Средство, обладающее антипролиферативными и антиметастатическими свойствами, для лечения онкологических заболеваний

Изобретение относится к медицине. Описано средство, представляющее собой комплексы 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена с β-циклодекстринами. Указанная композиция может найти применение в медицине и фармакологии для лечения опухолевых заболеваний различной локализации. Средство стабильно при хранении. 19 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к новому средству, представляющему собой комплексы 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена с β-циклодекстринами. Указанная композиция может найти применение в медицине и фармакологии для лечения опухолевых заболеваний различной локализации.

В настоящее время химиотерапия онкологических заболеваний является одним из основных методов их лечения. Применяемые для лечения онкологических заболеваний современные лекарственные средства недостаточно эффективны и обладают рядом серьезных нежелательных явлений, обусловленных повреждающим действием на здоровые органы и ткани. В связи с этим актуальной остаётся проблема поиска малотоксичных лекарственных средств и их комбинации с высокой терапевтической активностью. При этом успехи в разработке новых противоопухолевых лекарственных средств связаны не только с синтезом новых химических соединений, но и в значительной степени, с созданием их комбинации и улучшением свойств.

Известно, что у вещества 3-(2-фенилэтил)-2-тиоксо-4-тиазолидинон проявляется антипролиферативное действие на культуре клеток нейробластомы N2A /US 2003/0195238, C07D207/44, опубл. 16.10.2003/.

Известно также, что 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-он обладает антипролиферативным и антиметастатическим действием в отношении опухолевых клеток эпидермоидной карциномой Lewis, имплантированных мышам /Патент на изобретение РФ2522449, C07D277/36 , опубл. 10.07.2014г./.

Известно, что соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен обладает широким спектром фармакологического действия /Патент на изобретение РФ 2281007, A23L1/30, опубл. 10.08.2006/. Соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен стимулирует иммунную систему и обладает адаптогенными свойствами, что повышает его ценность при лечении онкологических заболеваний. Будучи антиоксидантом, соединение 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен потенциально способно защищать здоровые органы и ткани при радио- и химиотерапии онкологических заболеваний. Протекторное действие 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантена может быть обусловлено не только его антиоксидантными свойствами, но и опосредованным вследствие способности молекулы препарата ингибировать дифференцировку низкодифференцированных клеток подобных стволовым [Патент на изобретение РФ 2317074, A61K31/095, опубл. 20.02.2008г.]. Последний эффект наблюдается при предварительном введении препарата за 7 суток до действия радиации.

Имеющиеся данные по 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-ону, 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантену и β-циклодекстрину в качестве носителя позволяют создать эффективную и безопасную фармацевтическую композицию и расширить арсенал средств для лечения онкологических заболеваний. Один из компонентов фармацевтической композиции 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-он, являясь мультикиназным ингибитором [Ana Martinez SAR and 3D-QSAR Studies on Thiadiazolidinone Derivatives: Exploration of Structural Requirements for Glycogen Synthase Kinase 3 Inhibitors / Ana Martinez et al. // J. Med. Chem. 2005, 48, 7103-7112], нацелен как на подавление пролиферации опухолевых клеток и их метастазирования, так и на ингибирование роста сосудов опухоли. Пролиферация опухолевых клеток и васкуляризация (рост сосудов) опухоли – два важных процесса, которые обеспечивают рост злокачественной опухоли. Другой компонент фармацевтической композиции 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантен, обладая цитостатическим и защитным действием, возможно, обеспечит ее адъювантные свойства. При этом изыскание новых комплексов активных компонентов композиции с β-циклодекстрином позволить увеличить растворимость в воде, улучшить биодоступность и, следовательно, снизить их дозы. Разработка низкодозных высокоэффективных лекарственных препаратов является актуальной задачей современной медицинской химии. Одним из перспективных в разработке подобных лекарственных форм направлением является механохимия. Создание новых фармацевтических композиций методом механохимической активации базируется на создании комплексов путем соединения носителей β-циклодекстрина с фармацевтически активными субстанциями 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-оном и 9-фенил-симм-октагидроселено-ксантеном.

Задачей изобретения является повышение эффективности, снижение применяемых доз.

Поставленная задача достигается использованием фармацевтической композиции, состоящей из комплексов 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена с β-циклодекстринами, при следующем содержании компонентов:

активные субстанции (3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена) 8-10 масс. % , β-циклодекстрин остальное, при соотношении 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена от 1:1 до 4:1 в качестве комбинированного средства, обладающего антипролиферативными и антиметастатическими свойствами.

В литературе отсутствует информация по применению фармацевтической композиции, состоящей из комплексов 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена с β-циклодекстринами в соотношении от 1:1 до 4:1, с суммарным содержанием активных субстанций от 8 до 10 мас.% и β-циклодекстрина остальное масс.%, как антипролиферативного и антиметастатического средства для лечения онкологических заболеваний.

Новым в предлагаемом изобретении является то, в качестве комбинированного средства подавляющего пролиферацию и метастазирование различных опухолевых клеток может применяться фармацевтическая композиция, состоящая из комплексов 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена с β-циклодекстринами в соотношении от 1:1 до 4:1, с суммарным содержанием активных субстанций от 8 до 10 масс.% (3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-он от 4,5 до 7,2 масс. %, 9-фенил-сим-октагидроселеноксантен от 4,5 до 1,8 масс. %) и β-циклодекстрина - остальное. Для специалиста эти свойства явным образом не вытекают из уровня техники.

Полученная фармацевтическая композиция стабильна при хранении и была проверена на антипролиферативную и антиметастатическую эффективность.

Статистическую обработку проводили с применением следующих подходов и критериев: однофакторного дисперсионного анализа, критерия Стьюдента (в том числе для выборок с различной вариацией). Все расчеты проводили с помощь статистического пакета R (версия 2.15.0) в соответствии с современными руководствами по биологической статистике.

