Производные аминопиримидина в качестве модуляторов богатой лейцином повторной киназы 2 (lrrk2)
Изобретение относится к новому соединению формулы I или его фармацевтически приемлемым солям, которые обладают свойствами ингибитора LRRK2 и могут быть использованы для профилактики или лечения болезни Паркинсона. В общей формуле I
А представляет собой пяти-, шести- или семичленный насыщенный или ненасыщенный цикл, включающий один или два гетероатома, выбранных из О и N, один раз замещенный группой R5 и, возможно, один, два или три раза замещенный группами R6; X представляет собой -NRa-, a Ra представляет собой водород; R1 представляет собой С1-6алкил; R2 представляет собой галоген, С1-6алкокси, циано или гало-С1-6алкил; одна из групп R3 и R4 представляет собой галоген, С1-6алкил или С1-6алкокси, а другая группа является водородом; R5 представляет собой оксо, С1-6алкил, С3-6циклоалкил или -C(O)-NRbRc, где каждый из Rb и Rc независимо представляет собой водород или С1-6алкил, или Rb и Rc совместно с атомами, к которым они прикреплены, могут образовывать 4-6-членный насыщенный гетероциклил, который возможно содержит дополнительный гетероатом, выбранный из О и N, и который возможно один раз замещен R6; или Rb и Rc вместе с атомами, к которым они прикреплены, могут образовывать 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил; и каждая группа R6 независимо представляет собой С1-6алкил, С3-6циклоалкил, галоген, гидрокси-С1-6алкил, С1-6алкокси-С1-6алкил или 4-6-членный насыщенный гетероциклил с кислородом в качестве гетороатома. Предпочтительным является соединение соответствующее формуле IIa или IIb
где m представляет собой 0; 1 или 2; Z представляет собой -C(R7)2-; -NR8- или -О-; каждая группа R7 независимо представляет собой водород или С1-6алкил; и каждая группа R8 независимо представляет собой водород, С1-6алкил, С3-6циклоалкил, галоген, гидрокси-С1-6алкил, С1-6алкокси-С1-6алкил или 4-6-членный насыщенный гетероциклил с кислородом в качестве гетероатома. 4 н. и 18 з. п. ф-лы, 3 табл., 13 пр.
Область техники
Изобретение относится к соединениям, модулирующим функцию богатой лейцином повторной киназы 2 (LRRK2) и полезным для лечения опосредованных LRRK2 заболеваний и состояний, таких как болезнь Паркинсона.
Предшествующий уровень техники
От нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Паркинсона, деменция с тельцами Леви и болезнь Хантингтона, страдают миллионы человек. Болезнь Паркинсона представляет собой хроническое прогрессирующее нарушение моторной системы, от нее страдает, приблизительно, каждый тысячный человек на Земле, при этом 5-10% больных страдают наследственной формой заболевания. Болезнь Паркинсона вызвана прогрессирующей гибелью дофаминовых нейронов среднего мозга, в результате чего у больных нарушается способность направлять и контролировать свои движения. Основными симптомами болезни Паркинсона являются тремор, ригидность, замедленность движений и нарушение равновесия. Часто у больных болезнью Паркинсона наблюдаются и другие симптомы, такие как перепады настроения, потеря памяти, нарушения речевой функции и сна.
Гены, кодирующие богатую лейцином повторную киназу 2 (leucine-rich repeat kinase 2 protein, LRRK2) были обнаружены при изучении наследственной формы болезни Паркинсона (Paisan-Ruiz et al., Neuron, Vol.44(4), 2004, pp 595-600; Zimprich et al., Neuron, Vol.44(4), 2004, 601-607). Исследования in vitro показали, что связанные с заболеванием мутации ведут к усилению активности LRRK2-киназы и снижению скорости гидролиза GTP, по сравнению с диким типом (Guo et al., Experimental Cell Research, Vol.313(16), 2007, pp.3658-3670). Анти-LRRK2 антитела применялись для того, чтобы пометить тельца Леви ствола головного мозга, ассоциированные с болезнью Паркинсона, а также ассоциированные с деменцией с тельцами Леви кортикальные антитела, что позволяет предположить, что LRRK2 играет существенную роль в формировании телец Леви и патогенезе этих заболеваний (Zhou et al., Molecular Degeneration, 2006, 1:17 doi: 10.1186/1750-1326-1-17). Кроме того, LRRK2 был идентифицирован как ген, потенциально связанный с повышенной чувствительностью к болезни Крона и проказе (Zhang et al., New England J. Med. Vol.361 (2009) pp.2609-2618.
LRRK2 также была ассоциирована с переходом от мягких когнитивных нарушений к болезни Альцгеймера WO2007/149789); индуцированной L-Dopa дискинезией (Hurley et al., Eur. J. Neurosci., Vol.26, 2007, pp.171-177); заболеваниями ЦНС, связанными с дифференциацией предшественников нейронов (Milosevic et al., Neurodegen., Vol.4, 2009, p.25); такими видами рака, как рак почки, молочной железы, простаты, крови и легкого, а также острая миелоидная лейкемия (WO 2011/038572); папиллярными карциномами почек и щитовидной железы (Looyenga et al., www.pnas.org/cqi/doi/10.1073/pnas.1012500108); множественной миеломой (Chapman et al., Nature Vol.471, 2011, pp.467-472); амиотропным латеральным склерозом (Shtilbans et al., Amyotrophic Lateral Sclerosis "Early Online 2011, pp.1-7); ревматоидным артритом Nakamura et al., DNA Res. Vol.13(4), 2006, pp.169-183); и анкилозирующим спондилитом (Danoy et al., PLoS Genetics, Vol.6(12), 2010, e1001195, pp.1-5).
Таким образом, соединения и композиции, эффективные при модулировании LRRK2-активности, могут использоваться для лечения нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Паркинсона и деменция с тельцами Леви, расстройств ЦНС, таких как болезнь Альцгеймера и индуцированная L-Dopa дискинезия, раков, таких как рак почки, молочной железы, простаты, крови, папиллярный рак и рак легкого, острая миелогенозная лейкемия и множественная миелома, а также воспалительных заболеваний, таких как проказа, болезнь Крона, амиотропный латеральный склероз, ревматоидный артрит и анкилозирующий спонтидилит. В частности, существует потребность в соединениях с LRRK2-активностью, которые селективны по отношению к LRRK2, по сравнению с другими киназами, такими как JAK2, и из которых можно получить эффективные лекарства для лечения таких нейродегенеративных заболеваний, как болезнь Паркинсона.
Краткое описание изобретения
Изобретение относится к соединениям формулы I:
или его фармацевтически приемлемым солям,
где:
А представляет собой пяти- или шестичленный насыщенный или ненасыщенный цикл, включающий один или два гетероатома, выбранных из О, N и S, один раз замещенный группой R5 и, возможно, один, два или три раза замещенный группами R6;
X представляет собой -NRa-; -О- или -S(O)r-, где r находится в интервале от 0 до 2, a Ra представляет собой водород или С1-6алкил;
R1 представляет собой С1-6алкил; С1-6алкенил; С1-6алкинил; гало-С1-6алкил; С1-6алкокси-С1-6алкил; гидрокси-С1-6алкил; амино-С1-6алкил; С1-6алкилсульфонил-С1-6алкил; С3-6циклоалкил, возможно, замещенный С1-6алкилом; С3-6циклоалкил-С1-6алкил, где фрагмент С3-6циклоалкила, возможно, замещен С1-6алкилом; тетрагидрофуранил; тетрагидрофуранил- С1-6алкил; оксетанил или оксетан-С1-6алкил;
или R1 и Ra совместно с атомом, к которому они прикреплены, могут образовывать трех-шестичленный цикл, который может дополнительно содержать гетероатом, выбранный из О, N и S, и замещенный оксо, гало-группой или С1-6алкилом;
R2 представляет собой галоген; С1-6алкокси; циано; С1-6алкинил; С1-6алкенил; гало-С1-6алкил; гало-С1-6алкокси; С3-6циклоалкил, где фрагмент С3-6циклоалкила, возможно, замещен С1-6алкилом; тетрагидрофуранил; тетрагидрофуранил-С1-6алкил; ацетил; оксетанил или оксетан-С1-6алкил;
одна из групп R3 и R4 представляет собой галоген; С1-6алкил; С1-6алкокси; С3-6циклоалкилокси; гало-С1-6алкил или гало-С1-6алкокси, а другая группа является водородом;
R5 представляет собой оксо; С1-6алкил; С3-6циклоалкил; С3-6циклоалкил-С1-6алкил; или -C(O)-NRbRc, где Rb и Rc независимо могут быть водородом или -С1-6алкилом, или Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, могут образовывать гетероцикл, который может дополнительно содержать гетероатом, выбранный из О, N и S, и который может быть один или больше раз замещен R6; а также
каждая группа R6 независимо представляет собой: С1-6алкил; С3-6циклоалкил; С3-6циклоалкил-С1-6алкил; галоген; гало-С1-6алкил; гидрокси-С1-6алкил; С1-6алкокси-С1-6алкил; гетероциклил; оксо; или -C(O)-NRbRc.
Изобретение относится также к содержащим соединения фармацевтическим композициям, способам применения соединений и способам изготовления соединений.
Подробное описание изобретения
Определения
Если не сказано иное, следующие термины, используемые в настоящей заявке, включая спецификацию и формулу изобретения, соответствуют приведенным далее определениям. Необходимо отметить, что в данной спецификации и формуле изобретения единственное число включает также и множественное число соответствующих сущностей, если только из контекста явным образом не следует обратное.
"Алкил" означает одновалентную линейную или разветвленную насыщенную углеводородную группу, состоящую исключительно из атомов углерода и водорода и содержащую от одного до двенадцати атомов углерода. "Низший алкил" означает алкильную группу, содержащую от одного до шести атомов углерода, то есть, С1-6алкил. Примеры алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил, этил, пропил, изопропил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, н-гексил, октил, додецил и подобные им.
"Алкенил" означает линейный одновалентный углеводородный радикал длиной от двух до шести атомов углерода или разветвленный одновалентный углеводородный радикал длиной от трех до шести атомов углерода, содержащий, по меньшей мере, одну двойную связь, например, этенил, пропенил и подобные им.
"Алкинил" означает линейный одновалентный углеводородный радикал длиной от двух до шести атомов углерода или разветвленный одновалентный углеводородный радикал длиной от трех до шести атомов углерода, содержащий, по меньшей мере, одну тройную связь, например, этинил, пропинил и подобные им.
"Алкилен" означает линейный насыщенный двухвалентный углеводородный радикал длиной от одного до шести атомов углерода или разветвленный двухвалентный углеводородный радикал длиной от трех до шести атомов углерода, например, метилен, этилен, 2,2-диметилэтилен, пропилен, 2-метилпропилен, бутилен, пентилен и подобные им.
Термины "алкокси" и "алкилокси", которые могут использоваться взаимозаменяемо, означают группы формулы -OR, где R представляет собой алкил в соответствии с данным здесь определением. Примеры алкокси групп включают, но не ограничиваются ими, метокси, этокси, изопропокси и подобные им.
"Алкоксиалкил" означает группу формулы формулы Ra-O-Rb-, где Ra представляет собой алкил, a Rb алкилен в соответствии с данным здесь определением. Примеры алкокси групп включают 2-метоксиэтил, 3-метоксипропил, 1-метил-2-метоксиэтил, 1-(2-метоксиэтил)-3-метоксипропил и 1-(2-метоксиэтил)-3-метоксипропил.
"Алкоксиалкокси" означает группу формулы -O-R-R', где R представляет собой алкилен, a R' алкокси в соответствии сданным здесь определением.
"Алкилкарбонил" означает группу формулы -C(O)-R, где R представляет собой алкил в соответствии с данным здесь определением.
"Алкоксикарбонил" означает группу формулы -C(O)-R, где R представляет собой алкокси в соответствии с данным здесь определением.
"Алкилкарбонилалкил" означает группу формулы -R-C(O)-R, где R представляет собой алкилен, a R' алкил в соответствии с данным здесь определением.
"Алкоксикарбонилалкил" означает группу формулы -R-C(O)-R, где R представляет собой алкилен, a R' алкокси в соответствии с данным здесь определением.
"Алкоксикарбонилалкокси" означает группу формулы -O-R-C(O)-R', где R представляет собой алкилен, a R' алкокси в соответствии с данным здесь определением.
"Гидроксикарбонилалкокси" означает группу формулы -O-R-C(O)-OH, где R представляет собой алкилен в соответствии с данным здесь определением.
"Алкиламинокарбонилалкокси" означает группу формулы -O-R-C(O)-NHR', где R представляет собой алкилен, a R' алкил в соответствии с данным здесь определением.
"Диалкиламинокарбонилалкокси" означает группу формулы -O-R-C(O)-NR'R", где R представляет собой алкилен, a R' и R" алкил в соответствии с данным здесь определением.
"Алкиламиноалкокси" означает группу формулы -Ο-R-NHR', где R представляет собой алкилен, a R' алкил в соответствии с данным здесь определением.
"Диалкиламиноалкокси" означает группу формулы -O-R-NR'R", где R представляет собой алкилен, a R' и R" алкил в соответствии с данным здесь определением.
"Алкилсульфонил" означает группу формулы -SO2-R, где R представляет собой алкил в соответствии с данным здесь определением.
"Алкилсульфонилалкил" означает группу формулы -R'-SO2-R", где R' представляет собой алкилен, a R" алкил в соответствии с данным здесь определением.
"Алкилсульфонилалкокси" означает группу формулы -O-R-SO2-R', где R представляет собой алкилен, a R' алкил в соответствии с данным здесь определением.
"Амино" означает группу формулы NRR', где группы R и R' независимо представляют собой водород или алкил в соответствии с данным здесь определением. Таким образом, "амино" включает "алкиламино (где одна из групп R и R' представляют собой алкил, а другая водород) и "диалкиламино" (где обе группы R и R' представляют собой алкил).
"Аминокарбонил" означает группу формулы -C(O)-R, где R представляет собой амино в соответствии сданным здесь определением.
"Алкоксиамино" означает группу формулы -NR-OR', где R представляет собой водород или алкил, a R' алкил в соответствии с данным здесь определением.
"Алкилсульфанил" означает группу формулы -SR, где R представляет собой алкил в соответствии сданным здесь определением.
"Аминоалкил" означает группу формулы -R-R', где R' представляет собой амино, a R алкилен в соответствии с данным здесь определением. "Аминоалкил" включает аминометил, аминоэтил, 1-аминопропил, 2-аминопропил и подобные им. Аминогруппа "аминоалкила" может быть один или два раза замещена алкилом с получением "алкиламиноалкила" и "диалкиламиноалкила", соответственно. "Алкиламиноалкил" включает метиламинометил, метиламиноэтил, метиламинопропил, этиламиноэтил и подобные им. "Диалкиламиноалкил" включает диметиламинометил, диметиламиноэтил, диметиламинопропил, N-метил-N-этиламиноэтил и подобные им.
"Аминоалкокси" означает группу формулы -OR-R', где R' представляет собой амино, a R алкилен в соответствии с данным здесь определением.
"Алкилсульфониламидо" означает группу формулы -NR'SO2-R, где R представляет собой алкил, a R' водород или алкил.
"Аминокарбонилоксиалкил" или "карбамилалкил" означает группу формулы -R-O-C(O)-NR'R", где R представляет собой алкилен, а группы R', R" независимо представляют собой водород или алкил в соответствии с данным здесь определением.
"Алкинилалкокси" означает группу формулы -O-R-R', где R представляет собой алкилен, a R' алкинил в соответствии сданным здесь определением.
"Арил" означает циклическую ароматическую одновалентную углеводородную группу, состоящую из одного, двух или трех ароматических циклов. Арильная группа может быть замещена в соответствии с данным здесь определением. Примеры арильных групп включают, но не ограничиваются ими, фенил, нафтил, фенантрил, фторенил, инденил, пенталенил, азуленил, оксидифенил, бифенил, метилендифенил, аминодифенил, дифенилсульфидил, дифенилсульфонил, дифенилизопропилиденил, бензодиоксанил, бензофуранил, бензодиоксилил, бензопиранил, бензоксазинил, бензоксазинонил, бензопиперадинил, бензопиперазинил, бензопирролидинил, бензоморфолинил, метилендиоксифенил, этилендиоксифенил и подобные им, они могут быть замещены в соответствии с данным здесь определением.
"Арилалкил" и "Аралкил", которые могут использоваться взаимозаменяемо, означают радикал -RaRb, где Ra представляет собой алкилен, a Rb арил в соответствии с данным здесь определением; в качестве примеров можно привести фенилалкилы, такие как бензил, фенилэтил, 3-(3-хлорофенил)-2-метилпентил и подобные им.
"Арилсульфонил" означает группу формулы -SO2-R, где R представляет собой арил в соответствии с данным здесь определением.
"Арилокси" означает группу формулы -O-R, где R представляет собой арил в соответствии с данным здесь определением.
"Аралкилокси" означает группу формулы -Ο-R-R', где R представляет собой алкилен, a R' арил в соответствии с данным здесь определением.
"Карбокси" или "гидроксикарбонил", которые могут использоваться взаимозаменяемо, означают группу формулы -С(O)-ОН.
"Цианоалкил" означает группу формулы -R'-R", где R' представляет собой алкилен в соответствии с данным здесь определением, a R" представляют собой циано или нитрил.
