволяет оценить состояние больного [1], прогнозировать исход заболевания [2], а также предвидеть риск возникновения различных осложнений [3]. При этом многие исследователи на практике сталкиваются с проблемой значительной вариабельности уровня цитокинов в сыворотке крови у обследуемых когорт больных [4, 5]. Это обусловлено высокой скоростью деградации пептидов после клеточной экскреции [6], способностью активно связываться в комплексы с различными сывороточными белками [7], а также различием функционального состояния отдельных клеток-продуцентов. Решение данной проблемы может быть связано с определением не только внеклеточной концентрации цитокинов, но, одновременно, и внутриклеточной.

Известен способ подготовки биологической жидкости (цервикального смыва) для определения цитокинового профиля методом ИФА, заключающийся в отборе образцов, замораживании при -70°С, тестировании их на содержание гемоглобина, разбавлении 1:2 фосфатно-солевым буфером с 1% сыворотки эмбрионов коров с последующим определением искомой концентрации [8]. Недостатком данного метода является необходимость тестирования образца на гемоглобин, отсутствие информации о точном количестве изучаемых клеток в образце.

Известен способ определения стимулированной продукции цитокинов [9], заключающийся в предварительном выделении мононуклеарных клеток на градиенте плотности (фикол-урографин) методом центрифугирования в течение 40 мин, последующем трехразовом отмывании их средой RPMI-1640, стандартизации их количества, культивировании их с полной культуральной средой 24 или 48 ч во влажной камере с использованием СО₂ инкубатора, последующем центрифугировании, сборе кондиционной среды и дальнейшем определении в ней концентрации цитокинов методом ИФА. Недостатком данного метода является длительность подготовки, необходимость специального оборудования (СО₂-инкубатор, планшеточная центрифуга) и реагентов (эмбриональная телячья сыворотка, гентамицин, ампициллин, глутамин, меркаптоэтанол), невозможность получения информации о спонтанном уровне продукции цитокинов, отсутствии в исследовании нейтрофилов (не являются мононуклеарными клетками) продуцирующих, тем не менее, ряд цитокинов.

Известна модификация вышеописанного способа определения стимулированной продукции цитокинов [10] с дополнительным предварительным фильтрованием размороженного для исследования супернатанта через одноразовые нитроцеллюлозные фильтры с порами 0,4 мкм в диаметре. Недостатком способа является его трудоемкость, длительность, необходимость дополнительных расходных материалов.

Известен способ подготовки биологической жидкости [11], заключающийся в использовании цельной периферической гепаринизированной крови, разведенной средой RPMI 1640 с глутамином в соотношении 1:5. Кровь и грибной антиген в соотношении 1:1 помещаются в иммунологический планшет. В качестве контроля (оценка спонтанной индукции) используется кровь с добавлением культуральной среды без грибного антигена. Планшеты инкубируются 72 ч (для IFN-γ) и 24 ч (для остальных цитокинов) в условиях эксикатора (37°С, 0,5% СО₂) с последующим снятием супернатанта, делении его на малые порции, замораживании при -70°C с последующим определением количества цитокинов в них методом ИФА. Недостатком данного метода является его трудоемкость, необходимость наличия специального оборудования и реагентов.

Известен способ определения цитокинов и иммуноглобулина Е в конденсате выдыхаемой влаги (RU 2222015 С1, 2004) согласно которому конденсат концентрируют путем лиофильной сушки при комнатной температуре в течении 6 ч с последующим разведением забуференным физиологическим раствором в объеме, в 4-5 раз меньшем начального объема конденсата выдыхаемой влаги, стабилизируют бычьим сывороточным альбумином до конечной концентрации 1% с последующим определением концентрации цитокинов и IgE методом иммуноферментного анализа. Недостатком данного метода является длительная инкубация при комнатной температуре, приводящая к изменению концентрации цитокинов, риск контаминации бактериальными антигенами, необходимость использования специальных реагентов (бычий альбумин), влияющих на плотность белковой массы исследуемого раствора.

