Противораковое средство

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и касается лечения рака. Для этого вводят комбинацию лекарственных средств, включающую (6S,9aS)-N-бензил-8-((6-(3-(4-этилпиперазин-1-ил)азетидин-1-ил)пиридин-2-ил)метил)-6-((2-фтор-4-гидроксифенил)метил)-4,7-диоксо-2-(проп-2-ен-1-ил)-октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-1-карбоксамид и анти-PD-1 антитело. Введение такой комбинации обеспечивает эффективное лечение рака, в том числе у пациентов с низкой чувствительностью к монотерапии ингибитором иммунной контрольной точки. 2 н.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 4 пр.

 

Область техники

Настоящее изобретение относится к способу лечения рака посредством комбинации ингибитора CBP/катенина и ингибитора контрольной точки иммунного ответа, и терапевтическому лекарственному средству для лечения рака.

Предшествующий уровень техники

В последнее время ингибиторы контрольной точки иммунного ответа активно разрабатывались в терапии рака, среди которых анти-CTLA-4 антитело и анти-PD-1 антитело являются коммерчески доступными в качестве терапевтических лекарственных средств для лечения рака.

PD-1 (программируемая смерть 1) связывается с PD-L1 и PD-L2, которые являются его лигандами, экспрессируемыми на антиген-презентирующих клетках, и передают ингибирующий сигнал цитотоксическим T клеткам (CD8 положительным T клеткам) для отрицательной регуляции активированного состояния цитотоксических T клеток. Известно, что раковые клетки принудительно экспрессирующие PD-L1, ослабляют цитотоксическую активность антиген-специфических CD8-позитивных T клеток и индуцируют апоптоз. Известно, что PD-L1 экспрессируется во множестве раковых клеток и его прогноз становится хуже при повышении экспрессии. Анти-PD-1 антитело ниволюмаб блокирует передачу ингибирующих сигналов, поддерживает активированное состояние цитотоксических T клеток и атакует раковые клетки.

Когда CTLA (антиген, ассоциированный с цитотоксическими T лимфоцитами)-4 и ко-стимулирующая молекула CD80 (B7-1) или CD86 (B7-2) в антиген-представляющих клетках связываются друг с другом, активация цитотоксических T клеток подавляется антиген-представляющими клетками. Анти-CTLA-4 антитело, ипилимумаб, активирует и вызывает пролиферацию цитотоксических T клеток путем ингибирования связывания (см. фиг. 1).

Что касается PD-L1, сообщают, что клетки со сниженной экспрессией PD-L1 проявляют характеристики различных раковых стволовых клеток (онкогенность, фаза покоя, активность ALDH и др.) в исследовании раковых стволовых клеток рака желчевыводящих путей (непатентный документ 1). Множество стволовых раковых клеток являются негативными по экспрессии HLA класса I и не распознаются цитотоксическими Т.

С другой стороны, предполагают, что во множестве раковых клеток β-катенин активируется сигналом Wnt, из-за которого регуляторный механизм пролиферации клеток нарушается и прогрессирует клеточный канцерогенез. По существу, ингибиторы сигнального пути Wnt исследовали в качестве противораковых средств; ни один не был введен в практическое применение.

Авторы настоящего изобретения показали, что PRI-724, который является ингибитором CBP/катенина, в клинической разработке в качестве противоракового средства, является четко менее токсичным у людей, чем обычные ингибиторы Wnt, имеющие другие механизмы (непатентный документ 2). В качестве его механизма, рассматривают, что после ингибирования связывания между CBP и катенином, P300 с высоким сходством к CBP связывается вместо CBP, и такое изменение подавляет раковую пролиферацию и индуцирует дифференцировку (непатентный документ 3).

В последнее время было показано, что основным путем рака желчевыводящих путей является пролиферация опухоли посредством пути Wnt-β-катенина, и что ингибитор CBP/катенина, ICG-001, обладает сильным эффектом ингибирования пролиферации в модели на животных (непатентный документ 4).

Обычные ингибиторы Wnt блокируют сигналы на основе механизмов ингибирования продукции лиганда Wnt, блокируя функцию рецептора, обеспечивая разрушение катенина и подобное. Из-за таких механизмов проблемы токсичности появляются в доклинических исследованиях и клинических исследованиях, и разработка главным образом была прекращена. Это из-за того, что путь Wnt расценивается необходимым для поддержания жизни. С другой стороны, ингибитор CBP/катенина может быть предположительно высокобезопасным, так как он проявляет эффекты путем переключения с CBP на P300, а не блокированием сигнала.