Комплекс 1 - 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-он в комплексе с β-циклодекстрином.

Комплекс 2 - 9-фенил-сим-октагидроселеноксантен в комплексе с β-циклодекстрином.

Сущность изобретения поясняется примерами конкретного выполнения.

Пример. Проведена оценка сочетанного антипролиферативного и антиметастатического действия 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена (активные субстанции 9 масс.%, β-циклодекстрин 91 масс.%) в модельных экспериментах на мышах с имплантированными опухолями эпидермоидной карциномой Lewis.

Материалы и методы

Исследование сочетанных антипролиферативных и антиметастатических свойств 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена было проведено в эксперименте на мышах с имплантированными опухолевыми клетками эпидермоидной карциномой Lewis.

Тест-система

Эксперименты были проведены на 125 мышах-самцах гибридах первого поколения CBA×C57Bl/6: на каждую группу приходилось по 25 животных. В заднюю лапку мышей имплантировали эпидермоидную карциному Lewis, в количестве ~106 клеток (~ 0,2 см3).

Дозы и схемы введения 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена

Исследуемое соединение 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-он в комплексе с β-циклодекстрином в соотношении 1:10 вводили ежедневно в течение 3-х недель после имплантации опухоли. Изучаемое соединение 9-фенил-сим-октагидроселеноксантен в комплексе с β-циклодекстрином в соотношении 1:10 вводили три раза: на 7, 11 и 15 сутки после имплантации. Экспериментальные группы, дозы и количество животных указаны в таблице 1. Оба комплекса вводились внутрижелудочно (в/ж) в количестве 0,2 мл на животное в виде суспензии. Мышам контрольной группы с имплантированной опухолью внутрижелудочно вводилась водная суспензия β-циклодекстрина в количестве 0,2 мл на животное.

Таблица 1. Экспериментальные группы

# Группы Количество
животных
1 Контроль - 25
2 Комплекс 1 25 мг/кг 25
3 Комплекс 2 100 мг/кг 25
4 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
50 мг/кг
25
5 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
100 мг/кг
25

Критерии оценки эффективности исследуемых комплексов

Антипролиферативная эффективность оценивалось по изменению объема новообразования, который определяется по формуле. Объем новообразования оценивали по следующей формуле (1):

V = a×b×c (1)

где: a, b и с – длина, ширина и высота опухолевого узла.

Сроки измерения: 11, 16 и 21 сутки после имплантации. В качестве дополнительных критериев использовали изменение массы тела животных и выживаемость в группах на поздних сроках.

Антиметастатическая эффективность оценивалась по количеству метастазов в легких, которое определяли через 3 недели после начала введения комплексов. Для этого у декапитированных под наркозом животных извлекали легкие и переносили в жидкость Буэна. Подсчет метастазов проводили визуально.

Результаты

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что введение мышам с имплантированной опухолевыми клетками эпидермоидной карциномой Lewis изучаемых комплексов значительно снижает у них объем опухоли по сравнению с контрольной группой (таблица 2) уже через 11 сутки после имплантации опухоли.

Таблица 2. Изменение объема опухоли (мм3) у животных в зависимости от дозы введения изучаемых комплексов

Дозы введения Сутки после имплантации опухоли
11 16 21
1 Контроль (β-циклодекстрин) 2897±226 5098±407 8860±665
2 Комплекс 1 25 мг/кг 2648± 292 3885±417 5524±565*
3 Комплекс 2 100 мг/кг 2789±287 4890±398 8621±577
4 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
50 мг/кг
2182±267 3213±309* 5097±646*
5 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
100 мг/кг
1762±447* 2668±541* 3551±404*×

*Здесь и далее достоверное (P<0,00001-0,05) отличие от контроля по критерию Стьюдента

Таблица 3. Количество метастазов в легких в зависимости от дозы введения изучаемых комплексов

Дозы введения Количество метастазов, шт.
1 Контроль (β-циклодекстрин) 52,1 ± 8,3
2 Комплекс 1 25 мг/кг 30,2 ± 6,1*
3 Комплекс 2 100 мг/кг 47,3 ± 3,6
4 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
50 мг/кг
28,7 ± 6,4* у двух мышей в легких отсутствуют метастазы
5 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
100 мг/кг
17,2 ± 3,27* у двух мышей в легких отсутствуют метастазы

Достоверные отличия от контроля были получены при введении комплекса 1 в дозе 25 мг/кг, и комплекса 2 - 50-100 мг/кг. При этом наилучшие результаты были достигнуты по снижению объема опухоли при сочетанном введении комплекса 1 и комплекса 2, соответственно в дозах 25 и 100 мг/кг.

При анализе количества метастазов в легких было установлено достоверное их снижение по сравнению с контролем только для мышей-опухоленосителей тех групп, которым вводили как отдельно комплекс 1, так и при сочетанном его введении с комплексом 2, соответственно, в дозах 25 мг/кг и 50 – 100 мг/кг массы тела животных (таблица 4). Также следует отметить, что наилучшие результаты были достигнуты как и в случае со снижением объема опухоли при сочетанном введении комплекса 1 и комплекса 2, соответственно в дозах 25 и 100 мг/кг. При сочетанном введении комплекса 1 и комплекса 2 соответственно, в дозах 25 мг/кг и 50 – 100 мг/кг массы тела животных у двух мышей из групп в легких отсутствовали метастазы.

На протяжении всего эксперимента измерение массы тела подопытных мышей-опухоленосителей не показало существенного ее изменения при внутрижелудочном введении изучаемых комплексов (таблица 4).

