Т-клетки, модифицированные химерным рецептором антигена, нацеленным на cs1

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению химерных антигенных рецепторов, и может быть использовано в противоопухолевой терапии. Конструируют нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид химерного рецептора антигена, нацеленного на CS1. Вектором экспрессии трансдуцируют человеческие Т-клетки для получения популяции указанных клеток, экспрессирующих химерный рецептор антигена, нацеленный на CS1. Полученная популяция клеток эффективна в лечении онкологического заболевания, при котором экспрессируется CS1, например, такого как множественная миелома. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 12 ил., 5 табл., 5 пр.

.

 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

В данной заявке испрашивается приоритет обычной заявки США №62/088423, поданной 5 декабря 2014 г., озаглавленной «ПРИМЕНЕНИЕ ПРОИСХОДЯЩИХ ОТ ЦЕНТРАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПАМЯТИ Т-КЛЕТОК, МОДИФИЦИРОВАННЫХ ХИМЕРНЫМ РЕЦЕПТОРОМ АНТИГЕНА CS1, ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ», содержание которой включено в данный документ во всей ее полноте.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Иммунотерапии на основе опухолеспецифичных Т-клеток, включая терапии с использованием генетически модифицированных Т-клеток, исследовали в отношении противоопухолевого лечения. В некоторых случаях Т-клетки, используемые в таких терапиях, не остаются активными in vivo в течение достаточно длительного периода. В некоторых случаях противоопухолевая активность Т-клеток является относительно низкой. Следовательно, в данной области существует потребность в опухолеспецифичных терапиях онкологических заболеваний с более долговременным противоопухолевым функционированием.

Адоптивная T-клеточная терапия (ACT) с использованием Т-клеток, модифицированных химерным рецептором антигена (CAR), может обеспечивать безопасный и эффективный способ уменьшения частоты рецидивов разных онкологических заболеваний, так как Т-клетки с CAR могут быть генетически модифицированы для специфичного распознавания антигенно отличных популяций опухолей способом, не зависимым от МНС (главный комплекс гистосовместимости).

Множественная миелома (ММ) представляет собой B-клеточное злокачественное заболевание, характеризуемое клональным размножением плазматических клеток. На долю ММ приходится приблизительно 1 процент всех онкологических заболеваний и немного больше, чем 10 процентов гематологических злокачественных заболеваний в Соединенных Штатах. В одних Соединенных Штатах в этом году будет продиагностировано приблизительно 20000 новых случаев, и свыше 11000 людей умрут от этого заболевания. Современные терапии ММ часто индуцируют ремиссию, но почти все пациенты, в конечном счете, имеют рецидивы и умирают.

CS1 представляет собой гликопротеин поверхности клетки из семейства рецепторов сигнальных молекул активации лимфоцитов (SLAM), который сильно и селективно экспрессируется на нормальных плазматических клетках и клетках ММ, с меньшей экспрессией на клетках NK (природные киллеры) и слабой экспрессией или ее отсутствием на нормальных тканях. Элотузумаб (HuLuc63)-гуманизированное моноклональное антитело против CS1, которое вводится совместно с бортезомибом, дает у пациентов с рецидивом ММ больший или меньший PR (частичный ответ) у 48% пациентов. Высокая экспрессия CS1 на клетках ММ в сочетании с его ограничением плазматическими клетками в нормальной ткани делает CS1 целесообразной мишенью для терапии Т-клетками с CAR (Hsi et al. 2008 Clin Cancer Res 14: 2775).

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В данном документе описываются CAR, которые содержат внеклеточный домен, трансмембранный домен и внутриклеточной домен сигнализации. Внеклеточный домен включает CS1-специфичную область scFv или ее вариант и, возможно, спейсер, содержащий, например, часть человеческого домена Fc. Внеклеточный домен обеспечивает то, что CAR, при экспрессии на поверхности Т-клетки, направляет активность Т-клетки на клетки, экспрессирующие CS1-рецептор, экспрессируемый на поверхности ММ. Трансмембранный домен включает, например, трансмембранный домен CD4, трансмембранный домен CD8, трансмембранный домен CD28 или трансмембранный домен CD3. Внутриклеточный домен сигнализации включает домен сигнализации из зета цепи комплекса человеческого CD3 (CD3ζ) и один или более чем один костимулирующий домен, например, костимулирующий домен 4-1ВВ. Включение костимулирующего домена, такого как костимулирующий домен 4-1ВВ (CD137), последовательно с CD3ζ во внутриклеточную область обеспечивает то, что Т-клетки получают костимулирующие сигналы. Т-клетки, например, специфичные для пациента аутологичные Т-клетки, могут быть генетически модифицированы для экспрессии CAR, описанных в данном документе, и данные генетически модифицированные клетки могут быть размножены и использованы в ACT. Можно использовать разные поднаборы Т-клеток, включая и альфа бета Т-клетки, и гамма дельта Т-клетки. Кроме того, CAR могут экспрессироваться в других иммунных клеках, таких как клетки NK. Когда пациента лечат иммунной клеткой, экспрессирующей CAR, описанный в данном документе, клетка может быть аутологичной Т-клеткой или аллогенной Т-клеткой. В некоторых случаях используемые клетки представляют собой популяцию клеток, которая включает и CD4+, и CD8+ центральные Т-клетки памяти (T_CM), которые являются CD62L+, CCR7+, CD45RO+ и CD45RA-. Данная популяция клеток также может включать другие типы Т-клеток.

Описанный в данном документе CAR CS1 имеет некоторые полезные характеристики, например, стойкость и усиленную противоопухолевую активность после адоптивного переноса.

Т-клетки, экспрессирующие CAR, нацеленный на CS1, могут быть полезными при лечении онкологических заболеваний, таких как ММ, а также других онкологических заболеваний, при которых экспрессируется CS1. Таким образом, данное раскрытие включает способы лечения онкологического заболевания, при котором экспрессируется CS1, с использованием Т-клеток, экспрессирующих CAR, описанный в данном документе.

В данном документе описана молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая CAR, содержащий scFv против CS1 (например,

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSST INYAPSLKDKFIISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPDGNYWYFDVWGQGTLVT VSSGSTSGGGSGGGSGGGGSSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGIAVAWY QQKPGKVPKLLIYWASTRHTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYSSY PYTFGQGTKVEIK; SEQ ID NO: 1) или его вариант, имеющий 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот (например, замен); трансмембранный домен, выбранный из: трансмембранного домена CD4 или его варианта, имеющего 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот (например, замен), трансмембранного домена CD8 или его варианта, имеющего 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот (например, замен), трансмембранного домена CD28 или его варианта, имеющего 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот (например, замен), и трансмембранного домена CD3ζ или его варианта, имеющего 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот (например, замен); костимулирующий домен (например, костимулирующий домен CD28 или его вариант, имеющий 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот (например, замен); или костимулирующий домен 4-1ВВ или его вариант, имеющий 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот (например, замен); или и костимулирующий домен CD28 или его вариант, имеющий 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот (например, замен), и костимулирующий домен 4-1ВВ или его вариант, имеющий 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот (например, замен); и домен сигнализации CD3ζ или его вариант, имеющий 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот.

Данное раскрытие также включает молекулы нуклеиновых кислот, которые кодируют любые CAR, описанные в данном документе (например, векторы, которые включают последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую один из CAR), и выделенные Т-клетки, которые экспрессируют любые CAR, описанные в данном документе.

В данном документе описана молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая химерный рецептор антигена, где химерный рецептор антигена содержит: scFV против CS1, спейсерную область, трансмембранный домен CD28 или CD4, костимулирующий домен CD28 или костимулирующий домен 4-1ВВ, возможный линкер GlyGlyGly и домен сигнализации CD3ζ.

В одном воплощении CAR CS1 состоит из или содержит аминокислотную последовательность любого из SEQ ID NO: 31, 34, 37, 40, 43 и 46 (зрелый CAR, не имеющий сигнальной последовательности), или CAR CS1 состоит из или содержит аминокислотную последовательность любого из SEQ ID NO: 30, 33, 36, 39, 42 и 45 (незрелый CAR, имеющий сигнальную последовательность GMCSFRα (рецептор α гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора). CAR может экспрессироваться в форме, которая включает сигнальную последовательность, например, сигнальную последовательность человеческого рецептора альфа GM-CSF (MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP; SEQ ID NO: 26). CAR может экспрессироваться с дополнительными последовательностями, которые являются полезными для отслеживания экспрессии, например, с последовательностью перескакивания Т2А и усеченного EGFRt (рецептор t эпидермального фактора роста). Таким образом, CAR может содержать или состоять из аминокислотной последовательности любого из SEQ ID NO: 29-46, или может содержать или состоять из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичной любой из SEQ ID NO: 29-46. CAR может содержать или состоять из аминокислотной последовательности любого из SEQ ID NO: 29-46 с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами (предпочтительно консервативными аминокислотными заменами).

Также раскрыта популяция человеческих Т-клеток, трансдуцированных вектором, содержащим экспрессионную кассету, кодирующую химерный рецептор антигена CS1, описанный в данном документе (например, CAR, который содержит или состоит из аминокислотной последовательности любого SEQ ID NO: 29-46, или аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичной любой из SEQ ID NO: 29-46, или аминокислотной последовательности любого из SEQ ID NO: 29-46 с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами (предпочтительно консервативными аминокислотными заменами).

В разных воплощениях популяция человеческих Т-клеток представляет собой центральные Т-клетки памяти (T_CM), например, T_CM CD8+/CD4+.

Термин «модификация аминокислоты» относится к замене, вставке и/или делеции аминокислоты в последовательности белка или пептида. Термин «замена аминокислоты» или «замена» относится к замене аминокислоты в конкретном положении в последовательности родительского пептида или белка другой аминокислотой. Замену можно делать для замены аминокислоты в полученном в результате белке неконсервативным способом (т.е. посредством замены кодона от аминокислоты, принадлежащей к группе аминокислот, имеющих конкретный размер или характеристику, на аминокислоту, принадлежащую к другой группе) или консервативным способом (т.е. посредством замены кодона от аминокислоты, принадлежащей к группе аминокислот, имеющих конкретный размер или характеристику, на аминокислоту, принадлежащую к той же самой группе). Такая консервативная замена обычно приводит к меньшему изменению в структуре и функции образующегося в результате белка. Следующее представляет собой примеры разных групп аминокислот: 1) аминокислоты с неполярными группами R: аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, триптофан, метионин; 2) аминокислоты с незаряженными полярными группами R: глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин; 3) аминокислоты с заряженными полярными группами R (отрицательно заряженными при рН 6,0): аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота; 4) основные аминокислоты (положительно заряженные при рН 6,0): лизин, аргинин, гистидин (при рН 6,0). Другая группа может представлять собой те аминокислоты, которые имеют фенильные группы: фенилаланин, триптофан и тирозин.

