Композиции и способы модулирования экспрессии tau

Группа изобретений относится к области химии антисмысловых соединений, молекулярной биологии и медицины. Предложены соединения, способные снижать экспрессию РНК или белка 4R изоформы Tau, композиции на их основе и способы модулирования сплайсинга мРНК Tau у животного. В одном варианте предложенное соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 15-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность азотистых оснований, содержащую область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных азотистых оснований, комплементарных части равной длины азотистых оснований 121708-122044 SEQ ID NO: 1, при этом модифицированный олигонуклеотид содержит 2'-замещенный сахарный фрагмент. В другом варианте целевая область комплементарности находится в пределах азотистых оснований 121873-121898 SEQ ID NO: 1. Такие соединения и способы пригодны для лечения, предупреждения или облегчения нейродегенеративных заболеваний, ассоциированных с Tau, у индивидуума, нуждающегося в этом. 10 н. и 63 з.п. ф-лы, 1 ил., 17 табл., 10 пр.

 

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Настоящая заявка зарегистрирована вместе с перечнем последовательностей в электронном формате. Перечень последовательностей представлен в виде файла под названием BIOL0220WOSEQ_ST25.txt, созданного 14 марта 2014 года, размером около 208 Кб. Информация о перечне последовательностей в электронном формате в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

1. Область техники

В данном документе описаны композиции и способы, которые относятся к области химии антисмысловых соединений, молекулярной биологии и медицины. Варианты реализации, описанные в данном документе, относятся к соединениям, композициям и способам лечения, предупреждения или облегчения нейродегенеративных заболеваний, включая таупатию, болезнь Альцгеймера, лобно-височную деменцию (FTD), FTDP-17, прогрессирующий надъядерный паралич (PSP), хроническую травматическую энцефалопатию (СТЕ), кортикобазальную ганглиозную дегенерацию (CBD), эпилепсию и синдром Драве, путем подавления экспрессии Tau или модулирования сплайсинга Tau в клетке и/или у животного.

2. Описание

Основная функция Tau заключается в связывании и стабилизации микротрубочек, которые являются важными структурными компонентами цитоскелета, участвующими в митозе, цитокинезе и везикулярном транспорте. Tau находится во многих тканях, но особенно распространен в аксонах нейронов. У людей существует шесть изоформ Tau, которые образуются путем альтернативного сплайсинга экзонов 2, 3 и 10. Сплайсинг экзонов 2 и 3 на N-конце белка приводит к включению нуля, одного или двух 29-аминокислотных доменов, которые называются 0N, 1N или 2N Tau, соответственно. Влияние этих доменов на функцию Tau не совсем понятно, но он может играть роль во взаимодействиях с плазматической мембраной. Включение 10 экзона на С-конце приводит к включению связывающего микрорубочки домена, кодируемого 10 экзоном. Поскольку существует 3 связывающих микротрубочки домена, находящихся в любом месте Tau, то эта изоформа Tau (с включенным 10 экзоном) называется 4R, где «R» относится к количеству повторений связывающих микротрубочки доменов. Tau без 10 экзона называют 3R Tau. Поскольку большее количество связывающих микротрубочки доменов (в 4R по сравнению с 3R) приводит к усилению связывания с микротрубочками, то 4R Tau, предположительно, значительно усиливает связывание и сборку микротрубочек. Соотношение 3R/4R Tau регулируется в зависимости от уровня развития, при этом плодные ткани экспрессируют исключительно 3R Tau, а ткани взрослого человека экспрессируют приблизительно равные количества 3R/4R Tau. Отклонения от нормального соотношения 3R/4R Tau характеризуют нейродегенеративные FTD таупатии. В настоящее время известно, как изменение соотношения 3R/4R Tau на более поздней стадии у взрослых животных влияет на патогенез Tau.

Направленное фосфорилирование серина-треонина обеспечивает регуляцию способности Tau связывать микротрубочки. Гиперфосфорилирование ускоряет отрыв Tau от микротрубочек. Описаны и другие пост-трансляционные модификации Tau; однако их значение неясно. Фосфорилирование Tau также регулируется в зависимости от уровня развития, при этом более сильное фосфорилирование происходит в происходит в плодных тканях, и гораздо более слабое фосфорилирование - у взрослых. Одна из характеристик нейродегенеративных расстройств представляет собой ошибочно повышенное фосфорилирование Tau.

Сеть микротрубочек участвует во многих важных процессах внутри клетки, включая структурную целостность, необходимую для сохранения морфологии клеток и работы транспортной системы. Поскольку связывание Tau с микротрубочками стабилизирует микротрубочки, то Tau, вероятно, представляет собой ключевой медиатор для некоторых из этих процессов, а разрушение нормального Tau при нейродегенеративных заболеваниях может нарушать некоторые из этих ключевых клеточных процессов.

Один из первых показателей того, что Tau может быть важен при нейродегенеративных синдромах, заключается в том, что распознавание Tau является главным компонентом нейрофибриллярных включений при болезни Альцгеймера. Фактически, нейрофибриллярные включения представляют собой агрегаты гиперфосфорилированного белка Tau. Вместе с бляшками, содержащими бета-амилоид, нейрофибриллярные включения представляют собой отличительную черту болезни Альцгеймера (AD) и значительно коррелируют с ухудшением когнитивной функции. 95% скоплений Tau при AD обнаруживаются в нейронных процессах и называются невритической дистрофией. Процесс(-ы), посредством которого такой связанный с микротрубочками белок становится оторванным от микротрубочек и образует белковые скопления, а также то, как это связано с нейронной токсичностью, не вполне понятно.

Нейронные включения Tau являются патологической характеристикой не только болезни Альцгеймера, но и разновидности лобно-височной деменции (FTD), PSP и CBD. Связь между Tau и нейроденегерацией была подтверждена открытием того, что мутации гена Tau обусловливают разновидности FTD. Эти генетические данные также подчеркивают важность соотношения 3R:4R Tau. Многие мутации Tau, которые вызывают FTD, приводят к изменению сплайсинга Tau, что обусловливает предпочтительное включение 10 экзона и, следовательно, повышение 4R Tau. Общие уровни Tau являются нормальными. Хотя неизвестно, вызывает ли нейродегенерацию изменение изоформы Tau или изменение аминокислот, или оба случая. Полученные недавно данные позволяют предположить, что PSP также может быть связан с повышенным соотношением 4R:3R Tau и, следовательно, может быть восприимчив к такой же стратегии сплайсинга.

Для облегчения понимания влияния соотношений Tau на нейродегенерацию, при помощи минигена, которые содержит промотор Tau и фланкирующие интронные последовательности 10 экзона, была создана мышиная модель, основанная на одной из мутаций сплайсинга Tau (N279K). Как и у людей, такие мыши демонстрировали повышенные уровни 4R Tau, по сравнению с трансгенными мышами, экспрессирующими Tau дикого типа (WT Tau), и развитие поведенческих и двигательных патологий, а также скопления агрегированного Tau в головном мозге и спинном мозге.

Белок «Tau» связан с многочисленными заболеваниями головного мозга, включая болезнь Альцгеймера, лобно-височную деменцию, прогрессирующий надъядерный паралич, кортикобазальную ганглиозную дегенерацию, деменцию боксеров, паркинсонизма, связанного с хромосомой, болезнь Литико-Бодига, деменцию с преобладанием нейрофибриллярных клубков, ганглиоглиому, ганглиоцитому, менингиоангиоматоз, подострый склерозирующий панэнцефалит, свинцовую энцефалопатию, туберозный склероз, болезнь Галлервордена-Шпатца, болезнь Пика, аргирофильную зернистую болезнь, кортикобазальную дегенерацию или лобно-височную долевую дегенерацию и другие. Расстройства, связанные с Tau, такие как AD, являются самой распространенной причиной деменции во взрослом возрасте. По оценкам, AD поражает 15 миллионов людей во всем мире и 40% людей в возрасте более 85 лет. AD характеризуется двумя патологическими признаками: Нейрофибриллярные включения Tau (NFT) и бляшки амилоида-β (Аβ).

При судорожных расстройствах электрическая активность головного мозга периодически нарушается, что приводит к некоторой степени временной дисфункции мозга. Для нормальной функции головного мозга необходим упорядоченный, организованный, скоординированный разряд электрических импульсов. Электрические импульсы обеспечивают возможность коммуникации головного мозга со спинным мозгом, нервными волокнами и мышцами, а также коммуникации внутри него. Судороги могут быть результатом нарушения электрической активности головного мозга. Существует два основных типа судорог: эпилептические и не эпилептические. Эпилептические судороги не имеют видимой причины или пускового механизма и возникают многократно. Не эпилептические судороги инициируются или провоцируются расстройство или другим патологическим состоянием, которое раздражает головной мозг. Некоторые умственные расстройства могут вызывать судорожные симптомы, которые упоминают как психогенные не эпилептические судороги.

Известно, что болезнь Альцгеймера (AD) представляет собой клинический фактор риска для позднего возникновения судорог. В многочисленных моделях AD на мышах обобщена такая повышенная предрасположенность к судорогам. В течение последних 5 лет многие из этих моделей AD были исследованы в группе мышей, нокаутных по tau (tau-/-). Повышенную предрасположенность к судорогам облегчали при помощи таких тау-нокаутных линиях с отложением амилоида. Кроме того, интересно, что сами tau-/- являются защищенными от химически инициированных судорог.

Противосудорожные средства представляют собой обычную схему лечения судорог. Однако Противосудорожные средства неэффективны у значительной части людей с судорожным расстройством, и для этих индивидуумов единственной возможностью является хирургическая операция. В условиях недостатка доступных способов лечения судорожных расстройств и нейродегенеративных заболеваний, некоторые способы согласно представленным вариантам реализации изобретения обеспечивают способы лечения, предупреждения или облегчения судорожного расстройства и нейродегенеративных заболеваний путем подавления экспрессии Tau или модулирования сплайсинга Tau у животного.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В данном документе приводятся способы модулирования сплайсинга мРНК Tau в клетках, тканях и в организме животных. В данном документе представлены также способы модулирования экспрессии продукта мРНК Tau в клетках, тканях и в организме животных.

В некоторых вариантах реализации изобретения модулирование может происходить в клетке или ткани. В некоторых вариантах реализации клетка или ткань находится в организме животного. В некоторых вариантах реализации животное представляет собой человека. В некоторых вариантах реализации происходит снижение уровней мРНК Tau. В некоторых вариантах реализации происходит снижение уровней белка Tau. В некоторых вариантах реализации происходит модулирование сплайсинга мРНК Tau. В некоторых вариантах реализации происходит модулирование экспрессии продукта мРНК Tau. В некоторых вариантах реализации происходит ускорение отделения 10 экзона Tau. В некоторых вариантах реализации происходит снижение экспрессии РНК или белка 4R изоформы Tau. В некоторых вариантах реализации происходит повышение экспрессии РНК или белка 3R изоформы Tau. В некоторых вариантах реализации происходит снижение экспрессии РНК или белка 4R изоформы Tau и повышение экспрессии РНК или белка 3R изоформы Tau. В некоторых вариантах реализации происходит снижение фосфорилированного Tau. Такое снижение и модулирование может происходить в зависимости от времени или в зависимости от дозы.

Некоторые варианты реализации относятся к способам снижения или уменьшения одного или более симптомов расстройства, связанного с tau. В некоторых вариантах реализации симптом представляет собой судороги. В некоторых вариантах реализации расстройство, связанное с tau, или нейродегенеративное расстройство представляет собой болезнь Альцгеймера, лобно-височную деменцию, прогрессирующий надъядерный паралич, кортикобазальную ганглиозную дегенерацию, деменцию боксеров, паркинсонизма, связанного с хромосомой, болезнь Литико-Бодига, деменцию с преобладанием нейрофибриллярных клубков, ганглиоглиому, ганглиоцитому, менингиоангиоматоз, подострый склерозирующий панэнцефалит, свинцовую энцефалопатию, туберозный склероз, болезнь Галлервордена-Шпатца, болезнь Пика, аргирофильную зернистую болезнь, кортикобазальную дегенерацию или лобно-височную долевую дегенерацию. Некоторые варианты реализации относятся к способу уменьшения судорог у субъекта с высоким соотношением изоформ 4R:3R tau. В некоторых вариантах реализации способы включают введение субъекту антисмыслового агента, при этом агент обеспечивает снижение экспрессии tau или снижение соотношения 4R:3R tau в центральной нервной системе субъекта.

Также предлагаются способы, подходящие для предупреждения, лечения и облегчения заболеваний, расстройств и патологических состояний, связанных с Tau. В некоторых вариантах реализации изобретения такие заболевания, расстройства и патологические состояния, связанные с Tau, представляют собой нейродегенеративные заболевания. В некоторых вариантах реализации нейродегенеративное заболевание представляет собой любое заболевание из болезни Альцгеймера, лобно-височной деменции (FTD), FTDP-17, прогрессирующего надъядерного паралича, хронической травматической энцефалопатии, эпилепсии или синдрома Драве. В некоторых вариантах реализации происходит облегчение, предупреждение или отсрочка (замедление прогрессирования) одного или более симптомов нейродегенеративного заболевания. В некоторых вариантах реализации симптом представляет собой потерю памяти, тревожность или потерю двигательной функции. В некоторых вариантах реализации происходит улучшение нейродегенеративной функции. В некоторых вариантах реализации происходит снижение нейрофибриллярных включений.

Такие заболевания, расстройства и патологические состояния могут в совокупности иметь один или несколько факторов риска, причин или последствий. Некоторые факторы риска и причины развития нейродегенеративного заболевания включают генетическую предрасположенность и пожилой возраст.

В некоторых вариантах реализации изобретения способы лечения включают введение Tau антисмыслового соединения индивидууму, нуждающемуся в этом. Антисмысловое соединение может подавлять экспрессию Tau или модулировать сплайсинг Tau. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловое соединение представляет собой одноцепочечный антисмысловый олигонуклеотид. В некоторых вариантах реализации одноцепочечный антисмысловый олигонуклеотид комплементарен нуклеиновой кислоте Tau.

В некоторых вариантах реализации данного изобретения представлены соединения, содержащие олигонуклеотиды. В некоторых вариантах реализации такие олигонуклеотиды комплементарны транскрипту Tau. В некоторых таких вариантах реализации олигонуклеотиды комплементарны целевой области транскрипта Tau, содержащего 10 экзон. В некоторых таких вариантах реализации олигонуклеотиды комплементарны целевой области транскрипта Tau, содержащему интрон, смежный с 10 экзоном. В некоторых таких вариантах реализации олигонуклеотиды комплементарны целевой области транскрипта Tau, содержащего интрон, смежный с 10 экзоном и расположенный после 10 экзона. В некоторых таких вариантах реализации олигонуклеотиды комплементарны целевой области транскрипта Tau, содержащему интрон, смежный с 10 экзоном и расположенный до 10 экзона. В некоторых вариантах реализации транскрипт Tau содержит экзонный сайленсер сплайсинга для 10 экзона. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды подавляют включение 10 экзона. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид ускоряет перепрыгивание 10 экзона. В некоторых таких вариантах реализации происходит увеличение мРНК 3R Tau. В некоторых таких вариантах реализации происходит снижение мРНК Tau с мРНК 10 экзона. В некоторых вариантах реализации происходит снижение 4R изоформы белка Tau. В некоторых вариантах реализации происходит увеличение 3R изоформы белка Tau.