Таблица 4. Изменение массы тела (г) животных в зависимости от дозы введения изучаемых комплексов

Дозы введения Сутки после имплантации опухоли
7 11 16 21
1 Контроль (β-циклодекстрин) 23,5±0,6 24,3± 0,6 24,1±0,6 24,9±0,7
2 Комплекс 1 25 мг/кг 22,8±0,5 23,5±0,6 24,5±0,6 24,1±0,7
3 Комплекс 2 100 мг/кг 24,0±0,7 24,5±0,7 24,2±0,7 24,1±0,9
4 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
50 мг/кг
22,7±0,5 23,1±0,5 23,9±0,6 23,7±0,7
5 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
100 мг/кг
24,5±0,4 24,8±0,4 25,7±0,5 25,5±0,6

Результаты анализа выживаемости на поздних сроках показали, что как отдельное введение комплекса 1, так и сочетанное с комплексом 2, соответственно, в дозах 25 мг/кг и 50 – 100 мг/кг массы тела животных способствует увеличению продолжительности жизни мышей с имплантированной опухолью (таблица 5). При этом наилучшие результаты по выживаемости мышей-опухоленосителей обеспечило сочетанное введение комплекса 1 и комплекса 2, соответственно в дозах 25 мг/кг и 100 мг/кг массы тела животных.

Таблица 5. Количество выживших и погибших животных (шт.) в зависимости от дозы введения изучаемых комплексов

Дозы введения Погибшие Выжившие Соотношение выживших к погибшим
1 Контроль (β-циклодекстрин) 8 6 0,75
2 Комплекс 1 25 мг/кг 4 10 2,50
3 Комплекс 2 100 мг/кг 7 7 1,0
4 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
50 мг/кг
3 11 3,67
5 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
100 мг/кг
2 12 6,0

В модельных экспериментах на мышах с имплантированной опухолью эпидермоидной карциномой Lewis была проведена оценка сочетанного антипролиферативного и антиметастатического действия комплекса 1 и комплекса 2. Проведенные исследования показали, что сочетанное введение комплекса 1 и комплекса 2 мышам-опухоленосителям способствует ингибированию роста опухоли, увеличению продолжительности их жизни, снижению количества метастазов в легких и при этом не влияет на массу тела животных. При этом наилучшие результаты были достигнуты при сочетанном введении комплекса 1 и комплекса 2, соответственно в дозах 25 и 100 мг/кг.

Таким образом, в результате проведенных исследований было продемонстрировано более выраженное противоопухолевое действие сочетанного применения комплекса 1 и комплекса 2 мышам-опухоленосителям и целесообразности их включения в фармацевтическую композицию.

Пример. Исследованы адъювантные свойства 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена в комплексе с β-циклодекстрином при его совместном применении с 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-оном в комплексе с β-циклодекстрином по противоопухолевой и антиметастатической активности в модельных экспериментах на мышах с имплантированными опухолями меланомой В16 (активные субстанции 9 масс.%, β-циклодекстрин 91масс. %).

Материалы и методы. Оценка адъювантных свойств комплекса 2 при его совместном применении с комплексом 2 по антипролиферативной и антиметастатической активности было проведено в эксперименте на мышах с имплантированными опухолевыми клетками меланомой В16.

Тест-система

Эксперименты были проведены на 120 мышах-самцах гибридах первого поколения CBA×C57Bl/6: на каждую группу приходилось по 20 животных. В заднюю лапку животных была имплантирована меланома B-16, в количестве ~106 клеток (~0,2 см3). Клетки мышиной меланомы B-16, приспособленная к выращиванию в монослое (банк клеток ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина) культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением антибиотиков (пенициллин-стрептомицин по 100 ЕД/мл), 10% эмбриональной телячьей (10% по объему) сыворотки при температуре +37º C в атмосфере, содержащей 5% СО2. В качестве культуральной посуды использовали стерильные матрацы площадью 75 см3 (Corning, Nunc). Пересев культуры проводился 3 раза в неделю.

Дозы и схемы введения 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена

Исследуемое соединение 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-он в комплексе с β-циклодекстрином в соотношении 1:10 вводили ежедневно в течение 3-х недель после имплантации опухоли. Изучаемое соединение 9-фенил-сим-октагидроселеноксантен в комплексе с β-циклодекстрином в соотношении 1:10 вводили три раза: на 7, 11 и 15 сутки после имплантации. Экспериментальные группы, дозы и количество животных указаны в таблице 6. Оба комплекса вводились внутрижелудочно (в/ж) в количестве 0,2 мл на животное в виде суспензии. Мышам контрольной группы с имплантированной опухолью внутрижелудочно вводилась водная суспензия β-циклодекстрина в количестве 0,2 мл на животное.

Таблица 6. Экспериментальные группы

# Группы Количество
животных
1 Контроль - 20
2 Комплекс 1 25 мг/кг 20
3 Комплекс 1 50 мг/кг 20
4 Комплекс 1 75 мг/кг 20
5 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
100 мг/кг
20
6 Комплекс 1
Комплекс 2
50 мг/кг
100 мг/кг
20

Критерии оценки эффективности исследуемых комплексов

Антипролиферативная эффективность оценивалось по изменению объема новообразования, который определяется по формуле. Объем новообразования оценивали по следующей формуле (1):

V = a×b×c (1)

где: a, b и с – длина, ширина и высота опухолевого узла.

Сроки измерения: 10, 15 и 20 сутки после имплантации. В качестве дополнительных критериев использовали изменение массы тела животных и выживаемость в группах на поздних сроках.

Антиметастатическая эффективность оценивалась по количеству метастазов в легких, которое определяли через 3 недели после начала введения комплексов. Для этого у декапитированных под наркозом животных извлекали легкие и переносили в жидкость Буэна. Подсчет метастазов проводили визуально.