"Циклоалкил" означает одновалентную насыщенную карбоциклическую группу, состоящую из одного или двух циклов. Конкретные циклоалкилы могут быть незамещены или замещены алкилом. Циклоалкил может быть замещен в соответствии с данным здесь определением. Если не указано иначе, циклоалкил может быть замещен один или более заместителями, каждый из которых независимо представляет собой гидрокси, алкил, алкокси, галоген, галоалкил, амино, моноалкиламино или диалкиламино. Примеры циклоалкильных групп включают, но не ограничиваются ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и подобные им, включая их частично ненасыщенные производные (циклоалкенил).
"Циклоалкилалкил" означает группу формулы -R'-R", где R' представляет собой алкилен, a R" циклоалкил в соответствии с данным здесь определением.
"Циклоалкилалкокси" означает группу формулы -O-R-R', где R представляет собой алкилен, a R' циклоалкил в соответствии с данным здесь определением.
"Гетероарил" означает моноциклический или бициклический радикал, содержащий от 5 до 12 атомов, входящих в состав циклов, и по меньшей мере один ароматический цикл с одним, двумя или тремя гетероатомами, выбранными из числа N, О или S, причем оставшиеся атомы представляют собой атомы С, и точка прикрепления гетероарильного радикала находится на ароматическом цикле. Гетероарильный цикл может быть замещен в соответствии с данным здесь определением. Примеры гетероарильных групп включают, но не ограничиваются ими, возможно, замещенные имидазолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, пиразинил, тиенил, бензотиенил, тиофенил, фуранил, пиранил, пиридил, пирролил, пиразолил, пиримидил, хинолинил, изохинолинил, бензофурил, бензотиофенил, бензотиопиранил, бензимидазолил, бензооксазолил, бензооксадиазолил, бензотиазолил, бензотиадиазолил, бензопиранил, индолил, изоиндолил, триазолил, триазинил, хиноксалинил, пуринил, хиназолинил, хинолизинил, нафтиридинил, птеридинил, карбазолил, азепинил, диазепинил, акридинил и подобные им, каждый из которых может быть замещен в соответствии сданным здесь определением.
"Гетероарилалкил" или "гетероаралкил" означает группу формулы -R-R', где R представляет собой алкилен, a R' гетероарил в соответствии с данным здесь определением.
"Гетероарилсульфонил" означает группу формулы -SO2-R, где R представляет собой гетероарил в соответствии с данным здесь определением.
"Гетероарилокси" означает группу формулы -O-R, где R представляет собой гетероарил в соответствии с данным здесь определением.
"Гетероаралкилокси" означает группу формулы -O-R-R", где R представляет собой алкилен, a R' гетероарил в соответствии с данным здесь определением.
Термины "галоген", "галоген" и "галид", которые могут использоваться взаимозаменяемо, означают заместитель атом фтора, хлора, брома или йода.
"Галоалкил" означает алкил в соответствии с данным здесь определением, в котором один или более атомов водорода были замещены одним и тем же или различным галогеном. Примеры галоалкилов включают -CH2Cl, -CH2CF3, -CH2CCl3, перфторалкил (например, -CF3) и подобные им.
"Галоалкокси" означает группу формулы -OR, где R представляет собой группу галоалкила в соответствии с данным здесь определением. Примером галоалкокси является дифторметокси.
"Гетероциклоамино" означает насыщенный цикл, в котором по меньшей мере один атом представляет собой Ν, NH или Ν-алкил, а оставшиеся атомы цикла составляют алкиленовую группу.
"Гетероциклил" означает одновалентную насыщенную группу, состоящую из от одного до трех циклов и включающую один, два, три или четыре гетероатома (выбранных из числа азота, кислорода или серы). Циклы гетероциклила могут быть замещены в соответствии с данным здесь определением. Примеры гетероциклильных групп включают, но не ограничиваются ими, возможно, замещенные пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, азепинил, пирролидинил, азетидинил, тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил, оксетанил и подобные им. Такой гетероциклил может быть замещен в соответствии с данным здесь определением.
"Гетероциклилалкил" означает группу формулы -R-R', где R представляет собой алкилен, a R' гетероциклил в соответствии с данным здесь определением.
"Гетероциклилокси" означает группу формулы -OR, где R представляет собой гетероциклил в соответствии с данным здесь определением.
"Гетероциклилалкокси" означает группу формулы -OR-R', где R представляет собой алкилен, a R' гетероциклил в соответствии с данным здесь определением.
"Гетероциклилсульфонил" означает группу формулы -SO2-R, где R представляет собой гетероциклил в соответствии с данным здесь определением.
"Гидроксиалкокси" означает группу формулы -OR, где R представляет собой гидроксиалкил в соответствии с данным здесь определением.
"Гидроксиалкиламино" означает группу формулы -NR-R', где R представляет собой водород или алкил, a R' гидроксиалкил в соответствии с данным здесь определением.
"Гидроксиалкиламиноалкил" означает группу формулы -R-NR'-R", где R представляет собой алкилен, R' водород или алкил, a R" гидроксиалкил в соответствии с данным здесь определением.
"Гидроксикарбонилалкил" или "карбоксиалкил" означает группу формулы -R-(СО)-ОН, где R представляет собой алкилен в соответствии с данным здесь определением.
"Гидроксикарбонилалкокси" означает группу формулы -O-R-C(O)-OH, где R представляет собой алкилен в соответствии с данным здесь определением.
"Гидроксиалкилоксикарбонилалкил" или "гидроксиалкоксикарбонилалкил" означает группу формулы -R-C(O)-O-R-OH, где каждая группа R представляет собой алкилен, и эти группы могут быть одинаковыми или различными.
"Гидроксиалкил" означает алкильную группу в соответствии с данным здесь определением, замещенную одной или более, например, одной, двумя или тремя гидрокси группами, причем к одному атому углерода прикрепляется не более одной гидрокси группы. Репрезентативные примеры включают, но не ограничиваются ими, гидроксиметил, 2-гидроксиэтил, 2-гидроксипропил, 3-гидроксипропил, 1-(гидроксиметил)-2-метилпропил, 2-гидроксибутил, 3-гидроксибутил, 4-гидроксибутил, 2,3-дигидроксипропил, 2-гидрокси-1-гидроксиметилэтил, 2,3-дигидроксибутил, 3,4-дигидроксибутил и 2-(гидроксиметил)-3-гидроксипропил.
"Гидроксициклоалкил" означает циклоалкильную группу в соответствии с данным здесь определением, где один, два или три атома водорода циклоалкильного радикала замещены гидрокси заместителем. Репрезентативные примеры включают, но не ограничиваются ими, 2-, 3-, или 4-гидроксициклогексил и подобные им.
"Алкокси гидроксиалкил" и "гидрокси алкоксиалкил", которые могут использоваться взаимозаменяемо, означает алкил в соответствии с данным здесь определением, замещенный хотя бы один раз гидрокси-группой и хотя бы один раз алкокси-группой. Таким образом, "алкокси гидроксиалкил" и "гидрокси алкоксиалкил" включают, например, 2-гидрокси-3-метокси-пропан-1-ил и подобные им.
"Мочевина" или "уреидо" означает группу формулы -NR'-C(O)-NR"R"', где каждая из групп R', R" и R'" независимо представляет собой водород или алкил.
"Карбамат" означает группу формулы -O-C(O)-NR'R", где каждая из групп R' и R" независимо представляет собой водород или алкил.
"Карбокси" означает группу формулы -O-С(O)-ОН.
"Сульфонамидо" означает группу формулы -SO2-NR'R", где каждая из групп R' и R" независимо представляет собой водород или алкил.
"Возможно замещенный" при использовании совместно с описанием группы "арил", фенил", "гетероарил" "циклоалкил" или "гетероциклил" означает, что такая группа может быть незамещена (то есть, все открытые валентности заняты атомами водорода) или может быть замещена конкретными группами из настоящего описания.
"Уходящая группа" означает группу, значение которой связано с методологией синтетической органической химии, то есть, атом или группу, вытесняемую в условиях реакции замещения. Примеры уходящих групп включают, но не ограничиваются ими, галоген, алкан- или ариленсульфонилокси, такие как метансульфонилокси, этансульфонилокси, тиометил, бензосульфонилокси, тосилокси и тиенилокси, дигалофосфиноилокси, возможно, замещенные бензилокси, изопропилокси, ацилокси и подобные им.
"Модулятор" означает молекулу, взаимодействующую с мишенью. Взаимодействия включают, но не ограничиваются ими, агонисты, антагонисты и подобные им, в соответствии с данным здесь определением.
"Возможный" или "возможно" означает, что описываемое далее событие или обстоятельство может произойти или не произойти, а описание включает примеры, где событие или обстоятельство происходит, а также и примеры, где оно не происходит.
"Заболевание" или "состояние болезни" означает любой заболевание, состояние, симптом, расстройство или показание.
"Инертный органический растворитель" или "инертный растворитель" означает, что растворитель является инертным в условиях описываемой реакции, в которой он применяется, включая, например, бензол, толуол, ацетонитрил, тетрагидрофуран, Ν,Ν-диметилформамид, хлороформ, метилен хлорид или дихлорометан, дихлороэтан, диэтиловый эфир, этилацетат, ацетон, метилэтилкетон, метанол, этанол, пропанол, изопропанол, трет-butanol, диоксан, пиридин и подобные им. Если не указано обратное, растворители в реакциях настоящего изобретения являются инертными растворителями.
"Фармацевтически приемлемый" означает полезный для изготовления фармацевтической композиции, которая, в целом, безопасна, нетоксична, не является нежелательной в биологическом или ином смысле, включая применимость для ветеринарии и для изготовления лекарств для человека.
"Фармацевтически приемлемые соли" соединения означает соли, которые фармацевтически приемлемы в соответствии с данным здесь определением и обладают желательной фармацевтической активностью родительского соединения.
Следует понимать, что все ссылки на фармацевтически приемлемые соли включают формы с растворителем (сольваты) или кристаллические формы (полиморфы), в соответствии с данным здесь определением, одной и той же соли присоединения кислоты.
"Защитная группа" означает группу, которая селективно блокирует один реактивный центр многофункционального соединения, так что удается селективно провести химическую реакцию с другим - незащищенным - реактивным центром; это определение часто применяют в методологии синтетической органической химии. В определенных процессах настоящего изобретения защитные группы применяют для блокирования реактивных атомов азота и/или кислорода реагентов. Например, термины "амино-защитная группа" и "азот-защитная группа" взаимозаменяемо используются здесь для обозначения органических групп, предназначенных для защиты атомов азота от нежелательных реакций в ходе синтетических процедур. Примеры азот-защитных групп включают, но не ограничиваются ими, трифторацетил, ацетамидо, бензил (Bn), бензилоксикарбонил (карбобензилокси, CBZ), п-метоксибензилоксикарбонил, п-нитробензилоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил (ВОС) и подобные им. Специалист в области техники знает, как можно подобрать группу, которую легко удалить и которая может противостоять условиям последующей реакции.
"Сольваты" означает формы присоединения растворителей, которые содержат стехиометрические или нестехиометрические количества растворителя. Некоторые соединения характеризуются тенденцией захватывать фиксированное количество молекул растворителя в кристаллическом твердом состоянии, формируя сольват. Если растворителем является вода, получаемый сольват называется гидратом, если растворителем является спирт, сольват называется алкоголятом. Гидраты образуются при связывании одной или более молекул воды с одним из соединений, при взаимодействии с которыми вода сохраняет свое молекулярное состояние как H2O, при этом может образовываться один или больше гидратов.
"Болезнь Паркинсона" означает дегенеративное расстройство центральной нервной системы, при котором нарушается моторная функция, речь и/или когнитивная функция. Симптомы болезни Паркинсона могут включать, например, ригидность, тремор, замедление физических движений (брадикинезию) и неспособность двигаться (акинезия).
"Болезнь телец Леви" называют также " деменцией с тельцами Леви", "диффузным заболеванием с тельцами Леви", "кортикальным заболеванием с тельцами Леви" и означает нейродегенеративное расстройство, анатомически характеризующееся наличием в головном мозге телец Леви.
"Субъект" означает млекопитающих и немлекопитающих. "Млекопитающие" означает любого представителя класса млекопитающих, включая, но не ограниваясь ими, человека; других приматов, таких как шимпанзе и остальные виды обезьян и мартышек; сельскохозяйственных животных, таких как корова, лошадь, овца, коза и свинья; домашних животных, таких как кролики, собаки и кошки; лабораторных животных, включая грызунов, таких как крысы, мыши и морские свинки; и подобных животных. Примеры не-млекопитающих включают, но не ограничиваются ими, птиц и подобных им. Термин "субъект" не предполагает конкретный возраст или пол.
"Терапевтически эффективное количество" означает количество соединения, которого при введении субъекту для лечения заболевания достаточно для лечения этого состояния. "Терапевтически эффективное количество" зависит от соединения, заболевания, которое предстоит лечить, тяжести заболевания, возраста и относительного здоровья субъекта, маршрута и формы введения, мнения врача или ветеринара и других факторов.
Термины "определенные выше" или "определенные в данном описании" при применении к переменной включают путем ссылки широкое определение переменной, а также и конкретные определения при их наличии.
"Лечение" состояния заболевания включает, помимо прочего, ингибирование состояния заболевания, то есть, остановку развития самого заболевания или его клинических симптомов и/или облегчение состояния заболевания, то есть, временную или постоянную регрессию состояния заболевания или его клинических симптомов.
Термины "обработка", "взаимодействие", "реагирование" в связи с химической реакцией означают добавление или смешивание двух или более реагентов при соответствующих условиях с получением указанного и/или желательного продукта. Следует понимать, что реакция, при которой образуется указанный и/или желательный продукт, не обязательно происходит при непосредственном смешении двух первоначально добавленных реагентов, то есть, в смеси может первоначально образоваться один или больше интермедиатов, окончательно ведущих к получению указанного и/или желательного продукта.
"C1-6" в сочетании с любым другим термином в настоящем описании означает диапазон от одного до шести атомов углерода, то есть, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода. "С2-6" означает диапазон от двух до шести атомов углерода, то есть, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода, “C3-6” означает диапазон от трех до шести атомов углерода, то есть, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода.
Номенклатура и структуры
В целом, номенклатура и химические названия в настоящей заявке основаны на приложении ChembioOffice™ компании "КембриджСофт" (CambridgeSoft™). Любая открытая валентность на атоме углерода, кислорода или азота структур настоящего описания означает наличие водорода, если не сказано иное. Если в азотсодержащем гетероарильном цикле на атоме азота указана открытая валентность, и в этом цикле указаны переменные Ra, Rb или Rc, то такие переменные могут присоединяться к азоту с открытой валентностью. Если в структуре существует хиральный центр, но конкретной стереохимии для него не обозначено, такая структура охватывает оба ассоциированных с этим центром энантиомера. Если структура может существовать в виде нескольких таутомерных форм, все они охватываются данной структурой. Указанные в структуре атомы в настоящем описании охватывают все природные изотопы. Так, например, предполагается, что атом водорода включает дейтерий и тритий, а атом углерода включает изотопы С13 и С14.
Соединения по изобретению
Изобретение относится к соединениям формулы I:
или его фармацевтически приемлемым солям,
где: А представляет собой пяти- или шестичленный насыщенный или ненасыщенный цикл, включающий один или два гетероатома, выбранных из О, N и S, один раз замещенный группой R5 и, возможно, один, два или три раза замещенный группами R6;
X представляет собой -NRa-; -О- или -S(O)r, где r может быть в интервале от 0 до 2, a Ra представляет собой водород или С1-6алкил;
R1 представляет собой С1-6алкил; С1-6алкенил; С1-6алкинил; гало-С1-6алкил; С1-6алкокси-С1-6алкил; гидрокси-С1-6алкил; амино-С1-6алкил; С1-6алкилсульфонил-С1-6алкил; С3-6циклоалкил, возможно, замещенный С1-6алкилом; С3-6циклоалкил-С1-6алкил, где фрагмент С3-6циклоалкил, возможно, замещен С1-6алкилом; тетрагидрофуран; тетрагидрофуранил-С1-6алкил; оксетанил или оксетан-С1-6алкил;
или R1 и Ra совместно с атомом, к которому они прикреплены, могут образовывать трех-шестичленный цикл, который может дополнительно содержать гетероатом, выбранный из О, N и S, и который замещен оксо, гало-группой или С1-6алкилом;
R2 представляет собой галоген; С1-6алкокси; циано; С1-6алкинил; С1-6алкенил; гало-С1-6алкил; гало-С1-6алкокси; С3-6циклоалкил, где фрагмент С3-6циклоалкила, возможно, замещен С1-6алкилом; тетрагидрофуранил; тетрагидрофуранил-С1-6алкил; ацетил; оксетанил или оксетан-С1-6алкил;
одна из групп R3 и R4 представляет собой гало; С1-6алкил; С1-6алкокси; С3-6циклоалкилокси; гало-С1-6алкил или гало-С1-6алкокси, а другая группа является водородом;
R5 представляет собой оксо; С1-6алкил; С3-6циклоалкил; С3-6циклоалкил-С1-6алкил; или -C(O)-NRbRc, где Rb и Rc независимо могут быть водородом или -С1-6алкилом, или Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, могут образовывать гетероцикл, который может дополнительно содержать гетероатом, выбранный из О, N и S, и который может быть один или больше раз замещен R6; и
каждая группа R6 независимо представляет собой: С1-6алкил; С3-6циклоалкил; С3-6циклоалкил-С1-6алкил; гало; гало-С1-6алкил; гидрокси-С1-6алкил; С1-6алкокси-С1-6алкил; гетероциклил; оксо; или -C(O)-NRbRc.