В некоторых вариантах реализации изобретения, включая, но не ограничиваясь ими, любые из перечисленных выше вариантов реализации, транскрипт Tau находится в организме человека. В некоторых вариантах реализации изобретения, включая, но не ограничиваясь ими, любые из перечисленных выше вариантов реализации, транскрипт Tau находится в организме мыши.

В данном описании предлагаются следующие не ограничивающие нумерованные варианты реализации изобретения:

Вариант реализации 1. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 8-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность азотистых оснований, содержащую область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований, комплементарных целевой области равной длины транскрипта Tau.

Вариант реализации 2. Соединение по варианту реализации 1, отличающееся тем, что область комплементарности модифицированного олигонуклеотида на 100% комплементарна целевой области.

Вариант реализации 3. Соединение по варианту реализации 1 или 2, отличающееся тем, что область комплементарности последовательности азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере 10 смежных азотистых оснований.

Вариант реализации 4. Соединение по варианту реализации 1 или 2, отличающееся тем, что область комплементарности последовательности азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере 15 смежных азотистых оснований.

Вариант реализации 5. Соединение по варианту реализации 1 или 2, отличающееся тем, что область комплементарности последовательности азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере 18 смежных азотистых оснований.

Вариант реализации 6. Соединение по любому из вариантов реализации 1-5, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида имеет по меньшей мере 80% комплементарность равной по длине области транскрипта Tau, измеренную по всей длине олигонуклеотида.

Вариант реализации 7. Соединение по любому из вариантов реализации 1-5, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида имеет по меньшей мере 90% комплементарность равной по длине области транскрипта Tau, измеренную по всей длине олигонуклеотида.

Вариант реализации 8. Соединение по любому из вариантов реализации 1-5, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида имеет 100% комплементарность равной по длине области транскрипта Tau, измеренную по всей длине олигонуклеотида.

Вариант реализации 9. Соединение по любому из вариантов реализации 1-8, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах 10 экзона транскрипта Tau.

Вариант реализации 10. Соединение по любому из вариантов реализации 1 -8, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах 9 интрона транскрипта Tau.

Вариант реализации 11. Соединение по любому из вариантов реализации 1-8, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах 10 интрона транскрипта Tau.

Вариант реализации 12. Соединение по любому из вариантов реализации 1-8, отличающееся тем, что целевая область содержит часть 9 интрона и часть 10 экзона.

Вариант реализации 13. Соединение по любому из вариантов реализации 1-8, отличающееся тем, что целевая область содержит часть 10 экзона и часть 10 интрона.

Вариант реализации 14. Соединение по любому из вариантов реализации 1-8, отличающееся тем, что целевая область содержит часть 10 экзона и часть интрона на 5'-конце 10 экзона.

Вариант реализации 15. Соединение по любому из вариантов реализации 1-8, отличающееся тем, что целевая область содержит часть 10 экзона и часть интрона на 3'-конце 10 экзона.

Вариант реализации 16. Соединение по любому из вариантов реализации 1-15, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121708 и азотистого основания 122044 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 17. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121796 и азотистого основания 122044 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 18. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121796 и азотистого основания 121885 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 19. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121873 и азотистого основания 121898 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 20. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121869 и азотистого основания 121943 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 21. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 122020 и азотистого основания 122044 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 22. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121881 и азотистого основания 121898 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 23. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121880 и азотистого основания 121897 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 24. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121879 и азотистого основания 121896 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 25. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121878 и азотистого основания 121895 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 26. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121877 и азотистого основания 121894 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 27. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121876 и азотистого основания 121893 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 28. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121875 и азотистого основания 121892 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 29. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121874 и азотистого основания 121891 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 30. Соединение по любому из вариантов реализации 1-9, отличающееся тем, что целевая область находится в пределах азотистого основания 121873 и азотистого основания 121890 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 31. Соединение по любому из вариантов реализации 1-15, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 8-200.

Вариант реализации 32. Соединение по любому из вариантов реализации 1-15, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида состоит из последовательности азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 8-200.

Вариант реализации 33. Соединение по любому из вариантов реализации 1-15, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152 или 153.

Вариант реализации 34. Соединение по любому из вариантов реализации 1-15, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида состоит из последовательности азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152 или 153.

Вариант реализации 35. Соединение по любому из вариантов реализации 1-15, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида содержит последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 31, 33, 34, 35, 36, 37, 45, 72, 79, 82, 83, 97, 106, 107, 112, 113, 130, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 157, 158, 160 или 200.

Вариант реализации 36. Соединение по любому из вариантов реализации 1-15, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида состоит из последовательности азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 31, 33, 34, 35, 36, 37, 45, 72, 79, 82, 83, 97, 106, 107, 112, 113, 130, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 157, 158, 160 или 200.

Вариант реализации 37. Соединение по любому из вариантов реализации 1-36, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере один модифицированный нуклеозид.

Вариант реализации 38. Соединение по варианту реализации 37, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный нуклеозид содержит модифицированный сахарный фрагмент.

Вариант реализации 39. Соединение по варианту реализации 37, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный сахарный фрагмент представляет собой 2'-замещенный сахарный фрагмент.

Вариант реализации 40. Соединение по варианту реализации 39, отличающееся тем, что 2'-заместитель по меньшей мере одного 2'-замещенного сахарного фрагмента выбран из: 2'-ОМе, 2'-F и 2'-МОЕ.

Вариант реализации 41. Соединение по варианту реализации 39, отличающееся тем, что 2'-заместитель по меньшей мере одного 2'-замещенного сахарного фрагмента представляет собой 2'-МОЕ.

Вариант реализации 42. Соединение по любому из вариантов реализации 37-38, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный сахарный фрагмент представляет собой бициклический сахарный фрагмент.

Вариант реализации 43. Соединение по варианту реализации 42, отличающееся тем, что по меньшей мере один бициклический сахарный фрагмент представляет собой закрытую нуклеиновую кислоту (LNA) или cEt.

Вариант реализации 44. Соединение по любому из вариантов реализации 37-43, отличающееся тем, что по меньшей мере один сахарный фрагмент представляет собой заменитель сахара.

Вариант реализации 45. Соединение по варианту реализации 44, отличающееся тем, что по меньшей мере один заменитель сахара представляет собой морфолино.

Вариант реализации 46. Соединение по варианту реализации 44, отличающееся тем, что по меньшей мере один заменитель сахара представляет собой модифицированный морфолино.

Вариант реализации 47. Соединение по любому из вариантов реализации 1-46, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 5 модифицированный нуклеозидов, каждый независимо содержащий модифицированный сахарный фрагмент.

Вариант реализации 48. Соединение по варианту реализации 47, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 10 модифицированных нуклеозидов, каждый независимо содержащий модифицированный сахарный фрагмент.

Вариант реализации 49. Соединение по варианту реализации 47, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 15 модифицированных нуклеозидов, каждый независимо содержащий модифицированный сахарный фрагмент.

Вариант реализации 50. Соединение по варианту реализации 47, отличающееся тем, что каждый нуклеозид модифицированного олигонуклеотида представляет собой модифицированный нуклеозид, и каждый независимо содержит модифицированный сахарный фрагмент, причем модифицированный сахарные фрагменты каждого модифицированного нуклеозида являются одинаковыми.

Вариант реализации 51. Соединение по варианту реализации 47, отличающееся тем, что каждый нуклеозид модифицированного олигонуклеотида представляет собой модифицированный нуклеозид, каждый независимо содержащий модифицированный сахарный фрагмент.

Вариант реализации 52. Соединение по любому из вариантов реализации 1-51, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере два модифицированный нуклеозида, содержащих одинаковые модифицированные сахарные фрагменты.

Вариант реализации 53. Соединение по любому из вариантов реализации 1-52, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере два модифицированный нуклеозида, содержащих разные модифицированные сахарные фрагменты.

Вариант реализации 54. Соединение по любому из вариантов реализации 1-53, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит модифицированную область, содержащую по меньшей мере 5 смежных модифицированных нуклеозидов.

Вариант реализации 55. Соединение по варианту реализации 54, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит модифицированную область, содержащую по меньшей мере 10 смежных модифицированных нуклеозидов.

Вариант реализации 56. Соединение по варианту реализации 54, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит модифицированную область, содержащую по меньшей мере 15 смежных модифицированных нуклеозидов.

Вариант реализации 57. Соединение по варианту реализации 54, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит модифицированную область, содержащую по меньшей мере 18 смежных модифицированных нуклеозидов.

Вариант реализации 58. Соединение по варианту реализации 54, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит модифицированную область, содержащую по меньшей мере 20 смежных модифицированных нуклеозидов.

Вариант реализации 59. Соединение по любому из вариантов реализации 53-58, отличающееся тем, что каждый модифицированный нуклеозид модифицированной области имеет модифицированный сахарный фрагмент, независимо выбранный из: 2'-F, 2'-OMe, 2'-MOE, cEt, БНК, морфолино и модифицированного морфолино.

Вариант реализации 60. Соединение по любому из вариантов реализации 54-59, отличающееся тем, что все модифицированные нуклеозиды модифицированной области содержат одинаковые модификации.

Вариант реализации 61. Соединение по варианту реализации 60, отличающееся тем, что все модифицированные нуклеозиды модифицированной области содержат одинаковый 2'-замещенный сахарный фрагмент.

Вариант реализации 62. Соединение по варианту реализации 61, отличающееся тем, что 2'-замещенный сахарный фрагмент модифицированных нуклеозидов в области модифицированных нуклеозидов выбран из 2'-F, 2'-OMe и 2'-МОЕ.

Вариант реализации 63. Соединение по варианту реализации 61, отличающееся тем, что 2'-замещенный сахарный фрагмент модифицированных нуклеозидов в области модифицированных нуклеозидов представляет собой 2'-МОЕ.

Вариант реализации 64. Соединение по варианту реализации 59, отличающееся тем, что все модифицированные нуклеозиды в области модифицированных нуклеозидов содержат одинаковый бициклический сахарный фрагмент.

Вариант реализации 65. Соединение по варианту реализации 64, отличающееся тем, что бициклический сахарный фрагмент модифицированных нуклеозидов в области модифицированных нуклеозидов выбран из БЫК и cEt.

Вариант реализации 66. Соединение по варианту реализации 59, отличающееся тем, что все модифицированные нуклеозиды в области модифицированных нуклеозидов содержат заменитель сахара.

Вариант реализации 67. Соединение по варианту реализации 66, отличающееся тем, что заменитель сахара модифицированных нуклеозидов в области модифицированных нуклеозидов представляет собой морфолино.

Вариант реализации 68. Соединение по варианту реализации 66, отличающееся тем, что заменитель сахара модифицированных нуклеозидов в области модифицированных нуклеозидов представляет собой модифицированный морфолино.

Вариант реализации 69. Соединение по любому из вариантов реализации 1-68, отличающееся тем, что модифицированный нуклеотид содержит не более 4 смежных природных нуклеозидов.

Вариант реализации 70. Соединение по любому из вариантов реализации 1-68, отличающееся тем, что каждый нуклеозид модифицированного олигонуклеотида представляет собой модифицированный нуклеозид.

Вариант реализации 71. Соединение по варианту реализации 70, отличающееся тем, что каждый модифицированный нуклеозид содержит модифицированный сахарный фрагмент.

Вариант реализации 72. Соединение по варианту реализации 71, отличающееся тем, что все модифицированные нуклеозиды модифицированного олигонуклеотида содержат одинаковую модификацию.

Вариант реализации 73. Соединение по варианту реализации 72, отличающееся тем, что все модифицированные нуклеозиды модифицированного олигонуклеотида содержат одинаковый 2'-замещенный сахарный фрагмент.

Вариант реализации 74. Соединение по варианту реализации 73, отличающееся тем, что 2'-замещенный сахарный фрагмент модифицированного олигонуклеотида выбран из 2'-F, 2'-OMe и 2'-МОЕ.

Вариант реализации 75. Соединение по варианту реализации 74, отличающееся тем, что 2'-замещенный сахарный фрагмент модифицированного олигонуклеотида представляет собой 2'-МОЕ.

Вариант реализации 76. Соединение по варианту реализации 72, отличающееся тем, что все модифицированные нуклеозиды модифицированного олигонуклеотида содержат одинаковый бициклический сахарный фрагмент.

Вариант реализации 77. Соединение по варианту реализации 76, отличающееся тем, что бициклический сахарный фрагмент модифицированного олигонуклеотида выбран из БНК и cEt.

Вариант реализации 78. Соединение по варианту реализации 72, отличающееся тем, что все модифицированные нуклеозиды модифицированного олигонуклеотида содержат заменитель сахара.

Вариант реализации 79. Соединение по варианту реализации 78, отличающееся тем, что заменитель сахара модифицированного олигонуклеотида представляет собой морфолино.

Вариант реализации 80. Соединение по варианту реализации 78, отличающееся тем, что заменитель сахара модифицированного олигонуклеотида представляет собой модифицированный морфолино.

Вариант реализации 81. Соединение по любому из вариантов реализации 1-36, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид имеет мотив A-B₂-A-B₂-A-B₂-A-B₂-A-B₂-A-B₂-A₂, где каждый А содержит бициклический сахарный фрагмент, и где каждый В выбран из 2'-замещенного сахарного фрагмента и немодифицированного 2'-дезоксисахарного фрагмента.

Вариант реализации 82. Соединение по варианту реализации 81, отличающееся тем, что каждый А представляет собой сахарный фрагмент cEt.

Вариант реализации 83. Соединение по варианту реализации 81, отличающееся тем, что каждый А представляет собой сахарный фрагмент БНК.

Вариант реализации 84. Соединение по любому из вариантов реализации 81-83, отличающееся тем, что каждый В представляет собой немодифицированный 2'-дезоксисахарный фрагмент.

Вариант реализации 85. Соединение по любому из вариантов реализации 81-83, отличающееся тем, что каждый В представляет собой сахарный фрагмент 2'-МОЕ.

Вариант реализации 86. Соединение по любому из вариантов реализации 1-85, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь.

Вариант реализации 87. Соединение по варианту реализации 86, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь.

Вариант реализации 88. Соединение по вариантам реализации 86 или 87, содержащее по меньшей мере одну тиофосфатную межнуклеозидную связь.

Вариант реализации 89. Соединение по любому из вариантов реализации 1-85, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь, и при этом каждая межнуклеозидная связь содержит одинаковую модификацию.

Вариант реализации 90. Соединение по варианту реализации 89, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.

Вариант реализации 91. Соединение по варианту реализации 86, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит 4 фосфодиэфирные межнуклеозидные связи.

Вариант реализации 92. Соединение по варианту реализации 86, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит 5 фосфодиэфирных межнуклеозидных связей.

Вариант реализации 93. Соединение по варианту реализации 86, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит 6 фосфодиэфирных межнуклеозидных связей.

Вариант реализации 94. Соединение по варианту реализации 86, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит 7 фосфодиэфирных межнуклеозидных связей.