Известен способ получения биологической жидкости (смыва из полости носа) путем введения в носовой ход сухого марлевого тампона, который после извлечения переносят в пробирку, содержащую физиологический раствор и после 30 минутной инкубации отжимают [12]. Полученный раствор центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин, определяют оптическую плотность методом спектрофотометрии против физиологического раствора, стандартизируют путем разбавления/концентрирования до 0,4 единиц оптической плотности и используют для определения уровня содержания цитокинов. Недостатком данного метода является стандартизация по количеству всех растворенных метаболитов, среди которых присутствуют белки с различной молекулярной массой, не выполняющие функцию цитокинов (например, альбумины, глобулины, лизины и др.), не показана возможность использования способа для определения концентрации цитокинов крови.

Известен способ определения концентрации цитокинов в сыворотке крови, заключающийся в получении ее стандартным методом - коагуляции сгустка эритроцитов и фибрина при комнатной температуре в течение 30 мин, отделении его методом центрифугирования с последующим изучением концентрации цитокинов методом ИФА [13]. Недостатком способа является значительная вариабельность концентрации цитокинов в индивидуальных образцах, не позволяющая в целом оценить спонтанную продукцию цитокинов.

Известен способ подготовки пробы периферической крови для ИФА, взятый в качестве прототипа (Меньшиков В.В. Руководство по клинической лабораторной диагностике. - М.: Медицина, 1982. - 420 с.). Производят забор 5 мл периферической крови из локтевой вены. В пробирку с кровью добавляют антикоагулянт (гепарин) из расчета на 1 мл крови - 5 Ед. гепарина. Тщательно перемешивают. Пробу центрифугируют в течение 5 мин со скоростью 3000 об/мин. После этого забирают 0,1 мл надосадочной жидкости и помещают в лунку планшета для определения содержания цитокинов с помощью ИФА по стандартной методике в соответствии с протоколом фирмы-производителя.

Недостатком способа является невозможность определения в периферической крови общей концентрации внутри- и внеклеточных цитокинов, а также значительная вариабельность концентрации цитокинов в индивидуальных образцах, что влияет на точность измерения цитокинов методом ИФА.

Технический результат - повышение точности определения спонтанной продукции цитокинов, снижение индивидуальной вариабельности показателей за счет полного высвобождения вне- и внутриклеточных цитокинов из лимфоцитов периферической крови.

Технический результат достигается тем, что в способе подготовки периферической крови для иммуноферментного определения спонтанной продукции цитокинов, включающем забор крови и смешивание его с антикоагулянтом, согласно технического решения после перемешивания антигаулянта с кровью смесь оставляют при комнатной температуре на 20 мин для свободного осаждения эритроцитов, затем забирают 0,5 мл надосадочной лейкоцитарной взвеси и разводят ее дистиллированной водой до концентрации 5*10⁹ лейкоцитов/л, замораживают при температуре -20°С, после размораживания полученную биологическую жидкость используют для определения цитокинов.

Осаждение эритроцитов из смеси антикоагулянта с кровью в течение 20 мин при комнатной температуре позволяет получить стандартизованную лейкоцитарную взвесь, необходимую для дальнейшего приготовления биологической жидкости. Разбавление лейкоцитарной взвеси до 5*10⁹ лейкоцитов/л дистиллированной водой и полное замораживание ее при температуре -20°С позволяет разрушить клеточные мембраны, приводящие к выходу внутриклеточных цитокинов во внеклеточную среду, что при размораживании полученной биологической жидкости дает повышение точности измерения общей концентрации цитокинов, при этом снижается индивидуальная вариабельность показателей.

