Способ диагностики черепно-мозговой травмы с использованием белковых биомаркеров

Изобретение относится к медицине и касается способа диагностики черепно-мозговой травмы с использованием белковых биомаркеров, в ходе которого у пациента берут аналит и выявляют в нем концентрацию биомаркеров, в качестве которых используют глиальный протеин и нейрофиламент, где в качестве биомаркера дополнительно используют Тау-белок, при этом аналит у пациента берут через 1-24 часа после травмы, через 25-48 часов после травмы и в течение двух суток через шесть дней после травмы, после чего оценивают динамику белков, при этом пациенту ставят диагноз легкая черепно-мозговая травам при условии, если соблюдены по меньше мере два условия из А, B и C, где условие A соблюдено, если концентрация глиального протеина в первой пробе меньше или равна концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше или равна концентрации в третьей пробе; условие B соблюдено, если концентрация нейрофиламента в первой пробе больше или равна концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе; условие C соблюдено, если концентрация Тау-белка в первой пробе больше или равна концентрации белка во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики легкой черепно-мозговой травмы. 5 пр., 5 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности, к анализу материалов путем определения их химических свойства, а именно к способу диагностики черепно-мозговой травмы (далее – «ЧМТ)на основе иммуноферментного анализа (далее «ИФА») с использованием белковых биомаркеров.

В современном мире одна из ведущих причин смертности и инвалидизации населения принадлежит повреждениям головного мозга. В настоящее время есть возможность, с использованием компьютерной томографии, магнитно-резонансной томографии, установить повреждения центральной нервной системы, сопровождающиеся нарушениями структур головного мозга, но не позволяющих дифференцировать характер повреждения нервной системы, оценить тяжесть повреждения и последствия травмы. За последние 30 лет получена новая информация о биомаркерах, появление которых в крови коррелирует с повреждением различных структур головного мозга и которые, в перспективе, могут использоваться в прогностических моделях. Альтернативные методы, такие как измерение уровня биомаркеров в сыворотке крови с использованием иммуноферментного анализа и его модификаций, были тщательно изучены, чтобы определить, могут ли они предоставить информацию о степени повреждения мозговой ткани и/или предсказать клинический исход. Сложности в поиске подходящих биохимических маркеров повреждения центральной нервной системы связаны с малой выборкой обследованных пациентов, а также с их неоднородностью.

Известен способ диагностики ЧМТ у человека с использованием комбинации GFAP И UCH-L1 (CA3067055A1, опубл. 13.06.2019), предполагающий определение через 48 часов после предполагаемой травмы уровня фибриллярного кислого белка (GFAP) и уровня убиквитин-карбоксиконцевой гидролазы LI (UCH-L1) в образце крови. При этом определяют умеренную или тяжелую степень травмы при нахождении белков в следующих диапазонах: 105-890 пг/мл для GFAP и 110-2000 пг/мл для UCH-L1.

Недостатком данного способа является относительно низкая чувствительность и специфичность при низких концентрациях биомаркеров, что делает невозможным применения способа для диагностики ЧМТ легкой степени. Это обуславливает высокую вероятность выбора неправильной тактики лечения при отсутствии дополнительных диагностических мероприятий.

Также известно изобретение «Биомаркеры для ЧМТ» (GB2525055A, опубл. 14.10.2015), раскрывающее способ определения наличия ЧМТ с использованием биомаркеров, которые могут быть выбраны из группы, включающей белок, ассоцированный с микротрубочками 2 (MAP2) и фосфорилированныйнейрофиламент-H (pNF-H).

Недостатком данного изобретения можно назвать относительно маленькую выборку пациентов для обоснования эффективности способа, что затрудняет оценку предложенной методики, а также отсутствие результатов измерения белков GFAP и Тау.

Также известен способ определения ЧМТс использованием белка Tau (WO2019222554, опубл. 21.11.2019), включающий проведение одной или нескольких реакций амплификации, включая контактирование части биологического образца с мономерным свернутым тау-белком с образованием инкубационной смеси. Каждая реакция амплификации может включать определение наличия или количества неправильно свернутого тау-белка в биологическом образце в соответствии с амплифицированной частью неправильно свернутого тау-белка.

Недостатком данного способа является сложность проведения ПЦР исследования по сравнению с ИФА, неспецифичность Тау-белка для ЧМТ (может встречаться при нейродегенеративных, например, заболеваниях)

Также известен способ диагностики ЧМТ (US2019302127, опубл. 03.10.2019), включающий глиального фибриллярного кислого белка (GFAP) в пробу, взятой у субъекта, взаимодействие с антителом против GFAP и оценку взаимодействия GFAP и определенного участка аминокислотной последовательности антитела.