Домен scFv против CS1

Домен scFv против CS1 может представлять собой любой scFv, который связывается с CS1. В некоторых случаях домен scFv против CS1 включает последовательность, которая является по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% идентичной или идентичной SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях scFv против CS1 имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен (предпочтительно консервативных) по сравнению с SEQ ID NO: 1. scFv может представлять собой гуманизированный scFv.

Спейсерная область

CAR, описанный в данном документе, может включать спейсерную область, расположенную между доменом нацеливания на CS1 (т.е. scFv против CS1 или его вариант) и трансмембранным доменом. Можно использовать множество разных спейсеров. Некоторые из них включают по меньшей мере часть человеческой области Fc, например, шарнирную часть человеческой области Fc или домен СН3, или их варианты. В Таблице 1 ниже приведены разные спейсеры, которые можно использовать в CAR, описанных в данном документе.

Некоторые спейсерные области включают всю шарнирную область иммуноглобулина (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) или ее часть, т.е. последовательность, которая попадает между доменами СН1 и СН2 иммуноглобулина, например, шарнир Fc IgG4 или шарнир CD8. Некоторые спейсерные области включают домен СН3 иммуноглобулина или и домен СН3, и домен СН2. Последовательности, происходящие из иммуноглобулина, могут включать одну или более чем одну модификацию аминокислот, например, 1, 2, 3, 4 или 5 замен, например, замены, которые уменьшают связывание вне мишени.

В некоторых воплощениях спейсер представляет собой шарнир/линкер, происходящий из IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, который включает один или более чем один аминокислотный остаток, замененный аминокислотным остатком, отличным от остатка, который присутствует в немодифицированном шарнире. Данный один или более чем один замененный аминокислотный остаток выбран из одного или более чем одного аминокислотного остатка в положениях 220, 226, 228, 229, 230, 233, 234, 235, 234, 237, 238, 239, 243, 247, 267, 268, 280, 290, 292, 297, 298, 299, 300, 305, 309, 218, 326, 330, 331, 332, 333, 334, 336, 339 или их комбинаций, но не ограничивается ими.

В некоторых воплощениях модифицированный шарнир или шарнир/линкер происходит из IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, который включает одну или более чем одну из следующих замен аминокислотных остатков: C220S, C226S, S228P, C229S, P230S, Е233Р, V234A, L234V, L234F, L234A, L235A, L235E, G236A, G237A, P238S, S239D, F243L, P247I, S267E, H268Q, S280H, K290S, K290E, K290N, R292P, N297A, N297Q, S298A, S298G, S298D, S298V, Т299А, Y300L, V305I, V309L, Е318А, K326А, K326W, K326Е, L328F, A330L, A330S, A331S, P331S, I332E, Е333А, E333S, E333S, K334А, A339D, A339Q, P396L или их комбинаций, но не ограничивается ими.

В некоторых воплощениях модифицированный шарнир происходит из области шарнира/СН2/СН3 человеческого IgG4, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 или 11, или аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% идентична SEQ ID NO: 10 или 11.

В некоторых воплощениях модифицированный шарнир происходит из IgG4, который включает один или более чем один аминокислотный остаток, замененный аминокислотным остатком, отличным от остатка, присутствующего в немодифицированном шарнире. Данный один или более чем один замененный аминокислотный остаток выбран из одного или более чем одного аминокислотного остатка в положениях 220, 226, 228, 229, 230, 233, 234, 235, 234, 237, 238, 239, 243, 247, 267, 268, 280, 290, 292, 297, 298, 299, 300, 305, 309, 218, 326, 330, 331, 332, 333, 334, 336, 339 или их комбинаций, но не ограничивается ими.

В некоторых воплощениях модифицированный шарнир происходит из IgG4, который включает одну или более чем одну из следующих замен аминокислотных остатков: 220S, 226S, 228Р, 229S, 230S, 233Р, 234А, 234V, 234F, 234А, 235А, 235Е, 236А, 237А, 238S, 239D, 243L, 247I, 267Е, 268Q, 280Н, 290S, 290Е, 290N, 292Р, 297А, 297Q, 298А, 298G, 298D, 298V, 299А, 300L, 305I, 309L, 318А, 326А, 326W, 326Е, 328F, 330L, 330S, 331S, 331S, 332Е, 333А, 333S, 333S, 334А, 339D, 339Q, 396L и их комбинаций, но не ограничивается ими, где аминокислота в немодифицированном шарнире заменяется идентифицированными выше аминокислотами в указанном положении. В одном случае данная последовательность включает следующие аминокислотные замены: S228P, L235E и N297Q.

Для обсуждавшихся в данном документе положений аминокислот в иммуноглобулине нумерация осуществляется согласно индексу EU (Европейский Союз) или схеме нумерации EU (Kabat et al. 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, являющаяся тем самым включенной посредством ссылки). Индекс EU или индекс EU по Kabat, или схема нумерации EU относится к нумерации антитела по EU (Edelman et al. 1969 Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85).

Шарнирная/линкерная область также может содержать шарнирную область IgG4, имеющую последовательность ESKYGPPCPSCP (SEQ ID NO: 4) или ESKYGPPCPPCP (SEQ ID NO: 3).

Шарнирная/линкерная область также может содержать последовательность ESKYGPPCPPCP (SEQ ID NO: 3), с последующей линкерной последовательностью GGGSSGGGSG (SEQ ID NO: 2), с последующей последовательностью СН3 IgG4 GQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 12). Таким образом, вся линкерная/спейсерная область может содержать последовательность:

ESKYGPPCPPCPGGGSSGGGSGGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 11). В некоторых случаях спейсер имеет 1, 2, 3, 4 или 5 замен одиночных аминокислот (например, консервативных замен) по сравнению с SEQ ID NO: 11. В некоторых случаях шарнирная/линкерная область Fc IgG4 мутируется в двух положениях (L235E; N297Q) таким способом, который уменьшает связывание посредством рецепторов Fc (FcR).

Трансмембранная область

Можно использовать целый ряд трансмембранных доменов. Таблица 2 включает примеры подходящих трансмембранных доменов. Когда присутствует спейсерная область, трансмембранный домен локализуется ближе к карбокси концу относительно спейсерной области.

Костимулирующий домен

Костимулирующий домен может представлять собой любой домен, который подходит для применения с доменом сигнализации CD3ζ. В некоторых случаях костимулирующий домен представляет собой костимулирующий домен CD28, который включает последовательность, которая является по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% идентичной или полностью идентичной (SEQ ID NO: 23; аминокислотная замена LL до GG дважды подчеркнута). В некоторых случаях домен косигнализации CD28 имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен (предпочтительно консервативных и предпочтительно не в подчеркнутой последовательности GG) по сравнению с SEQ ID NO: 23. В некоторых случаях домен косигнализации представляет собой домен косигнализации 4-1ВВ, который включает последовательность, которая является по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% идентичной или идентичной KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (SEQ ID NO: 24). В некоторых случаях домен косигнализации 4-1ВВ имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен (предпочтительно консервативных) по сравнению с SEQ ID NO: 24.

Костимулирующий(щие) домен(ны) расположен(жены) между трансмембранным доменом и доменом сигнализации CD3ζ. Таблица 3 включает примеры подходящих костимулирующих доменов вместе с последовательностью домена сигнализации CD3ζ.

В разных воплощениях костимулирующий домен выбран из группы, состоящей из костимулирующего домена, показанного в Таблице 3, или его варианта, имеющего 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот, костимулирующего домена CD28 или его варианта, имеющего 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот, костимулирующего домена 4-1ВВ или его варианта, имеющего 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот, и костимулирующего домена ОХ40 или его варианта, имеющего 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот. В некоторых воплощениях присутствует костимулирующий домен 4-1ВВ или его вариант, имеющий 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот. В некоторых воплощениях имеются два костимулирующих домена, например, костимулирующий домен CD28 или его вариант, имеющий 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот (например, замен), и костимулирующий домен 4-1ВВ или его вариант, имеющий 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот (например, замен). В разных воплощениях 1-5 (например, 1 или 2) модификаций аминокислот представляют собой замены. Костимулирующий домен находится ближе к амино концу относительно домена сигнализации CD3ζ, и в некоторых случаях между костимулирующим доменом и доменом сигнализации CD3ζ располагается короткий линкер, состоящий из 2-10, например, 3 аминокислот (например, GGG).

Домен сигнализации CD3ζ

Домен сигнализации CD3ζ может представлять собой любой домен, который подходит для применения с доменом сигнализации CD3ζ. В некоторых случаях домен сигнализации CD3ζ включает последовательность, которая является по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% идентичной или полностью идентичной RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQE GLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 21). В некоторых случаях домен сигнализации CD3ζ имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен (предпочтительно консервативных) по сравнению с SEQ ID NO: 21.

Усеченный EGFR

После домена сигнализации CD3ζ; может следовать последовательность перескакивания рибосомы (например, LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR; SEQ ID NO: 27) и усеченный EGFR, имеющий последовательность, которая является по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% идентичной или полностью идентичной: LVTSLLLCELPHPAFLLIPRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFR GDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSL AWSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSC KATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECI QCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADA GHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM (SEQ ID NO: 28). В некоторых случаях усеченный EGFR имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен (предпочтительно консервативных) по сравнению с SEQ ID NO: 28.

CAR CS1

CAR CS1 может включать последовательность, которая является по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% идентичной или полностью идентичной аминокислотной последовательности, показанной на Фиг. 2, Фиг. 6, Фиг. 7, Фиг. 8, Фиг. 9 или Фиг. 10 (SEQ ID NO: 29-46; либо включающие, либо исключающие сигнальную последовательность GMCSFRa, и либо включающие, либо исключающие последовательность перескакивания рибосомы Т2А и усеченный EGFRt).

Среди CAR, нацеленных на CS1, описанных в данном документе, находятся CAR, обобщенные в Таблице 4, в которой указываются спейсерная область, трансмембранный домен и костимулирующий(щие) домен(ны) для каждого CAR.

* SEQ ID NO для: полной показанной последовательности, включающей сигнальную последовательность GMCSFRa, Т2А и EGFRt // последовательности, включающей сигнальную последовательность GMCSFRa, но исключающей Т2А и EGFRt // последовательности, исключающей сигнальную последовательность GMCSFRa, Т2А и EGFRt.

ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фиг. 1 представляет собой схематическую иллюстрацию лентивирусного вектора, экспрессирующего CAR CS1 (CS1scFv-IgG4(HL-CH3)-CD28gg-Zeta-(CO)-T2A-EGFRt_epHIV7). Конструкция CAR CS1 включает: сигнальную последовательность GMCSF, scFv против CS1, шарнирную область IgG4, линкер, домен СН3, костимулирующий домен CD28 и домен сигнализации CD3ζ. После конструкции CAR следует последовательность перескакивания рибосомы Т2А и затем последовательность, кодирующая суицидный ген EGFRt. Молекулы CAR и EGFRt экспрессируются от одного транскрипта.

На Фиг. 2 показана аминокислотная последовательность CAR CS1, которая включает сигнальный пептид, последовательность перескакивания рибосомы и EGFRt (SEQ ID NO: 29).

Фиг. 3 представляет собой пару графиков, иллюстрирующих результаты исследований, показывающих то, что T_CM, перенаправленные на CAR CS1, демонстрировали цитотоксичность против клеток ММ. Цитотоксичность размноженных Т-клеток с CAR CS1 оценивали с использованием 4-часовых анализов высвобождения ⁵¹Cr после совместного культивирования с клетками-мишенями, меченными ⁵¹Cr. В качестве позитивных контролей использовали LCL, экспрессирующие OKT3, так как они занимают все TCR (рецептор Т-клетки), и CS1-негативные клетки AML (KG1a) использовали в качестве негативных контролей. CAR CS1, но не Т-клетки с имитацией модификации, не являющиеся генетически модифицированными, демонстрировали специфичную цитотоксичность против клеток ММ.

На Фиг. 4 показаны результаты исследований, демонстрирующих то, что клетки Т_CM. перенаправленные на CAR CS1, демонстрировали эффекторную функцию в ответ на стимуляцию клеток ММ. Т-клетки с CAR CS1 (10⁵) совместно культивировали 6 часов в 96-луночных планшетах для культуры ткани с 10⁵ клеток MM.1S в качестве стимуляторов. Дегранулирование 107а и внутриклеточную продукцию IFN-гамма (интерферон-гамма) анализировали проточной цитометрией. Большинство Т-клеток с CAR, идентифицированных эрбитукс, индуцировали к дегранулированию после занятия клетками ММ, и IFN-гамма-позитивные клетки выявляли в ответ на стимуляцию антигеном.

На Фиг. 5 показаны результаты исследований, показывающих то, что клетки Т_CM, перенаправленные на CAR CS1, устраняют множественную миелому in vivo. Приблизительно 2×10⁶ клеток MM.1S, экспрессирующих люциферазу светляка, инокулировали в мышей NSG посредством инъекции в большую берцовую кость. Через 7 суток после инокуляции опухоли 1×10⁶ Т-клеток с CAR CS1 инфундировали мышам, несущим опухоль, посредством внутривенной инъекции. Опухолевую нагрузку отслеживали визуализацией Xenogen® один раз в неделю. Мышей, которые получали клетки, не подвергавшиеся генетической модификации, использовали в качестве контроля. Т-клетки с CAR CS1 полностью устраняли опухоль ММ через 14 суток после инфузии Т-клеток, тогда как Т-клетки, не подвергавшиеся генетической модификации, не имеют влияния на ингибирование опухоли.

На Фиг. 6 показана аминокислотная последовательность CS1scFv-IgG4(HL-CH3)-CD4tm-41BB-Zeta-T2A-EGFRt (SEQ ID NO: 32).

На Фиг. 7 показана аминокислотная последовательность CS1scFv-IgG4(L235E,N297Q)-CD4tm-41BB-Zeta-T2A-EGFRt (SEQ ID NO: 35).

На Фиг. 8 показана аминокислотная последовательность CS1scFv-IgG4(L235E, N297Q)-CD28tm-CD28gg-Zeta-T2A-EGFRt (SEQ ID NO: 38).

На Фиг. 9 показана аминокислотная последовательность CS1scFv-Линкер-CD4tm-41BB-Zeta-T2A-EGFRt (SEQ ID NO: 41).

На Фиг. 10 показана аминокислотная последовательность CS1scFv-Линкер-CD28tm-CD28gg-Zeta-T2A-EGFRt (SEQ ID NO: 44).

Фиг. 11 представляет собой полную нуклеотидную последовательность CS1scFv-IgG4(HL-CH3)-CD28gg-Zeta-T2A-EGFRt_epHIV7 (SEQ ID NO: 47).

На Фиг. 12 показаны результаты исследований, показывающих то, что клетки Т_CM, перенаправленные на CAR CS1, устраняют множественную миелому in vivo. 2×10⁶ клеток MM.1S GFPffluc+ инокулировали в мышей NSG посредством инъекции в большую берцовую кость в сутки -7. 1×10⁶ Т-клеток CAR CS1+, происходящих из центральных Т-клеток памяти (Т_СM), внутривенно инфундировали мышам, несущим опухоль, в сутки 0. Мышей, не получавших Т-клетки или получавших нетрансдуцированные T_CM от того же самого донора, использовали в качестве негативных контролей. Сигналы опухоли отслеживали посредством биофотонной визуализации. Показаны средние значения плюс/минус SEM (стандартная ошибка среднего) фотонов/с от многих мышей. CAR представляли собой CAR Фиг. 2 (СН2 CD28); Фиг. 6 (СН2 41ВВ); Фиг. 8 (EQ CD28); Фиг. 7 (EQ 41ВВ); Фиг. 10 (L CD28) и Фиг. 9 (L CD4 IBB).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Ниже описана структура, конструирование и характеризация нескольких CS1-специфичных химерных рецепторов антигена («CAR»). CAR представляет собой рекомбинантную биомолекулу, которая содержит внеклеточный домен распознавания, трансмембранную область и внутриклеточный домен сигнализации. Термин «антиген», следовательно, не ограничивается молекулами, которые связываются антителами, но ограничивается любой молекулой, которая может специфично связываться с любым рецептором. «Антиген», таким образом, относится к домену, распознаваемому CAR. Внеклеточный домен распознавания (также именуемый внеклеточным доменом или просто элементом распознавания, который он содержит) содержит элемент распознавания, который специфично связывается с молекулой, присутствующей на клеточной поверхности клетки-мишени. Трансмембранная область заякоривает CAR в мембране. Домен внутриклеточной сигнализации содержит домен сигнализации из зета-цепи человеческого комплекса CD3 и возможно содержит один или более чем один костимулирующий домен сигнализации. CAR может и связываться с антигеном, и трансдуцировать активацию Т-клеток, независимо от ограничения МНС. Таким образом, CAR представляют собой «универсальные» иммунорецепторы, которыми можно лечить популяцию пациентов с антиген-позитивными опухолями, независимо от их генотипа HLA (антиген лейкоцитов человека). Адоптивная иммунотерапия с использованием Т-лимфоцитов, которые экспрессируют опухолеспецифичный CAR, может быть мощной терапевтической стратегией для лечения онкологического заболевания.

В некоторых случаях CAR CS1 можно продуцировать с использованием вектора, в котором за открытой рамкой считывания CAR следует последовательность перескакивания рибосомы Т2А и усеченный EGFR (EGFRt), у которого отсутствует цитоплазматический хвост сигнализации. При данной организации коэкспрессия EGFRt дает инертный неиммуногенный маркер поверхности, который обеспечивает точное измерение генно-модифицированных клеток и обеспечивает позитивный отбор генно-модифицированных клеток, а также эффективное отслеживание терапевтических Т-клеток in vivo после адоптивного переноса. Эффективное осуществление контроля пролиферации для того, чтобы избежать цитокиновой бури и токсичности вне мишени, является важной проблемой для успеха Т-клеточной иммунотерапии. EGFRt, включенный в лентивирусный вектор с CAR CS1, может действовать в качестве суицидного гена для устранения Т-клеток CAR+ в случаях токсичности, связанной с лечением.

Описанный здесь CAR может быть получен любыми способами, известными в данной области, хотя предпочтительно он продуцируется с использованием методик генной инженерии. Нуклеиновые кислоты, кодирующие несколько областей химерного рецептора, могут быть получены и собраны в полную кодирующую последовательность стандартными методиками молекулярного клонирования, известными в данной области (скрининг геномной библиотеки, ПЦР (полимеразная цепная реакция) с перекрывающимися праймерами, лигирование с помощью праймеров, сайт-направленный мутагенез и т.д.), в зависимости от того, что является удобным. Образующуюся кодирующую область предпочтительно вставляют в экспрессионный вектор и используют для трансформации подходящей экспрессионной линии клеток-хозяев, предпочтительно, линии клеток Т-лимфоцитов и наиболее предпочтительно - линии аутологичных клеток Т-лимфоцитов.

Разные поднаборы Т-клеток, выделенных из пациента, можно трансдуцировать вектором для экспрессии CAR. Центральные Т-клетки памяти представляют собой один полезный поднабор Т-клеток. Центральные Т-клетки памяти могут быть выделены из одноядерных клеток периферической крови (РВМС) посредством отбора на клетки CD45RO+/CD62L+, используя, например, прибор CliniMACS® для иммуномагнитного отбора клеток, экспрессирующих желательные рецепторы. Клетки, обогащенные в отношении центральных Т-клеток памяти, могут быть активированы с использованием антител против CD3/CD28, трансдуцированы, например, лентивирусным вектором, который направляет экспрессию CAR CS1, а также неиммуногенного поверхностного маркера для выявления in vivo, устранения и потенциального отбора ex vivo. Активированные/генетически модифицированные центральные Т-клетки памяти с CAR CS1 могут быть размножены in vitro с использованием IL-2/IL15 и затем подвергнуты криоконсервации.

Пример 1: конструирование и структура epHIV7, используемого для экспрессии CS1-специфичного CAR

Плазмида pHIV7 представляет собой родительскую плазмиду, из которой могут быть получены клинические векторы, экспрессирующие CAR CS1. Вектор epHIV7, используемый для экспрессии CAR, был получен из вектора pHIV7 (Wang et al. 2011 Blood 118:1255). Важно то, что в данном векторе для управления экспрессией CAR используется человеческий промотор EF1. И 5', и 3'-последовательности вектора были получены из pv653RSN, который был ранее получен из провируса НХВс2. Вытесняемые последовательности ДНК полипуринового тракта (сРРТ) получали из штамма pNL4-3 ВИЧ-1 из репозитория реактивов СПИД NIH (Национальные институты здравоохранения США).