Определенное воплощение изобретения относится к соединению формулы I, где
А представляет собой пяти- или шестичленный насыщенный или ненасыщенный цикл, включающий один или два гетероатома, выбранных из О, N и S, один раз замещенный R5 и, возможно, один, два или три раза замещенный R6;
X представляет собой -ΝΗ-;
R1 представляет собой С1-6алкил;
R2 представляет собой гало; циано или гало-С1-6алкил;
одна из групп R3 и R4 представляет собой галоген или С1-6алкокси; а другая группа является водородом;
R5 представляет собой оксо; С1-6алкил; или -C(O)-NRbRc, где Rb и Rc независимо являются -С1-6алкилом, или Rb and Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, могут образовывать гетероцикл, который может дополнительно содержать гетероатом, выбранный из О, N и S, и который может быть один или больше раз замещен R6; и
каждая группа R6 независимо представляет собой С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 и Ra совместно с атомом, к которому они прикреплены, могут образовывать трех-шестичленный цикл, который может дополнительно содержать гетероатом, выбранный из О, N и S, и который может быть замещен оксо, гало-группой или С1-6алкилом;
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 и Ra совместно с атомом, к которому они прикреплены, формируют пяти- или шестичленный цикл.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 и Ra совместно с атомом, к которому они прикреплены, формируют группу пирролидинила, пиперидинил или оксазоладинонила.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой ацетил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, если R1 представляет собой циклопропил, циклобутил, циклопропил-С1-6алкил или циклобутил-С1-6алкил, то X соответствует -О-.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, r равняется 0.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, r равняется 2.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, X представляет собой -NRa- или -О-.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, X представляет собой -NRa.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, X представляет собой -О-.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, X представляет собой -S(O)n-.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, X представляет собой -NH- или -О-.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Ra представляет собой водород.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Ra представляет собой С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой С1-6алкил; гало-С1-6алкил; С1-6алкокси-С1-6алкил; амино-С1-6алкил; С1-6алкилсульфонил-С1-6алкил; С3-6циклоалкил; или С3-6циклоалкил-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой С1-6алкил; С3-6циклоалкил, возможно, замещенный С1-6алкилом; или С3-6циклоалкил-С1-6алкил, где фрагмент С3-6циклоалкил, возможно, замещен С1-6алкилом.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой С1-6алкил; гало-С1-6алкил; С1-6алкокси-С1-6алкил; амино-С1-6алкил; С С1-6алкилсульфонил-С1-6алкил; тетрагидрофуранил; тетрагидрофуранил-С1-6алкил; оксетанил или оксетан-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой С1-6алкил; гало-С1-6алкил; С1-6алкокси-С1-6алкил; амино-С1-6алкил или С1-6алкилсульфонил-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой С1-6алкли.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой гало-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой С1-6алкокси-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой амино-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой С1-6алкилсульфонил-С1-6алкил, возможно, замещенный С1-6алкилом.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой метил; этил; н-пропил; изопропил; изобутил; 3,3-диметилпропил; циклопентил;
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой С3-6циклоалкил, возможно, замещенный С1-6алкилом.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой С3-6циклоалкил-С1-6алкил, где фрагмент С3-6циклоалкил, возможно, замещен С1-6алкилом.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой тетрагидрофуранил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой тетрагидрофуранил-С1-6алкил; оксетанил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой оксетан-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой метил; этил; н-пропил; изопропил; изобутил; 3,3-диметилпропил; циклопропил; циклобутил; циклопентил; циклогексил; циклопропилметил; циклобутилметил; циклопентилметил; циклопропилэтил; метоксиэтил; оксетанил или тетрагидрофуранилметил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой метил; этил; н-пропил; изопропил; изобутил; 3,3-диметилпропил; циклопентил; циклогексил; циклопропилметил; циклобутилметил; циклопентилметил; циклопропилэтил; метоксиэтил; оксетанил или тетрагидрофуранилметил; циклогексил; циклопентилметил; метоксиэтил; оксетанил или тетрагидрофуранилметил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой метил; этил; н-пропил; изопропил или изобутил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой метил или этил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой метил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой этил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой циклопропил; циклобутил; циклопентил; циклогексил; циклопропилметил; циклобутилметил; циклопентилметил или циклопропилэтил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R1 представляет собой циклопентил; циклогексил или циклопентилметил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой гало; С1-6алкокси; гало-С1-6алкил; гало-С1-6алкокси; 1-6циклоалкил где фрагмент С3-6циклоалкил, возможно, замещен С1-6алкилом; С3-6циклоалкил-С1-6алкил, где фрагмент С3-6циклоалкил, возможно, замещен С1-6алкилом; тетрагидрофуранил; тетрагидрофуранил- С1-6алкил; оксетанил или оксетан-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой гало; С1-6алкокси; гало-С1-6алкил; циано; С1-6алкинил; С1-6алкенил; С3-6циклоалкил или С3-6циклоалкил-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой гало; С1-6алкокси; гало-С1-6алкил; циано; С3-6циклоалкил или С3-6циклоалкил-C1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой гало; С1-6алкокси; гало-С1-6алкил; С3-6циклоалкил или С1-6циклоалкил-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой гало; гало-С1-6алкил или циано.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой галоген или гало-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой гало.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой С1-6алкокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой гало-С1-6алкокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой гало-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой С3-6циклоалкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой С3-6циклоалкил-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой тетрагидрофуранил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой тетрагидрофуранил-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой оксетанил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой оксетан-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой гало, трифторметил или циано.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой хлоро, трифторметил или циано.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой хлоро или трифторметил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой фтор, хлоро или бромо.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой хлоро.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой фтор.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой бромо.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой трифторметил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой метокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой циано.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой С1-6алкинил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R2 представляет собой С1-6алкенил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой водород.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой гало.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой С1-6алкокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой галоген или С1-6алкокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой С3-6циклоалкилокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой гало-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой гало-С1-6алкокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой галоген или метокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой фтор, хлоро или метокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой фтор или хлоро.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой метокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой метил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой хлоро.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R3 представляет собой фтор.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой водород.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой С1-6алкил;
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой гало.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой С1-6алкокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой гало-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой гало-С1-6алкокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой галоген или метокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой фтор, хлоро, метил или метокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой фтор, хлоро или метокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой фтор или хлоро.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой метокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой метил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой хлоро.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой фтор.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R4 представляет собой С3-6циклоалкилокси.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R5 представляет собой оксо; С1-6алкил или -C(O)-NRbRc.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R5 представляет собой оксо.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R5 представляет собой С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R5 представляет собой С3-6циклоалкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R5 представляет собой С3-6циклоалкил-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R5 представляет собой -C(O)-NRbRc.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, каждая группа R6 независимо представляет собой С1-6алкил, гидрокси-С1-6алкил, С1-6алкокси-С1-6алкил, гетероциклил, оксо или -C(O)-NRbRc.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R6 представляет собой С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R6 представляет собой С3-6циклоалкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R6 представляет собой С3-6циклоалкил-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R6 представляет собой гало.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R6 представляет собой гало-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R6 представляет собой гидрокси-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R6 представляет собой С1-6алкокси-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R6 представляет собой гетероциклил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R6 представляет собой оксо.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R6 представляет собой -C(O)-NRbRc.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, формируют гетероцикл, который может дополнительно содержать гетероатом, выбранный из О, N и S, и который, возможно, один или более раз замещен R6.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, образуют пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, пирролидинил, азетидинил, азепинил, оксазепинил или диазепинил, возможно, один или более раз замещенные R6.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, образуют пиперидинил, пиперазинил или морфолинил, возможно, один или более раз замещенные R6.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, образуют пиперидинил, возможно, один или более раз замещенный R6.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, образуют пиперазинил, возможно, один или более раз замещенный R6.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, образуют морфолинил, возможно, один или более раз замещенный R6.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, образуют тиоморфолинил, возможно, один или более раз замещенный R6.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, образуют пирролидинил, возможно, один или более раз замещенный R6.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, образуют азетидинил, возможно, один или более раз замещенный R6.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, образуют азепинил, возможно, один или более раз замещенный R6.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, образуют оксазепинил, возможно, один или более раз замещенный R6.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, Rb и Rc совместно с атомом, к которому они прикреплены, образуют диазепинил, возможно, один или более раз замещенный R6.
В воплощениях изобретения, в которых R6 представляет собой гетероциклил или содержит гетероциклильную группу, такой гетероциклил может представлять собой азепинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидропиранил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, азетидинил или оксетанил.
В воплощениях изобретения, в которых R6 представляет собой гетероциклил или содержит гетероциклильную группу, такой гетероциклил может представлять собой пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил, оксетанил, азетидинил, азепинил, охазепинил или пирролидинил.
В воплощениях изобретения, в которых R6 представляет собой гетероциклил или содержит гетероциклильную группу, такой гетероциклил может представлять собой пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R6 представляет собой оксетанил.
В соответствии с определенными воплощениями изобретения, предметом изобретения являются соединения формулы IIa или IIb:
где:
m соответствует 0; 1 или 2;
Ζ представляет собой -C(R7)2-; -NR8- или -О-; или Ζ отсутствует;
каждая группа R7 независимо представляет собой водород или C1-6алкил; и
каждая группа R8 независимо представляет собой водород; С1-6алкил; С3-6циклоалкил; С3-6циклоалкил-С1-6алкил; гало; гало-С1-6алкил; гидрокси-С1-6алкил; С1-6алкокси-С1-6алкил; гетероциклил или -C(O)-NRbRc; и
X, R1, R2, R3 и R4 соответствуют определению, данному для формулы I.
В соответствии с определенными воплощениями, соединения относятся к формуле IIa.
В соответствии с определенными воплощениями, соединения относятся к формуле IIb.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, если Ζ отсутствует, m соответствует 1 или 2.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, m=0.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa and IIb, m is 1
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, m=2.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, m соответствует 0 или 1
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, m соответствует 1 или 2.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, Ζ представляет собой -C(R7)2-.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, Ζ представляет собой -NR8-.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, Ζ представляет собой -О-.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, Ζ отсутствует.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, R7 представляет собой водород.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, R7 представляет собой С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, каждая группа R8 независимо представляет собой С1-6алкил; С3-6циклоалкил; С3-6циклоалкил-С1-6алкил; гало; гало-С1-6алкил; гидрокси- С1-6алкил; С1-6алкокси-С1-6алкил; гетероциклил или -C(O)-NRbRc.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, каждая группа R8 независимо представляет собой С1-6алкил; С3-6циклоалкил; С3-6циклоалкил-С1-6алкил; гидрокси-С1-6алкил; С1-6алкокси- С1-6алкил; оксетанил или -C(O)-NRbRc.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, R8 представляет собой С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, R8 представляет собой С3-6циклоалкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, R8 представляет собой С3-6циклоалкил-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, R8 представляет собой гало.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, R8 представляет собой гало-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, R8 представляет собой гидрокси-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, R8 представляет собой С1-6алкокси-С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, R8 представляет собой гетероциклил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIa и IIb, R8 представляет собой -C(O)-NRbRc.
В воплощениях изобретения, в которых R8 представляет собой гетероциклил или содержит гетероциклильную группу, такой гетероциклил может представлять собой азепинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидропиранил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, азетидинил или оксетанил.
В воплощениях изобретения, в которых R8 представляет собой гетероциклил или содержит гетероциклильную группу, такой гетероциклил может представлять собой пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил, оксетанил, азетидинил, азепинил, охазепинил или пирролидинил.
В воплощениях изобретения, в которых R8 представляет собой гетероциклил или содержит гетероциклильную группу, такой гетероциклил может представлять собой пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил.
В соответствии с определенными воплощениями формулы I, R8 представляет собой оксетанил.
В соответствии с определенными воплощениями изобретения, объектом изобретения являются соединения формулы IIIa или IIIb: 
где:
R9 представляет собой водород; С1-6алкил; С3-6циклоалкил или С3-6циклоалкил-С1-6алкил; и
X, R1, R2, R3, Rb и Rc соответствуют определению, данному для формулы I.
В соответствии с определенными воплощениями изобретения, объектом изобретения являются соединения формулы IIIa.
В соответствии с определенными воплощениями изобретения, объектом изобретения являются соединения формулы IIIb.
В соответствии с определенными воплощениями формулы IIIa и IIIb, R9 представляет собой водород или С1-6алкил.
В соответствии с определенными воплощениями изобретения, соединение формулы I выбрано из следующей группы:
7-хлор-4-метил-8-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-3,4-дигидробензо[f][1,4]оксазепин-5(2Н)-он, 5-метокси-N,N-диметил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)бензофуран-2-карбоксамид, 5-хлор-3-метил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)бензо[d]оксазол-2(3Н)-он, N2-(6-хлор-2-метилбензо[d]оксазол-5-ил)-N4-метил-5-(трифторметил)пиримидин-2,4-диамин, 5-метокси-2-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он, 6-хлор-5-(5-хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-иламино)-2-метилизоиндолин-1-он, 6-хлор-2-метил-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он, 2-циклопропил-4-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он, 4-метокси-2-метил-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он, 5-хлор-6-(5-хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-иламино)бензо[d]оксазол-2(3Н)-он, 5-хлор-6-(5-хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-иламино)-3-метилбензо[d]оксазол-2(3Н)-он, 7-метокси-2-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-3,4-дигидроизохинолин-1(2Н)-он, 7-метокси-2-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)фталазин-1(2Н)-он, 2-этил-4-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он, 2-(2-гидроксипропан-2-ил)-4-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он, 4-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-2-(оксетан-3-ил)изоиндолин-1-он, 6-метокси-2-метил-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он, (5-хлор-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1Н-индол-3-ил)(морфолино)метанон, 2-(2-гидрокси-2-метилпропил)-6-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он, 5-(4-(этиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-2-(2-гидрокси-2-метилпропил)-6-метоксиизоиндолин-1-он, 6-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-2-(оксетан-3-ил)изоиндолин-1-он, 5-(4-(этиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-6-метокси-2-(оксетан-3-ил)изоиндолин-1-он, 5-хлор-N,N,1-триметил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1Н-индол-3-карбоксамид, (5-хлор-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1Н-индол-3-ил)(пиперазин-1-ил)метанон, (5-хлор-6-(4-(этиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1-метил-1Н-индол-3-ил)(морфолино)метанон, (5-метокси-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1Н-индол-3-ил)(морфолино)метанон, (5-хлор-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1Н-индол-3-ил)(4-метилпиперазин-1-ил)метанон, (5-хлор-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1Н-индол-3-ил)(4-этилпиперазин-1-ил)метанон, 4-метокси-2-метил-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он, (5-метокси-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)бензофуран-3-ил)(морфолино)метанон, 5-метокси-Ы,М-диметил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)бензофуран-3-карбоксамид, (1S,4S)-2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ил(5-хлор-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1Н-индол-3-ил)метанон, 7-((5-хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-ил)амино)-6-метокси-2,2,4-триметил-2Н-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он, 6-метокси-2,2,4-триметил-7-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-2Н-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он, 2-(7-метокси-2-метил-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-иламино)-4-(метиламино)пиримидин-5-карбонитрил и 5-хлор-1,3-диметил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)-1Н-бензо[d]имидазол-2(3Н)-он.
Изобретение также относится к способу лечения заболевания или состояния, опосредуемого или иначе связанного с рецептором LRRK2, причем этот способ включает введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества соединения изобретения.
Заболевание может представлять собой нейродегенеративное заболевание, такое как болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона и деменция с тельцами Леви.
Заболевание может представлять собой расстройство ЦНС, такое как болезнь Альцгеймера и L-Dopa-индуцированная дискинезия.
Заболевание может представлять собой рак или пролиферативное расстройство, такое как рак почки, молочной железы, простаты, крови, легкого или папиллярный рак, острая миелогенозная лейкемия или множественная миелома.
Заболевание может представлять собой воспалительное заболевание, такое как проказа, болезнь Крона, амиотрофический латеральный склероз, ревматоидный артрит и анкилозирующий спондилит.
Изобретение также относится к способу усиления когнитивной памяти, причем этот способ включает введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества соединения изобретения.
Изобретение также относится к композиции, состоящей из фармацевтически приемлемого носителя и соединения, описанного в настоящем документе.
Изобретение также относится к способу лечения болезни Паркинсона, причем этот способ включает введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества соединения, описанного в настоящем документе.
Изобретение также относится к соединению формулы I, описанному в настоящем документе, для применения с целью профилактики или лечения болезни Паркинсона.
Изобретение также относится к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, применяемой для профилактики или лечения болезни Паркинсона.
Изобретение также относится к соединению формулы I, описанному в настоящем документе, для изготовления лекарственного средства с целью профилактики или лечения болезни Паркинсона.
Репрезентативные соединения, соответствующие способам изобретения, описаны в следующем далее разделе экспериментальных примеров.
Синтез
Соединения настоящего изобретения можно изготовить разнообразными способами, отраженными в иллюстративных схемах синтетических реакций, показанных и описанных далее.
Исходные материалы и реагенты, используемые при приготовления этих соединений, как правило, либо доступны из коммерческих источников, таких как "Олдрич Кемикал Ко" (Aldrich Chemical Со), либо их можно получить способами, известными опытному специалисту в уровне техники, следуя процедурам, изложенным в таких руководствах, как Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis (Реагенты для органического синтеза); Wiley & Sons: New York, 1991, Тома 1-15; Rodd's Chemistry of Карбон Compounds (Химия соединений углерода), Elsevier Science Publishers, 1989, Тома 1-5 и Дополнительные материалы; а также Organic Reactions (Органические реакции), Wiley & Sons: New York, 1991, Тома 1-40. Следующие схемы синтетических реакций просто являются иллюстрациями некоторых способов синтеза соединений по настоящему изобретению, используя описание из настоящей заявки, специалист в уровне техники может предлагать и вносить в эти схемы разнообразные модификации.