Вариант реализации 95. Соединение по любому из вариантов реализации 91-94, отличающееся тем, что каждая оставшаяся межнуклеозидная связь представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

Вариант реализации 96. Соединение по любому из вариантов реализации 1-85, отличающееся тем, что это соединение имеет мотив межнуклеозидной связи N_SN_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_SN, где каждый N представляет собой нуклеозид, каждый S представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь, и каждый О представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

Вариант реализации 97. Соединение по любому из вариантов реализации 1-85, отличающееся тем, что это соединение имеет мотив межнуклеозидной связи N_SN_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_SN, где каждый N представляет собой нуклеозид, каждый S представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь, и каждый О представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

Вариант реализации 98. Соединение по любому из вариантов реализации 1-97, содержащее по меньшей мере один конъюгат.

Вариант реализации 99. Соединение по любому из вариантов реализации 1-98, состоящее из модифицированного олигонуклеотида.

Вариант реализации 100. Соединение по любому из вариантов реализации 1-99, отличающееся тем, что это соединение модулирует сплайсинг транскрипта Tau.

Вариант реализации 101. Соединение по любому из вариантов реализации 1-99, отличающееся тем, что это соединение снижает экспрессию 4R изоформы Tau.

Вариант реализации 102. Соединение по любому из вариантов реализации 1-99, отличающееся тем, что это соединение снижает экспрессию мРНК Tau, содержащей 10 экзон.

Вариант реализации 103. Соединение по любому из вариантов реализации 1-99, отличающееся тем, что это соединение снижает экспрессию белка Tau, содержащего аминокислоты, кодируемые 10 экзоном мРНК.

Вариант реализации 104. Соединение по любому из вариантов реализации 1-8 или 30-103, имеющее последовательность азотистых оснований, содержащую любую из последовательностей, перечисленных в SEQ ID NO: 8-200.

Вариант реализации 105. Соединение по любому из вариантов реализации 1-8 или 30-103, имеющее последовательность азотистых оснований, содержащую любую из последовательностей, перечисленных в SEQ ID NO: 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152 или 153.

Вариант реализации 106. Соединение по любому из вариантов реализации 1-8 или 30-103, имеющее последовательность азотистых оснований, состоящую из любой из последовательностей, перечисленных в SEQ ID NO: 8-200.

Вариант реализации 107. Соединение по любому из вариантов реализации 1-8 или 30-103, имеющее последовательность азотистых оснований, состоящую из любой из последовательностей, перечисленных в SEQ ID NO: 33, 34, 147, 148, 149, 150, 151, 152 или 153.

Вариант реализации 108. Двухцепочечное соединение, содержащее соединение по любому из вариантов реализации 1-107.

Вариант реализации 109. Соединение, состоящее из ISIS 670011.

Вариант реализации 110. Соединение, состоящее из ISIS 670012.

Вариант реализации 111. Соединение, состоящее из ISIS 670013.

Вариант реализации 112. Соединение, состоящее из ISIS 670014.

Вариант реализации 113. Соединение, состоящее из ISIS 670015.

Вариант реализации 114. Соединение, состоящее из ISIS 670016.

Вариант реализации 115. Соединение, состоящее из ISIS 670017.

Вариант реализации 116. Соединение, состоящее из ISIS 670018.

Вариант реализации 117. Соединение, состоящее из ISIS 670019.

Вариант реализации 118. Соединение, состоящее из ISIS 670020.

Вариант реализации 119. Соединение, состоящее из ISIS 670021.

Вариант реализации 120. Соединение, состоящее из ISIS 670022.

Вариант реализации 121. Соединение, состоящее из ISIS 670023.

Вариант реализации 122. Соединение, состоящее из ISIS 670024.

Вариант реализации 123. Соединение, состоящее из ISIS 670025.

Вариант реализации 124. Соединение, состоящее из ISIS 670026.

Вариант реализации 125. Соединение, состоящее из ISIS 670027.

Вариант реализации 126. Соединение, состоящее из ISIS 670028.

Вариант реализации 127. Соединение, состоящее из ISIS 678329.

Вариант реализации 128. Соединение, состоящее из ISIS 678330.

Вариант реализации 129. Соединение, состоящее из ISIS 678331.

Вариант реализации 130. Соединение, состоящее из ISIS 678332.

Вариант реализации 131. Соединение, состоящее из ISIS 678333.

Вариант реализации 132. Соединение, состоящее из ISIS 678334.

Вариант реализации 133. Соединение, состоящее из ISIS 693840.

Вариант реализации 134. Соединение, состоящее из ISIS 693841.

Вариант реализации 135. Соединение, состоящее из ISIS 693842.

Вариант реализации 136. Соединение, состоящее из ISIS 693843.

Вариант реализации 137. Соединение, состоящее из ISIS 693844.

Вариант реализации 138. Соединение, состоящее из ISIS 693845.

Вариант реализации 139. Соединение, состоящее из ISIS 693846.

Вариант реализации 140. Соединение, состоящее из ISIS 693847.

Вариант реализации 141. Соединение, состоящее из ISIS 693848.

Вариант реализации 142. Соединение, состоящее из ISIS 693849.

Вариант реализации 143. Соединение, состоящее из ISIS 549577.

Вариант реализации 144. Соединение, состоящее из ISIS 549580.

Вариант реализации 145. Соединение, состоящее из ISIS 549581.

Вариант реализации 146. Соединение, состоящее из ISIS 549582.

Вариант реализации 147. Соединение, состоящее из ISIS 549583.

Вариант реализации 148. Соединение, состоящее из ISIS 549584.

Вариант реализации 149. Соединение, состоящее из ISIS 549585.

Вариант реализации 150. Соединение, состоящее из ISIS 549586.

Вариант реализации 151. Соединение, состоящее из ISIS 617341.

Вариант реализации 152. Соединение, состоящее из ISIS 617351.

Вариант реализации 153. Соединение, состоящее из ISIS 617352.

Вариант реализации 154. Соединение, состоящее из ISIS 617353.

Вариант реализации 155 Соединение, состоящее из ISIS 617358.

Вариант реализации 156. Соединение, состоящее из ISIS 617360.

Вариант реализации 157. Соединение, состоящее из ISIS 617361.

Вариант реализации 158. Соединение, состоящее из ISIS 617362.

Вариант реализации 159. Способ модулирования сплайсинга транскрипта Tau в клетке, включающий приведение клетки в контакт с соединением согласно любому из вариантов реализации 1-158.

Вариант реализации 160. Способ по варианту реализации 158, отличающийся тем, что клетка находится in vitro.

Вариант реализации 161. Способ по варианту реализации 158, отличающийся тем, что клетка находится у животного.

Вариант реализации 162. Способ модулирования экспрессии белка Tau в клетке, включающий приведение клетки в контакт с соединением согласно любому из вариантов реализации 1-158.

Вариант реализации 163. Способ по варианту реализации 162, отличающийся тем, что происходит снижение экспрессии 4R изоформы белка Tau.

Вариант реализации 164. Способ по варианту реализации 162, отличающийся тем, что происходит повышение экспрессии 3R изоформы белка Tau.

Вариант реализации 165. Способ по любому из вариантов реализации 162-164, отличающийся тем, что клетка находится in vitro.

Вариант реализации 166. Способ по любому из вариантов реализации 162-164, отличающийся тем, что клетка находится у животного.

Вариант реализации 167. Способ уменьшения или облегчения одного или более симптомов, связанных с расстройством, ассоциированным с tau, включающий приведение в контакт клетки с соединением согласно любому из вариантов реализации 1-158.

Вариант реализации 168. Способ по варианту реализации 167, отличающийся тем, что симптом представляют собой судороги.

Вариант реализации 169. Способ по любому из вариантов реализации 167-168, отличающийся тем, что клетка находится у животного.

Вариант реализации 170. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из вариантов реализации 1-158 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Вариант реализации 171. Фармацевтическая композиция по варианту реализации 170, отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель представляет собой стерильный солевой раствор.

Вариант реализации 172. Способ, включающий введение животному фармацевтической композиции по вариантам реализации 170 или 171.

Вариант реализации 173. Способ по варианту реализации 172, отличающийся тем, что введение осуществляют инъекцией.

Вариант реализации 174. Способ по варианту реализации 172 или 173, отличающийся тем, что введение является системным.

Вариант реализации 175. Способ по варианту реализации 172 или 173, отличающийся тем, что введение осуществляют в ЦНС.

Вариант реализации 176. Способ по любому из вариантов реализации 172-175, отличающийся тем, что животное имеет один или более симптомов, связанных с одним или более расстройствами, ассоциированными с tan.

Вариант реализации 177. Способ по варианту реализации 176, отличающийся тем, что введение обеспечивает облегчение одного или более симптомов, связанных с одним или более расстройствами, ассоциированными с tau.

Вариант реализации 178. Способ по любому из вариантов реализации 172-175, отличающийся тем, что животное имеет один или более симптомов, связанных с болезнью Альцгеймера.

Вариант реализации 179. Способ по варианту реализации 178, отличающийся тем, что введение обеспечивает облегчение одного или более симптомов, связанных с болезнью Альцгеймера.

Вариант реализации 180. Способ по любому из вариантов реализации 172-179, отличающийся тем, что животное представляет собой мышь.

Вариант реализации 181. Способ по любому из вариантов реализации 172-179, отличающийся тем, что животное представляет собой человека.

Вариант реализации 182. Применение соединения по любому из вариантов реализации 1-158 или композиции по любому из вариантов реализации 170-171 для получения лекарственного средства для применения при лечении расстройства, связанного с tau.

Вариант реализации 183. Применение соединения по любому из вариантов реализации 1-158 или композиции по любому из вариантов реализации 170-171 для получения лекарственного средства для применения при облегчении одного или более симптомов, связанных с расстройством, ассоциированным с tau.

Вариант реализации 184. Соединение, композиция или способ по любому из вариантов реализации 1-183, отличающийся тем, что последовательность азотистых оснований не состоит из последовательности азотистых оснований, перечисленной в SEQ ID NO: 45, 66, 68, 69 или 200.

Вариант реализации 185. Соединение, композиция или способ по любому из вариантов реализации 1-183, отличающийся тем, что последовательность азотистых оснований не состоит из последовательности азотистых оснований CCAGCTTCTTATTAATTATC или TAAGATCCAGCTTCTTATTA.

Вариант реализации 186. Соединение, композиция или способ по любому из вариантов реализации 1-183, отличающийся тем, что целевая область не находится в пределах азотистого основания 121828 и азотистого основания 121847 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 187. Соединение, композиция или способ по любому из вариантов реализации 1-183, отличающийся тем, что целевая область не находится в пределах азотистого основания 121834 и азотистого основания 121853 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 188. Соединение, композиция или способ по любому из вариантов реализации 1-183, отличающийся тем, что целевая область не находится в пределах азотистого основания 121840 и азотистого основания 121859 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 189. Соединение, композиция или способ по любому из вариантов реализации 1-183, отличающийся тем, что целевая область не находится в пределах азотистого основания 121924 и азотистого основания 121941 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 190. Соединение, композиция или способ по любому из вариантов реализации 1-183, отличающийся тем, что целевая область не находится в пределах азотистого основания 121012 и азотистого основания 121029 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 191. Соединение, композиция или способ по любому из вариантов реализации 1-183, отличающийся тем, что целевая область не находится в пределах азотистого основания 121020 и азотистого основания 121037 SEQ ID NO: 1.

Вариант реализации 192. Соединение, композиция или способ по любому из вариантов реализации 1-183, отличающийся тем, что целевая область не находится в пределах азотистого основания 121024 и азотистого основания 121041 SEQ ID NO: 1.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

На фигуре 1 представлено графическое изображение изоформ Tau. Изоформы могут отличаться друг от друга количеством связывающих тубулин доменов (три или четыре повтора, расположенных в С-концевой половине белка), и они упоминаются как изформы 3R или 4R, соответственно. Они также могут отличаться наличием или отсутствием одной или двух высококислотных вставок из 29 аминокислот в N-концевой части белка (выступающий домен). Между выступающим доменом и связывающим микротрубочки доменом расположена основная область, богатая на пролин.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

При отсутствии конкретных определений, номенклатура, используемая в связи с ними, а также в связи с приемами и методиками аналитической химии, синтетической органической химии, а также медицинской и фармацевтической химии, описанная в данном документе, является общеизвестной и общепринятой в данной области техники. Для химического синтеза и химического анализа могут быть использованы стандартные методики. Некоторые такие методики и приемы можно найти, например, в публикациях "Carbohydrate Modifications in Antisense Research" под редакцией Sangvi и Cook, American Chemical Society, Вашингтон, округ Колумбия, 1994; "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Истон, штат Пенсильвания, 21-ое изд., 2005; и "Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications" под редакцией Stanley Т. Crooke, CRC Press, Бока-Ратон, штат Флорида; а также Sambrook et al., "Molecular Cloning, A laboratory Manual," 2-ое изд., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, которые включены в данный документ посредством ссылки для любых целей. Где это допустимо, все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, а также другие данные, упоминаемые в тексте данного описания, в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки.

Если не указано иное, следующие термины имеют следующие значения:

При использовании в данномдокументе «нуклеозид» означает соединение, содержащее фрагмент азотистого основания и сахарный фрагмент. Нуклеозиды включают, но не ограничиваются ими, природные нуклеозиды (встречающиеся в ДНК и РНК) и модифицированные нуклеозиды. Нуклеозиды могут быть связаны с фосфатным фрагментом.

При использовании в данномдокументе «химическая модификация означает химическое отличие соединения по сравнению с природным аналогом. В отношении олигонуклеотида химическая модификация включает не только отличие последовательности азотистых оснований. Химические модификации олигонуклеотидов включают нуклеозидные модификации (включая модификации сахарного фрагмента и модификации азотистого основания) и модификации межнуклеозидных связей.

При использовании в данномдокументе «фуранозил» означает структуру, содержащую 5-членное кольцо, которое содержит четыре атома углерода и один атом кислорода.

При использовании в данном документе «природный сахарный фрагмент» означает рибофуранозил, встречающийся в природной РНК, или дезоксирибофуранозил, встречающийся в природной ДНК.

При использовании в данномдокументе «сахарный фрагмент» означает природный сахарный фрагмент или модифицированный сахарный фрагмент нуклеозида.

При использовании в данном документе «модифицированный сахарный фрагмент» означает замещенный сахарный фрагмент, бициклический или трициклический сахарный фрагмент, или заменитель сахара.

При использовании в данном документе «замещенный сахарный фрагмент» означает фуранозил, содержащий по меньшей мере одну группу заместителя, который отличается от природного сахарного фрагмента. Замещенные сахарные фрагменты включают, но не ограничиваются ими, фуранозилы, содержащие заместители в 2'-положении, в З'-положении, в 5'-положении и/или в 4'-положении.

При использовании в данном документе «2'-замещенный сахарный фрагмент» означает фуранозил, содержащий заместитель в 2'-положении, отличный от Н или ОН. Если не указано иное, то 2'-замещенный сахарный фрагмент не представляет собой бициклический сахарный фрагмент (т.е. 2'-заместитель 2'-замещенного сахарного фрагмента не образует мостик с другим атомом фуранозильного кольца).

При использовании в данном документе «МОЕ» означает -ОСН₂СН₂ОСН₃.