Конструирование pHIV7 проводили следующим образом. Вкратце, pv653RSN, содержащий 653 п. о. из gag-pol плюс 5' и 3' длинных концевых повторов (LTR) с расположенным между ними геном SI-3-неомицинфосфотрансферазы (Neo), субклонировали в pBluescript следующим образом: на стадии 1, последовательности от 5' LTR до элемента, отвечающего на rev (RRE), давали р5' HIV-1 51, и затем 5' LTR модифицировали посредством удаления последовательностей выше ТАТА-бокса и лигировали сначала с энхансером CMV (цитомегаловирус) и затем с репликатором SV40 (p5'HIV-2). На стадии 2 после клонирования 3' LTR в pBluescript с получением p3'HIV-1 получали делецию в 400 п.о. в 3' LTR энхансера/промотора для удаления цис-регуляторных элементов в U3 ВИЧ и образования p3'HIV-2. На стадии 3 фрагменты, выделенные из p5'HIV-3 и p3'HIV-2, лигировали с получением pHIV-3. На стадии 4 p3'HIV-2 модифицировали далее посредством удаления дополнительных расположенных выше последовательностей ВИЧ с получением p3'HIV-3, и фрагмент BamHI-Sall из 600 п.о., содержащий WPRE, добавляли к p3'HIV-3 с получением p3HIV-4. На стадии 5 размер RRE pHIV3 уменьшали посредством ПЦР и лигировали с 5'-фрагментом из pHIV-3 (не показано) и с p3'HIV-4 с получением pHIV-6. На стадии 6 фрагмент BgIII-BamHI из 190 п.о., содержащий вытесняемую последовательность ДНК сРРТ из pNL4-3 (55) ВИЧ-1, амплифицировали из pNL4-3 и помещали между последовательностями RRE и WPRE в pHIV-б с получением pHIV-7. Данную родительскую плазмиду pHIV7-GFP (GFP - зеленый флуоресцентный белок) использовали для упаковки родительского вектора с использованием четырехплазмидной системы.

Для эффективной упаковки вирусного генома в вектор требуется сигнал упаковки - пси ψ. RRE и WPRE усиливают транспорт РНК-транскрипта и экспрессию трансгена. Было продемонстрировано то, что вытесняемая последовательность в комбинации с WPRE усиливает эффективность трансдукции лентивирусного вектора в клетках млекопитающих.

Хелперные функции, требующиеся для продукции вирусного вектора, разделены на три разные плазмиды для уменьшения вероятности получения лентивируса, компетентного в отношении репликации, посредством рекомбинации: 1) pCgp кодирует белок gag/pol, требующийся для сборки вирусного вектора; 2) pCMV-Rev2 кодирует белок Rev, который действует на последовательность RRE, помогая в транспортировке вирусного генома для эффективной упаковки; и 3) pCMV-G кодирует гликопротеин вируса везикулостоматита (VSV), который требуется для инфективности вирусного вектора.

Существует минимальная гомология последовательности ДНК между геномом вектора, кодируемым pHIV7, и хелперными плазмидами. Области гомологии включают область сигнала упаковки из приблизительно 600 нуклеотидов, расположенную в последовательности gag/pol хелперной плазмиды pGgp; последовательность промотора CMV во всех трех хелперных плазмидах и последовательность RRE в хелперной плазмиде pCgp. Очень маловероятно то, что рекомбинантный вирус, компетентный в отношении репликации, мог бы быть генерирован из-за гомологии в данных областях, посколько это потребовало бы многих событий рекомбинации. Дополнительно, любые полученные в результате рекомбинанты не имели бы функциональных LTR и последовательностей tat, требующихся для репликации лентивируса.

Промотор CMV был заменен промотором EF1α-HTLV (EF1p), и новая плазмида была названа epHIV7. EF1p имеет 563 п.о., и он был введен в epHIV7 с использованием NruI и NheI после того, как промотор CMV был вырезан.

Из данной системы был удален лентивирусный геном, за исключением gag/pol и rev, которые необходимы для патогенности вируса дикого типа и требуются для продуктивной инфекции клеток-мишеней. Кроме того, конструкция вектора epHIV7 не содержит интактного промотора 3'LTR, таким образом, что образующийся в результате экспрессируемый и подвергающийся обратной транскрипции провирусный ДНК-геном в клетках-мишенях будет иметь неактивные LTR. В результате этой конструкции последовательности, происходящие от ВИЧ-1, не будут транскрибироваться от провируса, и только терапевтические последовательности будут экспрессироваться от их соответствующих промоторов. Ожидается то, что удаление промоторной активности LTR в векторе SIN значительно понизит возможность непреднамеренной активации генов хозяина. В Таблице 5 обобщены разные регуляторные элементы, присутствующие в epHIV7.

Фиг. 1 представляет собой схематическое изображение CAR CS1 (CS1scFv-IgG4(HL-CH3)-CD28gg-Zeta(CO)-T2A-EGFRt_epHIV7) - лентивирусного вектора, содержащего конструкцию CAR, состоящую scFv против CS1, шарнирной области IgG4, линкера, костимулирующего домена CD28 и домена сигнализации CD3ζ. После данной конструкции CAR следует последовательность перескакивания рибосомы Т2А и затем кодирующая последовательность суицидного гена EGFRt. Молекулы CAR и EGFRt экспрессируются от одного транскрипта. Вся нуклеотидная последовательность вектора представлена на Фиг. 11, и в Таблице 5 представлено расположение разных элементов вектора.

Пример 2: получение векторов для трансдукции Т-клеток пациента

Для каждой плазмиды (CS1 CAR_epHIV7; pCgp; pCMV-G и pCMV-Rev2) генерируется фонд вакцинных штаммов, который используется для инокуляции ферментера с получением достаточного количества плазмидной ДНК. Плазмидная ДНК тестируется на идентичность, стерильность и уровень эндотоксинов до ее применения в продуцировании лентивирусного вектора.

Вкратце, клетки размножают из рабочей клетки 293Т (WCB), которая была протестирована для подтверждения стерильности и отсутствия вирусного загрязнения. Флакон с клетками 293Т из WCB 293Т оттаивают. Клетки выращивают и размножают до существования достаточного числа клеток для засева подходящего числа 10-слойных клеточных фабрик (CF) для продукции вектора и поддержания ряда клеток. Для продукции можно использовать один ряд клеток.

Лентивирусный вектор продуцируется в подпартиях из вплоть до 10 CF. В ту же самую неделю можно продуцировать две подпартии, что приводит к продукции приблизительно 20 л лентивирусного супернатанта/неделю. Материал, полученный из всех подпартий, объединяли во время фазы последующей переработки для того, чтобы произвести одну партию продукта. Клетки 293Т высевали в CF в среду для 293Т (DMEM (среда Игла, модифицированная по Дульбекко) с 10% FBS (фетальная телячья сыворотка)). Фабрики помещали в инкубатор при 37°C и горизонтально выравнивали для того, чтобы получать равное распределение клеток на всех слоях CF. Через двое суток клетки трансфицировали четырьмя лентивирусными плазмидами, описанными выше, с использованием способа с CaPO₄, который включает смесь Tris:EDTA, 2М CaCl₂, 2× HBS и четырех ДНК-плазмид. В сутки 3 после трансфекции супернатант, содержащий секретированные лентивирусные векторы, отбирали, очищали и концентрировали. После удаления супернатанта из CF послепроизводственные клетки собирали из каждой CF. Клетки трипсинизировали из каждой фабрики и собирали центрифугированием. Клетки ресуспендировали в среде для замораживания и криоконсервировали. Данные клетки позднее использовали для тестирования лентивируса, компетентного в отношении репликации (RCL).

Для очистки и приготовления векторов в виде препарата неочищенный супернатант осветляли мембранной фильтрацией для удаления обломков клеток. ДНК клетки-хозяина и остаточную плазмидную ДНК деградировали эндонуклеазным расщеплением (Бензоназа®). Вирусный супернатант осветляли от клеточных обломков с использованием 0,45 мкм фильтра. Осветленный супернатант отбирали в предварительно взвешенный контейнер, в который добавляется Бензоназа® (конечная концентрация 50 U(ед)/мл). Эндонуклеазное расщепление остаточной плазмидной ДНК и геномной ДНК хозяина проводится при 37°C в течение 6 ч. Использовали исходное концентрирование супернатанта, обработанного эндонуклеазой, посредством ультрафильтрации с тангенциальным потоком (TFF) для удаления остаточных низкомолекулярных компонентов из неочищенного супернатанта при ~20-кратном концентрировании вируса. Осуществляли циркуляцию осветленного вирусного супернатанта, обработанного эндонуклеазой, через картридж на основе полых волокон с NMWCO (номинальное отсечение по молекулярной массе) 500 кДа при скорости тока, разработанной для поддержания срезывающего усилия ~4000 с^-1 или менее при максимизации скорости потока. Диафильтрацию супернатанта, обработанного нуклеазой, инициировали во время процесса концентрирования для поддержания производительности картриджа. С использованием 4% лактозы в PBS (фосфатно-солевой буферный раствор) в качестве диафильтрационного буфера устанавливали скорость замены пермеата 80%. Вирусный супернатант доводили до целевого объема, представляющего собой 20-кратное концентрирование неочищенного супернатанта, и диафильтрацию продолжали в течение 4 дополнительных объемов обмена со скоростью замены пермеата 100%.

Дополнительное концентрирование вирусного продукта осуществляли с использованием методики высокоскоростного центрифугирования. Каждую подпартию лентивируса осаждали с использованием центрифуги Sorvall RC-26 plus при скорости 6000 об./мин (6088 RCF (относительная центробежная сила)) при 60°C в течение 16-20 ч. Вирусный осадок из каждой подпартии затем разводили в объеме 50 мл с использованием 4% лактозы в PBS. Растворенный в данном буфере осадок представляет собой конечную композицю для препарата вируса. Весь способ концентрирования вектора приводил приблизительно к 200-кратному уменьшению объема. После завершения получения всех подпартий материал помещали при -80°C, тогда как образцы из каждой подпартии тестировали на стерильность. После подтверждения стерильности образца подпартии быстро оттаивали при 37°C с частым встряхиванием. Вещество затем объединяли и вручную аликвотировали в боксе микробиологической безопасности класса II типа А/В3 в помещении для вирусных векторов. Использовали конфигурацию заполнения концентрированного лентивируса 1 мл в стерильных криофлаконах с внешней резьбой и О-кольцом класса 6 USP (Фармакопея США). Центр разработки прикладных технологий (CATD) систем контроля качества (QS) СОН (City of Hope) выпустил все материалы согласно Политике и стандартным технологическим регламентам для CBG (Клеточная биология и генетика) и в соответствии с современными надлежащими производственными практиками (cGMP).

Для обеспечения чистоты препарата лентивирусного вектора он тестируется на остаточные загрязнения ДНК хозяина и перенос остаточной ДНК хозяина и плазмиды. Наряду с другими анализами, идентичность вектора оценивается посредством ПЦР-ОТ (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) для обеспечения того, что присутствует правильный вектор. Для вектора, предназначенного для применения в данном исследовании, удовлетворяются все критерии выпуска.