Результаты

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что введение мышам с имплантированной опухолевыми клетками меланомой В16 изучаемых комплексов значительно снижает у них объем опухоли по сравнению с контрольной группой (таблица 7) уже через 10 сутки после имплантации опухоли.

Достоверные отличия от контроля были получены при введении комплекса 1 в дозе 25, 50 и 75 мг/кг, и комплекса 2 - 100 мг/кг. При этом наилучшие результаты были достигнуты по снижению объема опухоли при сочетанном введении комплекса 1 и комплекса 2, соответственно в дозах 25 и 100 мг/кг.

При анализе количества метастазов в легких было установлено достоверное их снижение по сравнению с контролем только для мышей-опухоленосителей тех групп, которым вводили как отдельно комплекс 1, так и при сочетанном его введении с комплексом 2, соответственно, в дозах 25, 50 и 75 мг/кг и 100 мг/кг массы тела животных (таблица 8). Также следует отметить, что наилучшие результаты были достигнуты как и в случае со снижением объема опухоли при сочетанном введении комплекса 1 и комплекса 2, соответственно в дозах 25 и 100 мг/кг.

Таблица 7. Изменение объема опухоли (мм3) у животных в зависимости от дозы введения изучаемых комплексов

Дозы введения Сутки после имплантации опухоли
10 15 20
1 Контроль (β-циклодекстрин) 2215±289 3901±546 7537±911
2 Комплекс 1 25 мг/кг 1326 ± 224*
p<0,02
3242±513 5375±843
3 Комплекс 1 50 мг/кг 1168 ± 175* p<0,004 3095±424 5041±718* p<0,05
4 Комплекс 1 75 мг/кг 1249±227* p<0,01 2920±370* p<0,01 4906±559* p<0,05
5 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
100 мг/кг
816±149* p<0,00001 1856±323* p<0,006 3216±546* p<0,001
6 Комплекс 1
Комплекс 2
50 мг/кг
100 мг/кг
695±70* p<0,0001 1563±175* p<0,0001 3924±487* p<0,002

*Здесь и далее достоверное (P<0,00001-0,05) отличие от контроля по критерию Стьюдента

Таблица 8. Количество метастазов в легких в зависимости от дозы введения изучаемых комплексов

Дозы введения Количество метастазов, шт.
1 Контроль (β-циклодекстрин) 34,3 ± 2,8
2 Комплекс 1 25 мг/кг 22,2 ± 3,1* (p<0,05)
3 Комплекс 1 50 мг/кг 21,0 ± 2,3* (p<0,01)
4 Комплекс 1 75 мг/кг 18,2 ± 3,6* (p<0,003)
5 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
100 мг/кг
11,3 ± 2,3* (p<0,00001)
6 Комплекс 1
Комплекс 2
50 мг/кг
100 мг/кг
14,9 ± 3,4* (p<0,001)

Измерение массы тела подопытных мышей-опухоленосителей в ходе проведения эксперимента не продемонстрировало значительного ее изменения при внутрижелудочном введении изучаемых комплексов (таблица 9).

Таблица 9. Изменение массы тела (г) животных в зависимости от дозы введения изучаемых комплексов

Дозы введения Сутки после имплантации опухоли
6 10 15 20
1 Контроль (β-циклодекстрин) 21,2±0,4 22,0± 0,5 23,5±0,5 23,0±0,6
2 Комплекс 1 25 мг/кг 20,9±0,3 21,4±0,4 22,3±0,4 22,0±0,5
3 Комплекс 1 50 мг/кг 21,8±0,4 22,2±0,5 23,4±0,5 23,7±0,6
4 Комплекс 1 75 мг/кг 22,1±0,6 23,1±0,6 24,3±0,5 23,8±0,5
5 Комплекс 1
Комплекс 2
25 мг/кг
50 мг/кг
21,6±0,5 22,0±0,4 23,7±0,4 24,0±0,6
6 Комплекс 1
Комплекс 2
50 мг/кг
100 мг/кг
22,0±0,5 23,4±0,5 24,6±0,7 24,1±0,7

В модельных экспериментах на мышах с имплантированной опухолью меланомой В16 изучены адъювантные свойства комплекса 2 при его совместном применении с комплексом 1 по противоопухолевой активности. В результате проведенных исследований установлено, что комплекс 2 усиливает противоопухолевое действие комплекса 1. Сочетанное введение комплекса 1 и комплекса 2 мышам способствует ингибированию роста опухоли, снижению количества метастазов в легких и при этом не влияет на массу тела животных. При этом наилучшие результаты были достигнуты при сочетанном введении комплекса 1 и комплекса 2, соответственно в дозах 25 и 100 мг/кг.

Пример. Проведена оценка противоопухолевой и антиметастатической активности фармацевтической композиции in vivo и ее терапевтических доз в модельных экспериментах на мышах с имплантированными опухолями меланомой В16 и эпидермоидной карциномой Lewis (активные субстанции 9 масс.%, β-циклодекстрин 91 масс.%).

Материалы и методы. Исследованы антипролиферативные и антиметастатические свойства фармацевтической композиции было проведено в двух сериях экспериментов на мышах с имплантированными опухолевыми клетками эпидермоидной карциномой Lewis и меланомой В16.

Первая серия эксперимента

Тест-система

Первая серия эксперимента была проведена на 100 мышах-самцах гибридах первого поколения CBA×C57Bl/6: на каждую группу приходилось по 25 животных. В заднюю лапку мышей имплантировали эпидермоидную карциному Lewis, в количестве ~106 клеток (~ 0,2 см3).