Более того, β-катенин также известен, как подавляющий активацию Т клеток путем подавления дифференцировки T клеток (непатентный документ 5). Следовательно, ингибитор CBP/β-катенина рассматривается, как обеспечивающий дифференцировку T клеток и активацию T клеток.

Пациенты, для которых анти-PD-1 антитело и анти-CTLA-4 антитело являются клинически заметно эффективными, ограничены. Причиной этого является то, что у раковых пациентов количество CD-8 позитивных клеток и экспрессия β-катенина коррелируют полностью противоположно, и было показано, что ткани с высокой экспрессией β-катенина содержат небольшое количество T клеток и наоборот, ткани, содержащие много T клеток, проявляют низкую экспрессию, и ткани, содержащие много T клеток, проявляют заметный эффект (непатентный документ 6).

[Список документов]

Непатентные документы

Непатентный документ 1: Cancer Sci (105) 667-674, 2014

Непатентный документ 2: J Clin Oncol 31, 2013 (suppl; abstr 2501)

Непатентный документ 3: The EMBO Journal 2013, 1-13

Непатентный документ 4: J Clin Invest. 2015 Mar 2; 125(3):1269-85. doi: 10.1172/JCI76452

Непатентный документ 5: J Immunol 2011; 186:784-790

Непатентный документ 6: Nature. 2015 May 11. doi: 10.1038/nature14404.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Проблемы, решаемые изобретением

Пациенты, для которых анти-PD-1 антитело и анти-CTLA-4 антитело являются клинически существенно эффективными, ограничены, и исследовали комбинированное применение с различными обычно используемыми средствами для лечения рака. Однако, удовлетворительных эффектов не было получено.

Средства решения проблем

В настоящем изобретении было обнаружено, что превосходный терапевтический эффект получают с использованием ингибитора контрольной точки иммунного ответа, такого как ингибитор PD-1-PD-L1 и подобного, и ингибитора CBP/катенина в комбинации, что привело к завершению настоящего изобретения.

То есть, главный пункт настоящего изобретения является следующим.

(1) Лекарственное средство для лечения рака, включающее ингибитор CBP/катенина и ингибитор контрольной точки иммунного ответа.

(2) Лекарственное средство для лечения рака вышеупомянутого (1), где ингибитором контрольной точки иммунного ответа является один или более видов ингибиторов контрольной точки иммунного ответа, выбираемых из антагониста PD-1, антагониста PD-L1, антагониста PD-L2, антагониста CTLA-4, антагониста KIR, антагониста CD137, антагониста LAG3 и антагониста OX40.

(3) Лекарственное средство для лечения рака вышеупомянутого (1), где ингибитором контрольной точки иммунного ответа является один или более видов ингибиторов контрольной точки иммунного ответа, выбираемых из анти-PD-1 антитела, анти-PD-L1 антитела, анти-PD-L2 антитела, анти-CTLA-4 антитела, анти-KIR антитела, анти-LAG3 антитела и анти-OX40 антитела.

(4) Лекарственное средство для лечения рака вышеупомянутых (1)-(3), где ингибитором CBP/катенина является α-спиральное миметическое соединение, обладающее ингибирующей активностью в отношении CBP/катенина.

(5) Лекарственное средство для лечения рака вышеупомянутого (4), где вышеупомянутое α-спиральное миметическое соединение представляет собой один или более видов любых α-спиральных миметических соединений, описанных в WO 2003/031448, WO 2004/093828, WO 2005/116032, WO 2009/148192, WO 2010/044485, WO 2010/128685, WO 2012/115286 и/или WO 2015/098853.

(6) Лекарственное средство для лечения рака вышеупомянутых (1)-(4), где ингибитором CBP/катенина является один или более видов, выбираемых из следующих соединений:

(6S,9aS)-N-бензил-6-[(4-гидроксифенил)метил]-8-(нафталин-1-илметил)-4,7-диоксо-3,6,9,9a-тетрагидро-2H-пиразино[1,2-a]пиримидин-1-карбоксамид (ICG-001), 4-(((6S,9S,9aS)-1-(бензилкарбамоил)-2,9-диметил-4,7-диоксо-8-(хинолин-8-илметил)октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-6-ил)метил)фенил дигидрофосфат, (6S,9S,9aS)-N-бензил-6-(4-гидроксибензил)-2,9-диметил-4,7-диоксо-8-(хинолин-8-илметил)октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-1-карбоксамид и (6S,9aS)-N-бензил-8-((6-(3-(4-этилпиперазин-1-ил)азетидин-1-ил)пиридин-2-ил)метил)-6-((2-фтор-4-гидроксифенил)метил)-4,7-диоксо-2-(проп-2-ен-1-ил)октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-1-карбоксамид

(7) Способ лечения рака, включающий введение эффективного количества ингибитора CBP/катенина и эффективного количества ингибитора контрольной точки иммунного ответа пациенту, нуждающемуся в этом.