При использовании в н данном документе «бициклический сахарный фрагмент» означает модифицированный сахарный фрагмент, содержащий 4-7-членное кольцо (включая, но не ограничиваясь им, фуранозил), которое содержит мостик, связывающий два атома 4-7-членного кольца с образованием второго кольца, что приводит к образованию бициклической структуры. В некоторых вариантах реализации изобретения 4-7-членное кольцо представляет собой сахарное кольцо. В некоторых вариантах реализации изобретения 4-7-членное кольцо представляет собой фуранозил. В некоторых таких вариантах реализации мостик соединяет 2'-углерод и 4'-углерод фуранозила.

При использовании в данном документе термин «заменитель сахара» означает структуру, которая не содержит фуранозил и которая способна заменять природный сахарный фрагмент нуклеозида так, что образованный нуклеозид может (1) внедряться в олигонуклеотид и (2) гибридизоваться с комплементарным нуклеозидом. Такие структуры включают кольца, содержащие другое количество атомов, чем фуранозил (например, 4, 6 или 7-членные кольца); замещения кислорода фуранозила на некислородный атом (например, углерод, серу или азот); или оба изменения, касающиеся количества атомов и замены кислорода. Такие структуры также могут содержать замещения, соответствующие тем, которые описаны в замещенных сахарных фрагментах (например, 6-членные карбоциклические бициклические заменители сахара, необязательно содержащие дополнительные заместители). Заменители сахара содержат также более сложные сахарные замещения (например, некольцевые системы пептидной нуклеиновой кислоты). Заменители сахара включают, без ограничения, морфолино, модифицированные морфолино, циклогексенилы и циклогекситолы.

При использовании в данном документе «нуклеотид» означает нуклеозид, дополнительно содержащий фосфатную связывающую группу. При использовании в данном документе «связанные нуклеозиды» могут быть или не быть связанными фосфатными линкерами, и, следовательно, этот термин включает, но не ограничивается этим, «связанные нуклеотиды». При использовании в данном документе «связанные нуклеозиды» представляют собой нуклеозиды, которые связаны в непрерывную последовательность (т.е. между связанными нуклеозидами нет дополнительных нуклеозидов).

При использовании в данном документе «азотистое основание» означает группу атомов, которая может быть связана с сахарным фрагментом с образованием нуклеозида, который может внедряться в олигонуклеотид, и причем эта группа атомов способна связываться с комплементарным природным азотистым основанием другого олигонуклеотида или нуклеиновой кислоты. Азотистые основания могут быть природными или могут быть модифицированными.

При использовании в данном документе «гетероциклическое азотистое основание» означает азотистое основание, содержащее гетероциклическую структуру.

При использовании в данном документе термины «немодифицированное азотистое основание» или «природное азотистое основание» означают природные гетероциклические азотистые основания РНК или ДНК: пуриновые основания аденин (А) и гуанин (G), а также пиримидиновые основания тимин (Т), цитозин (С) (включая 5-метил С) и урацил (U).

При использовании в данном документе «модифицированное азотистое основание» означает любое азотистое основание, которое не является природным азотистым основанием.

При использовании в данном документе «модифицированный нуклеозид» означает нуклеозид, содержащий по меньшей мере одну химическую модификацию, по сравнению с природными нуклеозидами РНК или ДНК. Модифицированные нуклеозиды содержат модифицированный сахарный фрагмент и/или модифицированное азотистое основание.

При использовании в данном документе «бициклический нуклеозид» или «БНК» означает нуклеозид, содержащий бициклический сахарный фрагмент.

При использовании в данном документе «стерически затрудненный этилнуклеозид» или «cEt» означает нуклеозид, содержащий бициклический сахарный фрагмент, содержащий мостик 4'-СН(СН₃)-O-2'.

При использовании в данном документе «нуклеозид замкнутой нуклеиновой кислоты» или «ЗНК» означает нуклеозид, содержащий бициклический сахарный фрагмент, содержащий мостик 4'-СН₂-O-2'.

При использовании в данном документе «2'-замещенный нуклеозид» означает нуклеозид, содержащий заместитель в 2'-положении, отличный от Н или ОН. Если не указано иное, то 2'-замещенный нуклеозид не представляет собой бициклический нуклеозид.

При использовании в данном документе «2'-дезоксинуклеозид» означает нуклеозид, содержащий 2'-Н фуранозильный сахарный фрагмент, который встречается в природных дезоксирибонуклеозидах (ДНК). В некоторых вариантах реализации изобретения 2'-дезоксинуклеозид может содержать модифицированное азотистое основание или может содержать азотистое основание РНК (например, урацил).

При использовании в данном документе «олигонуклеотид» означает соединение, содержащее множество связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит один или более немодифицированных рибонуклеозидов (РНК) и/или немодифицированных дезоксирибонуклеозидов (ДНК), и/или один или более модифицированных нуклеозидов.

При использовании в данном документе «олигонуклеозид» означает олигонуклеотид, в котором ни одна из межнуклеозидных связей не содержит атом фосфора. При использовании в данном документе олигонуклеотиды включают олигонуклеозиды.

При использовании в данном документе «модифицированный олигонуклеотид» означает олигонуклеотид, содержащий по меньшей мере один модифицированный нуклеозид и/или по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь.

При использовании в данном документе «межнуклеозидная связь» означает ковалентную связь между соседними нуклеозидами в олигонуклеотиде.

При использовании в данном документе «природная межнуклеозидная связь» означает 3'-5' фосфодиэфирную связь.

При использовании в данном документе «модифицированная межнуклеозидная связь» означает любую межнуклеозидную связь, отличную от природной межнуклеозидной связи.

При использовании в данном документе «олигомерное соединение» означает полимерную структуру, содержащую две или более субструктур. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерное соединение содержит олигонуклеотид. В некоторых вариантах реализации олигомерное соединение содержит одну или более конъюгирующих групп и/или концевых групп. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерное соединение состоит из олигонуклеотида.

При использовании в данном документе «концевая группа» означает один или более атомов, присоединенных к любому из З'-конца или 5'-конца, или к обоим концам олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации концевая группа представляет собой конъюгирующую группу. В некоторых вариантах реализации концевая группа содержит один или более нуклеозидов концевой группы.

При использовании в данном документе «конъюгат» означает атом или группу атомов, связанную с олигонуклеотидом или олигомерным соединением. В целом, конъюгирующие группы модифицируют одно или более свойств соединения, к которому они присоединены, включая, но не ограничиваясь ими, фармакодинамические, фармакокинетические, связывающие, абсорбционные свойства, свойства клеточного распределения, клеточного поглощения, заряда и/или клиренса.

При использовании в данном документе «группа, связывающая конъюгат» означает любой атом или группу атомов, используемую для присоединения конъюгата к олигонуклеотиду или олигомерному соединению.

При использовании в данном документе «антисмысловое соединение» означает соединение, содержащее или состоящее из олигонуклеотида, по меньшей мере часть которого комплементарна целевой нуклеиновой кислоте, с которой она способна гибридизоваться с получением по меньшей мере одной антисмысловой активности.

При использовании в данном документе «антисмысловая активность» означает любое обнаруживаемое или измеримое изменение, связанное с гибридизацией антисмыслового соединения с его целевой нуклеиновой кислотой.

При использовании в данном документе «обнаружение» или «измерение» означает, что выполняют тест или анализ для обнаружения или измерения. Такое обнаружение и/или измерение может давать нулевое значение. Следовательно, если тест на обнаружение или измерение приводит к отсутствию обнаруживаемой активности (нулевой активности), то стадию обнаружения или измерения активности все равно выполняют.

При использовании в данном документе «обнаруживаемая и/или измеримая активность» означает статистически значимую активность, не равную нулю.

При использовании в данном документе «по существу, неизменный» означает небольшое или отсутствие изменения конкретного параметра, в частности, по сравнению с другим параметром, который изменяется гораздо больше. В некоторых вариантах реализации параметр является, по существу, неизменным, если его изменение составляет менее 5%. В некоторых вариантах реализации изобретения параметр является, по существу, неизменным, если он изменяется менее чем в два раза, тогда как другой параметр изменяется по меньшей мере в десять раз. Например, в некоторых вариантах реализации антисмысловая активность представляет собой изменение количества целевой нуклеиновой кислоты. В некоторых таких вариантах реализации количество нецелевой нуклеиновой кислоты является, по существу, неизменным, если оно изменяется гораздо меньше, чем количество целевой нуклеиновой кислоты, но это изменение не обязательно должно быть нулевым.

При использовании в данном документе «экспрессия» означает процесс, в результате которого информация от гена преобразуется в белок. Экспрессия включает, но не ограничивается ими, транскрипцию, посттранскрипционную модификацию (например, сплайсинг, полиаденилирование, добавление 5'-кэпа) и трансляцию.

При использовании в данном документе «целевая нуклеиновая кислота» означает молекулу нуклеиновой кислоты, с которой гибридизуется антисмысловое соединение.

При использовании в данном документе «мРНК» означает молекулу РНК, которая кодирует белок.

При использовании в данном документе «пре-мРНК» означает транскрипт РНК, который не полностью процессирован в мРНК. Пре-РНК содержит один или более интронов.

При использовании в данном документе «транскрипт» означает молекулу РНК, транскрибированную из ДНК. Транскрипты включают, но не ограничиваются ими, мРНК, пре-мРНК и частично процессированную РНК.

При использовании в данном документе «транскрипт Tau» означает транскрипт, транскрибированный из гена Tau. В некоторых вариантах реализации изобретения транскрипт Tau представлен последовательностью GENBANK с номером доступа NT_010783.15, усеченной по нуклеотидам с 9240000 по 9381000(SEQ ID NO: 1), или ее вариантом.

При использовании в данном документе «ген Tau» означает ген, который кодирует белок Tau и любые изоформы белка Tau. В некоторых вариантах реализации изобретения изоформы белка Tau включают изоформу 3R и изоформу 4R.

При использовании в данном документе «3R» означает транскрипт Tau, который не содержит 10 экзон.

При использовании в данном документе «изоформа 3R Tau» означает изоформу белка Tau, которая не содержит аминокислоты, кодируемые 10 экзоном.

При использовании в данном документе «4R» означает транскрипт Tau, который содержит 10 экзон.

При использовании в данном документе «изоформа 4R Tau» означает изоформу белка Tau, которая содержит аминокислоты, кодируемые 10 экзоном.

При использовании в данном документе «заболевание, связанное с Tau», означает любое неврологическое или нейродегенеративное заболевание, связанное с Tau. Неограничивающие примеры расстройств, связанных с Tau, включают болезнь Альцгеймера, прогрессирующий надъядерный паралич, деменцию боксеров, лобно-височную деменцию, паркинсонизм, связанный с хромосомой, болезнь Литико-Бодига, деменцию с преобладанием нейрофибриллярных клубков, ганглиоглиому, ганглиоцитому, менингиоангиоматоз, подострый склерозирующий панэнцефалит, свинцовую энцефалопатию, туберозный склероз, болезнь Галлервордена-Шпатца, болезнь Пика, кортикобазальную ганглиозную дегенерацию, аргирофильную зернистую болезнь, надъядерный паралич, кортикобазальную дегенерацию, лобно-височную деменцию или лобно-височную долевую дегенерацию.

При использовании в данном документе «таупатия» означает расстройства, характеризующиеся отложением белка Tau в головном мозге.

При использовании в данном документе «специфический ингибитор Tau» включает, но не ограничивается ими, «антисмысловое соединение», нацеленное на Tau.

При использовании в данном документе «таргетинг» или «нацеленный на» означает связывание антисмыслового соединения с молекулой конкретной целевой нуклеиновой кислоты или с конкретной областью молекулы целевой нуклеиновой кислоты. Антисмысловое соединение нацелено на целевую нуклеиновую кислоту, если оно достаточно комплементарно целевой нуклеиновой кислоте для обеспечения гибридизации в физиологических условиях.

При использовании в данном документе «комплементарность азотистого основания» или «комплементарность» в отношении азотистых оснований означает азотистое основание, которое способно к спариванию оснований с другим азотистым основанием. Например, аденин (А) в ДНК комплементарен тимину (Т). Например, аденин (А) в РНК комплементарен урацилу (U). В некоторых вариантах реализации комплементарное азотистое основание означает азотистое основание антисмыслового соединения, которое способно к спариванию оснований с азотистым основанием его целевой нуклеиновой кислоты. Например, если азотистое основание в определенном положении антисмыслового соединения способно к водородному связыванию с азотистым основанием в определенном положении целевой нуклеиновой кислоты, то это положение водородного связывания между указанным олигонуклеотидом и целевой нуклеиновой кислоты считают комплементарным по этой паре азотистых оснований. Азотистые основания, содержащие определенные модификации, могут сохранять способность спаривания с противоположным азотистым основанием и, следовательно, сохраняют комплементарность азотистого основания.

При использовании в данном документе «некомплементарные» в отношении азотистых оснований означает пару азотистых оснований, которые не образуют водородные связи друг с другом.

При использовании в данном документе «комплементарные» в отношении олигомерных соединений (например, связанных нуклеозидов, олигонуклеотидов или нуклеиновых кислот) означает способность таких олигомерных соединений или их областей гибридизоваться в жестких условиях с другим олигомерным соединением или его областью за счет комплементарности азотистых оснований. Комплементарные олигомерные соединение не обязательно должны иметь комплементарные азотистые основания в каждом нуклеозиде. Напротив, допустимы некоторые несоответствия. В некоторых вариантах реализации изобретения комплементарные олигомерные соединения или области комплементарны по 70% азотистых оснований (70% комплементарность). В некоторых вариантах реализации комплементарные олигомерные соединения или области комплементарны на 80%. В некоторых вариантах реализации комплементарные олигомерные соединения или области комплементарны на 90%. В некоторых вариантах реализации комплементарные олигомерные соединения или области комплементарны на 95%. В некоторых вариантах реализации комплементарные олигомерные соединения или области комплементарны на 100%.

При использовании в данном документе «гибридизация» означает спаривание комплементарных олигомерных соединений (например, антисмыслового соединения с его целевой нуклеиновой кислотой). Не ограничиваясь конкретным механизмом, наиболее общий механизм спаривания включает водородное связывание, которое может быть водородным связыванием Уотсона-Крика, Хугстина или обратным водородным связыванием Хугстина между комплементарными азотистыми основаниями.

При использовании в данном документе «специфически гибридизуется» означает способность олигомерного соединения гибридизоваться с одним сайтом нуклеиновой кислоты с большей аффинностью, чем оно гибридизуется с другим сайтом нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид специфически гибридизуется более чем с одним сайтом-мишенью.

При использовании в данном документе «процент комплементарности» означает процент азотистых оснований олигомерного соединения, которые являются комплементарными равной по длине части целевой нуклеиновой кислоты. Процентную комплементарность рассчитывают делением количества азотистых оснований олигомерного соединения, которые комплементарны азотистым основаниям в соответствующих положениях целевой нуклеиновой кислоты, на общую длину олигомерного соединения.

При использовании в данном документе «процент идентичности» означает количество азотистых оснований в первой нуклеиновой кислоте, которые являются азотистыми основаниями того же типа (независимо от химической модификации), что и азотистые основания в соответствующих положениях второй нуклеиновой кислоты, деленное на общее количество азотистых оснований в первой нуклеиновой кислоте.