Как известно, животные клетки по-разному реагируют на замораживание [14], это обусловлено, в том числе, присутствием в их структуре белков, дифференцируемых на гидрофильные, к которым относится большинство белков цитоплазмы, ядра и межклеточные вещества, и гидрофобные - включающие белки, входящие в состав биологических мембран. Также известно, что лейкоциты имеют необходимость индивидуального подбора режима замораживания и оттаивания, связанную с особенностями кристаллизации воды [15], кроме того, воздействие низких температур в результате кристаллообразования при фазовом переходе вода-лед приводит к разрушению клеточных мембран [16, 17]. При этом отрицательные температуры ниже 15 градусов приводят к разрушению плазматической мембраны [18].

Проведенные исследования и статистическая обработка результатов позволили авторам подобрать оптимальный режим подготовки периферической крови для иммуноферментного анализа, что позволяет достоверно оценить концентрацию спонтанной продукции цитокинов.

Для сравнения методом иммуноферментного анализа была определена концентрация цитокинов в плазме крови и периферической крови, подготовленной предлагаемым способом, были обследованы 150 человек, из которых: 50 - здоровые добровольцы, 100 - имели воспалительные заболевания. Больные находились на лечении в Уральский НИИ травматологии и ортопедии. Больные были поделены на 3 когорты в зависимости от тяжести течения заболевания: Первая когорта - 40 человек (20 мужчин и 20 женщин, средний возраст - 33,4±1,7 года, сопутствующая патология встречалась у 20 больных (50%)). Вторая когорта - 30 человек (15 мужчин, 15 женщин, средний возраст - 36,2±4,5 года, сопутствующая патология встречалась у 15 больных (50%)). Третья когорта - 30 человек (15 мужчин и 15 женщин, средний возраст - 32,8±1,9 года; сопутствующая патология встречалась у 15 больных (50%)). Группа здоровых добровольцев 50 человек (27 мужчин, 23 женщины, средний возраст 35,8 лет). Исследование показало, что содержание различных цитокинов (IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, INFγ, TNF-α) в биологической жидкости, подготовленной предлагаемым способом выше концентрации в плазме крови на величину от 7,4 до 43,3%. Это доказывает, что при определении концентрации цитокинов иммуноферментным методом использование периферической крови, подготовленной предлагаемым способом, является предпочтительным.

Таким образом, предлагаемый способ подготовки периферической крови для иммуноферментного определения спонтанной продукции цитокинов методом стандартизации количества лейкоцитов с последующим криогидролизом их мембран является новым и соответствует критерию «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. У пациента в условиях соблюдения правил асептики и антисептики стандартным образом забирается периферическая кровь в пробирку, содержащую антикоагулянт (гепарин лития) в объеме 5-7 мл. После аккуратного перемешивания пробирку оставляют на 20 мин при комнатной температуре для свободного осаждения эритроцитов. После их седиментации на дно пробирки производят взятие 0,5 мл располагающейся над эритроцитами фракции лейкоцитарной взвеси, в которой производят точное определение концентрации лейкоцитов - источника цитокинов - любым удобным способом (на гематологическом анализаторе, в камере Горяева) и доводят ее до концентрации 5*10⁹ лейкоцитов/л дистиллированной водой, что позволяет стандартизировать исследование и дает возможность сравнительного анализа образцов с разным количеством клеток между собой. Подготовленную лейкоцитарную взвесь помещают в морозильную камеру с температурой -20°С до полного замораживания, приводящего к деструкции клеточных мембран, и высвобождения цитокинов из клеток. После размораживания полученную биологическую жидкость используют для определения спонтанной продукции цитокинов, содержащихся в клетке и внеклеточном пространстве методом иммуноферментного анализа с использованием стандартных коммерческих наборов реагентов в зависимости от варианта исследуемого цитокина, используя ручной метод или любой автоматический или полуавтоматический анализатор. Предлагаемый способ легко воспроизводим в условиях любого лечебного учреждения.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами: в таблице представлена сравнительная оценка определения концентрации цитокинов в плазме крови стандартным методом и биологической жидкости, полученной предложенным методом.