(8) Способ по вышеупомянутому (7), где ингибитором контрольной точки иммунного ответа является один или более видов ингибиторов контрольной точки иммунного ответа, выбираемых из антагониста PD-1, антагониста PD-L1, антагониста PD-L2, антагониста CTLA-4, антагониста KIR, антагониста CD137, антагониста LAG3 и антагониста OX40.

(9) Способ по вышеупомянутому (7), где ингибитором контрольной точки иммунного ответа является один или более видов ингибиторов контрольной точки иммунного ответа, выбираемых из анти-PD-1 антитела, анти-PD-L1 антитела, анти-PD-L2 антитела, анти-CTLA-4 антитела, анти-KIR антитела, анти-LAG3 антитела и анти-OX40 антитела.

(10) Способ по вышеупомянутым (7)-(9), где ингибитор CBP/катенина представляет собой α-спиральное миметическое соединение, обладающее ингибирующей активностью в отношении CBP/катенина.

(11) Способ по вышеупомянутому (10), где вышеупомянутое α-спиральное миметическое соединение представляет собой один или более видов любых α-спиральных миметических соединений, описанных в WO 2003/031448, WO 2004/093828, WO 2005/116032, WO 2009/148192, WO 2010/044485, WO 2010/128685, WO 2012/115286 и/или WO 2015/098853.

(12) Способ по вышеупомянутым (7)-(10), где ингибитор CBP/катенина представляет собой один или более видов, выбираемых из следующих соединений:

(6S,9aS)-N-бензил-6-[(4-гидроксифенил)метил]-8-(нафталин-1-илметил)-4,7-диоксо-3,6,9,9a-тетрагидро-2H-пиразино[1,2-a]пиримидин-1-карбоксамид (ICG-001), 4-(((6S,9S,9aS)-1-(бензилкарбамоил)-2,9-диметил-4,7-диоксо-8-(хинолин-8-илметил)октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-6-ил)метил)фенил дигидрофосфат, (6S,9S,9aS)-N-бензил-6-(4-гидроксибензил)-2,9-диметил-4,7-диоксо-8-(хинолин-8-илметил)октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-1-карбоксамид и (6S,9aS)-N-бензил-8-((6-(3-(4-этилпиперазин-1-ил)азетидин-1-ил)пиридин-2-ил)метил)-6-((2-фтор-4-гидроксифенил)метил)-4,7-диоксо-2-(проп-2-ен-1-ил)-октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-1-карбоксамид.

Эффект изобретения

Скорее, чем простой аддитивный эффект лечения рака ингибиторами контрольной точки иммунного ответа и эффект лечения рака ингибитором CBP/β-катенина, ингибитор CBP/β-катенина обеспечивает активацию и миграцию в раковые ткани цитотоксических Т клеток и усиливают эффект лечения рака, а также подавляет эффект пролиферации раковых клеток CBP/β-катенина. Ингибитор CBP/β-катенина обеспечивает дифференцировку стволовых раковых клеток и увеличивает антигенность, но может подавлять функции цитотоксических Т клеток посредством экспрессии PD-L1; однако, ингибитор контрольной точки иммунного ответа увеличивает эффект лечения рака ингибитором CBP/β-катенина путем ингибирования связывания PD-1 и PD-L1.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет собой схематический чертеж, демонстрирующий механизм действия ингибитора контрольной точки иммунного ответа.

Фиг. 2 представляет собой схематический чертеж, демонстрирующий механизм действия ингибитора CBP/β-катенина.

Фиг. 3 демонстрирует исчезновение стволовых клеток рака молочной железы посредством ингибитора CBP/β-катенина в примере 1.

Фиг. 4 демонстрирует подавление пролиферации колоректального рака посредством ингибитора CBP/β-катенина в примере 3.

Фиг. 5 демонстрирует снижение IL-10 посредством ингибитора CBP/β-катенина в примере 4.