Исходные материалы и интермедиаты схем реакций синтеза можно при необходимости выделить и очистить обычными способами, включая, но не ограничиваясь, фильтрование, перегонку, кристаллизацию, хроматографию и подобные им. Такие вещества можно охарактеризовать обычными способами, включая определение физических констант и спектральных данных.
Если не указано обратное, описанные здесь реакции можно проводить в инертной атмосфере при атмосферном давлении и температурах, приблизительно, от -78 до 150°С, например, приблизительно, от 0 до 125°С, их удобно проводить, приблизительно, при комнатной температуре (температуре окружающей среды), например, около 20°С.
Приводимая далее Схема А иллюстрирует одну синтетическую процедуру, применимую для получения конкретных соединений формулы I или II, где X, m, R1, R2, R3, R4 и R5 соответствуют данным здесь определениям.
Схема А
На этапе 1 Схемы А дихлоропиримидиновое соединение а взаимодействует с реагентом b с получением пиримидинового соединения с. Реакцию этапа 1 можно проводить в условиях полярных растворителей. В тех воплощениях изобретения, когда X соответствует -О- (то есть, реагент b представляет собой спирт), реакцию этапа А можно проводить в присутствии основания.
На этапе 2 пиримидиновое соединение с вступает в реакцию с анилиновым соединением d с получением фениламинопиридинового соединения формулы I изобретения. Реакцию этапа 2 можно проводить в полярных протонных растворителях и в присутствии кислоты, такой как HCI. Многие анилиновые соединения d доступны коммерчески, или их легко можно приготовить из нитробензолов, как показано в разделе Примеров ниже.
У процедуры, представленной на Схеме А, возможно большое количество вариаций, они понятны специалистам в уровне техники. Конкретные детали получения соединений изобретения описаны в разделе Примеров ниже.
Способы введения и фармацевтическая композиция
Изобретение включает фармацевтические композиции, содержащие хотя бы одно соединение по настоящему изобретению или индивидуальный изомер, рацемическую или нерацемическую смесь изомеров, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват, совместно, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым носителем или, возможно, другими терапевтическими и/или профилактическими ингредиентами.
В целом, соединения настоящего изобретения в терапевтически эффективном количестве вводятся любым способом, приемлемым для введения агентов, используемых для похожих целей. Приемлемые диапазоны дозировок составляют, как правило, 1-500 мг в день, например, 1-100 мг в день или, наиболее предпочтительно, 1-30 мг в день, в зависимости от различных факторов, таких как тяжесть заболевания, подлежащего излечению, возраст и относительное состояние здоровья пациента, активность используемого вещества, маршрут и форма введения, показания, по которым проводится введение, а также предпочтения и опыт врача. Обычный специалист в уровне техники, связанным с лечением таких заболеваний, сможет без ненужного экспериментирования и полагаясь на личные знания и описание из настоящей заявки, определить, какое количество соединения по настоящему изобретению будет эффективным для лечения данного заболевания.
Соединения по изобретению могут вводиться в виде фармацевтических составов, включая пригодные для орального (включая буккальное и сублингвальное), ректального, назального, топического, легочного, вагинального и парентерального (включая внутримышечное, внутриартериальное, интратекальное, подкожное и внутривенное) введения, или в форме, пригодной для введения посредством ингаляции или инсуффляции. Обычно, конкретным способом введения является оральный, следуя обычному суточному режиму дозировки, который можно изменять в зависимости от тяжести заболевания.
Соединение или соединения по изобретению, совместно с одним или более обычными адъювантами, носителями или разбавителями, можно включать в состав формы фармацевтической композиции или единичной дозировки. Форма фармацевтической композиции и единичной дозировки может состоять из обычных ингредиентов в обычных пропорциях, содержать или не содержать дополнительные активные соединения или системы, а формы единичной дозировки могут содержать подходящие эффективные количества активных ингредиентов, соизмеримые с предполагаемой суточной дозировкой лекарства. Фармацевтические композиции могут использоваться в твердом виде, например, в виде таблеток или заполненных капсул, в полутвердом виде, в виде порошков, составов задержанного высвобождения, а также в виде жидкостей, таких как растворы, суспензии, эмульсии, эликсиры и заполненные капсулы, предназначенные для применения перорально; а также могут использоваться в форме суппозиториев для ректального или вагинального введения; или в форме стерильных растворов для инъекций при парентеральном применении. Примеры подходящих форм единичной дозировки содержат около одного (1) миллиграмма активного ингредиента, или, более широко, приблизительно, от 0,01 до ста (100) миллиграмм на таблетку.
Соединения по изобретению можно включать в состав большого количества лекарственных форм для перорального введения. В качестве активного компонента фармацевтические композиции и формы дозировки могут содержать соединение или соединения по настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли. Фармацевтически приемлемые носители могут представлять собой твердое или жидкое вещество. Твердые формы включают порошки, таблетки, пилюли, капсулы, облатки, суппозитории и диспергируемые гранулы. Твердый носитель может представлять собой одно или больше веществ, которые также могут выполнять функцию разбавителей, красителей, солюбилизаторов, лубрикантов, суспендирующих агентов, связующих составов, консервантов, измельчителей или герметизирующего материала. В порошках носитель, обычно, представляет собой тонко измельченное вещество, смешанное с измельченным активным компонентом. В таблетках активный компонент, обычно, смешан с носителем, обладающим необходимой связывающей способностью, в желательной пропорции, и уплотнен до требуемой формы и размера. Порошки и таблетки могут содержать, приблизительно, от одного (1) до семидесяти (70) процентов активного соединения. Подходящие носители включают, но не ограничиваются ими, карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактозу, пектин, декстрин, крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу натрия, воск с низкой температурой плавления, кокосовое масло и подобные вещества. Термин "изготовление" включает смешивание активного соединения с инкапсулирующим материалом в качестве носителя, получение капсулы, в котором активный компонент, в смеси с носителем или без него, окружен носителем, связанным с этой капсулой. Подобным образом получают облатки и таблетки для рассасывания. Таблетки, порошки, капсулы, пилюли, облатки и таблетки для рассасывания могут представлять собой твердые формы, удобные для применения перорально.
Другие подходящие для орального применения формы включают жидкие препараты, такие как эмульсии, сиропы, эликсиры, водные растворы, водные суспензии, или твердые препараты, предназначенные для превращения в жидкую форму незадолго до использования. Эмульсии можно готовить в растворах, например, в водных растворах пропилен гликоля; они также могут содержать эмульсификаторы, например, такие как лецитин, моноолеат сорбитана или камедь. Водные растворы можно получать, растворяя активный компонент в воде и добавляя подходящие красители, ароматизаторы, стабилизаторы и уплотнители. Водные суспензии можно получать, растворяя мелко измельченный активный компонент в воде с вязким материалом, таким как природные или синтетические декстрины, смолы, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия и другие хорошо известные суспендирующие агенты. Препаративные формы включают растворы, суспензии и эмульсии и могут содержать, помимо активного компонента, еще и красители, ароматизаторы, стабилизаторы, буферы, искусственные и натуральные подсластители, диспергирующие вещества, уплотнители, солюбилизирующие вещества и подобные им.
Соединения настоящего изобретения можно приготовить в форме для парентерального введения (например, путем инъекции, например, болюсной инъекции или непрерывной инфузии), их можно изготовлять в форме единичной дозировки в виде ампул, заранее наполненных шприцов, небольших контейнеров для инфузии или контейнерах многократного дозирования, добавив туда консервант. Композиции могут также быть в виде суспензий, растворов или эмульсий в масле или водных носителях, например, в виде раствора в водном полиэтилен гликоле. Примеры масляных или неводных носителей, разбавителей, растворителей или основ включают пропилен гликоль, полиэтилен гликоль, растительные масла (например, оливковое масло) и предназначенные для инъекций органические эфиры (например, этилолеат), и могут содержать такие требуемые для получения лекарственного состава агенты, как консерванты, увлажнители, эмульсификаторы и суспендирующие, стабилизирующие или диспергирующие агенты. Альтернативно, активный ингредиент может принимать форму порошка, получаемого путем асептического выделения из стерильной жидкости или путем лиофилизации из раствора, и предназначенного для восстановления раствора с помощью подходящего носителя, например, стерильной апирогенной воды.
Соединения изобретения можно смешивать для топического наложения на эпидермис в виде мазей, кремов или лосьонов, или в виде трансдермальных пластырей. Мази или кремы могут, например, быть приготовлены на водной или масляной основе с добавлением подходящих уплотнителей и/или гелей. Лосьоны могут быть приготовлены на водной или масляной основе и, обычно, содержат еще один или более эмульсификаторов, стабилизаторов, диспергирующих, суспендирующих и уплотняющих агентов, а также красителей. Составы, удобные для топического применения во рту, включают таблетки для рассасывания, содержащие активные агенты в ароматизированной основе, обычно, сахарозе и камеди или трагаканте; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и камедь; а также полоскания для рта, содержащие активный ингредиент в подходящем водном носителе.
Соединения по изобретению можно приготовить в виде композиции для введения в виде суппозиториев. Сначала плавится легкоплавкий воск, такой как смесь глицеридов жирных кислот и кокосового масла, и затем активный компонент гомогенно диспергируется в расплаве, например, посредством перемешивания. Расплавленную гомогенную смесь затем выливают в формы подходящих размеров, охлаждают и переводят в твердое состояние.
Соединения по изобретению можно приготовить в виде композиции для вагинального введения. Для этой цели подходят маточные кольца, тампоны, кремы, гели, пасты, пены и аэрозольные баллончики, содержащие, помимо активного ингредиента, такие носители, которые, в соответствии с уровнем техники, считаются приемлемыми.
Соединения по изобретению можно приготовить в виде композиции для назального введения. Растворы или суспензии вводят непосредственно в носовую полость обычными средствами, например, с помощью капельницы, пипетки или аэрозольного баллончика. Составы могут быть в виде формы для однократного или многократного применения. В случае капельницы или пипетки последнее достигается путем введения пациенту соответствующего, заранее заданного объема раствора или суспензии. При использовании аэрозольного баллончика этого можно достичь с помощью мелкокапельного распрыскивателя, снабженного дозатором.
Соединения по изобретению можно приготовить в виде композиции для введения посредством аэрозолей, конкретно, в дыхательные пути и включая интраназальное введение. Обычно, размер частиц соединения будет небольшим, например, порядка пяти (5) микрон или меньше. Такой размер частиц можно получить средствами, известными в уровне техники, например, микроионизацией. Активный ингредиент поставляется в упаковке под давлением совместно с подходящим пропеллентом, таким как хлорофторуглерод (ХФУ), например, дихлородифторметан, трихлорофторметан или дихлоротетрафторэтан, или двуокись углерода или другой подходящий газ. Аэрозоль может содержать также поверхностно-активное вещество, такое как лецитин. Дозу лекарства можно контролировать мерным клапаном. Альтернативно, активный ингредиент можно поставлять в форме сухого порошка, например, смеси порошка соединения и порошка подходящего основания, такого как лактоза, крахмал, производные крахмала, например, гидроксипропилметил целлюлоза и поливинилпирролидин (ПВП). Порошкообразный носитель формирует гель в носовой полости. Порошковая композиция может выпускаться в форме единичной дозировки, например, в виде капсул, или, например, в форме желатиновых картриджей или блистерных упаковок, порошок из которых можно вводить посредством ингалятора.
При необходимости, составы можно окружать оболочкой, растворимой в кишечнике, адаптированной для задержанного или контролируемого высвобождения активного ингредиента. Например, соединения настоящего изобретения можно включать в устройства для трансдермальной или подкожной доставки лекарства. Такие системы удобны, когда необходимо обеспечить задержанное высвобождение соединения, и когда решающим фактором в схеме лечения является соблюдение больным режима лечения. Соединения в системах трансдермальной доставки часто сорбируют на твердой подложке, адгезивной к коже. Интересующие соединения можно также комбинировать с усилителями проницаемости, например, Азоном (azone, 1-додецилазациклогептан-2-он). Системы доставки с задержанным высвобождением вводят подкожно в субдермальный слой путем хирургической операции или инъекции. Субдермальные импланты инкапсулируют соединение в жиро-растворимые мембраны, например, силиконовую резину, или в биодеградируемый полимер, например, полимолочную кислоту.
Лекарственные препараты могут представлять собой единичную форму дозировки. В такой форме препарат распределяют по единичным дозам, содержащим соответствующие количества активного компонента. Единичная форма дозировки может быть специально упакована, каждая упаковка в таком случае будет содержать определенное количество препарата, например, это могут быть пакетированные таблетки, капсулы и порошки во флаконах или ампулах. Кроме того, единичная форма дозировки может сама по себе представлять собой капсулу, таблетку, облатку или таблетку для рассасывания, или это может быть упаковка, содержащая соответствующее количество таких объектов.
Другие подходящие фармацевтические носители и их составы описаны в работе Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Наука и практика фармацевтики) 1995, edited by Ε.W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvania. Ниже описаны репрезентативные фармацевтические составы, содержащие соединения по настоящему изобретению.
Применение
Соединения по изобретению полезны для лечения опосредованных LRRK2 болезней или состояний, включая нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Паркинсона, деменция с тельцами Леви и болезнь Хантингтона, а также для усиления когнитивной памяти у нуждающихся в этом пациентов.
Примеры
Следующие примеры и описания синтезов приводятся для того, чтобы дать возможность специалистам в уровне техники более ясно понимать и практиковать настоящее изобретение. Не следует считать, что они ограничивают объем изобретения, они просто иллюстрируют и представляют его.
Если не сказано иначе, все температуры, включая температуры плавления (то есть, т.пл.), выражены в градусах по Цельсию (°С). Следует понимать, что реакция, при которой образуется указанный и/или желательный продукт, не обязательно происходит при непосредственном смешении двух первоначально добавленных реагентов, то есть, в смеси может первоначально образоваться один или больше интермедиатов, окончательно ведущих к получению указанного и/или желательного продукта. В разделе описания синтезов и примеров могут использоваться следующие сокращения.
Список сокращений
| АсОН | Уксусная кислота |
| ΑΙΒΝ | 2,2'-Азобис(2-метилпропионитрил) |
| Atm. (атм.) | Атмосфера |
| (ВОС)2O | Ди-трет-бутил дикарбонат |
| DavePhos | 2-Дициклогексилфосфино-2'-(N,N-диметиламино)бифенил |
| DCM | Дихлорометан/Метилен хлорид |
| DIAD | Диизопропил азодикарбоксилат |
| DIPEA | Диизопропилэтиламин |
| DMAP | 4-Диметиламинопиридин |
| DME | 1,2-Диметоксиэтан |
| DMF (ДМФ) | N,N-диметилформамид |
| DMSO (ДМСО) | Диметил сульфоксид |
| DPPF | 1,1'-Бис(дифенилфосфино)ферроцен |
| Et2O | Диэтиловый |
| EtOH | Этанол/Этиловый спирт |
| EtOAc | Этилацетат |
| HATU | 2-(1Н-7-Азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметил урония гексафторфосфат метанаминий |
| HBTU | O-Бензотриазол-1-ил-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат |
| НОВТ | 1-Гидроксибензотриазол |
| HPLC | (ВЭЖХ) Высоко эффективная жидкостная хроматография |
| RP HPLC (ОФ ВЭЖХ) | Высоко эффективная жидкостная хроматография в обращенной фазе |
| i-PrOH | Изопропанол/изопропиловый спирт |
| LCMS (ЖХМС) | Жидкостная хроматография / масс спектрометрия |
| МеОН | Метанол/Метиловый спирт |
| MW | Микроволновая печь |
| NBS | N-Бромосукцинимид |
| NMP | 1-Метил-2-пирролидинон |
| PSI | Фунтов на квадратный дюйм |
| RT (КТ) | Комнатная температура |
| TBDMS | трет-Бутилдиметилсилил |
| TFA (ТФК) | Трифторуксусная кислота |
| THF (ТГФ) | Тетрагидрофуран |
| TLC | Thin layer chromatography |
Синтез 1: 2-хлор-5-фтор-N-метилпиримидин-4-амин
В 250 мл круглодонную колбу с мешалкой добавили 9,0 г 5-фтор-2,4-дихлор-пиримидина, 40 мл метанола и 15 мл 8М метиламина в этаноле. Реакционная смесь нагрелась (реакция слегка экзотермическая), после чего ее около 30 минут перемешивали при комнатной температуре. Проверка методами ТСХ (1:1 EtOAc: гептан) и ЖХМС показали завершение реакции. Смесь сконцентрировали до образования 9,77 г неочищенного материала, который очистили на колонке с диоксидом кремния в градиенте 1% - 10% МеОН в DCM в течение 35 минут с получением 6,77 г чистого 2-хлор-5-фтор-N-метилпиримидин-4-амина.
Тот же способ применяли для получения соединений, показанных в следующей далее Таблице 1, при этом использовали соответствующие коммерчески доступные замещенные 2,4-дихлор-пиримидины и амины.
Синтез 2: 2,5-дихлор-4-метоксипиримидин
В 250 мл круглодонную колбу с мешалкой добавили 1 г 5-хлор-2,4-дихлор-пиримидина и 15 мл диэтилового эфира. Смесь охладили на ледяной бане до 0°С, после чего медленно добавили 1 эквивалент метоксида натрия в метаноле (полученного в результате взаимодействия 120 мг натрия с 4 мл метанола при комнатной температуре). Реакционную смесь одну ночь перемешивали при комнатной температуре, отслеживая ход реакции по ЖХМС. Белый осадок профильтровали и промыли холодным метанолом. После высушивания получили 0,98 г чистого 2,5-дихлор-4-метоксипиримидина, и это вещество использовали без дополнительной очистки.