Дозы и схемы введения фармацевтической композиции

Исследуемую фармацевтическую композицию вводили ежедневно в течение 3-х недель после имплантации опухоли. Экспериментальные группы, дозы и количество животных указаны в таблице 10. Фармацевтическая композиция вводилась внутрижелудочно (в/ж) в количестве 0,2 мл на животное в виде суспензии. Мышам контрольной группы с имплантированной опухолью внутрижелудочно вводилась водная суспензия β-циклодекстрина в количестве 0,2 мл на животное.

Таблица 10. Экспериментальные группы

# Группы Количество
животных
1 Контроль - 25
2 Фармацевтическая композиция 17,5 мг/кг 25
3 Фармацевтическая композиция 35 мг/кг 25
4 Фармацевтическая композиция 70 мг/кг 25

Критерии оценки эффективности фармацевтической композиции

Антипролиферативная эффективность оценивалось по изменению объема новообразования, который определяется по формуле. Объем новообразования оценивали по следующей формуле (1):

V = a×b×c (1)

где: a, b и с – длина, ширина и высота опухолевого узла.

Сроки измерения: 11, 16 и 21 сутки после имплантации. В качестве дополнительных критериев использовали изменение массы тела животных и выживаемость в группах на поздних сроках.

Антиметастатическая эффективность оценивалась по количеству метастазов в легких, которое определяли через 3 недели после начала введения комплексов. Для этого у декапитированных под наркозом животных извлекали легкие и переносили в жидкость Буэна. Подсчет метастазов проводили визуально.

Вторая серия эксперимента

Тест-система

Вторая серия эксперимента была проведена на 100 мышах-самцах гибридах первого поколения CBA×C57Bl/6: на каждую группу приходилось по 25 животных. В заднюю лапку животных была имплантирована меланома B-16, в количестве ~106 клеток (~0,2 см3). Клетки мышиной меланомы B-16, приспособленная к выращиванию в монослое (банк клеток ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина) культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением антибиотиков (пенициллин-стрептомицин по 100 ЕД/мл), 10% эмбриональной телячьей (10% по объему) сыворотки при температуре +37º C в атмосфере, содержащей 5% СО2. В качестве культуральной посуды использовали стерильные матрацы площадью 75 см3 (Corning, Nunc). Пересев культуры проводился 3 раза в неделю.

Дозы и схемы введения фармацевтической композиции

Исследуемую фармацевтическую композицию вводили ежедневно в течение 3-х недель после имплантации опухоли. Экспериментальные группы, дозы и количество животных указаны в таблице 11. Фармацевтическая композиция вводилась внутрижелудочно (в/ж) в количестве 0,2 мл на животное в виде суспензии. Мышам контрольной группы с имплантированной опухолью внутрижелудочно вводилась водная суспензия β-циклодекстрина в количестве 0,2 мл на животное.

Таблица 11. Экспериментальные группы

# Группы Количество
животных
1 Контроль - 25
2 Фармацевтическая композиция 17,5 мг/кг 25
3 Фармацевтическая композиция 35 мг/кг 25
4 Фармацевтическая композиция 70 мг/кг 25

Критерии оценки эффективности фармацевтической композиции

Антипролиферативная эффективность оценивалось по изменению объема новообразования, который определяется по формуле. Объем новообразования оценивали по следующей формуле (1):

V = a×b×c (1)

где: a, b и с – длина, ширина и высота опухолевого узла.

Сроки измерения: 10, 15 и 20 сутки после имплантации. В качестве дополнительных критериев использовали изменение массы тела животных и выживаемость в группах на поздних сроках.

Антиметастатическая эффективность оценивалась по количеству метастазов в легких, которое определяли через 3 недели после начала введения комплексов. Для этого у декапитированных под наркозом животных извлекали легкие и переносили в жидкость Буэна. Подсчет метастазов проводили визуально.

Результаты

Первая серия эксперимента

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что введение мышам с имплантированной опухолевыми клетками эпидермоидной карциномой Lewis фармацевтической композиции значительно снижает у них объем опухоли по сравнению с контрольной группой (таблица 12) уже через 11 сутки после имплантации опухоли.

Таблица 12. Изменение объема опухоли (мм3) у животных в зависимости от дозы введения фармацевтической композиции

Дозы введения Сутки после имплантации опухоли
11 16 21
1 Контроль (β-циклодекстрин) 2266±202 4967±306 8157±555
2 Фармацевтическая композиция 17,5мг/кг 1620± 233 3766±365 6233±466
3 Фармацевтическая композиция 35 мг/кг 901±178* 2189±399* 3245±456*
4 Фармацевтическая композиция 70 мг/кг 1232±244* 2834±324* 4321±512*

*Здесь и далее достоверное (P<0,00001-0,05) отличие от контроля по критерию Стьюдента

Достоверные отличия от контроля были получены при введении мышам-опухоленосителям фармацевтической композиции в дозе 35 мг/кг и 70 мг/кг массы тела животных. При этом наилучшие результаты были достигнуты по снижению объема опухоли при введении фармацевтической композиции в дозе 35 мг/кг.

При анализе количества метастазов в легких было установлено достоверное их снижение по сравнению с контролем только для мышей-опухоленосителей тех групп, которым вводили фармацевтическую композицию в дозах 35 мг/кг и 70 мг/кг массы тела животных (таблица 13). Также следует отметить, что наилучшие результаты были достигнуты как и в случае со снижением объема опухоли при введении фармацевтической композиции в дозе 35 мг/кг. При введении фармацевтической композиции дозах 35 мг/кг и 70 мг/кг, соответственно у 4 и 2 мышей из групп в легких отсутствовали метастазы.

На протяжении всего эксперимента измерение массы тела подопытных мышей-опухоленосителей не показало существенного ее изменения при внутрижелудочном введении фармацевтической композиции (таблица 14).