Пример 3: приготовление клеток T_CM, подходящих для применения в ACT

Т-лимфоциты получают от пациента посредством лейкафереза, и набор подходящих аллогенных или аутологичных Т-клеток, например, центральных Т-клеток памяти (T_CM), генетически изменяют для экспрессии CAR, затем вводят обратно пациенту посредством любых клинически приемлемых способов для достижения противоопухолевой терапии.

Т_CM, которые являются CD8+, выделяют по существу, как описано в Wang et al. (J Immunology 35:689, 2012). Вкратце, в сутки лейкафереза РВМС (одноядерные клетки периферической крови) выделяли посредством центрифугирования в градиенте плотности над Ficoll-Paque, с последующими двумя промывками в PBS/EDTA. РВМС затем один раз промывали в PBS, ресуспендировали в средах X Vivo 15, содержащих 10% фетальной телячей сыворотки (FCS), переносили в 300 см³ мешок для переноса и хранили на 3-D (трехмерный) ротаторе в течение ночи при комнатной температуре (RT). На следующие сутки вплоть до 5×10⁹ РВМС инкубировали в 300 см³ мешке для переноса с микрошариками клинического класса качества, покрытыми антителами против CD4 (2,5 мл), против CD14 (1,25 мл) и против CD45RA (2,5 мл) (Miltenyi Biotec) в течение 30 минут при RT в X Vivo15, содержащей 10% FCS. Затем немедленно осуществляли обеднение клетками CD4+, CD14+ и CD45RA+ с использованием режима обеднения CliniMACS™ согласно инструкциям изготовителя (Miltenyi Biotec). После центрифугирования немеченую негативную фракцию клеток ресуспендировали в буфере CliniMACS™ PBS/EDTA (Miltenyi Biotec), содержащем 0,5% человеческого сывороточного альбумина (HSA), и затем метили биотинилированным mAb (моноклональное антитело) DREG56 клинического класса качества (COHNMC CBG) в соотношении 0,1 мг/10⁶ клеток в течение 30 минут при RT. Клетки затем промывали и ресуспендировали в конечном объеме 100 мл CliniMACS™ PBS/EDTA, содержащем 0,5% HSA, и переносили в новый 300 см³ мешок для переноса. После 30 минут инкубации с 1,25 мл микрошариков против биотина (Miltenyi Biotec) фракцию РВМС CD62L+ (T_CM CD8+) очищали с использованием позитивного отбора на CliniMACS™ согласно инструкциям изготовителя и ресуспендирвали в X Vivo15, содержащей 10% FCS.

Т_CM, которые являются CD8+/CD4+, готовят с использованием модификации вышеописанного способа посредством модификации отбора на CD4+, CD14+ и CD45RA+ на отбор на CD14+ и CD45RA+. В данном способе используется двухэтапный способ на устройстве CliniMACS™ для исходного обеднения клетками CD14+ и CD45RA+, затем для позитивного отбора клеток CD62L+. Данная модифицированная платформа генерирует объем 50×10⁶ T_CM из одного лейкафереза.

После обогащения клетки T_CM готовятся в виде препарата в полной X-Vivo15 плюс 50 IU (международная единица)/мл IL-2 и 0,5 нг/мл IL-15 и переносятся в тефлоновый мешок для культуры клеток, где они стимулируются шариками Dynal ClinEx™ Vivo CD3/CD28. Вплоть до пяти суток после стимуляции клетки трансдуцируют лентивирусным вектором, кодирующим CAR CS1, при множественности заражения (MOI) примерно 3. Культуры поддерживаются в течение вплоть до 42 суток с добавлением полной X-Vivo 15 и цитокина IL-2 и IL-15 в соответствии с потребностями для размножения клеток (поддерживая плотность клеток от 3×10⁵ до 2×10⁶ жизнеспособных клеток/мл и осуществляя пополнение цитокинами каждый понедельник, среду и пятницу культуры). Клетки типично размножаются при данных условиях приблизительно до 10⁹ клеток в пределах 21 суток. В конце периода культивирования клетки отбирают, дважды промывают и готовят в виде препарата в криоконсервирующей среде клинического класса качества.

В сутки инфузии Т-клеток криоконсервированный и высвобожденный продукт будет оттаян, промыт и приготовлен в виде препарата для повторной инфузии. Криоконсервированные флаконы, содержащие высвобожденный клеточный продукт, будут удалены из хранилища с жидким азотом, оттаяны, охлаждены и промыты промывочным буфером на основе PBS/2% человеческого сывороточного альбумина (HSA). После центрифугирования супернатант будет удален, и клетки будут ресуспендированы в нормальном физиологическом растворе, не содержащем консервантов (РFNS)/разбавителе для инфузии на основе 2% HSA. Образцы будут удалены для тестирования для контроля качества.

Пример 4: аминокислотная последовательность CAR CS1 (CS1scFv-IgG4(HL-CH3)-CD28tm-CD28gg-Zeta-T2A-EGFRt)

Полная аминокислотная последовательность CS1scFv-IgG4(HL-CH3)-CD28tm-CD28gg-Zeta-T2A-EGFRt показана на Фиг. 2. Полная последовательность (SEQ ID NO: 29) включает: сигнальный пептид GMCSF (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор) из 22 аминокислот (SEQ ID NO: 26), последовательность scFv против CS1 (SEQ ID NO: 1); последовательность шарнира IgG4 (SEQ ID NO: 3; с выделенными затенением аминокислотными заменами S на Р); 10-аминокислотный линер (SEQ ID NO: 2); последовательность СН3 IgG4 (SEQ ID NO: 12); последовательность трансмембранного домена CD28 из 28 аминокислот (SEQ ID NO: 14); последовательность костимулирующего домена CD28gg (SEQ ID NO: 23; выделены аминокислотные замены от LL до GG); Gly линкер из 3 аминокислот; последовательность CD3ζ из 112 аминокислот (SEQ ID NO: 21); последовательность перескакивания рибосомы Т2А из 24 аминокислот (SEQ ID NO: 27) и последовательность EGFRt (SEQ ID NO: 28).

Пример 5: Активность CAR CS1

Цитотоксичность размноженных Т-клеток с CAR CS1, экспрессирующих CAR, показанный на Фиг. 2, оценивали с использованием 4-часовых анализов высвобождения ⁵¹Cr после сокультивирования с клетками ММ, меченными ⁵¹Cr (MM.1S). Как показано на Фиг. 3, генетически модифицированные Т-клетки с CAR CS1 демонстрируют специфичное и эффективное умерщвление клеток ММ, тогда как нетрансдуцированные Т-клетки с имитацией модификации не имели цитотоксичности в отношении клеток ММ. При сокультивировании с клетками ММ сильная эффекторная функция, опосредованная генетически модифицированными Т_CM с CAR CS1, на которую указывает дегранулирование 107а и уровень IFN-гамма, показана на Фиг. 4. При адоптивном переносе мышам NSG, несущим опухоль MM, CS1-специфичные Т-клетки демонстрировали эффективную противоопухолевую активность, как показано на Фиг. 5.

В другом исследовании с дополнительным CAR CS1 (Фиг. 2 и Фиг. 6-10) 2×10⁶ клеток MM.1S GFPffluc+ инокулировали посредством инъекции в большую берцовую кость мышам NSG в сутки -7. 1×10⁶ Т-клеток CAR CS1+, происходящих из центральных Т-клеток памяти (T_CM), внутривенно инфундировали мышам, несущим опухоль, в сутки 0. В качестве негативных контролей использовали мышей, не получавших Т-клеток, или получавших нетрансдуцированные T_CM от того же самого донора. Опухолевые сигналы отслеживали биофотонной визуализацией. Показаны средние значения плюс/минус стандартная ошибка среднего фотонов/с от многих мышей. Результаты данного анализа показаны на Фиг. 12.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> City of Hope

<120> Т-КЛЕТКИ, МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ХИМЕРНЫМ РЕЦЕПТОРОМ АНТИГЕНА, НАЦЕЛЕННЫМ НА CS1

<130> 40056-0006WO1

<140> PCT/US2015/064303

<141> 2015-12-07

<150> US 62/088,423

<151> 2014-12-05

<160> 47

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 244

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 1

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

145 150 155 160

Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His

180 185 190

Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys

<210> 2

<211> 10

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> линкер

<400> 2

Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10

<210> 3

<211> 12

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> шарнир IgG4 S228P

<400> 3

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10

<210> 4

<211> 12

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> шарнир IgG4

<400> 4

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro

1 5 10

<210> 5

<211> 22

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> шарнир IgG4 (S228P)+ линкер

<400> 5

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

Ser Gly Gly Gly Ser Gly

20

<210> 6

<211> 39

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> шарнир CD28

<400> 6

Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu

20 25 30

Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro

35

<210> 7

<211> 48

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> шарнир CD8

<400> 7

Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

1 5 10 15

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

20 25 30

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 8

<211> 45

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> шарнир CD8

<400> 8

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 9

<211> 129

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> IgG4(HL-CH3) включает S228P в шарнире

<400> 9

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

20 25 30

Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

35 40 45

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

50 55 60

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

65 70 75 80

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

85 90 95

Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

100 105 110

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

115 120 125

Lys

<210> 10

<211> 229

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> IgG4(L235E,N297Q)

<400> 10

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Gln Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys

225

<210> 11

<211> 229

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> IgG4(S228P, L235E,N297Q)

<400> 11

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Gln Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys

225

<210> 12

<211> 107

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 12

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

1 5 10 15

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

20 25 30

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

35 40 45

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

50 55 60

Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

65 70 75 80

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

85 90 95

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

100 105

<210> 13

<211> 21

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> трансмембранный домен CD3z

<400> 13

Leu Cys Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu

1 5 10 15

Thr Ala Leu Phe Leu

20

<210> 14

<211> 27

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> трансмембранный домен CD28

<400> 14

Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu

1 5 10 15

Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

20 25

<210> 15

<211> 28

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> трансмембранный домен CD28M

<400> 15

Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser

1 5 10 15

Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

20 25

<210> 16

<211> 22

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> трансмембранный домен CD4

<400> 16

Met Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile

1 5 10 15

Gly Leu Gly Ile Phe Phe

20

<210> 17

<211> 21

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> трансмембранный домен CD8tm

<400> 17

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr

20

<210> 18

<211> 23

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> трансмембранный домен CD8tm2

<400> 18

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

20

<210> 19

<211> 24

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> трансмембранный домен CD8tm3

<400> 19

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys

20

<210> 20

<211> 27

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> трансмембранный домен 41BB