Недостатком данного способа является относительно низкая чувствительность к ЧМТ, обусловленная использованием одного GFAP, что недостаточно для полноценной диагностики. Кроме того, описанный способ диагностики может занимать достаточно много времени, что может негативно сказаться на состоянии пациента.

Также известен способ диагностики ЧМТ и других повреждений головного мозга разной степени тяжести на основе биомаркеров (US20130022982, опубл. 24.01.2013), включающий обнаружение биомаркеров в биологическом образце, в качестве которого может быть использована кровь, её сыворотка или плазма, а также спинномозговая жидкость. В качестве биомаркеров могут быть использованы белки Tau и GFAP, их продукты протеолитического распада, а также антитела.

Недостатком данного способа является относительно низкая эффективность именно для определения степени тяжести ЧМТ, обусловленная направленностью способа на определение большого количества состояний (например, инсульт, болезнь Альцгеймера, болезнь Пакинсона и хроническую травматическую энцефалопатию), что затрудняет ИФА и увеличивает время диагностики.

Также известен способ диагностики ЧМТ на основе биомаркеров (US2017023591, опубл. 26.01.2017), включающий обнаружение в образце пациента (например, в спинномозговой жидкости)наличия одного или нескольких биомаркеров, выбранных из группы, включающейубиквитин-С-концевой гидролазу LI (UCH-L1), белок глиальной фибриллярной кислоты (GFAP), альдегиддегидрогеназу семейства 1, член L1 (ALDHILI), тяжелую цепьфосфорилированногонейрофиламента (pNFH), среднюю цепь (NFM) или легкуюцепь (NFL), альфа-синуклеин, визинин-подобный белок 1 (VILIP-1) и S100B. Данный способ был принят за прототип.

Недостатком прототипа является относительно низкая эффективность диагностики, обусловленная недостаточной специфичностью способа для диагностики ЧМТ, так как существует большое количество нейродегенеративных заболеваний, которые вызывают смежные уровни концентрации исследуемых биомаркеров в пробах при диагностике согласно способу-прототипу.

Недостатки, относящиеся ко всем вышеприведенным документам, заключаются в отсутствии всех трех белков (тау, GFAP, pNF) и нацеленность способов на прогноз, исход.

Технической проблемой является необходимость разработки высокоэффектиного способа диагностики легкой ЧМТ.

Технический результат состоит в повышении эффективности диагностики легкой ЧМТ.

Технический результат достигается тем, что в способе диагностики черепно-мозговой травмы с использованием белковых биомаркеров, в ходе корого у пациента берут аналит и выявляют в нем концентрацию биомаркеров, в качестве которых используют глиальный протеин и нейрофиламент, отличающийся тем, что в качестве биомаркера дополнительно используют Тау-белок, при этом аналит у пациента берут через 1-24 часа после травмы, через 24-48 часов после травмы и в течение двух суток через шесть дней после травмы, после чего оценивают динамику белков, при этом пациенту ставят диагноз легкая черепно-мозговая травам при условии, если соблюдены по меньше мере два условия из А, B и C, где:

условие A соблюдено, есликонцентрация глиального протеина в первой пробе меньше или равна концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше или равна концентрации в третьей пробе;

условие B соблюдено, если концентрация нейрофиламента в первой пробе больше или равна концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе;

условие C соблюдено, если концентрация Тау-белка белка в первой пробе больше или равна концентрации белка во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе.

В качестве аналита может использоваться сыворотка, плазма крови, спинномозговая жидкость и др.

На основании источников, приведенных в патенте, можно утверждать, что временные рамки проведения диагностики ЧМТ, основанные на периодических и повторяющихся изменениях интенсивности и характеров процессов, протекающих внутри клетки, являются оптимальными. Изменения временных параметров забора материала или проведения теста, может пагубно сказаться на точности полученного результата.Указанные временные промежутки были выявлены путем анализа большого количества клинических случаев, связанных с ЧМТ.