Таблица 13. Количество метастазов в легких в зависимости от дозы введения фармацевтической композиции

Дозы введения Количество метастазов, шт.
1 Контроль (β-циклодекстрин) 48,4 ± 8,0
2 Фармацевтическая композиция 17,5 мг/кг 35,0 ± 5,9
3 Фармацевтическая композиция 35 мг/кг 21,1 ± 4,2* у 4 мышей в легких отсутствуют метастазы
4 Фармацевтическая композиция 70 мг/кг 28,8 ± 7,3* у 2 мышей в легких отсутствуют метастазы

Таблица 14. Изменение массы тела животных в зависимости от дозы введения фармацевтической композиции

Дозы введения Сутки после имплантации опухоли
7 11 16 21
1 Контроль (β-циклодекстрин) 20,2±0,5 21,4± 0,4 22,4±0,5 22,0±0,6
2 Фармацевтическая композиция 17,5 мг/кг 21,1±0,6 22,5±0,5 23,2±0,5 23,0±0,6
3 Фармацевтическая композиция 35 мг/кг 21,5±0,6 22,6±0,5 23,0±0,8 22,5±0,7
4 Фармацевтическая композиция 70 мг/кг 20,8±0,4 21,4±0,6 22,7±0,7 23,3±0,8

Результаты анализа выживаемости на поздних сроках показали, что введение фармацевтической композиции в дозах 35 мг/кг и 70 мг/кг массы тела животных способствует увеличению продолжительности жизни мышей с имплантированной опухолью (таблица 15). При этом наилучшие результаты по выживаемости мышей-опухоленосителей обеспечило введение фармацевтической композиции в дозе 35 мг/кг массы тела животных.

Таблица 15. Количество выживших и погибших животных в зависимости от дозы введения фармацевтической композиции

Дозы введения Погибшие Выжившие Соотношение выживших к погибшим
1 Контроль (β-циклодекстрин) 9 5 0,56
2 Фармацевтическая композиция 17,5 мг/кг 5 9 1,8
3 Фармацевтическая композиция 35 мг/кг 2 12 6,0
4 Фармацевтическая композиция 70 мг/кг 3 11 3,67

Вторая серия эксперимента

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что введение фармацевтической композиции мышам с имплантированной опухолевыми клетками меланомой В16 значительно снижает у них объем опухоли по сравнению с контрольной группой (таблица 16) уже через 10 сутки после имплантации опухоли.

Таблица 16. Изменение объема опухоли (мм3) у животных в зависимости от дозы введения фармацевтической композиции

Дозы введения Сутки после имплантации опухоли
10 15 20
1 Контроль (β-циклодекстрин) 2031±294 5012±299 7976±452
2 Фармацевтическая композиция 17,5мг/кг 1556± 310 3897±378 5986±502
3 Фармацевтическая композиция 35 мг/кг 1010±182* 2089±354* 3623±400*
4 Фармацевтическая композиция 70 мг/кг 1312±198* 2999±298* 4440±498*

*Здесь и далее достоверное (P<0,00001-0,05) отличие от контроля по критерию Стьюдента

Достоверные отличия от контроля были получены при введении фармацевтической композиции в дозах 35 мг/кг и 70 мг/кг. При этом наилучшие результаты были достигнуты по снижению объема опухоли при введении фармацевтической композиции в дозе 35 мг/кг.

При анализе количества метастазов в легких было установлено достоверное их снижение по сравнению с контролем только для мышей-опухоленосителей тех групп, которым вводили фармацевтическую композицию, в дозах 35 мг/кг и 70 мг/кг массы тела животных (таблица 17). Также следует отметить, что наилучшие результаты были достигнуты как и в случае со снижением объема опухоли при введении фармацевтической композиции в дозе 35 мг/кг. При введении фармацевтической композиции дозах 35 мг/кг и 70 мг/кг, соответственно у 3 и 2 мышей из групп в легких отсутствовали метастазы.

На протяжении всего эксперимента измерение массы тела подопытных мышей-опухоленосителей не показало существенного ее изменения при внутрижелудочном введении изучаемых комплексов (таблица 18).

Таблица 17. Количество метастазов в легких в зависимости от дозы введения фармацевтической композиции

Дозы введения Количество метастазов, шт.
1 Контроль (β-циклодекстрин) 37,9 ± 7,2
2 Фармацевтическая композиция 17,5 мг/кг 25,3 ± 4,8
3 Фармацевтическая композиция 35 мг/кг 12,5 ± 5,0* у 3 мышей в легких отсутствуют метастазы
4 Фармацевтическая композиция 70 мг/кг 19,2 ± 6,1* у 2 мышей в легких отсутствуют метастазы

Таблица 18. Изменение массы тела животных в зависимости от дозы введения фармацевтической композиции

Дозы введения Сутки после имплантации опухоли
7 11 16 21
1 Контроль (β-циклодекстрин) 21,5±0,4 22,1± 0,5 24,0±0,7 23,2±0,7
2 Фармацевтическая композиция 17,5 мг/кг 22,3±0,7 23,4±0,6 23,9±0,4 22,8±0,7
3 Фармацевтическая композиция 35 мг/кг 22,8±0,6 24,0±0,6 24,5±0,7 25,1±0,8
4 Фармацевтическая композиция 70 мг/кг 21,9±0,5 22,8±0,5 23,9±0,5 24,2±0,9

Результаты анализа выживаемости на поздних сроках показали, что введение фармацевтической композиции в дозах 35 мг/кг и 70 мг/кг массы тела животных способствует увеличению продолжительности жизни мышей с имплантированной опухолью (таблица 19). При этом наилучшие результаты по выживаемости мышей-опухоленосителей обеспечило введение фармацевтической композиции в дозе 35 мг/кг массы тела животных.