При использовании в данном документе «модулирование» означает изменение количества или качества молекулы, функции или активности, по сравнению с количеством или качеством молекулы, функции или активности до модулирования. Например, модулирование включает изменение, как повышение (стимулирование или индукцию), так и понижение (ингибирование или снижение) генной экспрессии. В качестве дополнительного примера, модулирование экспрессии может включать изменение выбора сайта сплайсинга процессинга мРНК, что приводит к изменению абсолютного или относительного количества конкретного сплайс-варианта, по сравнению с его количеством в отсутствие модулирования.

При использовании в данном документе «мотив» означает порядок химических модификаций в олигомерном соединении или его области. Мотивы могут быть определены по модификациям в некоторых нуклеозидах и/или в некоторых связывающих группах олигомерного соединения.

При использовании в данном документе «мотив нуклеозида» означает порядок нуклеозидных модификаций в олигомерном соединении или его области. Связи в таком олигомерном соединении могут быть модифицированными или немодифицированными. Если не указано иное, то мотивы в данном документе, которые описывают только нуклеозиды, представляют собой нуклеозидные мотивы. Следовательно, в таких случаях связи не являются ограниченными.

При использовании в данном документе «сахарный мотив» означает порядок сахарных модификаций в олигомерном соединении или его области.

При использовании в данном документе «связывающий мотив» означает порядок модификаций связывания в олигомерном соединении или его области. Нуклеозиды в таком олигомерном соединении могут быть модифицированными или немодифицированными. Если не указано иное, то мотивы в данном документе, которые описывают только связи, представляют собой связывающие мотивы. Следовательно, в таких случаях нуклеозиды не являются ограниченными.

При использовании в данном документе «мотив модификации азотистых оснований» означает порядок модификаций азотистых оснований вдоль олигонуклеотида. Если не указано иное, то мотив модификации азотистых оснований не зависит от последовательности азотистых оснований.

При использовании в данном документе «мотив последовательности» означает порядок азотистых оснований, расположенных вдоль олигонуклеотида или его части. Если не указано иное, то мотив последовательности не зависит от химических модификаций и, следовательно, может иметь любую комбинацию химических модификаций, включая отсутствие химических модификаций.

При использовании в данном документе «тип модификации» в отношении нуклеозида или нуклеозида определенного «типа» означает химическую модификацию нуклеозида и включает модифицированные и немодифицированные нуклеозиды. Соответственно, если не указано иное, то «нуклеозид, имеющий модификацию первого типа» также может быть немодифицированным нуклеозидом.

При использовании в данном документе «модифицированные по-разному» означает химические модификации или химические заместители, которые отличаются друг от друга, включая отсутствие модификаций. Так, например, МОЕ нуклеозид и немодифицированный нуклеозид ДНК являются «модифицированными по-разному», несмотря даже на то, что нуклеозид ДНК не является модифицированным. Точно так же, ДНК и РНК являются «модифицированными по-разному», несмотря даже на то, что обе они являются природными немодифицированными нуклеозидами. Нуклеозиды, которые являются одинаковыми, но содержат различные азотистые основания, не являются по-разному модифицированными. Например, нуклеозид, содержащий 2'-ОМе модифицированный сахар и немодифицированное азотистое основание аденин, и нуклеозид, содержащий 2'-ОМе модифицированный сахар и немодифицированное азотистое основание тимин, не являются по-разному модифицированными.

При использовании в данном документе «одинаковый тип модификации» относится к модификациям, которые являются одинаковыми, включая отсутствие модификаций. Так, например, два немодифицированных нуклеозида ДНК имеют «одинаковый тип модификации», несмотря даже на то, что нуклеозид ДНК не является модифицированным. Такие нуклеозиды, имеющие одинаковый тип модификации, могут содержать различные азотистые основания.

При использовании в данном документе «фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель» означает любое вещество, подходящее для применения при введении животному. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель представляет собой стерильный солевой раствор. В некоторых вариантах реализации такой стерильный солевой раствор представляет собой солевой раствор фармацевтической марки.

При использовании в данном документе «заместитель» или «группа заместителя» относится к атому или группе, которая замещает атом или группу указанного исходного соединения. Например, заместитель модифицированного нуклеозида представляет собой любой атом или группу, которая отличается от атома или группы, встречающейся в природном нуклеозиде (например, модифицированный 2'-заместитель представляет собой любой атом или группу в 2'-положении нуклеозида, отличную от Н или ОН). Группы заместителей могут быть защищенными или незащищенными. В некоторых вариантах реализации соединения согласно изобретению имеют заместители в одном или более одного положениях исходного соединения. Заместители также могут быть дополнительно замещены другими группами заместителей и могут быть присоединены к исходному соединению напрямую или через связывающую группу, такую как алкильная или нециклическая углеводородная группа.

Точно так же, при использовании в данном документе «заместитель» отношении химической функциональной группы означает атом или группу атомов, которая отличается от атома или группы атомов, обычно присутствующей в указанной функциональной группе. В некоторых вариантах реализации изобретения заместитель заменяет атом водорода функциональной группы (например, в некоторых вариантах реализации заместитель замещенной метильной группы представляет собой атом или группу, отличную от водорода, которая заменяет один из атомов водорода незамещенной метильной группы). Если не указано иное, то группы, подходящие для применения в качестве заместителей, включают, без ограничения, галоген, гидроксил, алкил, алкенил, алкинил, ацил (-C(O)R_aa), карбоксил (-C(O)O-R_aa), алифатические группы, алициклические группы, алкокси, замещенный окси (-O-R_aa), арил, аралкил, гетероциклический радикал, гетероарил, гетероарилалкил, амино (-N(R_bb)(R_cc)), имино (=NR_bb), амидо (-C(O)N(R_bb)(R_cc) или -N(R_bb)C(O)R_aa), азидо (-N₃), нитро (-NO₂), циано (-CN), карбамидо (-OC(O)N(R_bb)(R_cc) или -N(R_bb)С(O)OR_aa), уреидо (-N(R_bb)С(O)N(R_bb)(R_cc)), тиоуреидо (-N(R_bb)C-(S)N(R_bb)(R_cc)), гуанидинил (-N(R_bb)C(=NR_bb)N(R_bb)(R_cc), амидинил (-C(=NR_bb)N(R_bb)(R_cc) или -N(R_bb)C(=NR_bb)(R_aa)), тиол (-SR_bb), сульфинил (-S(O)R_bb), сульфонил (-S(O)₂R_bb) и сульфонамидил (-S(O)₂N(R_bb)(R_cc) или -N(R_bb)S(O)₂R_bb). Где каждый R_aa, R_bb и R_cc независимо представляет собой Н, необязательно связанную химическую функциональную группу или дополнительную группу заместителя с предпочтительным списком, включающим, без ограничения, алкил, алкенил, алкинил, алифатический, алкокси, ацил, арил, аралкил, гетероарил, алициклический, гетероциклический и гетероарилалкил. Выбранные заместители с соединениями, описанными в данном документе, находятся в рекурсивной степени.

При использовании в данном документе «алкил» означает насыщенный прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода. Примеры алкильных групп включают, без ограничения, метил, этил, пропил, бутил, изопропил, н-гексил, октил, децил, додецил и т.п. Алкильные группы обычно содержат от 1 до около 24 атомов углерода, более типично от 1 до около 12 атомов углерода (С₁-С₁₂ алкил), предпочтительно от 1 до около 6 атомов углерода.

При использовании в данном документе «алкенил» означает прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода и имеющий по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь. Примеры алкенильных групп включают, без ограничения, этенил, пропенил, бутенил, 1-метил-2-бутен-1-ил, диены, такие как 1,3-бутадиен, и т.п. Алкенильные группы обычно содержат от 2 до около 24 атомов углерода, более типично от 2 до около 12 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до около 6 атомов углерода. При использовании в данном документе алкенильные группы могут необязательно содержать одну или более дополнительных групп заместителей.

При использовании в данном документе «алкинил» означает прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода и имеющий по меньшей мере одну тройную углерод-углеродную связь. Примеры алкинильных групп включают, без ограничения, этинил, 1-пропинил, 1-бутинил и т.п.. Алкинильные группы обычно содержат от 2 до около 24 атомов углерода, более типично от 2 до около 12 атомов углерода, более предпочтительно от 2 до около 6 атомов углерода. При использовании в данном документе алкинильные группы могут необязательно содержать одну или более дополнительных групп заместителей.

При использовании в данном документе «ацил» означает радикал, образованный удалением гидроксильной группы из органической кислоты, который имеет общую Формулу -С(O)-Х, где Х обычно является алифатическим, алициклическим или ароматическим. Примеры включают алифатические карбонилы, ароматические карбонилы, алифатические сульфонилы, ароматические сульфинилы, алифатические сульфинилы, ароматические фосфаты, алифатические фосфаты и т.п. При использовании в данном документе ацильные группы могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.

При использовании в данном документе «алициклический» означает циклическую кольцевую систему, в которой кольцо является алифатическим. Кольцевая система может содержать одно или более колец, при этом по меньшей мере одно кольцо является алифатическим. Предпочтительные алициклические системы содержат кольца, имеющие от около 5 до около 9 атомов углерода в кольце. При использовании в данном документе алициклические группы могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.

При использовании в данном документе «алифатический» означает прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода, в котором насыщенность между двумя атомами углерода является одинарной, двойной или тройной связью. Алифатическая группа предпочтительно содержит от 1 до около 24 атомов углерода, более типично от 1 до около 12 атомов углерода, более предпочтительно от 1 до около 6 атомов углерода. Прямая или разветвленная цепь алифатической группы может прерываться одним или более гетероатомами, которые включают азот, кислород, серу и фосфор. Такие алифатические группы, прерванные гетероатомами, включают, без ограничения, полиалкокси, такие как полиалкиленгликоли, полиамины и полиимины. При использовании в данном документе алифатические группы могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.

При использовании в данном документе «алкокси» означает радикал, образованный между алкильной группой и атомом кислорода, причем для присоединения алкокси-группы к исходной молекуле использован атом кислорода. Примеры алкокси-групп включают, без ограничения, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентокси, неопентокси, н-гексокси и т.п. При использовании в данном документе алкокси-группы могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.

При использовании в данном документе «аминоалкил» означает аминозамещенный C₁-С₁₂ алкильный радикал. Алкильная часть радикала образует ковалентную связь с исходной молекулой. Аминогруппа может быть расположена в любом положении, а аминоалкильная группа может быть замещена дополнительной группой заместителя в алкильной и/или аминочасти.

При использовании в данном документе «аралкил» или «арилалкил» означает ароматическую группу, которая ковалентно связана с С₁-С₁₂ алкильным радикалом. Алкильная часть радикала полученной аралкильной (или арилалкильной) группы образует ковалентную связь с исходной молекулой. Примеры включают, без ограничения, бензил, фенетил и т.п. При использовании в данном документе аралкильные группы могут необязательно дополнительно содержать дополнительные группы заместителей, присоединенные к алкильной, арильной или к обеим группам, которые образуют группу радикала.

При использовании в данном документе «арил» и «ароматический» означают радикалы моно- или полициклических карбоциклических кольцевых систем, имеющих одну или более ароматических групп. Примеры арильных групп включают, без ограничения, фенил, нафтил, тетрагидронафтил, инданил, инденил и т.п. Предпочтительные арильные кольцевые системы имеют от около 5 до около 20 атомов углерода в одном или более кольцах. При использовании в данном документе арильные группы могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.

При использовании в данном документе «гало» и «галоген» означает атом, выбранный из фтора, хлора, брома и йода.

При использовании в данном документе «гетероарил» и «гетероароматический» означает радикал, содержащий моно- или полициклическое ароматическое кольцо, кольцевую систему или конденсированную кольцевую систему, в которой по меньшей мере одно из колец является ароматическим и содержит один или более гетероатомов. Гетероарил включает также конденсированные кольцевые системы, в том числе системы, в которых одно или более конденсированных колец не содержит гетероатомов. Гетероарильные группы обычно содержат один кольцевой атом, выбранный из серы, азота и кислорода. Примеры гетероарильных групп включают, без ограничения, пиридинил, пиразинил, пиримидинил, пирролил, пиразолил, имидазолил, тиазолил, оксазолил, изоксазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, тиофенил, фуранил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, бензоксазолил, хиноксалинил и т.п. Гетероарильные радикалы могут быть присоединены к исходной молекуле напрямую или через связывающий фрагмент, такой как алифатическая группа или гетероатом. При использовании в данном документе Гетероарильные группы могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.

Олигомерные соединения

В некоторых вариантах реализации данного изобретения предлагаются олигомерные соединения. В некоторых вариантах реализации такие олигомерные соединения содержат олигонуклеотиды, необязательно содержащие одну или более конъюгирующих и/или концевых групп. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерное соединение состоит из олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды содержат одну или более химических модификаций. Такие химические модификации включают модификации одного или более нуклеозидов (включая модификации сахарного фрагмента и/или азотистого основания) и/или модификации одной или более межнуклеозидных связей.

Некоторые сахарные фрагменты

В некоторых вариантах реализации олигомерные соединения согласно изобретению содержат один или более модифицированных нуклеозидов, содержащих модифицированный сахарный фрагмент. Такие олигомерные соединения, содержащие один или более нуклеозидов с модифицированным сахаром, могут иметь желаемые свойства, такие как улучшенная стабильность к нуклеазам или повышенная аффинность связывания с целевой нуклеиновой кислотой, по сравнению с олигомерными соединениями, содержащими только нуклеозиды, которые содержат природные сахарные фрагменты. В некоторых вариантах реализации модифицированные сахарные фрагменты представляют собой замещенные сахарные фрагменты. В некоторых вариантах реализации модифицированные сахарные фрагменты представляют собой бициклические или трициклические сахарные фрагменты. В некоторых вариантах реализации модифицированные сахарные фрагменты представляют собой заменители сахара. Такие заменители сахара могут содержать одно или более замещений, соответствующих замещениям замещенного сахарного фрагмента.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные сахарные фрагменты представляют собой замещенные сахарные фрагменты, содержащие один или более заместителей, включая, но не ограничиваясь ими, заместители в 2' и/или 5' положениях. Примеры заместителей сахара, подходящих для 2'-положения, включают, но не ограничиваются ими: 2'-F, 2'-ОСН₃ («ОМе» или «O-метил») и 2'-O(СН₂)₂OCH₃ («МОЕ»). В некоторых вариантах реализации заместитель сахара в 2'-положении выбран из аллила, амино, азидо, тио, O-аллила, О-С₁-С₁₀ алкила, O-C₁-С₁₀ замещенного алкила; O-C₁-С₁₀ алкокси; O-C₁-С₁₀ замещенного алкокси, OCF₃, O(CH₂)₂SCH₃, O(CH₂)₂-O-N(Rm)(Rn) и O-CH₂-C(=O)-N(Rm)(Rn), где каждый Rm и Rn независимо представляет собой Н или замещенный или незамещенный C₁-С₁₀ алкил. Примеры заместителей сахара в 5'-положении включают, но не ограничиваются ими: 5'-метил (R или S); 5'-винил и 5'-метокси. В некоторых вариантах реализации замещенные сахара содержат более одного немостикового заместителя сахара, например, 2'-F-5'-метильные сахарные фрагменты (см., например, международную заявку РСТ WO 2008/101157, где представлены дополнительные 5',2'-бис-замещенные сахарные фрагменты и нуклеозиды).