Основные биомаркеры исследуемые при ЧМТ в норме выявляются в следовых количествах. При нарушении целостности гематоэнцефалического барьера и повреждении нервной ткани концентрация биомаркеров повышается в несколько раз (время возможного выявления маркера индивидуально для каждого белка и составляет от 25 минут до 12 часов). Предлагаемая нами методика является количественным анализом и позволяет определить не только наличие конкретного биомаркера, но и выявить его концентрацию в динамике, что объективно позволяет подтвердить факт повреждения нервной ткани. Поскольку концентрация и степень повышения у каждого отдельного биомаркера индивидуальна от пациента к пациенту, то одного маркера недостаточно.Использование трех указанных биомаркеров позволяет максимально точно и быстро определить наличие и степень ЧМТ, особенно легкую степень ЧМТ. При этом анализ белков в динамике позволяет исключить неточности, связанные с повышением концентрации белка, которое не связано с травмой. Например, при болезни Альцгеймера значения белков будут значительно выше и не придут в норму даже к седьмому дню.

В качестве метода обнаружения исследуемых белков (тау, нейрофиламента, глиального протеина) выбран ИФА – метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).

Принцип заявляемого способа.

Стандарты, контроли и образцы сывороток инкубируют в лунках микропланшета, покрытых кроличьими поликлональными антителами к нейрофиламентам/Тау белку/глиальному протеину человека. После инкубации и промывки в лунки добавляются биотинилированныемоноклональные антитела к нейрофиламентам/Тау белку/глиальному протеину. Планшет инкубируется с захваченными молекулами биомаркеров.

После второй инкубации и промывки в лунки добавляют конъюгатстрептавидин-пероксидаза. После й инкубации и промывки в лунки добавляют стандартный раствор субстрата (Н20 2 и ТМВ). Энзиматическая реакция приводит к образованию голубого продукта. Окрашивание меняется на желтое при добавлении кислогостоп-раствора. Абсорбция полученного желтого раствора измеряется при длине волны 450 нм. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна концентрации маркера в сыворотке крови человека. Калибровочная кривая строится по значениям объема плазмы, полученным для стандартов биомаркеров человека. Концентрации в образцах определяют с помощью построенной калибровочной кривой.

Методика определения нейрофиламентов в сыворотке крови

В начале анализа вносят в соответствующие лунки микропланшета по 100 мкл каждого приготовленного стандарта, контроля и разведенного образца, предпочтительно в дублях. Далее производятинкубацию микропланшета при комнатной температуре (25°С) в течение 1 часа, на орбитальном шейкере при 300 оборотов/мин. Затем тщательно промывают лунки микропланшета 3 раза буфером для промывок (по 0,35 мл). После последней промывки переворачивают микропланшет и аккуратно очищают поверхность микропланшента с помощью постукивания им по фильтровальной бумаге. Вносят во все лунки микропланшета по 100 мкл раствора детектирующих антител. Затем осуществляют Инкубация лунок при комнатной температуре (25°С) в течение l часа, на орбитальном шейкере, при 300 оборотов/мин. После осуществляют следующую тщательную промывку лунок микропланшета 3 раза буфером для промывок (по 0,35 мл). После последней промывки необходимо перевернуть микропланшет и аккуратно очистить поверхность микропланшента с помощью постукивания им по фильтровальной бумаге. Производят внесение во все лунки микропланшета по 100 мкл раствора конъюгата-стрептавидин-НRР во все лунки. Затем осуществляют инкубацию в течение 1 часа при комнатной температуре (25°С) на орбитальном шейкере со скоростью 300 оборотов/мин. После проводят очередную тщательную промывку лунок микропланшета 3 раза буфером для промывок (по 0,35 мл). После последней промывки необходимо перевернуть микропланшет и аккуратно очистить поверхность микропланшента с помощью постукивания им по фильтровальной бумаге. Затем вносят во все лунки микропланшета по 100 мкл раствора субстрата, избегая попадания прямых солнечных лучей на микропланшет. Предпочтительно накрываютмикропланшет алюминиевой фольгой. Осуществляют инкубацию в течение 15 минут при комнатной температуре (время инкубации может быть увеличено до 25 минут, если температура ниже 20°С.), при этом во время инкубацию микропланшет не подвергают механическому воздействию. Затем реакцию останавливают путем внесения во все лунки микропланшета по 100 мкл стоп-раствора.Подсчет оптической плотности плазмы при длине волны 450 нм проводят на микропланшетномридере. Считывают абсорбцию в течение 10 минут после остановки реакции.