Таблица 19. Количество выживших и погибших животных в зависимости от дозы введения фармацевтической композиции

Дозы введения Погибшие Выжившие Соотношение выживших к погибшим
1 Контроль (β-циклодекстрин) 8 5 0,63
2 Фармацевтическая композиция 17,5 мг/кг 5 8 1,6
3 Фармацевтическая композиция 35 мг/кг 2 11 5,5
4 Фармацевтическая композиция 70 мг/кг 4 9 2,3

В результате проведенных исследований по противоопухолевому действию фармацевтической композиции установлено, что изучаемая комбинация обладает способностью ингибировать рост опухоли эпидермоидной карциномы Lewis и меланомы В16 у мышей. Ингибирование носит дозозависимый характер. При введении фармацевтической композиции в дозе 35 мг/кг массы тела животного ингибирование роста опухоли носит более выраженный характер, чем применение в дозах 17,5 мг/кг и 70 мг/кг. Но при введении мышам фармацевтической композиции в дозах 35 мг/кг и 70 мг/кг размеры опухолей статистически значимо отличаются от размеров контрольной группы, которым препарат не вводили. Изучение действия фармацевтической композиции на метастазирование при имплантации опухолевых клеток эпидермоидной карциномы Lewis и меланомы В16 мышам позволило установить, что предлагаемая комбинация в дозах 35 мг/кг и 70 мг/кг массы тела животных достоверно снижал количество метастазов в легких. Введение фармацевтической композиции в дозах 35 мг/кг и 70 мг/кг мышам-опухоленосителям способствует увеличению продолжительности жизни животных.

Таким образом, разработанная фармацевтическая композиция обладает выраженным антипролиферативным и антиместатическим действием в отношении опухолей эпидермоидной карциномы Lewis и меланомы В16.

Предлагаемое изобретение обеспечивает повышение эффективности, снижение применяемых доз и расширение арсенала средств для лечения различных видов опухолевых заболеваний.

Средство, обладающее антипролиферативными и антиметастатическими свойствами, состоящее из комплексов 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена с β-циклодекстринами,

при следующем содержании компонентов:

активные субстанции (3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена) 8-10 масс.%

β-циклодекстрин остальное,

при соотношении 3-(2 –фенилэтил)-2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена от 1:1 до 4:1.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к новому клатратному комплексу -, -, - или гидроксипропил- -циклодекстрина или арабиногалактана с 9-фенил-симм-октагидроселеноксантеном формулы (1) возможно в виде -кристаллической формы.

Изобретение относится к способу получения эндо-, экзо-тетрацикло-[4.5.1.02,6.08,11]додец-3(4)-ен-9-спиро-1'-(3'-селена)-циклопентанов общей формулы (1), заключающемуся в том, что региоизомерные (1:1) 9-метилен-эндо-, экзо-тетрацикло[5.4.1.02,6.0 8,11]додец-3(4)-ены подвергают взаимодействию с триэтилалюминием (AlEt3) в присутствии катализатора цирконацендихлорида (Cp2ZrCl2) при мольном соотношении 9-метилен-эндо-, экзо-тетрацикло[5.4.1.02,6.08,11]додец-3(4)-ены:AlEt 3:Cp2ZrCl2=10:(10-14):(0.6-1.0) в атмосфере аргона при комнатной температуре и атмосферном давлении в гексане в течение 7 ч с последующим добавлением к реакционной массе селена (Se), взятого в эквимольном по отношению к AlEt 3 количестве, и перемешиванием при температуре 80°С в течение 5-7 часов.

Изобретение относится к органической химии, в частности к технологии получения селеноксантенов, и может быть использовано в производстве пищевых добавок, лекарственных препаратов и косметических средств, проявляющих биологическую активность, широкого спектра действия.

Изобретение относится к улучшенному способу получения солей селенопирилия путем взаимодействия 1,5-дикетонов с селеноводородом, который получают при растворении селенида цинка в смеси уксусной кислоты, бромистого водорода и диэтилового эфира.

Изобретение относится к способу получения селенопиранов, проявляющих биологическую активность, а также к медицине, фармакологии, пищевой и косметической промышленности, и может быть использовано в производстве пищевых добавок и лекарственных препаратов широкого спектра действия.

Изобретение относится к соединению формулы I или его терапевтически приемлемым солям, где А1 представляет собой фурил, имидазолил, изотиазолил, изоксазолил, пиразолил, пирролил, тиазолил, тиадиазолил, тиенил, триазолил, пиперидинил, морфолинил, дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-ил, бензотиен-2-ил, бензотиазол-2-ил, тетрагидротиен-3-ил, [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиримидин-2-ил или имидазо[2,1-b][1,3]-тиазол-5-ил; где А1 незамещен или замещен одним, или двумя, или тремя, или четырьмя или пятью заместителями, независимо выбранными из R1, OR1, C(O)OR1, NHR1, N(R1)2, C(N)C(O)R1, C(O)NHR1, NHC(O)R1, NR1C(O)R1, (O), NO2, F, Cl, Br и CF3; R1 представляет собой R2, R3, R4 или R5; R2 представляет собой фенил; R3 представляет собой пиразолил или изоксазолил; R4 представляет собой пиперидинил; R5 представляет собой C1-C10алкил или C2-C10алкенил, каждый из которых не замещен или замещен заместителями, выбранными из R7, SR7, N(R7)2, NHC(O)R7, F и Cl; R7 представляет собой R8, R9, R10 или R11; R8 представляет собой фенил; R9 представляет собой оксадиазолил; R10 представляет собой морфолинил, пирролидинил или тетрагидропиранил; R11 представляет собой C1-C10алкил; Z1 представляет собой фенилен; Z2 представляет собой пиперидин, не замещенный или замещенный OCH3, или пиперазин; Z1A и Z2A оба отсутствуют; L1 представляет собой C1-C10алкил или C2-C10алкенил, каждый из которых не замещен или замещен R37B; R37B представляет собой фенил; Z3 представляет собой R38 или R40; R38 представляет собой фенил; R40 представляет собой циклогексил или циклогексенил; где фенилен, представленный Z1 не замещен или замещен группой OR41; R41 представляет собой R42 или R43; R42 представляет собой фенил, который не конденсирован или конденсирован с пирролилом, имидазолилом или пиразолом; R43 представляет собой пиридинил, который не конденсирован или конденсирован с пирролилом; где каждый вышеуказанный циклический фрагмент, представленный R2, R3, R4, R8, R9, R10, R38, R40, R42 и R43, независимо не замещен или замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из R57, OR57, С(О)OR57, F, Cl CF3 и Br; R57 представляет собой R58 или R61; R58 представляет собой фенил; R61 представляет собой C1-C10алкил; и где фенил, представленный группой R58, не замещен или замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из F и Cl.