Описание вариантов осуществления изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает лекарственное средство для лечения рака, включающее ингибитор CBP/катенина и ингибитор контрольной точки иммунного ответа в комбинации. Подробное объяснение дано ниже.

(Ингибитор CBP/катенина)

β-катенин действует как медиатор передачи сигнала Wnt, связывается с фактором транскрипции Tcf/Lef (T клеточный фактор/фактор, усиливающий лимфоциты), обеспечивает экспрессию различных генов (циклин D1, c-Myc и др.), вовлеченных в передачу сигнала Wnt, и контролирует пролиферацию и дифференцировку клеток (He et al., 1998 Science 281 1509-1512: Kolligs et al., 1999 Mol. Cell. Biol. 19, 5696-5706: Crawford et al., 1999, Oncogene 18, 2883-2891: Shtutman et al., 1999, Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 11, 5522-5527: Tetsu and McCormick, 1999 Nature, 398, 422-426) (см. фиг. 2).

CBP (белок, связывающий элемент ответа циклической АМФ (CREB)) непосредственно взаимодействует с β-катенином в CREB связывающем домене и обеспечивает активацию транскрипции Tcf/Lef (Ken-Ichi Takemaru and Randall T. Moon, 2000 J. Cell. Biol., 149, 2, 249-254).

Ингибитор CBP/катенина особенно не ограничен, пока он ингибирует взаимодействие между CBP и катенином, особенно β-катенином, и вариант осуществления изобретения, в котором ингибируется связывание β-катенина и CBP, в результате чего экспрессия гена комплекса β-катенина подавляется, является предпочтительным.

Ингибирование CBP/β-катенина может быть измерено посредством анализа связывания (анализ связывания радиоактивной метки и др.), известного самого по себе, анализа по гену репортеру и подобным. Предпочтительно это может быть подтверждено путем измерения экспрессии гена передачи сигнала Wnt посредством анализа по гену репортеру, описанного в WO 2009/148192.

Ингибитор CBP/катенина по настоящему изобретению особо не ограничен, пока он является как определено выше. Он является предпочтительно α-спиральным миметическим соединением, обладающим ингибирующей активностью в отношении CBP/катенина, и его примеры включают α-спиральные миметические соединения, их фармацевтически приемлемые соли и подобные, описанные в WO 2003/031448, WO 2004/093828, WO 2005/116032, WO 2009/148192, WO 2010/044485, WO 2010/128685, WO 2012/115286 и подобные.

Предпочтительно (6S,9aS)-N-бензил-6-[(4-гидроксифенил)метил]-8-(нафталин-1-илметил)-4,7-диоксо-3,6,9,9a-тетрагидро-2H-пиразино[1,2-a]пиримидин-1-карбоксамид (ICG-001), 4-(((6S,9S,9aS)-1-(бензилкарбамоил)-2,9-диметил-4,7-диоксо-8-(хинолин-8-илметил)октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-6-ил)метил)фенил дигидрофосфат (соединение 1), и (6S,9S,9aS)-N-бензил-6-(4-гидроксибензил)-2,9-диметил-4,7-диоксо-8-(хинолин-8-илметил)октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-1-карбоксамид (соединение 2) и подобные могут быть упомянуты.

В качестве ингибитора CBP/катенина по настоящему изобретению, соединение, описанное в WO 2015/098853, обладающее действием модулирования пути Wnt, его фармацевтически приемлемая соль и подобные также могут быть упомянуты.

Предпочтительно, (6S,9aS)-N-бензил-8-((6-(3-(4-этилпиперазин-1-ил)азетидин-1-ил)пиридин-2-ил)метил)-6-((2-фтор-4-гидроксифенил)метил)-4,7-диоксо-2-(проп-2-ен-1-ил)октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-1-карбоксамид (соединение A) и подобные могут быть упомянуты.