Тот же способ применяли для получения соединений, показанных в следующей далее Таблице 2, при этом использовали соответствующие коммерчески доступные спирты и соответствующие замещенные 2,4-дихлор- пиримидины.
Синтез 3: 5-Амино-6-метокси-2-метилизоиндолин-1-он
Этап 1: 5-Метокси-2-метил-4-нитробензонитрил
К раствору 5-метокси-2-метил-4-нитроанилина (4,9 г, 26,8 ммоль) в смеси ацетона (17,5 мл) и воды (19 мл) при 0°С добавили концентрированную HCl (5,6 мл). По каплям добавили раствор нитрита натрия (2,25 г, 32,6 ммоль) в воде (7,5 мл), после чего перемешивали смесь 30 минут при 0°С. Эту смесь затем по каплям добавили к смеси цианида меди (3,75 г, 42 ммоль) и цианида натрия (5,5 г, 112 ммоль) в воде (25 мл) и EtOAc (12.5 мл). После этого смесь 2 часа перемешивали при КТ и добавили воду (50 мл). Полученную смесь проэкстрагировали EtOAc (3×100 мл), после чего объединенные органические фракции промыли 2 М NaOH(водн) (50 мл) и концентрированным соляным раствором (50 мл). Органические фракции пропустили через гидрофобный керамический фильтр и упарили растворитель в вакууме. Остаток растерли в порошок с изогексаном и высушили с получением 5-метокси-2-метил-4-нитробензонитрила (4,62 г, 90%) в виде грязно-белого твердого вещества. ЖХМС (10 cm_ESCI_Bicarb_MeCN): [Μ]-=192 при 3,19 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,72 (s, 1Н), 7,31 (s, 1Н), 3,98 (s, 3Н), 2,55 (s, 3Н).
Этап 2: 5-Метокси-2-метил-4-нитробензойная кислота
Смесь 5-метокси-2-метил-4-нитробензонитрила (2 г, 10,4 ммоль) в АсОН (20 мл), воде (20 мл) и концентрированной серной кислоте (20 мл) 5 часов выдерживали при температуре 120°С. В систему добавили воду (100 мл) и DCM (100 мл), после чего смесь пропустили через гидрофобный керамический фильтр. Растворитель удалили в вакууме, получив 5-метокси-2-метил-4-нитробензойную кислоту (1,27 г, 58%) в виде грязно-белого твердого вещества. ЖХМС (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ-Н]-=210 при 3,37 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,75 (s, 1Н), 7,70 (s, 1Н), 3,99 (s, 3Н), 2,62 (s, 3Н).
Этап 3: Метил 5-метокси-2-метил-4-нитробензоат
К 5-метокси-2-метил-4-нитробензойной кислоте (1,27 г, 6 ммоль) в метаноле (15 мл) по каплям добавили тионил хлорид (0,44 мл, 6 ммоль). Смесь нагрели до кипения и кипятили с обратным холодильником 3 часа, после чего позволили охладиться. Растворитель удалили в вакууме, и остаток разделили между DCM (20 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (20 мл). Органическую фазу пропустили через гидрофобный керамический фильтр, и растворитель удалили в вакууме. Очистка остатка посредством хроматографии на колонке с силикагелем (0-100% EtOAc в изогексане) позволила получить метил 5-метокси-2-метил-4-нитробензоат (1,11 г, 82%) в виде грязно-белого твердого вещества. ЖХМС (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ+H]+=226 при 3,92 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,68 (s, 1Н), 7,60 (s, 1Н), 3,98 (s, 3Н), 3,95 (s, 3Н), 2,55 (s, 3Н).
Этап 4: Метил 2-(бромометил)-5-метокси-4-нитробензоат
Смесь метил 5-метокси-2-метил-4-нитробензоата (1,11 г, 5 ммоль) и NBS (1.07 г, 6 ммоль) в MeCN (20 мл) дегазировали, после чего добавили AIBN (18 мг, 0,11 ммоль). Смесь 18 часов выдерживали при температуре 70°С. В систему добавили DCM (50 мл) и воду (50 мл), после чего органическую фазу пропустили через гидрофобный керамический фильтр. Растворитель удалили в вакууме, и, очистив остаток от основных примесей посредством хроматографии на колонке с силикагелем (0-100% EtOAc в изогексане), получили метил 2-(бромометил)-5-метокси-4-нитробензоат (477 мг, 31%) в виде грязно-белого твердого вещества. ЖХМС (10 cm_ESCI_Bicarb_MeCN): [Μ-Br]-=224 при 3.92 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,92 (s, 1Н), 7,66 (s, 1Н), 4,88 (s, 2Н), 4,02 (s, 3Н), 4,00 (s, 3Н).
Этап 5: 6-Метокси-2-метил-5-нитроизоиндолин-1-он
К раствору метил 2-(бромометил)-5-метокси-4-нитробензоата (212 мг, 0,7 ммоль) в метаноле (6 мл) добавили Et3N (0,12 мл, 0,84 ммоль) и метиламин в EtOH (0,11 мл, ~8M в EtOH, 0,84 ммоль). Смесь 5 часов выдерживали при температуре 70°С, после чего добавили EtOAc (30 мл) и 2М HCl(водн) (30 мл). Слои разделили, и водный слой проэкстрагировали EtOAc (2×30 мл). Объединенные органические фракции пропустили через гидрофобный керамический фильтр, и растворитель удалили в вакууме. Очистка остатка посредством хроматографии на колонке с силикагелем (0-100% EtOAc в изогексане, затем EtOAc-10% МеОН в DCM) позволила получить 6-метокси-2-метил-5-нитроизоиндолин-1-он (117 мг, 75%) в виде грязно-белого твердого вещества. ЖХМС (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ+Н]+=223 при 3.02 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,86 (s, 1Н), 7,53 (s, 1Н), 4,40 (s, 2Н), 4,02 (s, 3Н), 3,24 (s, 3Н).
Этап 6: 5-Амино-6-метокси-2-метилизоиндолин-1-он
К 6-метокси-2-метил-5-нитроизоиндолин-1-ону (111 мг, 0,5 ммоль) в этаноле (6 мл) и воде (0,6 мл) добавили SnCl2⋅2H2O (451 мг, 2 ммоль), после чего смесь 5 часов выдерживали при температуре 65°С. В систему добавили DCM (20 мл) и 2М NaOH(aq) (10 мл), после чего ее пропустили через гидрофобный керамический фильтр. The растворитель удалили в вакууме с получением 5-амино-6-метокси-2-метилизоиндолин-1-она (68 мг, 71%) в виде грязно-белого твердого вещества. ЖХМС (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ+Н]+=193 при 2,32 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 7,01 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 5,44 (br s, 2H), 4,24 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,02 (s, 3H).
Синтез 4: 6-Амино-5-метокси-2-метилизоиндолин-1-он
Этап 1: 2-Метил-4,5-динитробензойная кислота
К концентрированному раствору серной кислоты (10 мл) при 0°С по каплям добавили концентрированную азотную кислоту (10 мл), и 10 минут перемешивали смесь при 0°С. В систему добавили 2-метил-4-нитробензойную кислоту (1,81 г, 10 ммоль) и 5 дней перемешивали ее при комнатной температуре. После этого смесь вылили в ледяную воду, твердый осадок отделили фильтрацией и высушили, получив 2-метил-4,5-динитробензойную кислоту (1,93 г, 85%) в виде грязно-белого твердого вещества. ЖХМС (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ-Η]-=225 при 3,10 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, d6-ДМСО): δ 8,53 (s, 1Н), 8,26 (s, 1Н), 2,71 (s, 3Н).
Этап 2: 4-Метокси-2-метил-5-нитробензойная кислота
К раствору КОН (2,38 г, 42,5 ммоль) в метаноле (50 мл) добавили 2-метил-4,5-динитробензойную кислоту (1,93 г, 8,5 ммоль), и смесь полтора часа выдерживали при температуре 70°С. Смесь закислили 2 Μ HCl(водн), твердый осадок отделили фильтрованием и высушили, получив 4-метокси-2-метил-5-нитробензойную кислоту (1,08 г, 60%) в виде грязно-белого твердого вещества. LCMS (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ-Η]-=210 при 3,23 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, d6-ДМСО): δ 8,40 (s, 1Н), 7,36 (s, 1Н), 4,02 (s, 3H), 2,67 (s, 3H).
Этап 3: Метил 4-метокси-2-метил-5-нитробензоат
К раствору 4-метокси-2-метил-5-нитробензойной кислоты (1,06 г, 5 ммоль) в метаноле (10 мл) по каплям добавили тионил хлорид (0,36 мл, 5 ммоль). Смесь 5 часов кипятили с обратным холодильником, после чего позволили остыть. Растворитель удалили в вакууме, и разделили осадок между DCM (20 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (20 мл). Органическую фазу пропустили через гидрофобный керамический фильтр, и растворитель удалили в вакууме, получив метил 4-метокси-2-метил-5-нитробензоат (998 мг, 89%) в виде грязно-белого твердого вещества. LCMS (10 cm_ESCI_Bicarb_MeCN): [Μ+Н]+=226 при 3,25 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,56 (s, 1Н), 6,91 (s, 1Н), 4,01 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 2,71 (s, 3H).
Этап 4: Метил 2-(бромометил)-4-метокси-5-нитробензоат
Смесь метил 4-метокси-2-метил-5-нитробензоата (994 мг, 4,41 ммоль) и NBS (943 мг, 5,3 ммоль) в MeCN (20 мл) дегазировали, после чего добавили AIBN (15 мг, 0,09 ммоль). Смесь 18 часов выдерживали при температуре 70°С. После этого добавили еще AIBN (15 мг, 0,09 ммоль), и смесь выдерживали при температуре 70°С в течение 24 часов. Добавили еще AIBN (15 мг, 0,09 ммоль) и NBS (300 мг, 1,7 ммоль), и смесь выдерживали при температуре 70°С в течение 24 часов. Затем еще раз добавили ΑΙΒΝ (15 мг, 0,09 ммоль), и смесь выдерживали при температуре 70°С в течение 24 часов. После этого в систему добавили DCM (50 мл) и воду (50 мл) и пропустили органическую фазу через гидрофобный керамический фильтр. Растворитель удалили в вакууме с получением неочищенного метил 2-(бромометил)-4-метокси-5-нитробензоата, который сразу использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Этап 5: 5-Метокси-2-метил-6-нитроизоиндолин-1-он
К неочищенному раствору 2-(бромометил)-4-метокси-5-нитробензоата (<4 ммоль) в метаноле (36 мл) добавили Et3N (0,68 мл, 4,8 ммоль) и метиламин в EtOH (0,6 мл, ~8M в EtOH, 4,8 ммоль). Смесь 5 часов выдерживали при температуре 70°С, после чего добавили EtOAc (30 мл) и 2М HCl(водн) (30 мл). Слои разделили, и водный слой проэкстрагировали EtOAc (2×30 мл). Объединенные органические фракции пропустили через гидрофобный керамический фильтр, и растворитель удалили в вакууме. Очистка остатка на колонке с силикагелем (0-100% EtOAc в изогексане, затем EtOAc-10% МеОН в DCM) позволила получить неочищенный 5-метокси-2-метил-6-нитроизоиндолин-1-он (487 мг) в виде твердого вещества коричневого цвета, которое сразу использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Этап 6: 6-Амино-5-метокси-2-метилизоиндолин-1-он
К неочищенному раствору 5-метокси-2-метил-6-нитроизоиндолин-1-она (121 мг, 0,54 ммоль) в этаноле (6 мл) и воде (0,6 мл) добавили SnCl2⋅2H2O (487 мг, 2,16 ммоль), и смесь 24 часа выдерживали при температуре 65°С. В систему добавили DCM (10 мл) и 2М NaOH(водн) (10 мл), после чего смесь пропустили через гидрофобный керамический фильтр. Растворитель удалили в вакууме с получением неочищенного 6-амино-5-метокси-2-метилизоиндолин-1-она (101 мг, 97%) в виде грязно-белого твердого вещества. Это вещество сразу использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. LCMS (10cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ+Н]+=193 при 2,00 мин.
Синтез 5: 5-Амино-6-хлορ-2-метилизоиндолин-1-он
Этап 1:5-Хлор-2-метил-4-нитробензонитрил
К раствору 5-хлор-2-метил-4-нитроанилина (5 г, 26,8 ммоль) в смеси ацетона (17,5 мл) и воды (19 мл) при 0°С добавили концентрированную HCl (5,6 мл). По каплям добавили раствор нитрита натрия (2,25 г, 32,6 ммоль) в воде (7,5 мл), после чего смесь 30 минут перемешивали при 0°С. Эту смесь затем по каплям добавили к смеси цианида меди (3,75 г, 42 ммоль) и цианида натрия (5,5 г, 112 ммоль) в воде (25 мл) и EtOAc (12,5 мл). После этого смесь один час перемешивали при комнатной температуре и добавили 50 мл воды. Затем ее проэкстрагировали EtOAc (3×100 мл) и промыли объединенные органические фракции 2 Μ NaOH(водн) (50 мл) и соляным раствором (50 мл). Органическую фракцию пропустили через гидрофобный керамический фильтр, и растворитель удалили в вакууме. Остаток ресуспендировали в смеси диэтиловый эфир: изогексан 1:1. Полученный твердый осадок отделили фильтрованием, промыли изогексаном и высушили. Из фильтрата выделили еще фракции и объединили их с первоначальной твердой фракцией, получив 5-хлор-2-метил-4-нитробензонитрил (3,22 г, 61%) в виде грязно-белого твердого вещества. LCMS (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ+Н]+=197 при 3,97 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 7,80 (s, 1Н), 7,80 (s, 1Н), 2,63 (s, 3H).
Этап 2: 4-Амино-5-хлор-2-метилбензонитрил
К раствору 5-хлор-2-метил-4-нитробензонитрила (192 мг, 1 ммоль) в этаноле (6 мл) и воде (0,6 мл) добавили SnCl2⋅2H2O (903 мг, 4 ммоль), и смесь 5 часов выдерживали при температуре 65°С. В систему добавили DCM (10 мл) и 2М NaOH(водн) (10 мл), после чего смесь пропустили через гидрофобный керамический фильтр. Растворитель удалили в вакууме с получением 4-амино-5-хлор-2-метилбензонитрила (131 мг, 81%) в виде грязно-белого твердого вещества. LCMS (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ+Н]+=163 при 3.37 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 6,89 (s, 1Н), 6,52 (s, 1Н), 4,21 (br s, 2Н), 3,84 (s, 3H), 2,38 (s, 3H).
Этап 3: 5-Хлор-2-метил-4-нитробензонитрил
Смесь 5-хлор-2-метил-4-нитробензонитрила (1 г, 5 ммоль) в АсОН (10 мл), воде (10 мл) и концентрированной серной кислоте (10 мл) 5 часов выдерживали при 120°С. В систему добавили воды (100 мл), отделили твердый остаток фильтрованием и высушили, получив 5-хлор-2-метил-4-нитробензойную кислоту (905 мг, 84%) в виде грязно-белого твердого вещества. LCMS (10 cm_ESCI_Bicarb_MeCN): [Μ-Η]-=214 при 2,12 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,22 (s, 1Н), 7,76 (s, 1Н), 2,70 (s, 3H).
Этап 4: Метил 5-хлор-2-метил-4-нитробензоат
К раствору 5-хлор-2-метил-4-нитробензойной кислоты (900 мг, 4,15 ммоль) в метаноле (10 мл) по каплям добавили тионил хлорид (0,3 мл, 4,15 ммоль). Смесь 5 часов кипятили с обратным холодильником, после чего позволили остыть. Растворитель удалили в вакууме, и разделили осадок между DCM (20 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (20 мл). Органическую фазу пропустили через гидрофобный керамический фильтр, и растворитель удалили в вакууме, получив метил 5-хлор-2-метил-4-нитробензоат (880 мг, 92%) в виде грязно-белого твердого вещества. LCMS (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ+Н]+=230 при 4,25 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,08 (s, 1Н), 7,73 (s, 1Н), 3,95 (s, 3H), 2,64 (s, 3H).
Этап 5: Метил 2-(бромометил)-5-хлор-4-нитробензоат
Смесь метил 5-хлор-2-метил-4-нитробензоата (862 мг, 4 ммоль) и NBS (854 мг, 4.8 ммоль) в MeCN (16 мл) дегазировали, после чего добавили AIBN (14 мг, 0,08 ммоль). Смесь 18 часов выдерживали при температуре 70°С. Растворитель удалили в вакууме, и разделили остаток между DCM (50 мл) и водой (50 мл). Органическую фазу пропустили через гидрофобный керамический фильтр, и растворитель удалили в вакууме. Очистка остатка посредством хроматографии на колонке с силикагелем (0-100% EtOAc в изогексане), проведенная с целью удаления основных примесей, позволила получить метил 2-(бромометил)-5-хлор-4-нитробензоат (1,09 г, 89%) в виде коричневого масла. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,14 (s, 1Н), 7,98 (s, 1Н), 4,91 (s, 2Н), 4,00 (s, 3H).