Методика определения глиального протеина в сыворотке крови

В начале анализа вносят по 100 мкл каждого стандарта, контроля, образца, предпочтительно в дублях, в соответствующие лунки. Также вносят по 100 мкл буфера для разведения I в качестве бланка, в соответствующие лунки. После осуществляют инкубацию при комнатной температуре 25°С в течение 2 часов, на орбитальном шейкере, установленном на 300 оборотов/мин. Далее производят промывку лунок микропланшета 3 раза буфером для промывок (по 0,35 мл). Затем вносят по 100 мклбиотинилированных анти-GFАР антител в каждую лунку. Осуществляют инкубирование при комнатной температуре 25°С в течение 1 часа, на орбитальном шейкере, установленном на 300 оборотов/мин. Промывают лункимикропланшета 3 раза буфером для промывок (по 0,35 мл).Добавляют по 100 мкл раствора конъюгатастрептавидин­пероксидаза во все лунки. Далее обеспечивают инкубацию в течение 1 часа при комнатной температуре (25°С), на орбитальном шейкере со скоростью 300 оборотов/мин. После промывают лункимикропланшета 3 раза буфером для промывок (по 0,35 мл). Затем добавляют по 100 мкл раствора субстрата в каждую лунку, при этом избегают попадания прямых солнечных лучей на микропланшет. Предпочтительно накрываютмикропланшет алюминиевой фольгой. Проводят инкубацию в течение 10 минут при комнатной температуре (время инкубации может быть увеличено до 20 минут, если температура ниже 20°С.). После останавливают реакцию добавлением 100 мкл стоп-раствора в каждую лунку.Подсчет оптической плотности плазмы при длине волны 450 нм осуществляют на микропланшетномридере. Считывание абсорбции необходимо выполнить в течение 5 - 15 минут после остановки реакции.

Методика определения ТАУ-белка в сыворотке крови

В начале анализа вносят по 100 мкл стандартов по 50 мкл контролей и образцов+50 мкл буфера для разведения. Затем обеспечивают инкубацию в течение 2 часов при комнатной температуре (опционно: инкубация в течение ночи при комнатной температуре). После проводят промывку в количестве 4 циклов. Далее вносят по 100 мкл детектирующих антител. Затем проводят инкубацию в течение 1 часа при комнатной температуре. Осуществляют следующую промывку в количестве 4 циклов. Вносят по 100 мкл стандартного коньюгата IgG антител к антителам кролика. Далее обеспечивают инкубацию в течение 30 минут при комнатной температуре. Вносятпо 100 мкл стоп-раствора, измеряют оптическую плотность плазмы при длине 450 нм.

Диагностика ЧМТ

Все три белка «в норме» в сыворотке крови не определяются, так как являются компонентом клеток нервной ткани. То есть, само по себе появление их в сыворотке говорит о том, что была разрушена нервная клетка. Но разрушение нервной клетки может быть вызвано разными причинами (инсульт, опухоль, нейродегенеративные заболевания и тд), а не только ЧМТ. Поэтому мы определяем уровень белков не однократно, а трехкратно. Не одного белка, а трех. Белки выбраны по «месту» их нахождения в нервной ткани. Эта комбинация позволяет «охватить» и сами нервные клетки и межклеточное пространство. Кратность определения: первые сутки после травмы, через сутки после травмы и через 7 дней после травмы тоже выбрана не случайно и зависит от метаболизма определяемых белков. Так, например, тау-белок быстро выводится и через сутки после травмы приходит в норму. То есть, если у пациента мы определяем тау-белок сегодня, завтра и через неделю и все три раза он повышен – можно заподозрить нейродегенративное заболевание.

Мы обследовали 120 пациентов. 77 из них были с диагнозом «ЗЧМТ. Сотрясение ГМ», 14 с оперативными вмешательствами по поводу опухолей ГМ и 30 «здоровых» (с бронхитами, гастритами и другой патологией, не связанной с поражением нервной ткани).При сравнении средних (среднее, стандартное отклонение и медиана) лабораторных показателей в группе 1 с ЗЧМТ и контрольной группой 3, выявлены достоверные различия по всем изучаемым биомаркерам в динамике. При этом в основной группе 1 у пациентов с легкой ЗЧМТ достоверно преобладали средние показатели всех трех изучаемых биомаркеров (TAU-, GFAP- и pNF-белков в динамике) (р<0,0001), чем в контрольной группе 3.

При оценке средних значений уровней концентрации TAU-белка и pNF-белка в основной группе 1 отмечается выраженная динамика в зависимости от времени забора крови, а именно TAU1>TAU2>TAU3 и pNF1>pNF2>pNF3. В контрольной группе 3 подобной закономерности не обнаружено.GFAP-белок был выше нормальных значений во всех трех измеряемых точках и не претерпевал динамики в связи с особенностями его метаболизма и длительным периодом полувыведения.