<400> 20

Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu

1 5 10 15

Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val

20 25

<210> 21

<211> 112

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> костимулирующий домен CD3

<400> 21

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 22

<211> 41

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> костимулирующий домен CD28

<400> 22

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 23

<211> 41

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> костимулирующий домен CD28gg*

<400> 23

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40

<210> 24

<211> 42

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> костимулирующий домен 41BB

<400> 24

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 25

<211> 42

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> костимулирующий домен OX40

<400> 25

Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His

1 5 10 15

Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln

20 25 30

Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile

35 40

<210> 26

<211> 22

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 26

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro

20

<210> 27

<211> 24

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> домен сигнализации CD3z

<400> 27

Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp

1 5 10 15

Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg

20

<210> 28

<211> 354

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> усеченный EGVF

<400> 28

Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro Ala Phe Leu

1 5 10 15

Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys

20 25 30

Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys

35 40 45

Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly

50 55 60

Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile

65 70 75 80

Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp

85 90 95

Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile

100 105 110

Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser

115 120 125

Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp

130 135 140

Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr

145 150 155 160

Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile

165 170 175

Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys

180 185 190

His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp

195 200 205

Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys

210 215 220

Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu

225 230 235 240

Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr

245 250 255

Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile

260 265 270

Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu

275 280 285

Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His

290 295 300

Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu

305 310 315 320

Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met

325 330 335

Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu

340 345 350

Phe Met

<210> 29

<211> 960

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR CS1

<400> 29

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

260 265 270

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly

275 280 285

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

290 295 300

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

305 310 315 320

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

325 330 335

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

340 345 350

Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

355 360 365

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

370 375 380

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu

385 390 395 400

Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val

405 410 415

Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His

420 425 430

Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys

435 440 445

His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

450 455 460

Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

465 470 475 480

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

485 490 495

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

500 505 510

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

515 520 525

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

530 535 540

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

545 550 555 560

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

565 570 575

Pro Pro Arg Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr

580 585 590

Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg Met Leu Leu Leu Val

595 600 605

Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro Ala Phe Leu Leu Ile

610 615 620

Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser

625 630 635 640

Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser

645 650 655

Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser

660 665 670

Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys

675 680 685

Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu

690 695 700

Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly

705 710 715 720

Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn

725 730 735

Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp

740 745 750

Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn

755 760 765

Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser

770 775 780

Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala

785 790 795 800

Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val

805 810 815

Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn

820 825 830

Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile

835 840 845

Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr

850 855 860

Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly

865 870 875 880

Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn

885 890 895

Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys

900 905 910

His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys

915 920 925

Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly

930 935 940

Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met

945 950 955 960

<210> 30

<211> 579

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR CS1, исключающий T2A и EGFRt

<400> 30

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

260 265 270

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly

275 280 285

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

290 295 300

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

305 310 315 320

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

325 330 335

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

340 345 350

Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

355 360 365

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

370 375 380

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu

385 390 395 400

Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val

405 410 415

Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His

420 425 430

Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys

435 440 445

His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

450 455 460

Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

465 470 475 480

Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

485 490 495

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

500 505 510

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

515 520 525

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

530 535 540

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

545 550 555 560

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

565 570 575

Pro Pro Arg

<210> 31

<211> 557

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CAR CS1, исключающий сигнал GMCSFRa, T2A и EGFRt

<400> 31

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

145 150 155 160

Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His

180 185 190

Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

245 250 255

Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro

260 265 270

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

275 280 285

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

290 295 300

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

305 310 315 320

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

325 330 335

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

340 345 350

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

355 360 365

Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

370 375 380

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

385 390 395 400

Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met

405 410 415

Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala

420 425 430

Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Arg Val Lys

435 440 445

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

450 455 460

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

465 470 475 480

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

485 490 495

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

500 505 510

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

515 520 525

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

530 535 540

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

545 550 555

<210> 32

<211> 955

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-IgG4(HL-CH3)-CD4tm-41BB-Zeta-T2A-EGFRt

<400> 32

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

260 265 270

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly

275 280 285

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

290 295 300

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

305 310 315 320

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

325 330 335

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

340 345 350

Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

355 360 365

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

370 375 380

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Ala Leu Ile Val

385 390 395 400

Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile Phe

405 410 415

Phe Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe

420 425 430

Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg

435 440 445

Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val

450 455 460

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

465 470 475 480

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

485 490 495

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

500 505 510

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

515 520 525

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

530 535 540

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

545 550 555 560

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Leu Glu

565 570 575

Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu

580 585 590

Glu Asn Pro Gly Pro Arg Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu

595 600 605

Cys Glu Leu Pro His Pro Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys

610 615 620

Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala

625 630 635 640

Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu

645 650 655

His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro

660 665 670

Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile

675 680 685

Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu

690 695 700

His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His

705 710 715 720

Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly

725 730 735

Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly

740 745 750

Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe

755 760 765

Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn

770 775 780

Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu

785 790 795 800

Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val

805 810 815

Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu

820 825 830

Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu

835 840 845

Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp

850 855 860

Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys

865 870 875 880

Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys

885 890 895

Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr

900 905 910

Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro

915 920 925

Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu

930 935 940

Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met

945 950 955

<210> 33

<211> 574

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-IgG4(HL-CH3)-CD4tm-41BB-Zeta

<400> 33

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

260 265 270

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly

275 280 285

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

290 295 300

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

305 310 315 320

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

325 330 335

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

340 345 350

Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

355 360 365

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

370 375 380

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Ala Leu Ile Val

385 390 395 400

Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile Phe

405 410 415

Phe Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe

420 425 430

Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg

435 440 445

Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val

450 455 460

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

465 470 475 480

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

485 490 495

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

500 505 510

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

515 520 525

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

530 535 540

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

545 550 555 560

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

565 570

<210> 34

<211> 552

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-IgG4(HL-CH3)-CD4tm-41BB-Zeta, исключающий сигнал GMCSFRa

<400> 34

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

145 150 155 160

Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His

180 185 190

Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

245 250 255

Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro

260 265 270

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

275 280 285

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

290 295 300

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

305 310 315 320

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

325 330 335

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

340 345 350

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

355 360 365

Leu Ser Leu Gly Lys Met Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly

370 375 380

Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile Phe Phe Lys Arg Gly Arg Lys

385 390 395 400

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

405 410 415

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

420 425 430

Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

435 440 445

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

450 455 460

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

465 470 475 480

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

485 490 495

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

500 505 510

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

515 520 525

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

530 535 540

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

545 550

<210> 35

<211> 1055

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-IgG4(L235E,N297Q)-CD4tm-41BB-Zeta-T2A-EGFRt

<400> 35

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

260 265 270

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val

275 280 285

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

290 295 300

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

305 310 315 320

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

325 330 335

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

340 345 350

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

355 360 365

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

370 375 380

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

385 390 395 400

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

405 410 415

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

420 425 430

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

435 440 445

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

450 455 460

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

465 470 475 480

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met

485 490 495

Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly

500 505 510

Leu Gly Ile Phe Phe Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

515 520 525

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

530 535 540

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly

545 550 555 560

Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

565 570 575

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

580 585 590

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

595 600 605

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

610 615 620

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

625 630 635 640

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

645 650 655

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

660 665 670

Pro Arg Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys

675 680 685

Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg Met Leu Leu Leu Val Thr

690 695 700

Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro Ala Phe Leu Leu Ile Pro

705 710 715 720

Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu

725 730 735

Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile

740 745 750

Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe

755 760 765

Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr

770 775 780

Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn

785 790 795 800

Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg

805 810 815

Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile

820 825 830

Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val

835 840 845

Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp

850 855 860

Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn

865 870 875 880

Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu

885 890 895

Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser

900 905 910

Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu

915 920 925

Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln

930 935 940

Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly

945 950 955 960

Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro

965 970 975

His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr

980 985 990

Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His

995 1000 1005

Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys

1010 1015 1020

Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val

1025 1030 1035

Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu

1040 1045 1050

Phe Met

1055

<210> 36

<211> 674

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-IgG4(L235E,N297Q)-CD4tm-41BB-Zeta

<400> 36

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

260 265 270

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val

275 280 285

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

290 295 300

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

305 310 315 320

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

325 330 335

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

340 345 350

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

355 360 365

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

370 375 380

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

385 390 395 400

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

405 410 415

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

420 425 430

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

435 440 445

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

450 455 460

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

465 470 475 480

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met

485 490 495

Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly

500 505 510

Leu Gly Ile Phe Phe Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

515 520 525

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

530 535 540

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly

545 550 555 560

Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

565 570 575

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

580 585 590

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

595 600 605

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

610 615 620

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

625 630 635 640

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

645 650 655

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

660 665 670

Pro Arg

<210> 37

<211> 652

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-IgG4(L235E,N297Q)-CD4tm-41BB-Zeta, исключающий сигнал GMCSFRa

<400> 37

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

145 150 155 160

Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His

180 185 190

Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

245 250 255

Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

260 265 270

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

275 280 285

Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr

290 295 300

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

305 310 315 320

Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

325 330 335

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

340 345 350

Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

355 360 365

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met

370 375 380

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

385 390 395 400

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

405 410 415

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

420 425 430

Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val

435 440 445

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

450 455 460

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Ala Leu Ile Val Leu Gly

465 470 475 480

Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile Phe Phe Lys

485 490 495

Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg

500 505 510

Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro

515 520 525

Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe

530 535 540

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu

545 550 555 560

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

565 570 575

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

580 585 590

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

595 600 605

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

610 615 620

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

625 630 635 640

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650

<210> 38

<211> 1060

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-IgG4(L235E, N297Q)-CD28tm-CD28gg-Zeta-T2A-EGFRt

<400> 38

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

260 265 270

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val

275 280 285

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

290 295 300

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

305 310 315 320

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

325 330 335

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

340 345 350

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

355 360 365

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

370 375 380

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

385 390 395 400

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

405 410 415

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

420 425 430

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

435 440 445

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

450 455 460

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

465 470 475 480

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met

485 490 495

Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu

500 505 510

Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser

515 520 525

Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly

530 535 540

Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala

545 550 555 560

Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

565 570 575

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

580 585 590

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

595 600 605

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

610 615 620

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

625 630 635 640

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

645 650 655

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

660 665 670

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly

675 680 685

Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg Met

690 695 700

Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro Ala

705 710 715 720

Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu

725 730 735

Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys

740 745 750

Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe

755 760 765

Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu

770 775 780

Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln

785 790 795 800

Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu

805 810 815

Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val

820 825 830

Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile

835 840 845

Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala

850 855 860

Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr

865 870 875 880

Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln

885 890 895

Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro

900 905 910

Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val

915 920 925

Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn

930 935 940

Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn

945 950 955 960

Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His

965 970 975

Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met

980 985 990

Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val

995 1000 1005

Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro

1010 1015 1020

Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile

1025 1030 1035

Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala

1040 1045 1050

Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met

1055 1060

<210> 39

<211> 679

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-IgG4(L235E, N297Q)-CD28tm-CD28gg-Zeta