Литература

1. Е.Ф. Чернушенко, Л.П. Кадан. О.Р. Панасюкова, В.Н. Петишкина, Л.М. Цыганкова Цитокины в оценке иммунной системы у больных туберкулезом легких // Украинский пульмонологический журнал. - 2010. - №2. - 39-43.

2. Притулина Ю.Г., Криворучко И.В., Шенцова В.В., Филь Г.В., Астапченко Д.С., Сахарова Л.А. Анализ цитокинового статуса при ряде инфекционных заболеваний // Успехи современного естествознания. - 2014. - №2. - С. 16-20.

3. Исаева Р.Х., Антонюк И.А., Гридякина А.В., Евстафьева А.Е. Иммунологические изменения при черепно-мозговой травме // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2014. - №8-2. - С. 41-47).

4. Убшаева Ю.Б. Комплексный анализ уровня сывороточных цитокинов и полиморфизма их генов в прогнозе течения и эффективности терапии ревматоидного артрита: автореф. дис. канд. мед. наук: 14.01.22 / Ю.Б. Убшаева. - Волгоград, 2013. - 23 с. - С. 10.

5. Малинин С.А. Профилактика и лечение острого послеоперационного панкреатита после спленэктомий у онкологических больных: автореф. дис. канд. мед. наук: 14.01.12 / С.А.Малинин. - Ростов-на-Дону, 2011. - С. 15.

6. Плотникова М.А. Мультиплексные методы определения вирус-индуцированной экспрессии цитокинов на основе микроципов и ПЦР: дис. канд. биол. наук / М.А. Плотникова. - Санкт-Петербург, 2014. - 117 с. - С. 33.

7. Коненков В.И., Ракова И.Г., Авдошина В.В., Гельфгат Е.Л. Комплексная оценка уровня спонтанной продукции цитокинов в культуре мононуклеарных клеток периферической крови здорового человека // Цитокины и воспаление. - 2005. - №2. - С. 33-37.

8. Кубанов А.А. Содержание интерферона-g, фактора некроза опухоли-а, интерлейкинов-4 и -12 в цервикальном секрете у пациенток с папилломавирусной инфекцией // Вестник дерматологии и венерологии. - 2005. - №2. - (http://www.mediasphera.ru/journals/vestnik/120/1417).

9. Итоговый отчет по теме «Оценка иммуномодулирующего действия биологически активной добавки «Кавесан» в экспериментальных мышиных моделях и в условиях in vitro на человеческих клетках» / под ред. В.А. Козлова. - Новосибирск: ФГБУ «НИКИ» СО РАМН, 2013. - 38 с. - С. 10, 12.

10. Коненков В.И., Ракова И.Г., Авдошина В.В., Гельфгат Е.Л. Комплексная оценка уровня спонтанной продукции цитокинов в культуре мононуклеарных клеток периферической крови здорового человека // Цитокины и воспаление. - 2005. - №2. - С. 33-37.

11. Поспелова А.В., Бурмистрова А.Л., Хомич Ю.С., Самышкина Н.Е., Бахарева Л.И. Влияние грибов рода Candida на синтез цитокинов иммунными клетками периферической крови человека in vitro // Успехи современного естествознания. - 2006. - №2 - С. 86.

12. Пересторонин В.И. Патофизиологические аспекты развития хронического гнойного риносинусита: автореф. дис. канд. мед. наук: 14.03.03 / Пересторонин В.И. - Чита, 2013. - 24 с.

13. Егорова Е.В., Пересторонин В.И., Цыбиков Н.Н. Уровень цитокинов и аутоантител к ним в сыворотке крови и назальном секрете у больных хроническим гнойным риносинуситом // Врач-аспирант. - 2013. - №2. - http://vrach-aspirant.ru/articles/otorhinolaryngology/12578/.

14. Сведенцов Е.П. Функциональное состояние лейкоцитов после выхода из криоанабиоза: научное издание / Е.П. Сведенцов, Т.В. Туманова. - Екатеринбург: УрО РАН, 2007. - 80 с.