Ингибитор CBP/катенина можно вводить в виде фармацевтических препаратов (например, инъекции, капсулы, таблетки, порошки, гранулы и подобные), рецептированных обычным способом. Например, его вводят в дозе около 0,01-1000 мг/кг (массы тела) в сутки, предпочтительно около 0,1-500 мг/кг (массы тела) в сутки, на основании количества активного ингредиента, в одной или нескольких порциях. Доза, способ введения и частота введения могут быть соответствующим образом изменены в соответствии с симптомом, возрастом и подобным. Например, при рецептировании в инъекции, носители, такие как дистиллированная вода, солевой раствор и подобные могут быть использованы и, при рецептировании в капсулах, таблетках, порошке или гранулах, вспомогательные вещества, такие как крахмал, лактоза, сахароза, карбонат кальция и подобные, вяжущие вещества, такие как раствор пасты крахмала, гуммиарабик, желатин, альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза и подобные, смазывающие вещества, такие как стеарат магния, тальк и подобные, и дезинтегрирующие вещества, такие как крахмал, агар, кристаллическая целлюлоза, карбонат кальция, гидрокарбонат натрия, альгинат натрия и подобные могут быть использованы. Процентное содержание активного ингредиента в препарате может варьироваться в рамках 1-99 масс%. Например, когда берут форму таблетки, капсулы, гранул, порошка или подобного, предпочтительно содержится 5-80 масс% активного ингредиента. В случае инъекции предпочтительно содержится 1-10 масс% активного ингредиента.

(Ингибитор контрольной точки иммунного ответа)

В качестве ингибитора контрольной точки иммунного ответа, например, может быть упомянут блокатор ингибирующего рецептора T клеток. Блокатором ингибирующего рецептора Т клеток обычно является молекула, которая специфически связывается с внеклеточным доменом ингибирующего рецептора Т или внеклеточным доменом лиганда ингибирующего рецептора Т клеток и предотвращает, например, активацию ингибирующего рецептора T клеток путем блокирования его связи с их лигандами, такими как CD80, CD86, PD-L1, PD-L2 и подобные. Специфически антагонист PD-1 (анти-PD-1 антитело, такое как ниволумаб, пембролизумаб и подобные и др.), антагонист PD-L1 (анти-PD-L1 антитело, такое как пидилизумаб, MPDL-3280A, MEDI4736, MSB0010718C, MEDI0680 и подобные и др.), антагонист PD-L2 (анти-PD-L2 антитело и др.), антагонист CTLA-4 (анти-CTLA-4 антитело, такое как ипилимумаб, тремелимумаб и подобные и др.), антагонист KIR (антитело к иммуноглобулин подобному рецептору анти-киллерных клеток (анти-KIR антитело), такой как лирилумаб и подобные и др.), антагонист CD137 (анти-CD137 антитело, такое как урелумаб, PF-05082566 и подобные и др.), антагонист LAG3 (анти-лимфоцит активирующий фактор 3 антитело (анти-LAG3 антитело), такое как BMS-986016 и подобные и др.) и антагонист OX40 (анти-OX40 антитело, такое как MEDI6469 и подобные) могут быть упомянуты. Анти-PD-1 антитело, анти-PD-L1 антитело или анти-CTLA-4 антитело являются предпочтительными.

Ингибитор контрольной точки иммунного ответа может быть получен в виде фармацетической композиции обычным способом. Во множестве случаев фармацевтическая композиция дополнительно содержит один или более буферов (например, нейтральный, солевой или фосфатный буферный раствор), углеводы (например, глюкозу, маннозу, сахарозу или декстран), маннит, белок, полипептид, или аминокислоты, такие как глицин и подобные, антиоксиданты (например, аскорбиновая кислота, дисульфит натрия, бутилгидрокситолуол, бутилгидроксианизол и подобные), бактериостатическое средство, комплексообразующее средство, такое как EDTA, глютатион и подобные, растворенное вещество, которое делает композицию изотонической, гипотонической или немного гипертонической с кровью реципиента, суспендирующее средство, загуститель, консервант, ароматизатор, подсластитель и/или красящее соединение, если необходимо.

(Лекарственное средство для лечения рака, способ лечения рака)