<400> 39

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

260 265 270

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val

275 280 285

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

290 295 300

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

305 310 315 320

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

325 330 335

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

340 345 350

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

355 360 365

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

370 375 380

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

385 390 395 400

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

405 410 415

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

420 425 430

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

435 440 445

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

450 455 460

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

465 470 475 480

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met

485 490 495

Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu

500 505 510

Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser

515 520 525

Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly

530 535 540

Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala

545 550 555 560

Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

565 570 575

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

580 585 590

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

595 600 605

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

610 615 620

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

625 630 635 640

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

645 650 655

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

660 665 670

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

675

<210> 40

<211> 657

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-IgG4(L235E, N297Q)-CD28tm-CD28gg-Zeta, исключающий сигнал GMCSFRa

<400> 40

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

145 150 155 160

Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His

180 185 190

Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

245 250 255

Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

260 265 270

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

275 280 285

Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr

290 295 300

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

305 310 315 320

Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

325 330 335

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

340 345 350

Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

355 360 365

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met

370 375 380

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

385 390 395 400

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

405 410 415

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

420 425 430

Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val

435 440 445

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

450 455 460

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val

465 470 475 480

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

485 490 495

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp

500 505 510

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

515 520 525

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Gly Gly

530 535 540

Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln

545 550 555 560

Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu

565 570 575

Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly

580 585 590

Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln

595 600 605

Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu

610 615 620

Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr

625 630 635 640

Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro

645 650 655

Arg

<210> 41

<211> 836

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-линкер-CD4tm-41BB-Zeta-T2A-EGFRt

<400> 41

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Ser Gly

260 265 270

Gly Gly Ser Gly Met Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu

275 280 285

Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile Phe Phe Lys Arg Gly Arg Lys Lys

290 295 300

Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr

305 310 315 320

Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly

325 330 335

Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

340 345 350

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

355 360 365

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

370 375 380

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

385 390 395 400

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

405 410 415

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

420 425 430

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

435 440 445

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly

450 455 460

Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg Met

465 470 475 480

Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro Ala

485 490 495

Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu

500 505 510

Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys

515 520 525

Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe

530 535 540

Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu

545 550 555 560

Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln

565 570 575

Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu

580 585 590

Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val

595 600 605

Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile

610 615 620

Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala

625 630 635 640

Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr

645 650 655

Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln

660 665 670

Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro

675 680 685

Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val

690 695 700

Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn

705 710 715 720

Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn

725 730 735

Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His

740 745 750

Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met

755 760 765

Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val

770 775 780

Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly

785 790 795 800

Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr

805 810 815

Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile

820 825 830

Gly Leu Phe Met

835

<210> 42

<211> 455

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-линкер-CD4tm-41BB-Zeta

<400> 42

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Ser Gly

260 265 270

Gly Gly Ser Gly Met Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu

275 280 285

Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile Phe Phe Lys Arg Gly Arg Lys Lys

290 295 300

Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr

305 310 315 320

Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly

325 330 335

Gly Cys Glu Leu Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

340 345 350

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

355 360 365

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

370 375 380

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

385 390 395 400

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

405 410 415

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

420 425 430

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

435 440 445

Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455

<210> 43

<211> 433

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-линкер-CD4tm-41BB-Zeta, исключающий сигнал GMCSFRa

<400> 43

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

145 150 155 160

Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His

180 185 190

Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Met Ala

245 250 255

Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu

260 265 270

Gly Ile Phe Phe Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys

275 280 285

Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys

290 295 300

Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Gly Gly

305 310 315 320

Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln

325 330 335

Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu

340 345 350

Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly

355 360 365

Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln

370 375 380

Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu

385 390 395 400

Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr

405 410 415

Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro

420 425 430

Arg

<210> 44

<211> 841

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-линкер-CD28tm-CD28gg-Zeta-T2A-EGFRt

<400> 44

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Ser Gly

260 265 270

Gly Gly Ser Gly Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu

275 280 285

Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

290 295 300

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

305 310 315 320

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

325 330 335

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe

340 345 350

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu

355 360 365

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

370 375 380

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

385 390 395 400

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

405 410 415

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

420 425 430

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

435 440 445

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Leu Glu Gly Gly

450 455 460

Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn

465 470 475 480

Pro Gly Pro Arg Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu

485 490 495

Leu Pro His Pro Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly

500 505 510

Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn

515 520 525

Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile

530 535 540

Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu

545 550 555 560

Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly

565 570 575

Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala

580 585 590

Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln

595 600 605

Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg

610 615 620

Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys

625 630 635 640

Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr

645 650 655

Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys

660 665 670

Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys

675 680 685

Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg

690 695 700

Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg

705 710 715 720

Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu

725 730 735

Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys

740 745 750

Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys

755 760 765

Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala

770 775 780

Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly

785 790 795 800

Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile

805 810 815

Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val

820 825 830

Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met

835 840

<210> 45

<211> 460

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-линкер-CD28tm-CD28gg-Zeta

<400> 45

Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro

1 5 10 15

Ala Phe Leu Leu Ile Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly

20 25 30

Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly

35 40 45

Phe Asp Phe Ser Arg Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly

50 55 60

Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Pro Ser Leu Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn

85 90 95

Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp

100 105 110

Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe

115 120 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr

130 135 140

Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp

145 150 155 160

Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp

165 170 175

Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val

180 185 190

Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

195 200 205

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

210 215 220

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

225 230 235 240

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

245 250 255

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Ser Gly

260 265 270

Gly Gly Ser Gly Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu

275 280 285

Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

290 295 300

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

305 310 315 320

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

325 330 335

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe

340 345 350

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu

355 360 365

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

370 375 380

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

385 390 395 400

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

405 410 415

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

420 425 430

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

435 440 445

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460

<210> 46

<211> 438

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-линкер-CD28tm-CD28gg-Zeta, исключающий сигнал GMCSFRa

<400> 46

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Pro Asp Gly Asn Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser

130 135 140

Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

145 150 155 160

Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Ile Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175

Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His

180 185 190

Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr

210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys

225 230 235 240

Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Met Phe

245 250 255

Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu

260 265 270

Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg

275 280 285

Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro

290 295 300

Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala

305 310 315 320

Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala

325 330 335

Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu

340 345 350

Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp

355 360 365

Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu

370 375 380

Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile

385 390 395 400

Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr

405 410 415

Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met

420 425 430

Gln Ala Leu Pro Pro Arg

435

<210> 47

<211> 9796

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CS1scFv-IgG4(HL-CH3)-CD28gg-Zeta-T2A-EGFRt_epHIV7

<400> 47

gttagaccag atctgagcct gggagctctc tggctaacta gggaacccac tgcttaagcc 60

tcaataaagc ttgccttgag tgcttcaagt agtgtgtgcc cgtctgttgt gtgactctgg 120

taactagaga tccctcagac ccttttagtc agtgtggaaa atctctagca gtggcgcccg 180

aacagggact tgaaagcgaa agggaaacca gaggagctct ctcgacgcag gactcggctt 240

gctgaagcgc gcacggcaag aggcgagggg cggcgactgg tgagtacgcc aaaaattttg 300

actagcggag gctagaagga gagagatggg tgcgagagcg tcagtattaa gcgggggaga 360

attagatcga tgggaaaaaa ttcggttaag gccaggggga aagaaaaaat ataaattaaa 420

acatatagta tgggcaagca gggagctaga acgattcgca gttaatcctg gcctgttaga 480

aacatcagaa ggctgtagac aaatactggg acagctacaa ccatcccttc agacaggatc 540

agaagaactt agatcattat ataatacagt agcaaccctc tattgtgtgc atcaaaggat 600

agagataaaa gacaccaagg aagctttaga caagatagag gaagagcaaa acaaaagtaa 660

gaaaaaagca cagcaagcag cagctgacac aggacacagc aatcaggtca gccaaaatta 720

ccctatagtg cagaacatcc aggggcaaat ggtacatcag gccatatcac ctagaacttt 780

aaatgcatgg gtaaaagtag tagaagagaa ggctttcagc ccagaagtga tacccatgtt 840

ttcagcatta tcagaaggag ccaccccaca agatttaaac accatgctaa acacagtggg 900

gggacatcaa gcagccatgc aaatgttaaa agagaccatc aatgaggaag ctgcaggcaa 960

agagaagagt ggtgcagaga gaaaaaagag cagtgggaat aggagctttg ttccttgggt 1020

tcttgggagc agcaggaagc actatgggcg cagcgtcaat gacgctgacg gtacaggcca 1080

gacaattatt gtctggtata gtgcagcagc agaacaattt gctgagggct attgaggcgc 1140

aacagcatct gttgcaactc acagtctggg gcatcaagca gctccaggca agaatcctgg 1200

ctgtggaaag atacctaaag gatcaacagc tcctggggat ttggggttgc tctggaaaac 1260

tcatttgcac cactgctgtg ccttggatct acaaatggca gtattcatcc acaattttaa 1320

aagaaaaggg gggattgggg ggtacagtgc aggggaaaga atagtagaca taatagcaac 1380

agacatacaa actaaagaat tacaaaaaca aattacaaaa attcaaaatt ttcgggttta 1440

ttacagggac agcagagatc cagtttgggg atcaattgca tgaagaatct gcttagggtt 1500

aggcgttttg cgctgcttcg cgaggatctg cgatcgctcc ggtgcccgtc agtgggcaga 1560

gcgcacatcg cccacagtcc ccgagaagtt ggggggaggg gtcggcaatt gaaccggtgc 1620

ctagagaagg tggcgcgggg taaactggga aagtgatgtc gtgtactggc tccgcctttt 1680

tcccgagggt gggggagaac cgtatataag tgcagtagtc gccgtgaacg ttctttttcg 1740

caacgggttt gccgccagaa cacagctgaa gcttcgaggg gctcgcatct ctccttcacg 1800

cgcccgccgc cctacctgag gccgccatcc acgccggttg agtcgcgttc tgccgcctcc 1860

cgcctgtggt gcctcctgaa ctgcgtccgc cgtctaggta agtttaaagc tcaggtcgag 1920

accgggcctt tgtccggcgc tcccttggag cctacctaga ctcagccggc tctccacgct 1980

ttgcctgacc ctgcttgctc aactctacgt ctttgtttcg ttttctgttc tgcgccgtta 2040

cagatccaag ctgtgaccgg cgcctacggc tagcgccgcc accatgctgc tgctcgtgac 2100

atctctgctg ctgtgcgagc tgccccaccc cgcctttctg ctgattcctg aggtgcagct 2160

ggtggaaagc ggcggaggac tggtgcagcc tggcggatct ctgagactga gctgtgccgc 2220

cagcggcttc gacttcagcc ggtactggat gagctgggtg cgccaggccc ctggcaaagg 2280

cctggaatgg atcggcgaga tcaaccccga cagcagcacc atcaactacg cccccagcct 2340

gaaggacaag ttcatcatca gccgggacaa cgccaagaac agcctgtacc tgcagatgaa 2400

ctccctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctattgcgcc agacccgacg gcaactactg 2460