15. Щеглова О.О. Функциональное состояние лейкоцитов после выхода из холодового анабиоза при умеренно-низкой температуре: дисс. канд. биол. наук: 03.00.13, 14.00.29 / Щеглова О.О. - Киров, 2005. - 116 с.

16. Зайцева О.О., Полежаева Т.В., Сведенцов Е.П., Соломина О.Н., Утемов С.В. Эффективность применения оригинальных криофилактиков для сохранности лейкоцитов при -40°С // Cjournal of stress physiology & biochemistry. - 2011. - Vol. 7. - №4. - С. 198-206. - C. 204.

17. Svedentsov E.P., Chtcheglova O.O., Tumanova T.V., Solomina O.N. Conservation leukocytes in the conditions of cryoanabiosis (-40°C) // Journal of Stress Physiology & Biochemistry. - 2006. - Vol. 2. - №1, pp. 28-34. - P. 32.

18. Кузнецов K.B. Консервирование тромбоцитов замораживанием (экспериментальное исследование): автореф. дис. анд. мед. наук: 14.00.29 / К.В. - Киров, 2006. - 24 с. - С. 10.

Способ подготовки периферической крови для иммуноферментного определения спонтанной продукции цитокинов, включающий забор крови и перемешивание с антикоагулянтом, отличающийся тем, что после перемешивания антикоагулянта с кровью смесь оставляют при комнатной температуре на 20 мин для свободного осаждения эритроцитов, затем забирают 0,5 мл надосадочной лейкоцитарной взвеси и разводят ее дистиллированной водой до концентрации 5*10⁹ лейкоцитов/л, замораживают при температуре -20°С, после размораживания полученную биологическую жидкость используют для определения цитокинов.

Изобретение относится к медицине и касается способа получения бифункционального аффинного сорбента для хроматографической очистки иммуноглобулинов флуоресцирующих путем иммобилизации неосмектина с гетерологичными антигенами, дающими перекрестные реакции с иммуноглобулинами, где к сорбенту вносят водорастворимый антиген, проводят экспозицию, отмывают от несвязавшегося антигена, доводят рН и проводят одномоментную очистку иммуноглобулинов флуоресцирующих от несвязавшегося ФИТЦ и гетерологичных антител с контролем иммунологических показателей готовых препаратов в РИФ.

Способ выявления антиотцовских антител после иммунизации женщин с идиопатическим привычным выкидышем лимфоцитами полового партнера // 2614729

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для выявления антиотцовских антител после иммунизации женщин с идиопатическим привычным выкидышем лимфоцитами полового партнера.

Способ скрининговой диагностики острого клеточного отторжения трансплантированного сердца // 2614726

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, может быть использовано при ведении пациентов после трансплантации сердца для диагностики отторжения трансплантированного сердца.

Способы быстрого выявления риска т-хелперного дефицита у людей в условиях арктики // 2614702

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления риска формирования Т-хелперного иммунодефицита у человека в условиях Арктики. Для этого осуществляют забор крови из вены и определяют общее количество лимфоцитов, малых лимфоцитов в лимфоцитограмме и содержание зрелых функционально активных Т-клеток CD3+.

Способ одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов и устройство иммунохроматографического анализа для его реализации // 2614689

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека и животных.

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин во втором триместре беременности при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом а(h3n2) // 2613895

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин во втором триместре гестации при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом A(H3N2).

Способ прогнозирования синдрома задержки роста плода в третьем триместре гестации при обострении хронического бронхита, обусловленного гриппом a(h3n2), у женщин во втором триместре беременности // 2613890

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для прогнозирования синдрома задержки роста плода в третьем триместре гестации при обострении хронического простого бронхита, обусловленного гриппом A(H3N2), у женщин во втором триместре беременности.

Антитела и иммуноконъюгаты, визуализируемые при помощи иммуно-позитрон-эмиссионной томографии, и способы их применения // 2613886

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения присутствия белка STEAP-1 в биологическом образце, полученном от индивида, имеющего подозрение на метастатический рак предстательной железы.