Настоящее изобретение обеспечивает способ лечения пациентов, страдающих от рака, включающий введение пациенту терапевтического лекарственного средства для рака, содержащего комбинацию ингибитора CBP/катенина и ингибитора контрольной точки иммунного ответа. Способ, описанный в настоящей спецификации, направлен на лечение рака, например, лейкоза и солидных опухолей (например, меланомы, рака, саркомы, лимфомы и подобного). Специфически, рак почки, почечноклеточная карцинома, рак мочевого пузыря, уротелиальный рак, урогенитальные опухоли, рак легкого, плоскоклеточная карцинома легкого, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, злокачественная меланома, увеальная меланома, глазная меланома, рак желудка, рак пищевода, глиобластома, глиосаркома, метастатическая опухоль головного мозга, рак печени, метастатический рак печени, гепатома, эпителиальный рак гепатоцитов, рак толстого кишечника, рак ободочной кишки, рак поджелудочной железы, метастатический рак поджелудочной железы, метастатическая плоскоклеточная карцинома головы, рак молочной железы, метастатический рак молочной железы, злокачественная плевральная мезотелиома, метастатическая плоскоклеточная карцинома шеи, метастатическая назофарингеальная карцинома, HPV-16 позитивный солидный рак, миелофиброз, первичный миелофиброз (PMF) и миелофиброз, перенесенный с истинной полицитемии (PV) или эссенциальной тромбоцитемии (ET), первичный миелофиброз, рецидивирующий рак эпителия яичников, рак фаллопиевой трубы, перитонеальный рак, метастатическая саркома, гормонорезистентный рак предстательной железы, рак коры надпочечников, неХоджкинская лимфома, B-клеточная лимфома, B-клеточная неХоджкинская лимфома, Ходжкинская лимфома, острый миелолейкоз, хронический миелолейкоз, хроническая лимфоцитарная лимфома, мелкая лимфоцитарная лимфома, T-клеточный лейкоз, T-клеточная лимфома, фолликулярная лимфома, миелодиспластический синдром и подобные могут быть упомянуты.

У таких раковых пациентов это особенно эффективно для рака с активированным β-катенином.

Лекарственное средство для лечения рака по настоящему изобретению, включающее ингибитор CBP/катенина и ингибитор контрольной точки иммунного ответа в комбинации, может быть рецептировано каждое отдельно или вместе способом, соответствующим для желаемого введения, например, перорального, трансназального, через слизистые оболочки, ректального, вагинального, местного, внутривенного, интраперитонеальнного, внутрикожного, подкожного, и внутримышечного введения и подобного.

В настоящем изобретении определение дозы и времени введения терапевтически эффективного количества лекарственного средства для лечения рака, содержащего комбинацию ингибитора CBP/катенина и ингибитора контрольной точки иммунного ответа, находится в рамках знаний обычного специалиста в области техники. Например, начальное эффективное количество может быть предположено из культур клеток или другого анализа in vitro. Доза может быть установлена для получения циркулирующей концентрации или тканевой концентрации, такой как IC50 концентрация и подобные, определенные анализом культур клеток в модели на животных.

Для цели изобретения метод введения выбирают, полагаясь на состояние, которое лечат, и терапевтическое лекарственное средство. Ингибитор CBP/катенина и ингибитор контрольной точки иммунного ответа можно вводить различными методами. Предпочтительные примеры методов включают, без ограничения, подкожное, внутривенное, интраперитонеальное, внутримышечное и системное введение и, в некоторых случаях, прямую инъекцию в определенный орган или опухоль и подобное. Ингибитор CBP/катенина и ингибитор контрольной точки иммунного ответа можно вводить посредством одного пути или одновременно несколькими путями.

Ингибитор CBP/катенина и ингибитор контрольной точки иммунного ответа можно вводить один раз в сутки, два-несколько раз в сутки, или дополнительно, множество раз в сутки, в зависимости от, среди других обстоятельств, показаний к лечению и мнения назначающего врача.

Количества CBP/катенина и ингибитора контрольной точки иммунного ответа, необходимые для получения терапевтического эффекта, могут быть эмпирически определены в соответствии с обычными методиками для определенного объекта. Обычно, клеткам вводят фармакологически эффективную дозу при введении объекту лечения. ʺФармакологически эффективное количествоʺ или ʺфармакологически эффективная дозаʺ относятся к количеству, достаточному для получения желаемого физиологического эффекта или способного достигать желаемого результата, такого как уменьшение или устранение одного ил более симптомов или признаков расстройства или заболевания и подобное, для лечения определенного расстройства или патологического состояния.

Лекарственное средство для лечения рака по настоящему изобретению, которое является комбинацией ингибитора CBP/катенина и ингибитора контрольной точки иммунного ответа, может быть скомбинировано с другим лечением рака, например, хирургической резекцией, лучевой терапией, химиотерапией, иммунотерапией, и поддерживающей терапией (например, обезболивающей, диуретической, антидиуретической, терапией, противовирусными лекарственными средствами, антибиотиками, пищевыми добавками, лечением анемии, лечением коагуляции крови, лечением костей и психопатологическим и психологическим лечением) и подобное.

Тогда как настоящее изобретение объясняется более подробно далее путем демонстрации примеров, они не ограничивают рамки настоящего изобретения.