Этап 6: 6-Хлор-2-метил-5-нитроизоиндолин-1-он
К раствору метил 2-(бромометил)-5-хлор-4-нитробензоата (617 мг, 2 ммоль) в метаноле (18 мл) добавили Et3N (0,34 мл, 2,4 ммоль) и метиламин в EtOH (0,3 мл, ~8 Μ в EtOH, 2,4 ммоль). Смесь 3 часа выдерживали при температуре 70°С, после чего добавили EtOAc (30 мл) и 2М HCl(водн) (30 мл). Слои разделили, и водный слой проэкстрагировали EtOAc (2×30 мл). Объединенные органические фракции пропустили через гидрофобный керамический фильтр, и удалили растворитель в вакууме. Очистка остатка на колонке с силикагелем (0-10% метанол в DCM) позволила получить 6-хлор-2-метил-5-нитроизоиндолин-1-он (347 мг, 77%) в виде грязно-белого твердого вещества. LCMS (10 cm_ESCI_Bicarb_MeCN): [Μ+Н]+=227 при 2,89 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8,00 (s, 1Н), 7,90 (s, 1Н), 4,46 (s, 2Н), 3,24 (s, 3H).
Этап 7: 5-Амино-6-хлор-2-метилизоиндолин-1-он
К раствору 6-хлор-2-метил-5-нитроизоиндолин-1-она (340 мг, 1,5 ммоль) в этаноле (9 мл) и воде (0,9 мл) добавили SnCl2⋅2H2O (1,35 г, 6 ммоль), и смесь 5 часов выдерживали при температуре 65°С. В систему добавили DCM (20 мл) и 2М NaOH(водн) (10 мл), после чего смесь пропустили через гидрофобный керамический фильтр. Растворитель удалили в вакууме с получением 5-амино-6-хлор-2-метилизоиндолин-1-она (251 мг, 85%) в виде грязно-белого твердого вещества. LCMS (10 cm_ESCI_Bicarb_MeCN): [Μ+Н]+=197 при 2,31 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, d6-ДМСО): δ 7,45 (s, 1Н), 6,90 (s, 1H), 5,99 (br s, 2H), 4,32 (s, 2H), 3,01 (s, 3H).
Синтез 6: 5-Амино-4-метокси-2-метилизоиндолин-1-он
Этап 1: 3-Гидрокси-2-метил-4-нитробензойная кислота
К раствору 3-гидрокси-2-метилбензойная кислоты (5,00 г, 25,3 ммоль) в концентрированной H2SO4 (98%, 10 мл) по каплям добавили концентрированную HNO3 (63%, 10 мл). Смесь 10 минут перемешивали при -40°С. После этого ее вылили в ледяную воду и трижды проэкстрагировали этилацетатом. Органические слои объединили и высушили над безводным Na2SO4. Растворитель упарили в вакууме, получив 3-гидрокси-2-метил-4-нитробензойную кислоту в виде твердого вещества желтого цвета, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Этап 2: Метил 3-метокси-2-метил-4-нитробензоат
К раствору неочищенной 3-гидрокси-2-метил-4-нитробензойной кислоты в ацетоне (300 мл) добавили K2CO3(15,8 г, 115 ммоль) и Me2SO4(8,7 г, 69 ммоль). Смесь 2 часа кипятили с обратным холодильником. После упаривания растворителя в вакууме оставшийся остаток очистили на колонке с силикагелем (элюирование системой РЕ/ЕА=10:1) с получением метил 3-метокси-2-метил-4-нитробензоата в виде твердого вещества желтоватого цвета (2,7 г, 33% - общий выход для двух этапов), m/z (ES+APCl]+: [М+Н]+ 226,1.
Этап 3: Метил 2-(бромометил)-3-метокси-4-нитробензоат
К раствору метил 3-метокси-2-метил-4-нитробензоата (800 мг, 3,6 ммоль) в CH3CN (10 мл) под защитой N2 добавили NBS (770 мг, 4,3 ммоль) и AIBN (12 мг, 0,072 ммоль). Смесь одну ночь кипятили с обратным холодильником при 80°С. После упаривания растворителя в вакууме оставшийся остаток очистили на колонке с силикагелем (элюирование системой РЕ/ЕА=15:1) с получением метил 2-(бромометил)-3-метокси-4-нитробензоата в виде масла желтого цвета (910 мг, выход 84%). m/z (ES+APCl)+: [M-Br]+ 224,1.
Этап 4: 4-Метокси-2-метил-5-нитроизоиндолин-1-он
К раствору метил 2-(бромометил)-3-метокси-4-нитробензоата (300 мг, 1,0 ммоль) в МеОН (10 мл) добавили Et3N (120 мг, 1,2 ммоль) и CH3NH2 (1,0 мл, 4М в МеОН). Раствор перемешивали 4 часа при 70°С. Растворитель упарили в вакууме, после чего остаток очистили на колонке с силикагелем (элюирование системой РЕ/ЕА=10:1) с получением 4-метокси-2-метил-5-нитроизоиндолин-1-она в виде твердого вещества желтого цвета (110 мг, выход 50%). m/z (ES+APCl)+: [М+Н]+ 223,1.
Этап 5: 5-Амино-4-метокси-2-метилизоиндолин-1-он
К раствору 4-метокси-2-метил-5-нитроизоиндолин-1-она (155 мг, 0,7 ммоль) в МеОН (10 мл) добавили Pd/C (60 мг). Смесь перемешивали 6 часов в атмосфере водорода при 50°С. Полученную суспензию профильтровали. Фильтрат сконцентрировали при пониженном давлении с получением 5-амино-4-метокси-2-метилизоиндолин-1-она (70 мг, выход 52%). m/z (ES+APCl)+: [М+Н]+ 193,1.
Пример 1: 7-Хлор-4-метил-8-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-3,4-дигидробензо[f][1,4]оксазепин-5(2Н)-он
Step 1:2-((трет-Бутилдиметилсилил)окси)-N-метилэтанамин
Раствор трет-бутилдиметилхлоросилана (4,2 г, 27,9 ммоль) в дихлорометане (10 мл) в течение 3 минут при перемешивании по каплям добавили к раствору 2-(метиламино)этанола (2,0 г, 26,6 ммоль) и имидазола в дихлорометане (20 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь один час перемешивали при комнатной температуре. Добавили воду (20 мл) и разделили фазы. Водную фазу проэкстрагировали дихлорометаном, после чего объединенные органические фазы пропустили через разделяющий фазы картридж и удалили растворитель при пониженном давлении, получив бесцветное масло (5,10 г, 95%). Это масло использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 2: 4-Амино-N-(2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)этил)-5-хлор-2-метокси-N-метилбензамид
4-Амино-5-хлор-2-метоксибензойную кислоту (3,0 г, 14,9 ммоль), DIPEA (3,84 г, 29,8 ммоль) и HATU (6,80 г, 17,9 ммоль) 20 минут перемешивали при комнатной температуре в дихлорометане (180 мл). В систему добавили 2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-N-метилэтанамин (3,12 г, 16,4 ммоль), после чего смесь перемешивали один час, а затем анализ ЖХМС показал, что реакция завершилась. Дихлорометан удалили, и полученный остаток разделили между этилацетатом и водой. Слои разделили, и проэкстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединенные органические экстракты сконцентрировали, и полученный остаток мелко растерли с этилацетатпетролейным эфиром (1:1). Твердый остаток отфильтровали и выбросили. Супернатант сохранили и сконцентрировали, получив неочищенный продукт, который использовали непосредственно на следующем этапе (2,0 г, 36%).
Этап 3: 4-Амино-5-хлор-2-гидрокси-N-(2-гидроксиэтил)-N-метилбензамид
4-Амино-N-(2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)этил)-5-хлор-2-метокси-N-метилбензамид (2,0 г, 5,3 ммоль) начали перемешивать в атмосфере азота в дихлорометане (100 мл) при -10°С, и туда по каплям добавили 1М раствор трихлорида бора в дихлорометане (10,68 мл, 10,7 ммоль). Реакционной смеси позволили нагреться до комнатной температуры, после чего оставили перемешиваться при этой температуре еще 18 часов. Затем систему охладили до -10°С, и по каплям добавили еще один эквивалент раствора трихлорида бора, после чего позволили нагреться до комнатной температуры и перемешивали 3 часа. По истечении этого времени анализ ЖХМС показал, что реакция завершилась. Смесь охладили на ледяной бане, и по каплям добавили метанол (20 мл) и 7Н раствор метанола в аммиаке (17 мл), и затем добавили еще часть МеОН (~80 мл) до полного растворения твердого остатка. Раствор один час перемешивали при комнатной температуре, а затем сконцентрировали. Полученный остаток 30 минут перемешивали с насыщенным водным раствором NaHCO3 (150 мл), после чего водную фазу проэкстрагировали с этилацетатом. Объединенные экстракты промыли соляным раствором, затем пропустили через разделяющий фазы картридж и удалили растворитель при пониженном давлении, получив зеленую смолу (1,00 г, 77%). Материал использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 4: 8-Амино-7-хлор-4-метил-3,4-дигидробензо[f][1,4]оксазепин-5(2Н)-он
4-Амино-5-хлор-2-гидрокси-N-(2-гидроксиэтил)-N-метилбензамид (300 мг, 1,22 ммоль) начали перемешивать при комнатной температуре в атмосфере азота в дихлорометане при 0°С, после чего добавили TEA (247 мг, 2,4 ммоль), трифенилфосфин (320 мг, 1,2 ммоль) и DEAD (212 мг, 1,2 ммоль). Смесь оставили перемешиваться еще на час при 0°С, после чего анализ ЖХМС показал образование пика, соответствующего целевому веществу. Летучие компоненты удалили при пониженном давлении, полученную смолу растворили в дихлорометане и пропустили через картридж SCX-2 20 g. Картридж промыли системой дихлорометан-метанол 10% и собрали фракции в 100 мл колбы. Анализ методом ТСХ показал, что состав фракций не идентичен тому, что был верифицирован ЖХМС. Наиболее чистую фракцию сконцентрировали, получив целевой материал (18 мг, 5%).
Этап 5: 7-Хлор-4-метил-8-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-3,4-дигидробензо[f][1,4]оксазепин-5(2Н)-он
Смесь 2-хлор-N-метил-5-(трифторметил)пиримидин-4-амина (0,5 г, 2,36 ммоль), 8-амино-7-хлор-4-метил-3,4-дигидробензо[f][1,4]оксазепин-5(2Н)-она (0,38 ммоль) и п-толуол сульфоновой кислоты (0,49 г, 2,6 ммоль) в диоксане (10 мл) два часа выдерживали при 100°С. Смесь охладили, профильтровали и промыли твердый осадок диоксаном. Твердый осадок высушили в вакууме и очистили на колонке с силикагелем (20-100% этилацетат/ изогексан) с получением 7-хлор-4-метил-8-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-3,4-дигидробензо[f][1,4]оксазепин-5(2Н)-она в виде белого твердого вещества (10 мг, 28%). ЖХМС (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [МН+]=402 при 3,04 мин. 1Н ЯМР δ (м.д.)(400 МГц, CDCl3): 8,41 (1Н, s), 8,22 (1Н, s), 7,97 (1Н, s), 7,77-7,67 (1Н, m), 5,29 (1Н, s), 4,47-4,39 (2Н, m), 3,61-3,51 (2Н, m), 3,21-3,18 (3H, m), 3,20-3,07 (3H, m).
Пример 2: 7-((5-Хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-ил)амино)-6-метокси-2,2,4-триметил-2H-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он
Этап 1: 6-Хлор-2,2-диметил-7-нитро-2H-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он
К суспензии безводного фторида калия (4,71 г, 81 ммоль) в ДМФ (40 мл) добавили 2-амино-5-нитрофенол (5,00 г, 26,5 ммоль), после чего смесь один час перемешивали при комнатной температуре. В систему по каплям в течение 20 минут добавили раствор этил-α-бромоизобутирата (6,33 г, 32,5 ммоль) в ДМФ (10 мл). Смесь перемешивали еще 20 часов при 60°С. Реакции позволили охладиться, после чего добавили воду (150 мл) и проэкстрагировали водный слой этилацетатом. Объединенные органические экстракты последовательно промыли 2М водным HCl (100 мл), водой (100 мл) и соляным раствором (100 мл), а затем пропустили через разделяющий фазы картридж. Растворитель удалили при пониженном давлении, и остаток суспендировали в этилацетате. Осадок отделили фильтрованием и промыли этилацетатом, получив твердое вещество бледно-желтого цвета (2,29 г, 34%), использовавшееся на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 2: 6-Хлор-2,2,4-триметил-7-нитро-2Н-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он
6-Хлор-2,2-диметил-7-нитро-2Н-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он (2,29 г, 8,9 ммоль) размешали в ДМФ при 0°С в атмосфере азота, после чего добавили гидрид натрия (60% дисперсия в масле) (392 мг, 9,79 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 30 минут при комнатной температуре, а затем добавили иодометан (1,89 г, 13,4 ммоль) и перемешивали смесь при комнатной температуре еще 18 часов. По данным ЖХМС, реакция завершилась. В систему осторожно добавили воду (10 мл), а затем удалили ДМФ при пониженном давлении. Остаток разделили между этилацетатом и водой. Слои разделили и проэкстрагировали водную фазу этилацетатом. Органические фракции объединили и пропустили через разделяющий фазы картридж. Растворители упарили, получив оранжевое твердое вещество (2,4 г, количественный выход), которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 3: 6-Метокси-2,2,4-триметил-7-нитро-2Н-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он
Систему толуол-метанол (4:1) (50 мл) дегазировали, после чего добавили сначала карбонат цезия (2,85 г, 7,4 мл), а затем rac-2-(ди-трет-бутилфосфин)1,1'-бинафтил (44 мг, 0,11 ммоль) и 6-хлор-2,2-диметил-7-нитро-2Н-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он (1,0 г, 3,7 ммоль); добавление проводили при перемешивании в атмосфере азота. Затем добавили палладия (II) ацетат (20 мг, 0,074 ммоль), и 18 часов выдерживали смесь при 75°С при перемешивании в атмосфере азота. Реакции позволили охладиться, после чего добавили еще одну аликвоту палладия (II) ацетата, и 18 часов выдерживали смесь при 75°С, чтобы завершить превращение. Реакции позволили охладиться, добавили воду (100 мл) и проэкстрагировали всю систему этилацетатом. Объединенные органические экстракты промыли соляным раствором, пропустили через разделяющий фазы картридж и упарили, получив твердое вещество коричневого цвета (~800 мг). Очистка на колонке с силикагелем (0-100% этилацетат/ изогексан) позволила получить 6-метокси-2,2,4-триметил-7-нитро-2Н-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он (0,47 г, 48%).
Этап 4: 7-Амино-6-метокси-2,2,4-триметил-2Н-бензо[b][1,4]оксазин-3(4H)-он
6-Метокси-2,2,4-триметил-7-нитро-2Н-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он (250 мг, 0,94 ммоль) перемешали в 15 мл этанола, после чего добавили хлорид олова (II). Смесь 2 часа перемешивали при 80°С. Летучие компоненты удалили при пониженном давлении, а остаток превратили в белую кашицу, перемешав с 2М водным раствором гидроксида натрия. Водный слой проэкстрагировали этилацетатом и объединенные органические экстракты пропустили через разделяющий фазы картридж и упарили, получив кристаллическое коричневое твердое вещество (220 мг, 99%), которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 5: 7-((5-Хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-ил)амино)-6-метокси-2,2,4-триметил-2H-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он
Смесь 2,5-дихлор-N-метилпиримидин-4-амина (1 ммоль), 7-амино-6-метокси-2,2,4-триметил-2Н-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-она (222 мг, 0,94 ммоль), карбоната цезия (0,65 г, 2 ммоль), XantPhos (17 мг, 0,03 ммоль) и Pd2(dba)3 (5 мг, 0,02 ммоль) в диоксане (3 мл) в течение 1 минуты сонировали на ультразвуковой бане. После этого смесь 5 минут дегазировали в потоке азота. Пробирку запечатали и нагрели реакционную смесь до 100°С, нагрев проводили 18 часов. Реакционную смесь охладили и разбавили этилацетатом (15 мл). Органический слой промыли водой, и объединенные водные экстракты дополнительно промыли этилацетатом. Объединенные органические экстракты пропустили через разделяющий фазы картридж и удалили растворитель при сниженном давлении. Очистка остатка на колонке с силикагелем (0-100% этилацетат/изогексан) позволила получить 7-((5-хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-ил)амино)-6-метокси-2,2,4-триметил-2Н-бензо[b][1,4]оксазин-3(4Н)-он (30 мг, 15%). ЖХМС (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [МН+]=378 при 2,77 мин. 1Н ЯМР δ (м.д.)(400 МГц, d6- ДМСО): 8,05 (1Н, s), 7,98 (1Н, S), 7,54 (1Н, s), 7,28 (1Н, d, J=5,2), 6,85 (1Η, s), 3,93 (3H, s), 3,66 (3H, s), 2,91 (3H, d, J=4,6), 1,41 (6H,s).