Нуклеозиды, содержащие 2'-замещенные сахарные фрагменты, упоминаются как 2'-замещенные нуклеозиды. В некоторых вариантах реализации изобретения 2'-замещенный нуклеозид содержит группу 2'-заместителя, выбранную из галогена, аллила, амино, азидо, O-C₁-C₁₀ алкокси; O-C₁-C₁₀ замещенного алкокоси, SH, CN, OCN, CF₃, OCF₃, O-алкила, S-алкила, N(R_m)-алкила; O-алкенила, S-алкенила или N(R_m)-алкенила; O-алкинила, S-алкинила, N(R_m)-алкинила; О-алкиленил-O-алкила, алкинила, алкарила, аралкила, O-алкарила, O-аралкила, O(СН₂)₂SCH₃, O-(СН₂)₂-O-N(R_m)(R_n) или O-CH₂-C(=O)-N(R_m)(R_n), где каждый R_m и R_n независимо представляет собой Н, аминозащитную группу или замещенный или незамещенный C₁-С₁₀ алкил. Эти группы 2'-заместителя могут быть дополнительно замещены одной или более группами заместителей, независимо выбранными из гидроксила, амино, алкокси, карбокси, бензил, фенила, нитро (NO₂), тиола, тиоалкокси (S-алкила), галогена, алкила, арила, алкенила и алкинила.

В некоторых вариантах реализации 2'-замещенный нуклеозид содержит группу 2'-заместителя, выбранную из F, NH₂, N₃, OCF₃ O-СН₃, O(СН₂)₃NH₂, CH₂-CH=CH₂, O-СН₂-СН=СН₂, OCH₂CH₂OCH₃, O(CH₂)₂SCH₃, O-(CH₂)₂-O-N(R_m)(R_n), O(СН₂)₂O(СН₂)₂N(СН₃)₂ и N-замещенного ацетамида (O-CH₂-C(=O)-N(R_m)(R_n), где каждый R_m и R_n независимо представляет собой Н, аминозащитную группу или замещенный или незамещенный C₁-С₁₀ алкил.

В некоторых вариантах реализации 2'-замещенный нуклеозид содержит сахарный фрагмент, содержащий группу 2'-заместителя, выбранную из F, OCF₃ O-СН₃, OCH₂CH₂OCH₃, O(СН₂)₂SCH₃, O-(СН₂)₂-O-N(СН₃)₂, -O(СН₂)₂O(СН₂)₂N(СН₃)₂ и O-СН₂-С(=O)-N(Н)СН₃.

В некоторых вариантах реализации 2'-замещенный нуклеозид содержит сахарный фрагмент, содержащий группу 2'-заместителя, выбранную из F, O-СН₃ и OCH₂CH₂OCH₃.

Некоторые модифицированные сахарные фрагменты содержат мостиковый заместитель сахара, который образует второе кольцо, что приводит к получению бициклического сахарного фрагмента. В некоторых таких вариантах реализации бициклический сахарный фрагмент содержит мостик между 4' и 2' атомами фуранозного кольца. Примеры таких 4'-2' сахарных заместителей включают, но не ограничиваются

ими: -[C(R_a)(R_b)]_n-, -[C(R_a)(R_b)]_n-O-, -C(R_aR_b)-N(R)-O- или -С(R_aR_b)-O-N(R)-; 4'-СН₂-2', 4'-(СН₂)₂-2', 4'-(СН₂)₃-2', 4'-(СН₂)-O-2' (БНК); 4'-(CH₂)-S-2'; 4'-(CH₂)₂-O-2' (ENA); 4'-СН(СН₃)-O-2' (cEt) и 4'-С-Н(CH₂OCH₃)-O-2', и их аналоги (см., например, патент США 7399845, выданный 15 июля 2008); 4'-С(СН₃)(СН₃)-O-2' и его аналоги (см., например, WO 2009/006478, опубликованную 8 января 2009); 4'-СН₂-N(ОСН₃)-2' и его аналоги (см., например, WO 2008/150729, опубликованную 11 декабря 2008); 4'-СН₂-O-N(СН₃)-2' (см, например, US 2004/0171570, опубликованный 2 сентября 2004); 4'-CH₂-O-N(R)-2' и 4'-CH₂-N(R)-O-2'-, где каждый R независимо представляет собой Н, защитную группу или C₁-С₁₂ алкил; 4'-CH₂-N(R)-O-2', где R представляет собой Н, С₁-С₁₂ алкил или защитную групп (см. патент США 7427672, выданный 23 сентября 2008); 4'-СН₂-С(Н)(СН₃)-2' (см., например, Chattopadhyaya, et al, J Org Chem, 2009, 74, 118-134); и 4'-СН₂-С(=СН₂)-2' и его аналоги (см. международную заявку РСТ WO 2008/154401, опубликованную 8 декабря 2008).

В некоторых вариантах реализации изобретения такие 4'-2' мостики независимо содержат от 1 до 4 связанных групп, независимо выбранных из

-[C(R_a)(R_b)]_n-, -C(R_a)=C(R_b)-, -C(R_a)=N-, -C(=NR_a)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(R_a)₂-, -S(=O)_x- и -N(R_a)-;

где:

x равен 0, 1 или 2;

n равен 1, 2, 3 или 4;

каждый R_a и R_b независимо представляет собой Н, защитную группу, гидроксил, C₁-C₁₂ алкил, замещенный C₁-C₁₂ алкил, C₂-C₁₂ алкенил, замещенный C₂-C₁₂ алкенил, C₂-C₁₂ алкинил, замещенный C₂-C₁₂ алкинил, C₅-C₂₀ арил, замещенный C₅-C₂₀ арил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, гетероарил, замещенный гетероарил, C₅-C₇ алициклический радикал, замещенный C₅-C₇ алициклический радикал, галоген, OJ₁, NJ₁J₂, SJ₁, N₃, COOJ₁, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, CN, сульфонил (S(=O)₂-J₁) или сульфоксил (S(=O)-J₁); и

каждый J₁ и J₂ независимо представляет собой, Н, C₁-С₁₂ алкил, замещенный C₁-C₁₂ алкил, C₂-C₁₂ алкенил, замещенный C₂-C₁₂ алкенил, C₂-C₁₂ алкинил, замещенный C₂-C₁₂ алкинил, С₅-С₂₀ арил, замещенный С₅-С₂₀ арил, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, C₁-C₁₂ аминоалкил, замещенный C₁-C₁₂ аминоалкил или защитную группу.

Нуклеозиды, содержащие бициклические сахарные фрагменты, упоминаются как бициклические нуклеозиды или БНК. Бициклические нуклеозиды включают, но не ограничиваются ими, (А) α-L-метиленокси (4'-CH₂-O-2') БНК, (В) β-D-метиленокси (4'-СН₂-O-2') БНК (также упоминается как замкнутая кислота или ЗНК), (С) этиленокси (4'-(CH₂)₂-O-2') БНК, (D) аминоокси (4'-CH₂-O-N(R)-2') БНК, (Е) оксиамино (4'-CH₂-N(R)-O-2') БНК, (F) метил(метиленокси) (4'-СН(СН₃)-O-2') БНК (также упоминается как стерически затрудненный этил или cEt), (G) метилентио (4'-CH₂-S-2') БНК, (Н) метиленамино (4'-CH₂-N(R)-2') БНК, (I) метилкарбоциклическая (4'-СН₂-СН(СН₃)-2') БНК и (J) пропиленкарбоциклическая (4'-(СН₂)₃-2') БНК, изображенные ниже.

где Вх представляет собой фрагмент азотистого основания, a R независимо представляет собой Н, защитную группу или C₁-C₁₂ алкил.

В данной области техники известны дополнительные бициклические сахарные фрагменты, например: Singh et al., Chem Commun, 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc Natl Acad Sci USA, 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg Med Chem Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J Org Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J Am Chem Soc., 129(26) 8362-8379 (Jul. 4, 2007); Elayadi et al., Curr Opinion Invens Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem Biol, 2001, 8, 1-7; Orum et al., Curr Opinion Mol Ther, 2001, 3, 239-243; патенты США №7053207, 6268490, 6770748, 6794499, 7034133, 6525191, 6670461 и 7399845; WO 2004/106356, WO 1994/14226, WO 2005/021570 и WO 2007/134181; публикации патентов США № US 2004/0171570, US 2007/0287831 и US 2008/0039618; патенты США с серийными номерами 12/129154, 60/989574, 61/026995, 61/026998, 61/056564, 61/086231, 61/097787 и 61/099844; а также международные заявки РСТ № PCT/US 2008/064591, PCT/US 2008/066154, и PCT/US 2008/068922.

В некоторых вариантах реализации изобретения бициклические сахарные фрагменты и нуклеозиды, содержащие такие бициклические сахарные фрагменты, дополнительно определяют по изомерной конфигурации. Например, нуклеозид, содержащий мостик 4'-2'-метиленокси, может быть в α-L конфигурации или β-D конфигурации. Ранее в антисмысловые олигонуклеотиды, демонстрирующие антисмысловую активность, были внедрены α-L-метиленокси (4'-СН₂-O-2') бициклические нуклеозиды (Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).

В некоторых вариантах реализации замещенные сахарные фрагменты содержат один или более немостиковых заместителей сахара и один или более мостиковых заместителей сахара (например, 5'-замещенные и 4'-2' мостиковые сахара), (см. международную заявку РСТ WO 2007/134181, опубликованную 22 ноября 2007, где ЗНК замещена, например, 5'-метальной или 5'-винильной группой).

В некоторых вариантах реализации модифицированные сахарные фрагменты представляют собой заменители сахара. В некоторых таких вариантах реализации атом кислорода природного сахара заменен, например, атомом серы, углерода или азота. В некоторых таких вариантах реализации такой модифицированный сахарный фрагмент содержит также мостиковые и/или немостиковые заместители, описанные выше. Например, некоторые заменители сахара содержит 4'-атом серы и заместитель в 2'-положении (см., например, заявку на патент США US 2005/0130923, опубликованную 16 июня 2005 года) и/или в 5'-положении. Например, описаны карбоциклические бициклические нуклеозиды, имеющие мостик 4'-2' (см., например, Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 и Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 77, 7731-7740).

В некоторых вариантах реализации изобретения заменители сахара содержат кольца, имеющие не 5 атомов. Например, в некоторых вариантах реализации заменитель сахара содержит шестичленный тетрагидропиран. Такие тетрагидропираны могут быть дополнительно модифицированы или замещены. Нуклеозиды, содержащие такие модифицированные тетрагидропираны, включают, но не огрничиваются ими, гекситоловую нуклеиновую кислоту (ГНК), анитоловую нуклеиновую кислоту (АНК), маннитоловую нуклеиновую кислоту (МНК) (см. Leumann, CJ. Bioorg. & Med. Chem. (2002) 10: 841-854), фтор-ГНК (F-ГНК) и соединения, имеющие Формулу VII:

где независимо для каждого из упомянутого по меньшей мере одного тетрагидропиранового нуклеозидного аналога Формулы VII:

Вх представляет собой фрагмент азотистого основания;

Т₃ и Т₄, каждый независимо, представляют собой межнуклеозидную связывающую группу, которая связывает тетрагидропирановый нуклеозидный аналог с антисмысловым соединением, или один из Т₃ и Т₄ представляет собой межнуклеозидную связывающую группу, которая связывает тетрагидропирановый нуклеозидный аналог с антисмысловым соединением, а другой из Т₃ и Т₄ представляет собой В, гидроксизащитную группу, связанную конъюгирующую группу или 5' или 3'-концевую группу;

q₁, q₂, q₃, q₄, q₅, q₆ и q₇, каждый независимо, представляет собой, Н, C₁-C₆ алкил, замещенный С₂-С₆ алкил, С₂-С₆ алкенил, замещенный С₂-С₆ алкенил, С₂-С₆ алкинил или замещенный С₂-С₆ алкинил; и

каждый из R₁ и R₂ независимо выбран из: водорода, галогена, замещенного или незамещенного алкокси, NJ₁J₂, SJ₁, N₃, OC(=X)J₁, OC(=X)NJ₁J₂, NJ₃C(=Х)NJ₁J₂ и CN, где Х представляет собой О, S или NJ₁, и каждый J₁, J₂ и J₃ независимо представляет собой Н или C₁-C₆ алкил.

В некоторых вариантах реализации изобретения представлены модифицированные ТГП нуклеозиды Формул VII, где каждый из q₁, q₂, q₃, q₄, q₅, q₆ и q₇ представляет собой Н. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один из q₁, q₂, q₃, q₄, q₅, q₆ и q₇ отличен от Н. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один из q₁, q₂, q₃, q₄, q₅, q₆ и q₇ представляет собой метил. В некоторых вариантах реализации представлены ТГП нуклеозиды Формулы VII, в которых один из R₁ и R₂ представляет собой F. В некоторых вариантах реализации R₁ представляет собой фтор, а R₂ представляет собой Н, R₁ представляет собой метокси, a R₂ представляет собой Н, и R₁ представляет собой метоксиэтокси, a R₂ представляет собой Н.

В данной области техники известны многие другие бициклические и трициклические кольцевые системы Сахаров и заменителей сахара, которые могут быть использованы для модификации нуклеозидов (см., например, обзорную статью: Leumann, J.С, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002, 10, 841-854).

В некоторых вариантах реализации изобретения заменители сахара содержат кольца, имеющие более 5 атомов и более одного гетероатома. Например, описаны нуклеозиды, содержащие морфолиносахарные фрагменты, и их применение в олигомерных соединениях (см., например: Braasch et al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; и патенты США 5698685; 5166315; 5185444; и 5034506). При использовании в данном документе термин «морфолино» обозначает заменитель сахара, имеющий следующую структуру:

В некоторых вариантах реализации изобретения «морфолино» могут быть модифицированными, например, добавлением или изменением различных групп заместителей в представленной выше структуре морфолино. Такие заменители сахара в данном документе упоминаются как «модифицированные морфолино».

Без ограничения, представлены также комбинации модификаций, такие как 2'-F-5'-метилзамещенные нуклеозиды (см. международную заявку РСТ WO 2008/101157, опубликованную 21 августа 2008, где описаны другие 5',2'-бис-замещенные нуклеозиды), а также замена рибозильного кольцевого атома кислорода на S и дополнительное замещение в 2'-положении (см. заявку на патент США US 2005-0130923, опубликованную 16 июня 2005), или альтернативно 5'-замещение бициклической нуклеиновой кислоты (см. международную заявку РСТ WO 2007/134181, опубликованную 22 ноября 2007, где 4'-СН₂-O-2' бициклический нуклеозид дополнительно замещен в 5'-положении на 5'-метильную или 5'-винильную группу). Также был описан синтез и получение карбоциклических бициклических нуклеозидов, их олигомеризация и биохимические исследования (см., например, Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc. 2007, 129(26), 8362-8379).

Некоторые азотистые основания

В некоторых вариантах реализации нуклеозиды согласно данному изобретению содержат одно или более немодифицированных азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации нуклеозиды согласно данному изобретению содержат одно или более модифицированных азотистых оснований.