В результате анализа выявлен оптимальный алгоритм диагностики: пациенту ставят диагноз легкая черепно-мозговая травам при условии, если соблюдены по меньше мере два условия из А, B и C, где:

условие A соблюдено, есликонцентрация глиального протеина в первой пробе меньше или равна концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше или равна концентрации в третьей пробе;

условие B соблюдено, если концентрация нейрофиламента в первой пробе больше или равна концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе;

условие C соблюдено, если концентрация Тау-белка белка в первой пробе больше или равна концентрации белка во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе.

Заявляемое изобретение поясняется примерами.

Пример 1.

Пациент в возрасте 59 л., мужчина, поступил со следующими жалобами: диффузные головные боли, боли в грудной клетке, усиливаются при надавливании, боли в пояснице слева. В результате диагностических мероприятий пациенту поставлен диагноз: закрытая ЧМТ; сотрясение головного мозга;ушиб мягких тканей правой теменно-височной области;перелом поперечных отростков L1-2 слева, перелом 6 ребра справа, ушиб грудной клетки. Пациент смог назвать приблизительное время получения травмы.

Для оценки эффективности заявляемого способа у пациента был взят образец сыворотки крови в течение первых суток после травмы, через сутки после травмы и через семь дней после травмы (всего три пробы). Результаты анализа представлены в таблице 1.

Таблица 1 – анализ динамики белков при диагностике ЧМТ

Концентрация Тау-белка, пг/мл	Концентрация глиального протеина, пг/мл	Концентрация нейрофиламента, пг/мл
1 проба	2 проба	3 проба	1 проба	2 проба	3 проба	1 проба	2 проба	3 проба
111,23	10,4	9,36	56,05	62,96	55,97	109,24	85,73	51,36

Концентрация Тау-белка белка в первой пробе больше или равна концентрации белка во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе. Концентрация глиального протеина в первой пробе меньше концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе. Концентрация нейрофиламента в первой пробе больше концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе. Таким образом, выполнены три условия для постановки диагноза ЧМТ легкой степени согласно заявляемому способу. Правильность поставленного диагноза подтверждена ранее стандартными диагностическими методами.

Пример 2.

Пациентка в возрасте 74 л., женщина, поступила со следующими жалобами: головная боль в области ушиба, общую слабость, колебания АД, заторможенность, тяжесть в голове, тошнота.В результате диагностических мероприятий пациентке поставлен диагноз: закрытая ЧМТ и сотрясение головного мозга. Пациентка смогла назвать приблизительное время получения травмы.

Для оценки эффективности заявляемого способа у пациентки был взят образец сыворотки крови в течение первых суток после травмы, через сутки после травмы и через семь дней после травмы (всего три пробы). Результаты анализа представлены в таблице 2.

Таблица 2 – анализ динамики белков при диагностике ЧМТ

Концентрация Тау-белка, пг/мл	Концентрация глиального протеина, нг/мл	Концентрация нейрофиламента, пг/мл
1 проба	2 проба	3 проба	1 проба	2 проба	3 проба	1 проба	2 проба	3 проба
7,25	5,39	3,02	14,85	11,41	11,09	64,39	24,52	15,28

Концентрация Тау-белка белка в первой пробе больше или равна концентрации белка во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе. Концентрация глиального протеина в первой пробе больше концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе. Концентрация нейрофиламента в первой пробе больше концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе. Таким образом, выполнены оба условия (по Тау-белку и нейрофиламенту) для постановки диагноза ЧМТ легкой степени согласно заявляемому способу. Правильность поставленного диагноза подтверждена ранее стандартными диагностическими методами.

Пример 3.

Пациент в возрасте 46 л., мужчина, поступил со следующими жалобами: на головокружение, однократную рвоту после падения со ступенек, одышку при ходьбе, при подъеме на 3-5 ступенек, на снижение переносимости нагрузок, на нерегулярный ритм сердца, боли в пояснично-крестцовом отделе позвоночника, слабость в нижних конечностях.В результате диагностических мероприятий пациенту поставлен диагноз: закрытая ЧМТ и сотрясение головного мозга. Пациент смог назвать приблизительное время получения травмы.