Пример 3: 5-Метокси-N,N-диметил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)бензофуран-2-карбоксамид
Этап 1: Метил 5-метоксибензофуран-2-карбоксилат
2-Гидрокси-5-метокси-бензальдегид (10 г, 65,8 ммоль) перемешали в ДМФ и в атмосфере азота (90 мл) с карбонатом калия (23 г, 0,17 моль), после чего по каплям добавили бромоацетат. Смесь 4 часа перемешивали при комнатной температуре. После этого систему 18 часов выдерживали при 80°С. Затем ей позволили остыть и вылили в ледяную воду (200 мл), а образовавшуюся коричневую суспензию перемешивали 30 минут. По завершении процесса твердый осадок отделили фильтрованием и промыли водой. Затем его высушили, получив (5,22 г, 39%) соединения, использовавшегося на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 2: Метил 4-хлор-5-метоксибензофуран-2-карбоксилат
Метил 5-метоксибензофуран-2-карбоксилат (5,22 г, 25,3 ммоль) растворили в дихлорометане, и добавили в систему сульфурил хлорид (3,76 г, 27,9 ммоль); скорость добавления была такова, чтобы поддерживать температуру смеси 20°С. После перемешивания в течение 5 часов раствор медленно, по каплям перенесли в ледяную воду (70 мл). Органическую фазу промыли водой, водным насыщенным NaHCO3 и еще раз водой. Слои разделили, и органический слой пропустили через разделяющий фазы картридж, после чего упарили с получением твердого вещества (5,81 г), использовавшегося на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 3: Метил 4-хлор-5-метокси-6-нитробензофуран-2-карбоксилат
Метил 4-хлор-5-метоксибензофуран-2-карбоксилат растворили в концентрированной серной кислоте (58 мл) при перемешивании на ледяной бане, после чего по каплям добавили концентрированную азотную кислоту, поддерживая температуру ниже 5°С. Затем смесь 2,5 часа перемешивали при комнатной температуре. По окончании процесса смесь на 2 часа поместили в ледяную воду (500 мл). Образовавшийся твердый осадок профильтровали и промыли водой до нейтральной реакции. После этого осадок высушили, получив метил 4-хлор-5-метокси-6-нитробензофуран-2-карбоксилат (6,3 г, 91%), который использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 4: 4-Хлор-5-метокси-6-нитробензофуран-2-карбоновая кислота
К суспензии метил 4-хлор-5-метокси-6-нитробензофуран-2-карбоксилата (2,0 г, 7,0 ммоль) в системе метанол-вода (3:1) (40 мл) при перемешивании добавили гидроксид лития (0,9 г, 21,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 3 часа при комнатной температуре. Затем ее сконцентрировали при пониженном давлении, а полученный остаток растворили в воде и промыли диэтиловым эфиром. Водную фазу закислили добавлением 2М водного раствора соляной кислоты, после чего проэкстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты пропустили через разделяющий фазы картридж и упарили, получив белое твердое вещество (1,17 г, 61%), которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 5: 4-Хлор-5-метокси-N,N-диметил-6-нитробензофуран-2-карбоксамид
4-Хлор-5-метокси-N,N-диметил-6-нитробензофуран-2-карбоксамид получили способом, описанным в Примере 1, этап 2, начиная от 4-хлор-5-метокси-6-нитробензофуран-2-карбоновой кислоты (1,17 г, 4,31 ммоль) и диметиламин гидрохлорида (386 мг, 4,74 ммоль). Очистка на колонке с силикагелем (20-100% этилацетат/изогексан) позволила получить 4-хлор-5-метокси-N,N-диметил-6-нитробензофуран-2-карбоксамид в виде оранжевого твердого вещества (850 мг, 66%).
Этап 6: 6-Амино-5-метокси-N,N-диметилбензофуран-2-карбоксамид
4-Хлор-5-метокси-N,N-диметил-6-нитробензофуран-2-карбоксамид (500 мг, 1,68 ммоль), TEA (184 мг, 1,83 ммоль) и 10% палладий на активированном угле (90 мг) при комнатной температуре в атмосфере водорода 18 часов перемешивали в ТГФ-ДМФ (2:1) (30 мл). Реакционную смесь еще раз наполнили водородом и перемешивали еще 18 часов. Катализатор удалили фильтрованием, а фильтрат сконцентрировали при пониженном давлении с получением твердого вещества коричневого цвета (400 мг, количественный выход), которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 7: 5-Метокси-N,N-диметил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)бензофуран-2-карбоксамид
5-Метокси-N,N-диметил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)бензофуран-2-карбоксамид был получен способом, описанным в Примере 2, начиная от 4-хлор-5-метокси-N,N-диметил-6-нитробензофуран-2-карбоксамида (220 мг, 0,94 ммоль). Неочищенное вещество очистили на препаративной ВЭЖХ с получением 5-метокси-N,N-диметил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)бензофуран-2-карбоксамида (40 мг, 21%). ЖХМС (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [МН+]=410 при 3,01 мин. 1Н ЯМР δ (м.д.) (400 МГц, d6-ДМСО): 8,70 (1Н, s), 8,28 (1Н, s), 8,17 (1Н, s), 7,40-7,32 (3H, m), 3,98 (3H, s), 3,41-3,28 (6Н, m), 3,01 (3H, s).
Пример 4: 5-Хлор-1,3-диметил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)-1Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он
Этап 1: 5-Хлор-6-нитро-1Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он
Раствор 4-хлор-5-нитро-1,2-фенилендиамина (2,0 г, 10,66 ммоль) и CDI (2,59 г, 16 ммоль) в безводном ТГФ (50 мл) 4 часа перемешивали при температуре 85°С. Реакционной смеси позволили остыть, и удалили растворители при пониженном давлении. Полученный остаток промыли 2М водной соляной кислотой и перекристаллизовали из метанола с получением 5-хлор-6-нитро-1Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-она в виде твердого вещества коричневого цвета (1,9 г, 84%), которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 2: 5-Хлор-1,3-диметил-6-нитро-1H-бензо[d]имидазол-2(3H)-он
5-Хлор-6-нитро-1Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он (1,00 г, 4,7 ммоль) перемешали в ДМФ (50 мл), после чего в систему добавили карбонат калия (1,29 г, 9,4 ммоль) и иодометан (2,66 г, 18,7 ммоль). Реакционную смесь полтора часа перемешивали при 75°С. Системе позволили остыть, и удалили растворители при пониженном давлении. Остаток распределили между водой и этилацетатом, и разделили фазы. Водную фазу экстрагировали этилацетатом, и объединенные органические экстракты пропустили через разделяющий фазы картридж и упарили с получением коричневого твердого вещества (1,07 г, 95%), которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 3: 5-Амино-6-хлор-1,3-диметил-1Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он
5-Амино-6-хлор-1,3-диметил-1Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он был получен способом, описанным в Примере 2, этап 4, начиная от 5-хлор-6-нитро-1Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-она (400 мг, 1,64 ммоль), с получением коричневого твердого вещества (314 мг, 90%), которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 4: 5-Хлор-1,3-диметил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)-1Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он
5-Хлор-1,3-диметил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)-1Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он был получен способом, описанным в Примере 2, начиная от 5-амино-6-хлор-1,3-диметил-1Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-она (200 мг, 0,94 ммоль). Очистка на колонке с силикагелем (0-100% этилацетат/ изогексан) позволила получить указанное в заголовке соединение (20 мг, 11%). ЖХМС (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [МН+]=387 при 3,10 мин. 1Н ЯМР δ (м.д.)(400 МГц, ДМСО-d6): 8,83 (1Н, s), 8,13 (1Н, s), 7,58 (1Н, s), 7,38 (1Н, s), 7,08 (1Н, s), 3,36 (6Н, s), 2,84 (3H, d, J=4,2).
Пример 5: 5-Хлор-3-метил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)бензо[d]оксазол-2(3H)-он
Этап 1: 5-Хлор-6-нитробензо[d]оксазол-2(3H)-он
5-Хлор-6-нитробензо[d]оксазол-2(3H)-он был получен способом, описанным в Примере 4, этап 1, начиная от 2-амино-4-хлор-5-нитрофенола (5,53 г, 29,3 ммоль), с получением коричневого твердого вещества (5,25 г, 83%), которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 2: 5-Хлор-3-метил-6-нитробензо[d]оксазол-2(3H)-он
5-Хлор-3-метил-6-нитробензо[d]оксазол-2(3H)-он был получен способом, описанным в Примере 2, этап 2, начиная от 5-хлор-6-нитробензо[d]оксазол-2(3H)-она (1,75 г, 8,1 ммоль), а иодометан заменили на диметилсульфат. Неочищенный продукт перекристаллизовали из метанол с получением твердого вещества оранжевого цвета (0,6 г, 32%), которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 3: 6-Амино-5-хлор-3-метилбензо[d]оксазол-2(3H)-он
6-Амино-5-хлор-3-метилбензо[d]оксазол-2(3H)-он был получен способом, описанным в Примере 2, этап 4, начиная от 5-хлор-3-метил-6-нитробензо[d]оксазол-2(3H)-она (520 мг, 2,3 ммоль) с получением твердого вещества (400 мг, 88%), которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 4: 5-Хлор-3-метил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)бензо[d]оксазол-2(3H)-он
5-Хлор-3-метил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)бензо[d]оксазол-2(3Н)-он был получен способом, описанным в Примере 2, этап 5, начиная от 6-амино-5-хлор-3-метилбензо[d]оксазол-2(3Н)-она (224 мг, 1,1 ммоль). Очистка на колонке с силикагелем (0-100% этилацетат/ изогексан) привела к получению твердого вещества, которое растерли со смесью петролейный эфир / диэтиловый эфир (1:1). В результате было получено белое твердое вещество (15 мг, 7%). ЖХМС (10cm_ESCI_Formic_MeCN): [МН+]=374 при 3,58 мин. 1Н ЯМР δ (м.д.) (400 МГц, CDCl3): 8,57 (1Н, s), 8,19 (1Н, s), 7,48 (1Н, s), 7,01 (1Н, s), 5,28 (1Н, s), 3,39 (3Н, s), 3,09 (3Н, d, J=4,67).
Пример 6: N2-(6-хлор-2-метилбензо[d]оксазол-5-ил)-N4-метил-5-(трифторметил)пиримидин-2,4-диамин
Этап 1: 6-Хлор-2-метилбензо[d]оксазол-5-амин
6-Хлор-2-метилбензо[d]оксазол-5-амин был получен способом, описанным в Примере 2, этап 4, начиная от 6-хлор-2-метил-5-нитробензо[d]оксазола (493 мг, 2,3 ммоль) с образованием твердого вещества (200 мг, 47%). Это вещество использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Этап 2: N2-(6-хлор-2-метилбензо[d]оксазол-5-ил)-N4-метил-5-(трифторметил)пиримидин-2,4-диамин
N2-(6-хлор-2-метилбензо[d]оксазол-5-ил)-N4-метил-5-трифторметил)пиримидин-2,4-диамин был получен способом, описанным в Примере 2, этап 5, начиная от 6-хлор-2-метилбензо[d]оксазол-5-амина (205 мг, 1,1 ммоль). Очистка на колонке с силикагелем (0-100% этилацетат/ изогексан) привела к получению твердого вещества, которое растерли со смесью петролейный эфир / диэтиловый эфир (1:1) с получением белого твердого вещества (15 мг, 7%). ЖХМС (10cm_ESCI_Formic_MeCN): [МН+]=358 при 3,49 мин. 1Н ЯМР δ (м.д.) (400 МГц, d6-ДМСО): 8,90 (1Н, s), 8,19 (2Н, d, J=11,5), 7,87 (1Н, s), 7,19 (1Н, d, J=5,2), 2,86 (3Η, d, J=4,3), 2,65 (3H, s).
Пример 7: 5-Метокси-2-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он
Смесь неочищенного 6-амино-5-метокси-2-метилизоиндолин-1-она (<0,57 ммоль), 2-хлор-N-метил-5-(трифторметил)пиримидин-4-амина (66 мг, 0,31 ммоль) и pTSA (59 мг, 0,31 ммоль) в диоксане (4 мл) 4 часа выдерживали при температуре 100°С. В систему добавили DCM (10 мл) и насыщенный водный раствор NaHCO3 (10 мл), органическую фазу пропустили через разделяющий фазы картридж, и растворитель удалили в вакууме. Очистка остатка на препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой привела к получению 5-метокси-2-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-она (15 мг, 13%) в виде грязно-белого твердого вещества. ЖХМС (10 cm_ESCI_Bicarb_MeCN): [Μ+Н]+=368 при 2,89 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 9,04 (s, 1Н), 8,17 (s, 1Н), 7,80 (s, 1Н), 6,93 (s, 1Η), 5,26 (br s, 1H), 4,31 (s, 2H), 3,97 (s, 3H), 3,20 (d, J 4,7, 3H), 3,18 (s, 3H).
Пример 8: 6-Хлор-5-(5-хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-иламино)-2-метилизоиндолин-1-он
Смесь 5-амино-6-хлор-2-метилизоиндолин-1-она (61 мг, 0,31 ммоль), 2,5-дихлор-4-метоксипиримидина (55 мг, 0,31 ммоль) и pTSA (59 мг, 0,31 ммоль) в диоксане (4 мл) 18 часов выдерживали при температуре 100°С. В систему добавили DCM (10 мл) и насыщенный водный раствор NaHCO3 (10 мл), затем органическую фазу пропустили через разделяющий фазы картридж. Растворитель удалили в вакууме, и остаток очистили на препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением 6-хлор-5-(5-хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-иламино)-2-метилизоиндолин-1-она (26 мг, 25%) в виде грязно-белого твердого вещества. ЖХМС (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ+Н]+=338 при 2,83 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, d6-ДМСО): δ 8,46 (s, 1Н), 8,29 (s, 1Н), 8,01 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,41 (q, J 4,6, 1H), 4,48 (s, 2H), 3,08 (s, 3H), 2,91 (d, J 4,6, 3H).
Пример 9: 6-Хлор-2-метил-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он
6-Хлор-2-метил-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он был получен способом, описанным в Примере 8, с использованием 2-хлор-N-метил-5-(трифторметил)пиримидин-4-амина. ЖХМС (10 cm_ESCI_Formic_MeCN): [Μ+Н]+=372 при 3,48 мин. 1Н ЯМР (400 МГц, d6-ДМСО): δ 8,91 (s, 1Н), 8,23 (s, 1Н), 8,23 (s, 1Н), 7,75 (s, 1Н), 7,26 (q, J 4,5, 1Н), 4,49 (s, 2Н), 3,09 (s, 3H), 2,88 (d, J 4,5, 3H).
Пример 10: 4-метокси-2-метил-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он
К раствору 5-амино-4-метокси-2-метилизоиндолин-1-она (81 мг, 0,42 ммоль) в трет-BuOH (3 мл) добавили 2-хлор-N-метил-5-(трифторметил)пиримидин-4-амин (89 мг, 0,42 ммоль). Смесь один час выдерживали при 100°С в условиях микроволнового облучения. Растворитель упарили в вакууме, и остаток очистили на препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (35 мг, выход 23%). m/z (ES+APCI)+: [М+Н]+ 368,1. 1Н-ЯМР (Bruker, 500 МГц, MeOD) δ 8,65 (d, J=8,5 Гц, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,43 (d, J=8,5 Гц, 1H), 4,69 (s, 2H), 4,06 (s, 3H), 3,19 (s, 3H), 3,05 (s, 3H).
Описанные выше соединения, а также другие соединения, полученные с использованием описанных выше процедур, представлены далее в Таблице 3, в которой для них приведены также значения Ki (мкМ) связывания с LRRK2.
Пример 10: Количественный анализ на LRRK2 in vitro с использованием оборудования LabChip
Данный анализ применялся для того, чтобы определить эффективность соединения как ингибитора активности LRRK2. С этой целью определялись значения Kiapp, IC50 или процента ингибирования. В полипропиленовом планшете совместно ингибировали LRRK2, флуоресцентно меченый пептидный субстрат, АТФ и исследуемое соединение. После завершения реакции на установке LabChip 3000 ("Калипер Лайф Сайенс" (Caliper Life Sciences)), субстрат методом капиллярного электрофореза разделили на две популяции: фосфорилированный субстрат и нефосфорилированный субстрат. Относительные количества каждого из них количественно определили по интенсивности флуоресценции. Значение Ki для LRRK2 рассчитали по следующей формуле:
Y=V0*(1-((x+Ki*(1+S/Km)+Et)/(2*Et)-(((x+Ki*(1+S/Km)+Et)∧2-(4*Et*x))∧0,5)/(2*Et))).
Значения Ki в таблице 4 и везде в данном описании выражены в мкМ.
В ходе анализа были заданы следующие условия и использовались следующие материалы:
Конечные условия анализа
| LRRK2 G2019S в 5 мМ MgCl2 | 5,2 нМ ("Инвитроген" |
| (Invitrogen) лот # 567054А) | |
| LRRK2G2019S с 1 мМ MnCl2 | 11 нМ ("Инвитроген" |
| (Invitrogen) лот # 567054А) | |
| LRRK2 дикого типа в 5 мМ MgCl2 | 15 нМ ("Инвитроген" |
| (Invitrogen) лот # 500607F) | |
| LRRK2 I2020Τ с 5 мМ MgCl2 | 25 нМ ("Инвитроген" |
| (Invitrogen) лот # 43594) | |
| Субстрат | 1 мкМ |
| АТФ | 130 мкМ |
| Время киназной реакции | 2 часа |
| Температура | окружающей среды |
| Общий объем | 20 мкл |
АТФарр Kms
| G2019S в 5 мМ MgCl2 | 130 мкМ |
| G2019S в 1 мМ MnCl2 | 1 мкМ |
| Дикий тип в 5 мМ MgCl2 | 80 мкМ |
| I2020T в 5 мМ MgCl2 | 14 мкМ |
Материалы
| Твердофазная подложка | черный полипропиленовый 384-луночный планшет |
| объемом 50 мкл ("МатриКал" (MatriCal) кат. № МР101-1-РР) | |
| Киназа | LRRK2 G2019S ("Инвитроген", кат. № PV4882). |
| LRRK2 дикого типа ("Инвитроген", кат. №PV4874). | |
| Субстрат | 5FAM-GAGRLGRDKYKTLRQIRQ-CONH2 |
| Несвязывающий планшет | 384-луночные чистые полипропиленовые планшеты |
| с V-образным днищем ("Грайнер" (Greiner) кат.№ 781280). | |
| АТФ | 10 мМ АТФ ("Селл Сигналлинг" (Cell |
| Signaling) кат.№9804). | |
| Тритон Х-100 | Тритон Х-100. |
| Brij-35 | Brij-35 ("Пирс" (Pierce) кат.№ 20150). |
| Реагент для покрытия №#3 | Реагент для покрытия №3 |
| ("Калипер" (Caliper)). | |
| ДМСО | ДМСО ("Сигма" кат.№ 34869-100ML). |
| Буфер завершения реакции | H2O/25 мМ Tris, рН 8,0/5 мМ MgCl2/2 |
| мМ DTT/0,01% Тритон Х-100 |
Раствор для остановки процесса (Stop Solution): Н2O/100 мМ HEPES, рН 7,2/0,015% Brij-35/0,2% реагента для покрытия #3/20 мМ ЭДТА.