Изобретение относится к новому средству, представляющему собой производные роданина формулы (I), для лечения опухолевых заболеваний различной локализации. Технический результат - средство антипролиферативного и антиметастатического действия для лечения опухолевых заболеваний.

Изобретение относится к соединению, выбранному из группы, состоящей из: 4-[(2-{[(2S)-2-фторпропил](пиридин-2-илсульфонил)амино}-4,5-диметилфенокси)метил]бензойной кислоты, 4-[(2-{[(2R)-2-фторпропил](пиридин-2-илсульфонил)амино}-4,5-диметилфенокси)метил]бензойной кислоты, 4-{[(6-{[(2R)-2-фторпропил](пиридин-2-илсульфонил)амино}-2,3-дигидро-1Н-инден-5-ил)окси)метил}бензойной кислоты, 4-[(5-хлор-2-{[(2S)-2-фторпропил](пиридин-2-илсульфонил)амино}-4-метилфенокси)метил]бензойной кислоты, 4-[(5-хлор-2-{[(2R)-2-фторпропил](пиридин-2-илсульфонил)амино}-4-метилфенокси)метил]бензойной кислоты, 4-[(2-{[(2R)-3-фтор-2-метилпропил](пиридин-2-илсульфонил)амино}-4,5-диметилфенокси)метил]бензойной кислоты, 4-[(2-{[(2S)-3-фтор-2-метилпропил](пиридин-2-илсульфонил)амино}-4,5-диметилфенокси)метил]бензойной кислоты, 4-{[(6-{[(2R)-2-фторбутил](пиридин-2-илсульфонил)амино}-2,3-дигидро-1Н-инден-5-ил)окси)метил}бензойной кислоты, 4-{[(6-{[(2S)-2-фторбутил](пиридин-2-илсульфонил)амино}-2,3-дигидро-1Н-инден-5-ил)окси)метил}бензойной кислоты, 4-[(5-хлор-2-{[(2R)-2-фторпропил](пиридин-3-илсульфонил)амино}-4-метилфенокси)метил] бензойной кислоты, 4-[(5-хлор-2-{[(2S)-2-фторпропил](пиридин-3-илсульфонил)амино}-4-метилфенокси)метил]бензойной кислоты, 4-[(2-{[(2S)-2-фторпропил](пиридин-3-илсульфонил)амино}-4,5-диметилфенокси)метил]бензойной кислоты, 4-[(2-{[(2R)-2-фторпропил](пиридин-3-илсульфонил)амино}-4,5-диметилфенокси)метил]бензойной кислоты, 4-{[(6-{[(2S)-2-фторпропил](пиридин-3-илсульфонил)амино}-2,3-дигидро-1Н-инден-5-ил)окси)метил}бензойной кислоты и 4-{[(6-{[(2R)-2-фторпропил](пиридин-3-илсульфонил)амино}-2,3-дигидро-1Н-инден-5-ил)окси)метил}бензойной кислоты, или его фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к новым гексафторизопропанолзамещенным производным циклогексана формулы (I), обладающим свойствами модулирования LXR - и/или LXR агонистов, а также к их фармацевтически приемлемым солям.

Изобретение относится к способу получения соединения формулы I в каждом случае в свободной форме и в форме соли, где Q означает СН или N, Y означает NO2 или CN, Z означает СНR3, О, NR3 или S, R1 и R2 каждый независимо друг от друга означает водород, незамещенный или R4-замещенный С1-С8алкил или вместе образуют алкиленовый мостик из двух или трех углеродных атомов, причем алкиленовый мостик может дополнительно содержать гетероатом, выбранный из группы, включающей NR5, О или S, R3 означает H, незамещенный или R4-замещенный С1-С12лкил, R4 означает незамещенный или замещенный арил или гетероарил, R5 означает Н или С1-С12алкил, путем превращения соединения формулы II, в котором R означает циклогексил, фенил, бензил или группу формулы (a), 1 означает уходящую группу, с помощью галогенирующего агента в соединение формулы IV, где Х означает галоген, превращение полученного соединения формулы IV путем взаимодействия с соединением формулы V в соединение формулы VI, которое затем превращают с помощью хлорирующего агента в соединение формулы I.

Настоящее изобретение относится к новому семейству ингибиторов протеинкиназ. В частности, настоящее изобретение относится к ингибиторам представителей семейств протеинкиназ Тес и Src общей формулы 1 и к их фармацевтически приемлемым солям.

Изобретение относится к медицине. Описано средство, представляющее собой комплексы 3--2-тиоксо-1,3 тиазолидин-4-она и 9-фенил-сим-октагидроселеноксантена с β-циклодекстринами. Указанная композиция может найти применение в медицине и фармакологии для лечения опухолевых заболеваний различной локализации. Средство стабильно при хранении. 19 табл., 1 пр.

Наверх