Для оценки эффективности заявляемого способа у пациента был взят образец сыворотки крови приблизительно через 24 часа после травмы, через 48 часов после травмы и через восемь дней после травмы (всего три пробы). Результаты анализа представлены в таблице 3.

Таблица 3 – анализ динамики белков при диагностике ЧМТ

Концентрация Тау-белка, пг/мл	Концентрация глиального протеина, нг/мл	Концентрация нейрофиламента, пг/мл
1 проба	2 проба	3 проба	1 проба	2 проба	3 проба	1 проба	2 проба	3 проба
1,12	0,82	0,74	0,31	0,28	0,29	0,17	0,11	0,19

Концентрация Тау-белка белка в первой пробе больше или равна концентрации белка во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе. Таким образом, выполнено одно условие (по Тау-белку) для постановки диагноза ЧМТ легкой степени согласно заявляемому способу. Правильность постановки диагноза была подтверждена стандартными диагностическими методами.

Пример 4.

Пациент в возрасте 73 л., мужчина, поступил со следующими жалобами: на головную боль, головокружение, слабость, вялость, заторможенность, потеря сознания после ДТП.. В результате диагностических мероприятий пациенту поставлен диагноз: закрытая ЧМТ легкой степени. Пациент смог назвать приблизительное время получения травмы.

Для оценки эффективности заявляемого способа у пациента был взят образец сыворотки крови приблизительно через 24 часа после травмы, через 48 часов после травмы и через восемь дней после травмы (всего три пробы). Результаты анализа представлены в таблице 4.

Таблица 4 – анализ динамики белков при диагностике ЧМТ

Концентрация Тау-белка, пг/мл	Концентрация глиального протеина, нг/мл	Концентрация нейрофиламента, пг/мл
1 проба	2 проба	3 проба	1 проба	2 проба	3 проба	1 проба	2 проба	3 проба
8,21	5,11	1,1	0,87	0,73	0,75	0,96	0,52	0,15

Концентрация Тау-белка в первой пробе больше концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе. Таким образом, выполнено условие по Тау-белку для постановки диагноза ЧМТ легкой степени согласно заявляемому способу. Правильность поставленного диагноза подтверждена ранее стандартными диагностическими методами.

Пример 5.

Пациент в возрасте 37 л., мужчина, поступил примерно через час после падения с велосипеда со следующими жалобами: на головокружение, головную боль в теменной области, эпизод потери памяти, боль в шейном отделе при движении. В результате диагностических мероприятий пациенту поставлен диагноз: закрытая ЧМТ легкой степени.

Для оценки эффективности заявляемого способа у пациента был взят образец сыворотки крови приблизительно через 1 час после травмы, через 25 часов после травмы и через шесть дней после травмы (всего три пробы). Результаты анализа представлены в таблице 5.

Таблица 5

Концентрация Тау-белка, пг/мл	Концентрация глиального протеина, нг/мл	Концентрация нейрофиламента, пг/мл
1 проба	2 проба	3 проба	1 проба	2 проба	3 проба	1 проба	2 проба	3 проба
0,55	0,41	0,18	2,33	1,30	0,26	3,17	1,16	0,14

Концентрация Тау-белка в первой пробе больше концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе. Концентрация нейрофиламента в первой пробе больше концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе. Таким образом, выполнены оба условия (по Тау-белку и нейрофиламенту) для постановки диагноза ЧМТ легкой степени согласно заявляемому способу. Правильность поставленного диагноза подтверждена ранее стандартными диагностическими методами.

Способ диагностики черепно-мозговой травмы с использованием белковых биомаркеров, в ходе которого у пациента берут аналит и выявляют в нем концентрацию биомаркеров, в качестве которых используют глиальный протеин и нейрофиламент, отличающийся тем, что в качестве биомаркера дополнительно используют Тау-белок, при этом аналит у пациента берут через 1-24 часа после травмы, через 25-48 часов после травмы и в течение двух суток через шесть дней после травмы, после чего оценивают динамику белков, при этом пациенту ставят диагноз легкая черепно-мозговая травам при условии, если соблюдены по меньше мере два условия из А, B и C, где:

условие A соблюдено, если концентрация глиального протеина в первой пробе меньше или равна концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше или равна концентрации в третьей пробе;

условие B соблюдено, если концентрация нейрофиламента в первой пробе больше или равна концентрации во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе;

условие C соблюдено, если концентрация Тау-белка в первой пробе больше или равна концентрации белка во второй пробе, при этом концентрация во второй пробе больше концентрации в третьей пробе.