Способ прогнозирования инфекционного осложнения атопического дерматита у детей при специфической иммунотерапии // 2613301

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и дерматологии, и может быть использовано для прогнозирования инфекционного осложнения атопического дерматита у детей при специфической иммунотерапии.

Способ иммунологического определения антигенов анизакид в мышечной ткани рыб // 2613296

Изобретение относится к области ветеринарной и медицинской гельминтологии, в частности к иммунологическому методу обнаружения антигена личинок анизакид в мышечной ткани рыбы, и может быть рекомендовано для ветеринарно-санитарной экспертизы морепродуктов.

Флуоресцентный оптический днк-биосенсор // 2616879

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к оптическим биосенсорам, предназначенным для определения белковых молекул в малых концентрациях. Заявленный флуоресцентный оптический ДНК-биосенсор состоит из подложки, адсорбированной на подложке тонкой пленки комплекса ДНК-белок, причем подложка выполнена из монокристаллического кремния с ориентацией поверхности (100), размером 18×18 мм и толщиной 380±20 мкм, шероховатость рабочей поверхности ≤0,06, а содержание белка в тонкой пленке составляет от 10-15 до 10-9 моль/л. Технический результат - разработка флуоресцентного оптического ДНК-биосенсора, обладающего возможностью многократного его использования без потери чувствительности, в частности, при определении белковых молекул в малых концентрациях. 3 табл.

Способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства // 2616898

Изобретение относится к биотехнологии и вирусологии и может быть использовано специалистами, работающими в области производства медицинских и ветеринарных биопрепаратов. Изобретение раскрывает способ определения иммуногенной активности вакцины против бешенства, отличающийся тем, что в лунки планшетов вносят моноклональные антитела, специфичные к гликопротеину вируса бешенства, в 0,1-0,2 М фосфатном буфере с pH 7,2-7,4, инкубируют, добавляют 1,0-1,5% раствор бычьего сывороточного альбумина в 0,1-0,2 фосфатном буфере с pH 7,2-7,4 с добавлением в него 0,1-0,25% Tween-20, инкубируют, вводят испытуемые вакцины и референс-вакцину, инкубируют 45-60 мин при комнатной температуре, отмывают лунки планшетов 0,1-0,2 фосфатным буфером с pH 7,2-7,4, содержащим 0,1-0,8% Tween-20 с последующим добавлением конъюгата моноклональных антител, специфичных к гликопротеину вируса бешенства, с пероксидазой хрена в рабочем титре 1:5000-6000, инкубируют, добавляют 100-120 мкл на лунку однокомпонентного субстратного раствора ТМБ-теста с экспозицией 10-15 минут, после чего добавляют в каждую лунку по 50-60 мкл 0,5-0,6 М раствор H2SO4 и измеряют величину оптической плотности раствора при длине волны 450 нм, а иммуногенную активность вакцин против бешенства определяют на основании сопоставления сигналов оптической плотности раствора исследуемого образца, и сравнения его с сигналом оптической плотности раствора референс-вакцины. Изобретение направлено на ускорение и упрощение определения иммуногенной активности вакцины против бешенства. 2 пр.

Способ определения пола плода // 2616901

Изобретение относится к области диагностики, а именно к способу определения пола плода в ранние сроки его внутриутробного развития. Способ определения пола плода заключается в определении уровня антимюллерова гормона (АМГ) в сыворотке крови, в сроки 7, а также 9-10 недель беременности, и при увеличении АМГ в 2,6 и более раз за этот период диагностируют наличие плода мужского пола, при увеличении его не выше чем в 1,5 раза - наличие плода женского пола. Вышеописанный способ позволяет с высокой точностью диагностировать пол плода в ранние сроки беременности. 4 пр.