Примеры

Пример 1

К фракции боковой популяции (стволовые раковые клетки расценивали как концентрированные), полученной двухмерной клеточной сортировкой клеточной линии человеческого рака молочной железы (MDA-MB-231) с помощью Hoechst Blue и Hoechst Red добавляли 0,3 мкM ингибитора CBP/катенина (соединение 2) в культуральной среде. Через 4 дня фракция боковой популяции почти исчезала (при отсутствии обработки лекарственным препаратом, 1,6% SP клеток определяли, тогда как 0% определяли в группе обработки соединением 2), и стволовые раковые клетки расценивали дифференцированными (фиг. 3).

Пример лечения 1

Пациенту со злокачественной меланомой при невозможности удаления опухолей хирургически давали ниволумаб путем внутривенной капельной инфузии по 2 мг/кг (массы тела)/раз с 3-недельными интервалами, и ингибитор CBP/β-катенина (соединение 1) в 30 мг/м²/сутки путем внутривенной капельной инфузии.

Пример лечения 2

Пациенту со злокачественной меланомой, которому невозможно удалить опухоли хирургически, давали ипилимумаб путем внутривенной капельной инфузии по 3 мг/кг (массы тела)/раз с 3-недельными интервалами, и ингибитор CBP/β-катенина (соединение 1) по 100 мг/м²/сутки посредством внутривенной капельной инфузии.

Пример 2

Эффект комбинированного применения ингибитора CBP/катенина (соединение A) и антимышиного PD-1 (CD279) антитела в модели на животных, серийно трансплантированных спонтанным раком молочной железы трансгенных мышей (MMTV-Wnt-1).

Спонтанный рак молочной железы трансгенной мыши (MMTV-Wnt-1), при котором Wnt-1 локально экспрессировался в эпителиальных клетках молочной железы, собирали, и серийно трансплантировали исходной линии мышей (C57BL/6J) с помощью трокара. Когда серийно трансплантированная опухоль становилась около 1,5 г, ее выделяли, разрезали на фрагменты около 30 мг, и подкожно трансплантировали в бок тела 5 мышей (C57BL/6J) в каждой группе. Приживаемость опухоли подтверждали и соединение A (50 мг/кг, два раза в сутки, 21 день, пероральное введение и анти-мышиное PD-1 антитело (клон: RMP1-14, BioXCell) (10 мг/кг, два раза в сутки, 3 недели, интраперитонеальное введение) каждое вводили отдельно или в комбинации.

С днем начала введения как день 0, максимальный размер и минимальный размер опухоли, развившейся у каждой мыши, измеряли посредством электронно-цифрового циркуля (Mitsutoyo) в дни 4, 7, 11, 14, 18, и 21.

Объем опухоли рассчитывали в соответствии со следующей формулой.

Объем опухоли TV (мм³)=максимальный размер опухоли (мм)х минимальный размер опухоли² (мм²)/2

Результаты TV суммированы в таблице 1. Комбинированное применение соединения A и антимышиного PD-1 антитела продемонстрировала противоопухолевый эффект, более сильный по статистической достоверности (*p<0,05) при сравнении с отдельным введением каждого (повторные измерения ANOVA с последующим множественным сравнением типа Даннета).

Таблица 1

Среднее±SEM (мм3)	День 0	День 4	День 7	День 11	День 14	День 18	День 21
Контрольная группа	74,3±6,9	110,7±10,3	149,7±17,2	212,1±27,9	2413±46,0	458,8±96,8	529,3±94,9
Группа соединения A	75,3±9,2	83,2±8,5	90,5±22,3	123,1±40,5	140,4±45,1	221,6±47,9	237,7±41,2
Группа антимышиного PD-1 антитела	73,8±9,6	105,6±7,4	126,8±15,2	176,4±15,5	273,7±42,8	430,1±61,0	502,3±99,1
Группа соединение A+антимышиное PD-1 антитело	73,3±8,4	56,9±9,8	69,3±19,0	64,6±10,2	71,5±15,1	94,8±22,9(*)	111,3±25,9(*)

Пример 3

Эффект комбинированного применения ингибитора CBP/катенина (соединение 1) и антимышиного PD-L1 антитела в модели на животных у мышей BALB/c с трансплантированными клетками колоректального рака.

Клетки колоректального рака, клетки CT26 подкожно трансплантировали в правую часть живота самок мышей BALB/c. После размножения до среднего размера опухоли 80 мм³, их группировали по 10 мышей в группе в соответствии со следующим

группа 1: группа носителя

группа 2: группа введения антимышиного PD-L1 антитела

группа 3: группа введения соединения 1

группа 4: группа комбинированного введения соединения 1 и антимышиного PD-L1 антитела

Соединение 1 (80 мг/кг, один раз в сутки, 21 день, интраперитонеальное введение) и антимышиное PD-L1 антитело (каталожный No.: BE0101-100 MG, BioXCell) (2 мг/кг, два раза в неделю, 2 недели, интраперитонеальное введение) каждое вводили отдельно или в комбинации.