В некоторых вариантах реализации модифицированные азотистые основания выбраны из: универсальных оснований, гидрофобных оснований, смешанных оснований, увеличенных по размеру оснований и фторированных оснований, как описано в данном документе, 5-замещенных пиримидинов, 6-азапиримидинов и N-2, N-6 и O-6 замещенных пуринов, включая 2-аминопропиладенин, 5-пропинилурацил; 5-пропинилцитозина; 5-гидроксиметилцитозина, ксантина, гипоксантина, 2-аминоаденина, 6-метил и других алкильных производных аденина и гуанина, 2-пропил и других алкильных производных аденина и гуанина, 2-тиоурацила, 2-тиотимина и 2-тиоцитозина, 5-галогенурацила и цитозина, 5-пропинил (-С≡С-СН₃) урацила и цитозина и других алкинильных производных пиримидиновых оснований, 6-азоурацила, цитозина и тимина, 5-урацила (псевдоурацила), 4-тиоурацила, 8-галоген, 8-амино, 8-тиол, 8-тиоалкил, 8-гидроксил и других 8-замещенных аденинов и гуанинов, 5-галоген, особенно 5-бром, 5-трифторметил и других 5-замещенных урацилов и цитозинов, 7-метилгуанина и 7-метиладенина, 2-F-аденина, 2-аминоаденина, 8-азагуанина и 8-азааденина, 7-деазагуанина и 7-деазааденина, 3-деазагуанина и 3-деазааденина, универсальных оснований, гидрофобных оснований, смешанных оснований, увеличенных по размеру оснований и фторированных оснований, как описано в данном документе. Дополнительные модифицированные азотистые основания включают трициклические пиримидины, такие как феноксазин цитидин ([5,4-b][1,4]бензоксазин-2(3Н)-он), фенотиазин цитидин (1Н-пиримидо[5,4-b][1,4]бензотиазин-2(3Н)-он), G-зажимы, такие как замещенный феноксазин цитидин (например,

9-(2-аминоэтокси)-Н-пиримидо[5,4-b][1,4]бензоксазин-2(3Н)-он), карбазол цитидин

(2Н-пиримидо[4,5-b]индол-2-он), пиридоиндол цитидин

(Н-пиридо[3',2':4,5]пирроло[2,3-d]пиримидин-2-он). Модифицированные азотистые основания также могут включать те, в которых пуриновое или пиримидиновое основание заменено другими гетероциклами, например, 7-деазааденин, 7-деазагуанозин, 2-аминопиридин и 2-пиридон. Дополнительные азотистые основания включают те, которые описаны в патенте США №3687808, те, которые описаны в публикации The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, J.I., ред., John Wiley & Sons, 1990, 858-859; те, которые описаны в публикации Englisch et al., Angewandte Chemie, международное издание, 1991, 30, 613; и те, которые описаны в публикации Sanghvi, Y.S., глава 15, Antisense Research and Applications, Crooke, S.T. and Lebleu, В., ред., CRC Press, 1993, 273-288.

Иллюстративные патенты США, в которых представлено описание получения некоторых из указанных выше модифицированных азотистых оснований, а также других модифицированных азотистых оснований, включают, без ограничения, U.S. 3687808; 4845205; 5130302; 5134066; 5175273; 5367066; 5432272; 5457187; 5459255; 5484908; 5502177; 5525711; 5552540; 5587469; 5594121; 5596091; 5614617; 5645985; 5681941; 5750692; 5763588; 5830653 и 6005096, некоторые из которых имеют того же заявителя, что и настоящая заявка, и каждый из которых включен в данныйданный документ посредством ссылки в полном объеме.

Некоторые межнуклеозидные связи

В некоторых вариантах реализации данного изобретения представлены олигомерные соединения, содержащие связанные нуклеозиды. В таких вариантах реализации нуклеозиды могут быть связаны вместе при помощи любой межнуклеозидной связи. Два основных класса межнуклеозидных связывающих групп определяют по наличию или отсутствию атома фосфора. Иллюстративные межнуклеозидные связи, содержащие фосфор, включают, но не ограничиваются ими, фосфодиэфиры (Р=O), фосфотриэфиры, метилфосфонаты, фосфорамидаты и тиофосфаты (P=S). Иллюстративные не содержащие фосфора межнуклеозидные связывающие группы включают, но не ограничиваются ими, метиленметилимино (-СН₂-N(СН₃)-O-СН₂-), тиодиэфир (-O-C(O)-S-), тионокарбамат (-O-C(O)(NH)-S-); силоксан (-O-Si(H)₂-O-); и N,N'-диметилгидразин (-СН₂-N(СН₃)-N(СН₃)-). Модифицированные связи, в сравнении с природными фосфодиэфирными связями, могут быть использованы для изменения, обычно повышения устойчивости олигомерного соединения к действию нуклеаз. В некоторых вариантах реализации изобретения межнуклеозидные связи, имеющие хиральный атом, могут быть получены в виде рацемической смеси или в виде отдельных энантиомеров. Иллюстративные хиральные связи включают, но не ограничиваются ими, алкилфосфонаты и тиофосфаты. Специалистам в данной области техники хорошо известны способы получения фосфорсодержащих и не содержащих фосфора межнуклеозидных связей.

Олигонуклеотиды, описанные в данном документе, содержат один или более асимметричных центров и, следовательно, образуют энантиомеры, диастереомеры и другие стереоизомерные конфигурации, которые могут быть определены в терминах абсолютной стереохимии как (R) или (S), α или β, как в случае сахарных аномеров, или (D) или (L), как в случае аминокислот, и т.д. В антисмысловые соединения, представленные в данном документе, включены все такие возможные изомеры, а также их рацемические и оптически чистые формы.

Нейтральные межнуклеозидные связи включают, без ограничения, фосфотриэфиры, метилфосфонаты, MMI (3'-СН₂-N(СН₃)-O-5'), амид-3 (3'-CH₂-C(=O)-N(H)-5'), амид-4 (3'-CH₂-N(H)-C(=O)-5'), формацеталь (3'-O-СН₂-O-5') и тиоформацеталь (3'-S-CH₂-O-5'). Дополнительные нейтральные межнуклеозидные связи включают неионные связи, содержащие силоксан (диалкилсилоксан), карбоксилатный эфир, карбоксамид, сульфид, сульфонатный эфир и амиды (см., например: Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi и P.D. Cook, ред., ACS Symposium Series 580; главы 3 и 4, 40-65). Дополнительные нейтральные межнуклеозидные связи включают неионные связи, содержащие смешанные части компонентов N, О, S и СН₂.

Некоторые мотивы

В некоторых вариантах реализации данного изобретения представлены олигомерные соединения, содержащие олигонуклеотиды. В некоторых вариантах реализации такие олигонуклеотиды содержат одну или более химических модификаций. В некоторых вариантах реализации химически модифицированные олигонуклеотиды содержат один или более модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации химически модифицированные олигонуклеотиды содержат один или более модифицированных нуклеозидов, содержащих модифицированные сахара. В некоторых вариантах реализации химически модифицированные олигонуклеотиды содержат один или более модифицированных нуклеозидов, содержащих одно или более модифицированных азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации химически модифицированные олигонуклеотиды содержат одну или более модифицированных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации химические модификации (модификации сахара, модификации азотистого основания и/или модификации связи) определяют порядок или мотив. В некоторых вариантах реализации порядки химических модификаций сахарных фрагментов, межнуклеозидных связей и азотистых оснований не зависят друг от друга. Следовательно, олигонуклеотид может быть описан по его мотиву модификации сахара, мотиву межнуклеозидной связи и/или модификации азотистого основания (при использовании в данном документе мотив модификации азотистого основания описывает химические модификации азотистых оснований независимо от последовательности азотистых оснований).

Некоторые сахарные мотивы

В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат один или более типов модифицированных сахарных фрагментов и/или природных сахарных фрагментов, расположенных вдоль олигонуклеотида или его области в определенном порядке или мотиве сахарной модификации. Такие мотивы могут содержать любые сахарные модификации, описанные в данном документе и/или другие известные сахарные модификации.

В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат или состоят из области, имеющей мотив сахарной модификации гэп-мера, который содержит две внешние области или «крылья» и внутреннюю область или «гэп». Три области мотива гэп-мера (5'-крыло, гэп и 3'-крыло) образуют непрерывную последовательность нуклеозидов, в которой по меньшей мере некоторые сахарные мотивы нуклеозидов каждого крыла отличаются от по меньшей мере части сахарных мотивов нуклеозидов в гэп. В частности, по меньшей мере сахарные фрагменты нуклеозидов каждого крыла, которые расположены вплотную к гэп (самый 3' нуклеозид 5'-крыла и самый 5' нуклеозид 3'-крыла), отличаются от сахарного фрагмента соседних нуклеозидов в гэп, определяя, таким образом, границу между крыльями и гэп. В некоторых вариантах реализации изобретения сахарные фрагменты в гэп являются одинаковыми. В некоторых вариантах реализации гэп содержит один или более нуклеозидов, имеющих сахарный фрагмент, отличный от сахарного фрагмента одного или более других нуклеозидов в гэп. В некоторых вариантах реализации мотивы сахарных модификаций двух крыльев являются одинаковыми (симметричный гэп-мер). В некоторых вариантах реализации мотив сахарных модификаций 5'-крыла отличается от мотива сахарных модификаций 3'-крыла (асимметричный гэп-мер). В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат 2'-МОЕ модифицированные нуклеозиды в крыльях и 2'-F модифицированные нуклеозиды в гэп.

В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды являются полностью модифицированными. В некоторых таких вариантах реализации олигонуклеотиды являются однородно модифицированными. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды являются однородными 2'-МОЕ. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды являются однородными 2'-F. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды являются однородными морфолино. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды являются однородными БНК. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды являются однородными ЗНК. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды являются однородными cEt.

В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат однородно модифицированную область и дополнительные нуклеозиды, которые модифицированы неоднородно или модифицированы по-другому. В некоторых вариантах реализации неоднородно модифицированная область имеет по меньшей мере 5, 10, 15 или 20 нуклеозидов в длину. В некоторых вариантах реализации однородная область представляет собой 2'-МОЕ область. В некоторых вариантах реализации однородная область представляет собой 2'-F область. В некоторых вариантах реализации однородная область представляет собой морфолино-область. В некоторых вариантах реализации однородная область представляет собой область БНК. В некоторых вариантах реализации однородная область представляет собой область ЗНК. В некоторых вариантах реализации однородная область представляет собой область cEt.

В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид не содержит более 4 смежных немодифицированных 2'-дезоксинуклеозидов. В некоторых случаях антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие более 4 смежных 2'-дезоксинуклеозидов, активируют РНКазу Н, что приводит к расщеплению целевой РНК. В некоторых вариантах реализации такое расщепление предотвращается отсутствием более 4 смежных 2'-дезоксинуклеозидов, например, при необходимости изменения сплайсинга, а не расщепления целевой РНК.

Некоторые мотивы межнуклеозидных связей

В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат модифицированные межнуклеозидные связи, расположенные вдоль олигонуклеотида или его области в определенном порядке или мотиве модифицированных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации межнуклеозидные связи расположены в мотиве, содержащем разрыве, как описано выше для мотива сахарных модификаций. В таких вариантах реализации межнуклеозидные связи в каждой из двух областей крыльев отличаются от межнуклеозидных связей в области гэп. В некоторых вариантах реализации межнуклеозидные связи в крыльях являются фосфодиэфирными, а межнуклеозидные связи в гэп являются тиофосфатными. Мотив сахарных модификаций выбран независимо, так что такие олигонуклеотиды, которые имеют мотив межнуклеозидных связей с разрывами, могут иметь или не иметь мотив сахарных модификаций с разрывами, и если они имеют сахарный мотив с разрывами, то длины крыльев и гэп могут быть или не быть одинаковыми.

В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды содержат область, имеющую чередующийся мотив межнуклеозидной связи. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды согласно данному изобретению содержат область, имеющую однородно модифицированные межнуклеозидные связи. В некоторых таких вариантах реализации олигонуклеотид содержит область, которая однородно связана тиофосфатными межнуклеозидными связями. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид однородно связан тиофосфатом. В некоторых вариантах реализации каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида выбрана из фосфодиэфира и тиофосфата. В некоторых вариантах реализации каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида выбрана из фосфодиэфира и тиофосфата, и по меньшей мере одна межнуклеозидная связь является тиофосфатной.

В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 6 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 8 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 10 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 6 последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 8 последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 10 последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок из по меньшей мере 12 последовательных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых таких вариантах реализации по меньшей мере один такой блок расположен на 3'-конце олигонуклеотида. В некоторых таких вариантах реализации по меньшей мере один такой блок расположен в пределах 3 нуклеозидов от 3'-конца олигонуклеотида.

В некоторых вариантах реализации изобретения соединения и композиции, включая модифицированные олигонуклеотиды, доставляют в ЦНС. В некоторых вариантах реализации соединения и композиции, включая модифицированные олигонуклеотиды, доставляют в ЦНС путем интрацеребровентрикулярного введения или болюсного интрацеребровентрикулярного введения. В некоторых вариантах реализации один или более модифицированных олигонуклеотидов могут демонстрировать высокую эффективность и высокую селективность в отношении целевой нуклеиновой кислоты, но могут обладать некоторой степенью острой токсичностью при введении в ЦНС путем интрацеребровентрикулярного введения. В некоторых вариантах реализации внедрение одной или более модификаций в межнуклеозидные связи модифицированного олигонуклеотида ослабляет или снижает острую токсичность, связанную с доставкой в ЦНС путем интрацеребровентрикулярного введения. В некоторых вариантах реализации внедрение одной или более фосфодиэфирных межнуклеозидных связей в модифицированный олигонуклеотид ослабляет или снижает острую токсичность, связанную с доставкой в ЦНС путем интрацеребровентрикулярного введения.

В некоторых вариантах реализации олигомерное соединение имеет мотив межнуклеозидных связей, выбранный из представленной ниже таблицы, где каждый «N» представляет собой нуклеозид, каждый нижний индекс «s» представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь, и каждый верхний индекс «о» представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь:

В некоторых вариантах реализации изобретения внедрение 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 фосфодиэфирных межнуклеозидных связей в модифицированный олигонуклеотид ослабляет или снижает острую токсичность, связанную с доставкой в ЦНС путем интрацеребровентрикулярного введения.

Некоторые мотивы модификаций азотистых оснований

В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат химические модификации азотистых оснований, расположенные вдоль олигонуклеотида или его области в определенном порядке или мотиве модификаций азотистых оснований. В некоторых таких вариантах реализации модификации азотистых оснований расположены в мотиве с разрывами. В некоторых вариантах реализации модификации азотистых оснований расположены в чередующемся мотиве. В некоторых вариантах реализации каждое азотистое основание является модифицированным. В некоторых вариантах реализации ни одно азотистое основание не является химически модифицированным.

В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат блок модифицированных азотистых оснований. В некоторых таких вариантах реализации блок расположен на 3'-конце олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации блок находится в пределах 3 нуклеотидов от 3'-конца олигонуклеотида. В некоторых таких вариантах реализации блок расположен на 5'-конце олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации блок находится в пределах 3 нуклеотидов от 5'-конца олигонуклеотида.

В некоторых вариантах реализации изобретения модификации азотистых оснований зависят от природного основания в конкретном положении олигонуклеотида. Например, в некоторых вариантах реализации каждый пурин или каждый пиримидин в олигонуклеотиде является модифицированным. В некоторых вариантах реализации каждый аденин является модифицированным. В некоторых вариантах реализации каждый гуанин является модифицированным. В некоторых вариантах реализации каждый тимин является модифицированным. В некоторых вариантах реализации каждый цитозин является модифицированным. В некоторых вариантах реализации каждый урацил является модифицированным.