Способ прогнозирования невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации // 2616902

Изобретение относится к акушерству и касается прогнозирования угрозы невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации. Способ состоит в том, что в лейкоцитах периферической крови беременной на 5-11 неделе гестации с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени определяют уровни экспрессии генов Toll-подобных рецепторов TLR4 и TLR9, гена противомикробного пептида HBD1. При одновременном снижении определяемых показателей, по меньшей мере, в 2,5 раза по сравнению с их уровнем, установленным при физиологически протекающей беременности, прогнозируют угрозу выкидыша в первом триместре гестации. Использование изобретения позволяет осуществить профилактику осложнений, обусловленных инвазивностью исследования (исключение забора биологического материала клеток эндометрия) при одновременном обеспечении точности прогнозирования невынашивания беременности инфекционного генеза на ранних сроках гестации за счет использования в качестве биологического материала лейкоцитов периферической крови. 1 табл., 4 пр.

Способ дифференциальной диагностики острого риносинусита // 2617044

Изобретение относится к медицине, в частности к оториноларингологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики острого риносинусита. Способ дифференциальной диагностики острого риносинусита включает исследование сыворотки крови больного до начала лечения и определение уровней цитокинов интерлейкина - 6 (IL-6) и γ-интерферона (γINF) пг/мл, после чего вычисляют коэффициент диагностики K по формуле: K=IL-6/γINF, и при значении K≤1,4 диагностируют вирусный риносинусит, при выполнении условия 1,4<K<2,5 диагностируют поствирусный риносинусит, при значении K≥2,5 диагностируют бактериальный риносинусит. Предложенный способ позволяет с высокой достоверностью проводить дифференциальную диагностику острого риносинусита за счет использования объективных критериев оценки, позволяющих четко, быстро и однозначно дифференцировать вирусный, поствирусный и бактериальный риносинусит. 3 пр.

Способ прогнозирования осложненного течения острых респираторных инфекций у детей // 2617046

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования осложненного течения ОРИ у детей. Для этого у детей путем в браш-биоптате слизистой носо-ротоглотки определяют местный неспецифический секреторный иммуноглобулин А, колонизационную активность: индекса инфицирования, индекса адгезии, степени деструкции эпителиоцитов и уровень внеклеточного фосфатидилхолина. По снижению уровня местного неспецифического иммуноглобулина А в пределах 4-16 lg, индекса инфицирования 50-100%, индекса адгезии клеточных эпителиоцитов 100-500 м.кл., деструкции эпителиоцитов 20-50%, уровня внеклеточного фосфатидилхолина 0,001-0,01 мг/мл прогнозируют осложненное течение острых респираторных инфекций у детей. Использование данного способа позволяет прогнозировать осложненное течение ОРИ у детей на ранних стадиях путем одновременного определения нескольких показателей, интегрально характеризующих антиинфекционную резистентность слизистой носо-ротоглотки. 2 пр.

Способ прогнозирования риска развития инфекционного эндокардита // 2617060

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и хирургии, и может быть использовано для прогнозирования генетической предрасположенности или повышенного риска развития инфекционного эндокардита (ИЭ) у пациентов из группы риска. Сущность способа: проводят генотипирование по полиморфному локусу I462V гена CYP1A1 и по полиморфному локусу I105V гена глутатион-S-трансферазы Пи1 GSTP1 у пациентов группы риска, при выявлении носительства сочетания генотипов CYP1A1 I462I и GSTP1 I105V у их носителей прогнозируют 22,6-кратный риск развития инфекционного эндокардита. В группу риска входят лица с внутривенной наркоманией, врожденными и приобретенными пороками сердца, протезированными клапанами и другими операциями на сердце, коронарных артериях, иммунодефицитными состояниями. Способ позволяет установить генетическую предрасположенность к ИЭ у пациентов из группы риска, помогает определить тактику ведения пациентов и индивидуализировать комплекс профилактических и лечебных мероприятий. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл.