Буфер разделения: Н2О/100 мМ HEPES, рН 7,2/0,015% Brij-35/0,1% реагента для покрытия #3/1:200 реагента для покрытия №8/10 мМ ЭДТА/5% ДМСО.
Приготовление планшета с соединениями
В лунки колонок 3-24 добавили по 34,6 мкл ДМСО, эти лунки предназначены для последовательных разведений. Колонки 1 и 2 рядов А и Ρ предназначены для контролей, туда добавили по 37,5 мкл ДМСО. a, d и 50 мкл 25 мкМ G-028831 (Стауроспорин) добавили в колонки 1 и 2 ряда В. Для образцов: чтобы начать со 100 мкМ, в колонки 1 и 2 добавили по 37,5 мкл ДМСО, а затем 12,5 мкл 10 мМ соединения; чтобы начать с 10 мкМ, в колонки 1 и 2 добавили по 78 мкл ДМСО, а затем 2 мкл 10 мМ соединения; наконец, чтобы начать с 1 мкМ, в пустые колонки 1 и 2 создали концентрацию соединения по 25 мкМ (2 мкл 10 мМ соединения + 798 мкл ДМСО). Для последовательных разведений 1:3,16 использовали прецизионный инструмент ("PLK_BM_serial_halflog").
Приготовление АТФ
АТФ разбавили до концентрации 282,1 мкМ в полном киназном буфере (финальная концентрация составила 130 мкМ).
Приготовление общего и холостого растворов
Субстрат разбавили в полном реакционном буфере до 4 мкМ. Чтобы получить холостой раствор, смешали равные объемы полного реакционного буфера и 4 мкМ субстрата. Равные объемы полного реакционного буфера и 4 мкМ субстрата смешали, и к полученному раствору добавили 2Х финальную концентрацию LRRK2.
Процедура анализа
В лунки для холостого раствора 50 мкл полипропиленового планшета вручную добавили 5 мкл/лунку буфера/субстрата. Для начала киназной реакции использовали Biomek FX ("PLK SAR 23 ATP"). В соответствующие лунки добавили следующие компоненты:
2 мкл соединения + 23 мкл АТФ;
5 мкл/лунку соединения/АТФ в планшет для анализа;
5 мкл/лунку киназы/субстрата в планшет для анализа;
Планшет 2 часа инкубировали в темноте. Для остановки киназной реакции использовали Biomek FX ("PLK Stop"), и в планшет для анализа добавляли по 10 мкл/лунку Раствора для остановки процесса. Результаты получены на LabChip 3000.
Протокол для Lab Chip 3000:
На приборе LabChip 3000 запускали задание "LRRK2 IC50" со следующими настройками:
| Давление | 1,4 psi |
| Напряжение в конце потока | 500 В |
| Напряжение в начале потока | 2350 В |
| Параметр "Post sample buffer sip time" | |
| (Время для отсасывания буфера между прохождением образцов) | 75 секунд |
| Параметр "Post dye buffer sip time" |
| (Время для отсасывания буфера между прохождением маркеров рядов) | 75 секунд |
| Финальное время задержки | 200 секунд |
Пример 11: Анализ связывания LRRK2 In Vitro Lanthascreen
Данный анализ применялся для того, чтобы определить эффективность соединения как ингибитора активности LRRK2. С этой целью определялись значения Kiapp, IC50 или процента ингибирования. В мелких ячейках 384-луночного микропланшета ProxiPlates F black совместно инкубировали LRRK2, антитело Еu-анти-GST, маркер активности киназ Alexa Fluor® Kinase tracer 236 и исследуемые соединения.
Связывание Alexa Fluor® "tracer" с киназой определяли, добавляя меченое Европием анти-GST антитело. Связывание маркера и антитела с киназой приводит к высокой степени FRET, вытеснение маркера ингибитором приводит к уменьшению FRET.
В ходе анализа были заданы следующие условия и использовались следующие материалы:
Конечные условия анализа
| GST-LRRK2 G2019S | 10 нМ |
| Еu-анти-GST-антитело | 2 нМ |
| Kinase tracer 236 | 8,5 нМ |
| Продолжительность киназной реакции: | 1 час |
| Температура: | окружающей среды |
| Общий объем: | 15 мкл |
| ДМСО | 1% |
Материалы
| 384-луночный микропланшет ProxiPlates F black производства | |
| "Перкин Элмер" кат. №6008260 | |
| Киназа: | LRRK2 G2019S "Инвитроген" кат. №PV4882 (лот 567054А). |
| Eu-меченое анти-GST антитело | "Инвитроген" кат.№ PV5594 |
| Alexa Fluor® Kinase tracer 236 | "Инвитроген" кат.№PV5592 |
| TRIS- HCl | "Сигма" кат.№Т3253 |
| ЭГТА | "Сигма" кат.№Е3889 |
| Brij-35 | "Сигма" кат.№В4184(30% масс.%) |
| ДМСО | "Сигма" кат.№D8418 |
| MgCl2 | "Сигма" кат.№М9272 |
| Реакционный буфер: | Н2О/50 мМ Tris, рН 7,4/10 мМ МgСl2/1 мМ |
| ЭГТА/0,01% Brij 35. |
Приготовление планшета с соединениями
Исследуемые соединения (10 мМ маточный раствор) последовательно разбавляли в отношении 1:3,16 (20 мкл + 43,2 мкл) в 100% ДМСО. Кривая 12pt. Каждое соединение разбавляли в отношении 1:33,3 (3 мкл+97 мкл) в реакционном буфере. 5 мкл перенесли в планшет для анализа. Финальная максимальная концентрация исследуемого вещества составила 100 мкМ.
Приготовление общего и холостого растворов
В лунки для общего и холостого растворов добавили по 5 мкл ДМСО(3%) в реакционном буфере, и в лунки для холостого раствора добавили по 5 мкл Eu-меченого анти-GST антитела (6 нМ).
Процедура анализа
В лунки для соединений и общего раствора добавили по 5 мкл LRRK2(30nM)/ Eu-меченого анти-GST антитела (6 нМ). Во все лунки добавили по 5 мкл киназного маркера (25,5 нМ). Планшеты инкубировали при комнатной температуре 1 час на планшетном шейкере (мягкие встряхивания). Данные получены на ридере от "Перкин Элмер" Perkin Elmer EnVision reader по протоколу HTRF.
Обработка данных
Рассчитывалось отношение (665/620)*10000. Средние фоновые значения вычитали из всех значений для данных. Для каждого исследуемого значения рассчитывали процент от контроля. Посторили график зависимости % контроля от концентрации соединения. Рассчитали значение Ki (построение кривой xlfit по заданным координатам - уравнение Моррисона).
Результаты выразили в виде Ki в мкМ. Уравнение для Ki: Y=V0*(1-((x+Ki**(1+S/Km)+Et)/(2*Et)-(((x+Ki*(1+S/Km)+Et)∧2-(4*Et*x)∧0.5)/(2*Et)))
где Et=4 нМ
kd (маркер)=8,5 нМ
Концентрация маркера (S)=8,5 нМ.
Пример 12: Животная модель болезни Паркинсона
Болезнь Паркинсона можно имитировать у мышей и приматов, вводя им 1-метил-4-фенил тетрагидропиридин (МФТП), селективный нейротоксин дофаминергических нейронов нигростриальной системы, который разрушает находящиеся в стриатуме дофаминовые нервные окончания. Эффективность соединений по данному изобретению при лечении болезни Паркинсона можно оценить по индуцированной МФТП нейродегенерации, следуя протоколу, который описан в работе Saporito с соавт., J. Pharmacology (1999), том 288, стр. 421-427.
Кратко, МФТП растворили в PBS в концентрации 2-4 мг/мл, и этот раствор ввели подкожно мышам (самцы линии С57 весом 20-25 г) в концентрации от 20 до 40 мг/кг. Соединения по изобретению солюбилизировали в полиэтилен гликоль гидроксистеарате и растворили в PBS. За 4-6 часов до введения МФТП мышам подкожно ввели 10 мл/кг этого раствора соединения, процедуру затем повторяли раз в день в течение 7 дней. В день последней инъекции мышей умертвили, средний мозг блокировали и зафиксировали в параформальдегиде. Стриатумы вырезали, взвесили и хранили при -70°С.
Собранные таким способом стриатумы проанализировали на содержание в них дофамина и его метаболитов дигидроксифенилуксусной кислоты и гомованилиновой кислоты. Анализ проводили методом ВЭЖХ с электрохимической детекцией, как описано в работе Sonsalla с соавт., J.Pharmacol. Exp.Ther. (1987) Том 242, стр. 850-857. Можно также для анализа стриатумов применить гидроксилазный анализ по Okunu с соавт., Anal Biochem (1987) том 129, стр. 405-411, измеряя выделение 14CO2 в ходе опосредуемой тирозин гидроксилазой конверсии меченого тирозина в L-dopa. Стриатумы можно еще анализировать с использованием моноамино оксидазы В, как описано в работе White с соавт., Life Sci. (1984), том 35, стр. 827-833, а также отслеживая поглощение дофамина, как описано в работе Saporito с соавт., (1992) том 260, стр. 1400-1409.
Хотя настоящее изобретение и было описано со ссылкой на свои конкретные воплощения, специалист в уровне техники должен понимать, что в них можно вносить разнообразные изменения и заменять их эквивалентами, не отступая от сущности и объема изобретения. Кроме того, в объем настоящего изобретения можно вносить разнообразные модификации, приспосабливаясь к конкретной ситуации, материалу, смесям химических соединений, процессу, этапу или этапам процесса. Все такие модификации входят в объем изложенной далее формулы изобретения.
1. Соединение формулы I
или его фармацевтически приемлемая соль,
где
А представляет собой пяти-, шести- или семичленный насыщенный или ненасыщенный цикл, включающий один или два гетероатома, выбранных из О и N, один раз замещенный группой R5 и, возможно, один, два или три раза замещенный группами R6;
X представляет собой -NRa-, a Ra представляет собой водород;
R1 представляет собой С1-6алкил;
R2 представляет собой галоген, С1-6алкокси, циано или гало-С1-6алкил;
одна из групп R3 и R4 представляет собой галоген, С1-6алкил или С1-6алкокси, а другая группа является водородом;
R5 представляет собой оксо, С1-6алкил, С3-6циклоалкил или -C(O)-NRbRc, где каждый из Rb и Rc независимо представляет собой водород или С1-6алкил, или Rb и Rc совместно с атомами, к которым они прикреплены, могут образовывать 4-6-членный насыщенный гетероциклил, который возможно содержит дополнительный гетероатом, выбранный из О и N, и который возможно один раз замещен R6; или Rb и Rc вместе с атомами, к которым они прикреплены, могут образовывать 2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептанил; и
каждая группа R6 независимо представляет собой С1-6алкил, С3-6циклоалкил, галоген, гидрокси-С1-6алкил, С1-6алкокси-С1-6алкил или 4-6-членный насыщенный гетероциклил с кислородом в качестве гетороатома.
2. Соединение по п. 1, где X представляет собой -NH-.
3. Соединение по п. 1, где R2 представляет собой галоген, гало-С1-6алкил или циано.
4. Соединение по п. 1, где R2 представляет собой хлор, трифторметил или циано.
5. Соединение по п. 1, где R2 представляет собой трифторметил.
6. Соединение по п. 1, где R3 представляет собой галоген или С1-6алкокси.
7. Соединение по п. 1, где R3 представляет собой галоген или метокси.
8. Соединение по п. 1, где R4 представляет собой галоген или C1-6алкокси.
9. Соединение по п. 1, где R4 представляет собой галоген или метокси.
10. Соединение по п. 1, где R5 представляет собой оксо, С1-6алкил или -C(O)-NRbRc.
11. Соединение по п. 1, где каждая группа R6 независимо представляет собой С1-6алкил, гидрокси-С1-6алкил, С1-6алкокси-С1-6алкил или 4-6-членный насыщенный гетероциклил с кислородом в качестве гетороатома.
12. Соединение по п. 1, где указанное соединение соответствует формуле IIa или IIb
где
m представляет собой 0; 1 или 2;
Z представляет собой -C(R7)2-; -NR8- или -О-;
каждая группа R7 независимо представляет собой водород или С1-6алкил; и
каждая группа R8 независимо представляет собой водород, С1-6алкил, С3-6циклоалкил, галоген, гидрокси-С1-6алкил, С1-6алкокси-С1-6алкил или 4-6-членный насыщенный гетероциклил с кислородом в качестве гетероатома.
13. Соединение по п. 12, где m представляет собой 0 или 1.
14. Соединение по п. 12, где Z представляет собой -C(R7)2-.
15. Соединение по п. 12, где Z представляет собой -NR8-.
16. Соединение по п. 12, где Z представляет собой -О-.
17. Соединение по п. 1, выбранное из группы, состоящей из следующих соединений
7-хлор-4-метил-8-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-3,4-дигидробензо[f][1,4]оксазепин-5(2H)-он,
5-метокси-N,N-диметил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)бензофуран-2-карбоксамид,
5-хлор-3-метил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)бензо[d]оксазол-2(3H)-он,
N2-(6-хлор-2-метилбензо[d]оксазол-5-ил)-N4-метил-5-(трифторметил)пиримидин-2,4-диамин,
5-метокси-2-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он,
6-хлор-5-(5-хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-иламино)-2-метилизоиндолин-1-он,
6-хлор-2-метил-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он,
2-циклопропил-4-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он,
4-метокси-2-метил-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он,
5-хлор-6-(5-хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-иламино)бензо[d]оксазол-2(3H)-он,
5-хлор-6-(5-хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-иламино)-3-метилбензо[d]оксазол-2(3H)-он,
7-метокси-2-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-3,4-дигидроизохинолин-1(2Н)-он,
7-метокси-2-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)фталазин-1(2Н)-он,
2-этил-4-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он,
2-(2-гидроксипропан-2-ил)-4-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он,
4-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-2-(оксетан-3-ил)изоиндолин-1-он,
6-метокси-2-метил-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он,
(5-хлор-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1Н-индол-3-ил)(морфолино)метанон,
2-(2-гидрокси-2-метилпропил)-6-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)изоиндолин-1-он,
5-(4-(этиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-2-(2-гидрокси-2-метилпропил)-6-метоксиизоиндолин-1-он,
6-метокси-5-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-2-(оксетан-3-ил)изоиндолин-1-он,
5-(4-(этиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-6-метокси-2-(оксетан-3-ил)изоиндолин-1-он,
5-хлор-N,N,1-триметил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1Н-индол-3-карбоксамид,
(5-хлор-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1H-индол-3-ил)(пиперазин-1-ил)метанон,
(5-хлор-6-(4-(этиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1-метил-1Н-индол-3-ил)(морфолино)метанон,
(5-метокси-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1H-индол-3-ил)(морфолино)метанон,
(5-хлор-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1H-индол-3-ил)(4-метилпиперазин-1-ил)метанон,
(5-хлор-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1Н-индол-3-ил)(4-этилпиперазин-1-ил)метанон,
(5-метокси-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)бензофуран-3-ил)(морфолино)метанон,
5-метокси-N,N-диметил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)бензофуран-3-карбоксамид,
(1S,4S)-2-окса-5-азабицикло[2.2.1]гептан-5-ил(5-хлор-1-метил-6-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-1H-индол-3-ил)метанон,
7-((5-хлор-4-(метиламино)пиримидин-2-ил)амино)-6-метокси-2,2,4-триметил-2H-бензо[b][1,4]оксазин-3(4H)-он,
6-метокси-2,2,4-триметил-7-(4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-иламино)-2H-бензо[b][1,4]оксазин-3(4H)-он,
2-(7-метокси-2-метил-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-иламино)-4-(метиламино)пиримидин-5-карбонитрил и
5-хлор-1,3-диметил-6-((4-(метиламино)-5-(трифторметил)пиримидин-2-ил)амино)-1Н-бензо[d]имидазол-2(3H)-он
или его фармацевтически приемлемая соль.
18. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами ингибитора богатой лейцином повторной киназы 2 (LRRK2), содержащая:
(a) фармацевтически приемлемый носитель и
(b) эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-17.
19. Способ лечения болезни Паркинсона, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-17.
20. Соединение по любому из пп. 1-17 или его фармацевтически приемлемая соль, обладающие свойствами ингибитора LRRK2, для применения в профилактике или лечении болезни Паркинсона.
21. Фармацевтическая композиция по п. 18, где эта композиция полезна для профилактики или лечения болезни Паркинсона.
22. Применение соединения по любому из пп. 1-17 или его фармацевтически приемлемой соли, обладающих свойствами ингибитора LRRK2, для изготовления лекарственного средства для профилактики или лечения болезни Паркинсона.