С днем начала введения, как день 0, максимальный размер и минимальный размер опухоли, образовавшейся у каждой мыши, измеряли в дни 3, 6, 9, 12 и 15.

Объем опухоли рассчитывали в соответствии со следующей формулой.

Объем опухоли (мм³)=большая ось опухоли (мм) х меньшая ось опухоли² (mm²)/2

Результаты объема опухоли суммированы на фиг. 4. Комбинированное применение соединения 1 и антимышиного PD-L1 антитела продемонстрировали противоопухолевый эффект, превосходящий по статистической достоверности (*p<0,01) при сравнении с отдельным введением каждого (двухсторонний ANOVA для повторных применений).

Пример 4

Супрессивное действие на продукцию IL-10 ингибитора CBP/катенина (соединение 1)

Использовали 624 mel клеток и 928 mel клеток, которые представляют собой клеточные линии (меланома), полученные от пациентов людей со злокачественной меланомой US NIH. Такие клетки были активированы и были способны к продукции IL-10.

В культуральной среде (10% FCS-содержащая RPMI1640, добавлен пенициллин и стрептомицин), соответствующие клетки меланомы сеяли в 6-луночный планшет в концентрации 1×10⁵ клеток/2 мл/ячейку. После посева соединение 1 добавляли до заданной концентрации и клетки культивировали в течение 24 ч. Через 24 ч надосадочную жидкость культур восстанавливали и концентрацию IL-10 в надосадочной жидкости измеряли. Для измерения концентрации IL-10 использовали набор Human IL10 OptEIA ELISA (BD, #555157).

Результаты показаны на фиг. 5.

Когда соединение 1 добавляли по 1 мкM, влияние на пролиферацию подтверждали во всех клетках. Когда соединение 1 добавляли по 0,2 мкM, влияние на пролиферацию не было подтверждено во всех клетках. Так как продукция IL-10 подавлялась даже в состоянии (0,2 мкM) свободном от влияния на пролиферацию, было обнаружено, что соединение 1 обладает супрессивным действием в отношении продукции IL-10.

Пациенты, для которых анти-PD-1 антитело и анти-CTLA-4 антитело, которые являются ингибиторами контрольной точки иммунного ответа, являются клинически эффективными, ограничены. Известно, что их эффект зависит от количества CD-8 позитивных T клеток у пациентов с раком. В частности, количество CD-8 позитивных T клеток и экспрессия β-катенина коррелируют полностью противоположно, и ткани с высокой экспрессией β-катенина содержат небольшое количество T клеток и наоборот, ткани, содержащие много T клеток, проявляют низкую экспрессию.

Ингибитор CBP/катенина проявляет более высокий эффект в ткани, где экспрессия β-катенина является высокой. С другой стороны, он может увеличивать количество CD-8 позитивных T клеток посредством супрессивного действия в отношении продукции IL-10. Следовательно, было обнаружено, что ингибитор CBP/катенина дает более выраженный противораковый эффект при использовании в комбинации с ингибитором контрольной точки иммунного ответа.

Настоящая заявка основана на патентной заявке No. 2015-121479, поданной в Японии (дата подачи: 16 июня 2015), содержание которой полностью включено в настоящее описание.

1. Терапевтическое лекарственное средство для лечения рака, содержащее (6S,9aS)-N-бензил-8-((6-(3-(4-этилпиперазин-1-ил)азетидин-1-ил)пиридин-2-ил)метил)-6-((2-фтор-4-гидроксифенил)метил)-4,7-диоксо-2-(проп-2-ен-1-ил)-октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-1-карбоксамид и анти-PD-1 антитело в комбинации.

2. Способ лечения рака, включающий введение эффективного количества (6S,9aS)-N-бензил-8-((6-(3-(4-этилпиперазин-1-ил)азетидин-1-ил)пиридин-2-ил)метил)-6-((2-фтор-4-гидроксифенил)метил)-4,7-диоксо-2-(проп-2-ен-1-ил)-октагидро-1H-пиразино[2,1-c][1,2,4]триазин-1-карбоксамида и эффективного количества анти-PD-1 антитела пациенту, нуждающемуся в этом.