Способ оценки готовности женщин с хроническим эндометритом к экстракорпоральному оплодотворению // 2617061

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки готовности женщин с хроническим эндометритом к экстракорпоральному оплодотворению, включающий обследование женщин в период окна имплантации в цикле, предшествующем проведению программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), отличающийся тем, что у женщин с хроническим эндометритом на 19-21 день менструального цикла получают смыв из полости матки, в котором методом твердофазного иммуноферментного анализа определяют содержание альфа-2-макроглобулина (а2-МГ) и при содержании а2-МГ равном или более 4,5 мг/л оценивают готовность женщин к ЭКО как низкую, рекомендуют дополнительное лечение и перенос сроков ЭКО, а при содержании а2-МГ менее 4,5 мг/л оценивают готовность женщин к ЭКО как высокую и рекомендуют инициацию программы ЭКО. Осуществление изобретения обеспечивает неинвазивный способ оценки готовности к ЭКО, позволяющий повысить эффективность ЭКО за счет выбора оптимального периода начала программы. 3 пр., 1 табл.

Способ прегравидарного прогнозирования риска формирования септальных форм врожденных пороков сердца у плода // 2617249

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии и детской кардиологии, и касается предгравидарного прогнозирования риска формирования септальных форм врожденных пороков сердца у плода. Способ включает молекулярно-генетическое тестирование семейной пары, планирующей беременность на догестационном этапе, с выявлением женского аллеля HLA-DRB1*03, HLA-DRB1*12 и мужского генотипа HLA-DRB1*01,04. Вероятный прогноз развития врожденного порока рассчитывают по формуле ,где Y - вероятность риска формирования септальных форм врожденного порока сердца в последующих поколениях (%); X1 - женский аллель HLA-DRB1*03, при этом X1 принимает значение равное 0 при отсутствии аллеля в генотипе, X1=1 при наличии аллеля HLA-DRB1*03 в гетерозиготе и X1=2 при наличии аллеля HLA-DRB1*03 в гомозиготе; X2 - мужской генотип HLA-DRB1*01,04, X2=0 при отсутствии данного генотипа, X2=1 при наличии генотипа HLA-DRB1*01,04; X3 - женский аллель HLA-DRB1*12, соответственно X3=0 при отсутствии аллеля в генотипе, X3=1 при наличии аллеля HLA-DRB1*12 в гетерозиготе и X3=2 при наличии аллеля HLA-DRB1*12 в гомозиготе. Изобретение обеспечивает повышение эффективности и достоверности прогнозирования развития септальных форм врожденных пороков сердца у плода в последующей беременности. 3 пр., 1 табл.

Способ диагностики тяжести течения хронического гастрита у детей // 2617419

Изобретение относится к медицине, в частности гастроэнтерологии, и касается способа диагностики тяжести течения хронического гастрита у детей. Сущность способа заключается в изучении клинических, морфологических и иммуногистохимических показателей слизистой оболочки желудка на наличие антигенов простого герпеса, цитомегаловируса и вируса Эпштейн-Барр. Поводят оценку числа микрососудов слизистой оболочки желудка и их эндотелий, неравномерность толщины стенки микрососудов, наличие разрастания соединительной ткани в их стенке, изменения ядер, ядерно-цитоплазматического индекса и наличие периваскулярного отека. При обнаружении вирусной моноинфекции с изменениями эндотелия до 40% микрососудов в виде неравномерного увеличения толщины их стенок, а также гиперхроматоза ядер эндотелиоцитов диагностируют легкое течение. При обнаружении не менее двух вирусных инфекций с увеличением числа микрососудов от 30% до 50% и изменением эндотелия в 45%-60% микрососудов диагностируют течение средней тяжести. При наличии вирусно-бактериальной инфекции с увеличением числа микрососудов более чем на 50% и тотальными изменениями эндотелия более 60% микрососудов диагностируют тяжелое течение хронического гастрита. Использование способа позволяет с высокой точностью оценить тяжесть течения хронического гастрита у детей. 3 пр.