gtacttcgac gtgtggggcc agggcaccct cgtgacagtg tctagcggca gcacaagcgg 2520

aggcggatct ggcggaggat caggcggggg aggatccagc gatatccaga tgacccagag 2580

ccccagcagc ctgtctgcca gcgtgggcga cagagtgacc atcacatgca aggccagcca 2640

ggacgtggga atcgccgtgg cctggtatca gcagaaaccc ggcaaggtgc ccaagctgct 2700

gatctactgg gccagcacca gacacaccgg cgtgcccgat agattttccg gcagcggctc 2760

cggcaccgac ttcaccctga caatcagctc cctgcagcct gaggacgtgg ccacctacta 2820

ctgccagcag tacagcagct acccctacac cttcggacag ggcaccaagg tggaaatcaa 2880

agagtctaag tacggccctc cctgcccccc ttgtccaggc ggcggatctt ccggaggagg 2940

aagcggaggc cagcccagag aacctcaggt gtacacactg ccccctagcc aggaagagat 3000

gaccaagaat caggtgtccc tgacatgcct cgtgaagggc ttctacccct ccgatatcgc 3060

cgtggaatgg gagagcaacg gccagcctga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct 3120

ggacagcgac ggctcattct tcctgtacag caggctgacc gtggacaaga gccggtggca 3180

ggaaggcaac gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca 3240

gaagtccctg agcctgtccc tgggcaagat gttctgggtg ctggtggtcg tgggcggcgt 3300

gctggcctgt tatagcctgc tcgtgaccgt ggccttcatc atcttttggg tgcgcagcaa 3360

gcggagcaga ggcggccaca gcgactacat gaacatgacc cccagacggc caggccccac 3420

ccggaaacac tatcagcctt acgcccctcc cagagacttc gccgcttatc ggtccggcgg 3480

agggcgggtg aagttcagca gaagcgccga cgcccctgcc taccagcagg gccagaatca 3540

gctgtacaac gagctgaacc tgggcagaag ggaagagtac gacgtcctgg ataagcggag 3600

aggccgggac cctgagatgg gcggcaagcc tcggcggaag aacccccagg aaggcctgta 3660

taacgaactg cagaaagaca agatggccga ggcctacagc gagatcggca tgaagggcga 3720

gcggaggcgg ggcaagggcc acgacggcct gtatcagggc ctgtccaccg ccaccaagga 3780

tacctacgac gccctgcaca tgcaggccct gcccccaagg ctcgagggcg gcggagaggg 3840

cagaggaagt cttctaacat gcggtgacgt ggaggagaat cccggcccta ggatgcttct 3900

cctggtgaca agccttctgc tctgtgagtt accacaccca gcattcctcc tgatcccacg 3960

caaagtgtgt aacggaatag gtattggtga atttaaagac tcactctcca taaatgctac 4020

gaatattaaa cacttcaaaa actgcacctc catcagtggc gatctccaca tcctgccggt 4080

ggcatttagg ggtgactcct tcacacatac tcctcctctg gatccacagg aactggatat 4140

tctgaaaacc gtaaaggaaa tcacagggtt tttgctgatt caggcttggc ctgaaaacag 4200

agacttttgg catttccttt agtgtcccaa aaacgactaa gtccgaaccg gacttttgtc 4260

gacggacctc catgcctttg agaacctaga aatcatacgc ggcaggacca agcaacatgg 4320

tcagttttct cttgcagtcg tcagcctgaa cataacatcc ttgggattac gctccctcaa 4380

ggagataagt gatggagatg tgataatttc aggaaacaaa aatttgtgct atgcaaatac 4440

aataaactgg aaaaaactgt ttgggacctc cggtcagaaa accaaaatta taagcaacag 4500

aggtgaaaac agctgcaagg ccacaggcca ggtctgccat gccttgtgct cccccgaggg 4560

ctgctggggc ccggagccca gggactgcgt ctcttgccgg aatgtcagcc gaggcaggga 4620

atgcgtggac aagtgcaacc ttctggaggg tgagccaagg gagtttgtgg agaactctga 4680

gtgcatacag tgccacccag agtgcctgcc tcaggccatg aacatcacct gcacaggacg 4740

gggaccagac aactgtatcc agtgtgccca ctacattgac ggcccccact gcgtcaagac 4800

ctgcccggca ggagtcatgg gagaaaacaa caccctggtc tggaagtacg cagacgccgg 4860

ccatgtgtgc cacctgtgcc atccaaactg cacctacgga tgcactgggc caggtcttga 4920

aggctgtcca acgaatgggc ctaagatccc gtccatcgcc actgggatgg tgggggccct 4980

cctcttgctg ctggtggtgg ccctggggat cggcctcttc atgtgagcgg ccgctctaga 5040

cccgggctgc aggaattcga tatcaagctt atcgataatc aacctctgga ttacaaaatt 5100

tgtgaaagat tgactggtat tcttaactat gttgctcctt ttacgctatg tggatacgct 5160

gctttaatgc ctttgtatca tgctattgct tcccgtatgg ctttcatttt ctcctccttg 5220

tataaatcct ggttgctgtc tctttatgag gagttgtggc ccgttgtcag gcaacgtggc 5280

gtggtgtgca ctgtgtttgc tgacgcaacc cccactggtt ggggcattgc caccacctgt 5340

cagctccttt ccgggacttt cgctttcccc ctccctattg ccacggcgga actcatcgcc 5400

gcctgccttg cccgctgctg gacaggggct cggctgttgg gcactgacaa ttccgtggtg 5460

ttgtcgggga aatcatcgtc ctttccttgg ctgctcgcct gtgttgccac ctggattctg 5520

cgcgggacgt ccttctgcta cgtcccttcg gccctcaatc cagcggacct tccttcccgc 5580

ggcctgctgc cggctctgcg gcctcttccg cgtcttcgcc ttcgccctca gacgagtcgg 5640

atctcccttt gggccgcctc cccgcatcga taccgtcgac tagccgtacc tttaagacca 5700

atgacttaca aggcagctgt agatcttagc cactttttaa aagaaaaggg gggactggaa 5760

gggctaattc actcccaaag aagacaagat ctgctttttg cctgtactgg gtctctctgg 5820

ttagaccaga tctgagcctg ggagctctct ggctaactag ggaacccact gcttaagcct 5880

caataaagct tgccttgagt gcttcaagta gtgtgtgccc gtctgttgtg tgactctggt 5940

aactagagat ccctcagacc cttttagtca gtgtggaaaa tctctagcag aattcgatat 6000

caagcttatc gataccgtcg acctcgaggg ggggcccggt acccaattcg ccctatagtg 6060

agtcgtatta caattcactg gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg 6120

ttacccaact taatcgcctt gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag 6180

aggcccgcac cgatcgccct tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tggaaattgt 6240

aagcgttaat attttgttaa aattcgcgtt aaatttttgt taaatcagct cattttttaa 6300

ccaataggcc gaaatcggca aaatccctta taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt 6360

gagtgttgtt ccagtttgga acaagagtcc actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa 6420

agggcgaaaa accgtctatc agggcgatgg cccactacgt gaaccatcac cctaatcaag 6480

ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcact aaatcggaac cctaaaggga gcccccgatt 6540

tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg 6600

agcgggcgct agggcgctgg caagtgtagc ggtcacgctg cgcgtaacca ccacacccgc 6660

cgcgcttaat gcgccgctac agggcgcgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg 6720

aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata 6780

accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg 6840

tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac 6900

gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact 6960

ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat 7020

gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga 7080

gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac 7140

agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat 7200

gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac 7260

cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct 7320

gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac 7380

gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga 7440

ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg 7500

gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact 7560

ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac 7620

tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta 7680

actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt 7740

taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga 7800

gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc 7860

tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt 7920

ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc 7980

gcagatacca aatactgttc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc 8040

tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg 8100

cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg 8160

gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga 8220

actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc 8280

ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg 8340

gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg 8400

atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt 8460

tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc 8520

tgattctgtg gataaccgta ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg 8580

aacgaccgag cgcagcgagt cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcccaa tacgcaaacc 8640

gcctctcccc gcgcgttggc cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg 8700

gaaagcgggc agtgagcgca acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca 8760

ggctttacac tttatgcttc cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt 8820

tcacacagga aacagctatg accatgatta cgccaagctc gaaattaacc ctcactaaag 8880

ggaacaaaag ctggagctcc accgcggtgg cggcctcgag gtcgagatcc ggtcgaccag 8940

caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct aactccgccc agttccgccc 9000

attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag gccgcctcgg 9060

cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaaa 9120

agcttcgacg gtatcgattg gctcatgtcc aacattaccg ccatgttgac attgattatt 9180

gactagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt 9240

ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc 9300

attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg 9360

tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat 9420

gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca 9480

gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat 9540

taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg 9600

gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc accaaaatca 9660

acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg 9720

tgtacggaat tcggagtggc gagccctcag atcctgcata taagcagctg ctttttgcct 9780

gtactgggtc tctctg 9796

<---

1. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид химерного рецептора антигена, где кодируемый полипептид имеет аминокислотную последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 32, 33 или 34.

2. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где кодируемый полипептид имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34.

3. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где кодируемый полипептид имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33.

4. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где кодируемый полипептид имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32.

5. Популяция человеческих Т-клеток, экспрессирующих химерный рецептор антигена, нацеленный на CS1, трансдуцированных вектором, кодирующим полипептид химерного рецептора антигена, где кодируемый полипептид имеет аминокислотную последовательность, выбранную из: SEQ ID NO: 33 и 34.

6. Популяция человеческих Т-клеток по п. 5, где кодируемый полипептид имеет SEQ ID NO: 34.

7. Популяция человеческих Т-клеток по п. 5, где кодируемый полипептид имеет SEQ ID NO: 33.

8. Способ лечения онкологического заболевания, при котором экспрессируется CS1, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, популяции человеческих Т-клеток по любому из пп. 5-7.

9. Способ по п. 8, в котором популяция человеческих Т-клеток является аутологичной по отношению к пациенту.

10. Способ по п. 8, в котором популяция человеческих Т-клеток является аллогенной по отношению к пациенту.

11. Способ по любому из пп. 8-10, где онкологическое заболевание представляет собой множественную миелому.