В некоторых вариантах реализации изобретения некоторые или все цитозиновые фрагменты в олигонуклеотиде представляют собой 5-метилцитозиновые фрагменты или ни один из них не представляет собой 5-метилцитозин. В данном документе 5-метилцитозин не является «модифицированным азотистым основанием». Соответственно, если не указано иное, то немодифицированные азотистые основания включают и цитозиновые остатки, имеющие 5-метил, и те, которые не имеют 5-метила. В некоторых вариантах реализации изобретения оговорено состояние метилирования всех или некоторых цитозиновых азотистых оснований.

Некоторые общие длины

В некоторых вариантах реализации данного изобретения представлены олигомерные соединения, содержащие олигонуклеотиды любой из множества диапазонов длин. В некоторых вариантах реализации данного изобретения представлены олигомерные соединения или олигонуклеотиды, состоящие из от Х до Y связанных нуклеозидов, где Х представляет собой наименьшее количество нуклеозидов в диапазоне, а Y представляет собой наибольшее количество нуклеозидов в диапазоне. В некоторых таких вариантах реализации каждый Х и Y независимо выбран из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 и 50; при условии, что X≤Y. Например, в некоорых вариантах реализации данного изобретения представлены олигомерные соединении, которые содержат олигонуклеотиды, состоящие из 8-9, 8-10, 8-11, 8-12, 8-13, 8-14, 8-15, 8-16, 8-17, 8-18, 8-19, 8-20, 8-21, 8-22, 8-23, 8-24, 8-25, 8-26, 8-27, 8-28, 8-29, 8-30, 9-10, 9-11, 9-12, 9-13, 9-14, 9-15, 9-16, 9-17, 9-18, 9-19, 9-20, 9-21, 9-22, 9-23, 9-24, 9-25, 9-26, 9-27, 9-28, 9-29, 9-30, 10-11, 10-12, 10-13, 10-14, 10-15, 10-16, 10-17, 10-18, 10-19, 10-20, 10-21, 10-22, 10-23, 10-24, 10-25, 10-26, 10-27, 10-28, 10-29, 10-30, 11-12, 11-13, 11-14, 11-15, 11-16, 11-17, 11-18, 11-19, 11-20, 11-21, 11-22, 11-23, 11-24, 11-25, 11-26, 11-27, 11-28, 11-29, 11-30, 12-13, 12-14, 12-15, 12-16, 12-17, 12-18, 12-19, 12-20, 12-21, 12-22, 12-23, 12-24, 12-25, 12-26, 12-27, 12-28, 12-29, 12-30, 13-14, 13-15, 13-16, 13-17, 13-18, 13-19, 13-20, 13-21, 13-22, 13-23, 13-24, 13-25, 13-26, 13-27, 13-28, 13-29, 13-30, 14-15, 14-16, 14-17, 14-18, 14-19, 14-20, 14-21, 14-22, 14-23, 14-24, 14-25, 14-26, 14-27, 14-28, 14-29, 14-30, 15-16, 15-17, 15-18, 15-19, 15-20, 15-21, 15-22, 15-23, 15-24, 15-25, 15-26, 15-27, 15-28, 15-29, 15-30, 16-17, 16-18, 16-19, 16-20, 16-21, 16-22, 16-23, 16-24, 16-25, 16-26, 16-27, 16-28, 16-29, 16-30, 17-18, 17-19, 17-20, 17-21, 17-22, 17-23, 17-24, 17-25, 17-26, 17-27, 17-28, 17-29, 17-30, 18-19, 18-20, 18-21, 18-22, 18-23, 18-24, 18-25, 18-26, 18-27, 18-28, 18-29, 18-30, 19-20, 19-21, 19-22, 19-23, 19-24, 19-25, 19-26, 19-29, 19-28, 19-29, 19-30, 20-21, 20-22, 20-23, 20-24, 20-25, 20-26, 20-27, 20-28, 20-29, 20-30, 21-22, 21-23, 21-24, 21-25, 21-26, 21-27, 21-28, 21-29, 21-30, 22-23, 22-24, 22-25, 22-26, 22-27, 22-28, 22-29, 22-30, 23-24, 23-25, 23-26, 23-27, 23-28, 23-29, 23-30, 24-25, 24-26, 24-27, 24-28, 24-29, 24-30, 25-26, 25-27, 25-28, 25-29, 25-30, 26-27, 26-28, 26-29, 26-30, 27-28, 27-29, 27-30, 28-29, 28-30 или 29-30 связанных нуклеозидов. В различных вариантах реализации, в которых количество нуклеозидов олигомерного соединения или олигонуклеотида ограничено до определенного диапазона или конкретного значения, олигомерное соединение или олигонуклеотид тем не менее может дополнительно содержать другие дополнительные заместители. Например, олигонуклеотид, содержащий 8-30 нуклеозидов, исключает олигонуклеотиды, имеющие 31 нуклеозид, но, если не указано иное, такой олигонуклеотид может дополнительно содержать, например, один или более конъюгатов, концевых групп или других заместителей. В некоторых вариантах реализации гэп-мерный олигонуклеотид имеет любую из перечисленных выше длин.

Специалистам в данной области техники понятно, что некоторые длины могут быть невозможными для некоторых мотивов. Например: гэп-мер, имеющий область 5'-крыла, состоящую из четырех нуклеотидов, гэп, состоящий из по меньшей мере шести нуклеотидов, и область 3'-крыла, состоящую из трех нуклеотидов, не может иметь общую длину менее 13 нуклеотидов. Поэтому следует понимать, что нижний предел длины составляет 13, а предел 10 в «10-20» не действует в этом варианте реализации.

Кроме того, если олигонуклеотид описан диапазоном общей длины и областями, имеющими определенные длины, и если сумма указанных длин областей меньше, чем верхний предел диапазона общей длины, то олигонуклеотид может иметь дополнительные нуклеозиды за пределами указанных областей, при условии, что общее количество нуклеозидов не превышает верхний предел диапазона общей длины. Например, олигонуклеотид, состоящий из 20-25 связанных нуклеозидов, содержащий 5'-крыло, состоящее из 5 связанных нуклеозидов; 3'-крыло, состоящее из 5 связанных нуклеозидов, и центральный гэп, состоящий из 10 связанных нуклеозидов (5+5+10=20) может иметь до 5 нуклеозидов, которые не являются частью 5'-крыла, 3'-крыла или гэп (до достижения предела общей длины, равного 25). Такие дополнительные нуклеозиды могут быть расположены 5' в 5'-крыле и/или 3' в 3'-крыле.

Некоторые олигонуклеотиды

В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды согласно данному изобретению характеризуются по их сахарному мотиву, мотиву межнуклеозидных связей, мотиву модификаций азотистых оснований и по общей длине. В некоторых вариантах реализации все такие параметры не зависят друг от друга. Следовательно, каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида, имеющего гэп-мерный сахарный мотив, может быть модифицированной или немодифицированной и может следовать или не следовать гэп-мерному порядку модификации сахарных модификаций. Следовательно, межнуклеозидные связи в пределах областей крыльев или сахарного гэп-мера могут быть одинаковыми или отличными друг от друга и могут быть одинаковыми или отличными от межнуклеозидных связей области гэп. Точно так же, такие олигонуклеотиды с сахарным гэп-мером могут содержать одно или более модифицированных азотистых оснований, независимо от гэп-мерного порядка сахарных модификаций. В данном документе, если в описании олигонуклеотида или олигомерного соединения не указан один или более параметров, такой параметр не является ограниченным. Следовательно, олигомерное соединение, описанное только как имеющее гэп-мерный сахарный мотив без дополнительного описания, может иметь любую длину, мотив межнуклеозидных связей и мотив модификаций азотистых оснований. Если не указано иное, то все химические модификации не зависят от последовательности азотистых оснований.

Некоторые конъюгирующие группы

В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерные соединения модифицированы путем присоединения одной или более конъюгирующих групп. В целом, конъюгирующие группы модифицируют одно или более свойств присоединенного олигомерного соединения, включая, но не ограничиваясь ими, фармакодинамические, фармакокинетические, стабильность, связывающие, абсорбционные свойства, свойства клеточного распределения, клеточного поглощения, заряда и клиренса. Конъюгирующие группы обычно используют в области химии и присоединяют их напрямую или через необязательный фрагмент, связывающий конъюгат, или группу, связывающую конъюгат, к исходному соединению, такому как олигомерное соединение, такое как олигонуклеотид. Конъюгирующие группы включают, без ограничения, интеркаляторы, репортерные молекулы, полиамины, полиамиды, полиэтиленгликоли, простые тиоэфиры, простые полиэфиры, холестерины, тиохолестерины, фрагменты холевой кислоты, фолат, липиды, фосфолипиды, биотин, феназин, фенантридин, антрахинон, адамантан, акридин, флуоресцеины, родамины, кумарины и красители. Ранее были описаны некоторые конъюгирующие группы, например: холестериновый фрагмент (Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556), холевая кислота (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let, 1994, 4, 1053-1060), простой тиоэфир, например, гексил-3-тритилтиол (Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770), тиохолестерин (Oberhauser et al., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533-538), алифатическая цепь, например, додекандиол или ундециловые остатки (Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al., FEBS Lett., 1990, 259, 327-330; Svinarchuk et al., Biochimie, 1993, 75, 49-54), фосфолипид, например, ди-гексадецил-рац-глицерин или триэтиламмония 1,2-ди-О-гексадецил-рац-глицеро-3-Н-фосфонат (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), полиаминная или полиэтиленгликолевая цепь (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973), или адамантануксусная кислота (Manoharan et al.. Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), пальмитиловый фрагмент (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237), или октадециламинный, или гексиламинокарбонилоксихолестериновый фрагмент (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937).

В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующая группа содержит активное лекарственное вещество, например, аспирин, варфарин, фенилбутазон, ибупрофен, супрофен, фен-буфен, кетопрофен, (S)-(+)-пранопрофен, карпрофен, дансилсаркозин, 2,3,5-трийодбензойная кислота, флуфенамовая кислота, фолиниевая кислота, бензотиадиазид, хлортиазид, диазепин, индометицин, барбитурат, цефалоспорин, лекарство сульфа, противодиабетическое, антибактериальное лекарство или антибиотик.

В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующая группа присоединена к олигонуклеотидам в олигомерных соединениях напрямую. В некоторых вариантах реализации конъюгирующие группы присоединены к олигонуклеотидам через группу, связывающую конъюгат. В некоторых таких вариантах реализации группы, связывающие конъюгат, включая, но не ограничиваясь ими, бифункциональные связывающие фрагменты, такие как те, которые известны в данной области техники, пригодны для соединений, представленных в данном документе. Группы, связывающие конъюгат, подходят для присоединения конъюгирующих групп, таких как химически стабилизированные группы, функциональные группы, репортерные группы и другие группы, к селективным сайтам в исходном соединении, таком как, например, олигомерное соединение. В общем, бифункциональный связывающий фрагмент содержит фрагмент нециклического углеводородного радикала, имеющий две функциональные группы. Одну из функциональных групп выбирают для связывания с исходной молекулой или рассматриваемым соединением, а другую выбирают для связывания, по существу, любой выбранной группы, такой как химическая функциональная группа или конъюгирующая группа. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер конъюгата содержит цепную структуру или олигомер из повторяющихся звеньев, таких как этиленгликолевые или аминокислотные звенья. Примеры функциональных групп, которые обычно используют в бифункциональном связывающем фрагменте, включают, но не ограничиваются ими, электрофилы для взаимодействия с нуклеофильными группами и нуклеофилы для взаимодействия с электрофильными группами. В некоторых вариантах реализации бифункциональные связывающие фрагменты содержат амино, гидроксил, карбоновую кислоту, тиол, ненасыщенные фрагменты (например, двойные или тройные связи) и т.п.

Некоторые неограничивающие примеры фрагментов, связывающих конъюгат, включают пирролидин, 8-амино-3,6-диоксаоктановую кислоту (ADO), сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (SMCC) и 6-аминогексановую кислоту (АНЕХ или AHA). Другие связывающие группы включают, но не ограничиваются ими, замещенный C₁-С₁₀ алкил, замещенный или незамещенный C₂-С₁₀ алкенил или замещенный или незамещенный С₂-С₁₀ алкинил, причем неограничивающий список предпочтительных групп заместителей включает гидроксил, амино, алкокси, карбокси, бензил, фенил, нитро, тиол, тиоалкокси, галоген, алкил, арил, алкенил и алкинил.

Конъюгирующие группы могут быть присоединены к одному или к обоим концам олигонуклеотида (концевые конъюгирующие группы) и/или в любом внутреннем положении.

В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы находятся на 3'-конце олигонуклеотида олигомерного соединения. В некоторых вариантах реализации конъюгирующие группы расположены вблизи 3'-конца. В некоторых вариантах реализации конъюгаты присоединены на 3'-конце олигомерного соединения, но перед одной или несколькими концевыми группами нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации конъюгирующая группа находится в концевой группе.

В некоторых вариантах реализации данного изобретения представлены олигомерные соединения. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерные соединения содержат олигонуклеотид. В некоторых вариантах реализации олигомерное соединение содержит олигонуклеотид и одну или более конъюгирующих и/или концевых групп. Такие конъюгирующие и/или концевые группы могут быть добавлены к олигонуклеотидам, имеющим любые химические мотивы, рассмотренные выше. Так, например, олигомерное соединение, содержащее олигонуклеотид, имеющий область чередующихся нуклеозидов, может содержать концевую группу.

Антисмысловые соединения

В некоторых вариантах реализации олигомерные соединения согласно данному изобретению представляют собой антисмысловые соединения. Такие антисмысловые соединения могут гибридизоваться с целевой нуклеиновой кислотой, что приводит к получению по меньшей мере одной антисмысловой активности. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения специфически гибридизуются с одной или более целевыми нуклеиновыми кислотами. В некоторых вариантах реализации специфически гибридизующееся антисмысловое соединение имеет последовательность азотистых оснований, содержащую область, имеющую достаточную комплементарность целевой нуклеиновой кислоте для обеспечения возможности гибридизации и получения антисмысловой активности и недостаточную комплементарность любой нецелевой нуклеиновой кислоте во избежание неспецифической гибридизации с любыми последовательностями нецелевых нуклеиновых кислот в условиях, в которых желаема специфическая гибридизация (например, в физиологических условиях для in vivo или терапевтических применения и в условиях выполнения анализов в случае in vitro анализов).

В некоторых вариантах реализации данного изобретения представлены антисмысловые соединения, содержащие олигонуклеотиды, которые полностью комплементарны целевой нуклеиновой кислоте по всей длине олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды на 99% комплементарны целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации олигонуклеотиды на 95% комплементарны целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации такие олигонуклеотиды на 90% комплементарны целевой нуклеиновой кислоте.

В некоторых вариантах реализации такие олигонуклеотиды на 85% комплементарны целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации такие олигонуклеотиды на 80% комплементарны целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловое соединение содержит область, которая полностью комплементарна целевой нуклеиновой кислоте, и является по меньшей мере на 80% комплементарным целевой нуклеиновой кислоте по всей длине олигонуклеотида. В некоторых таких вариантах реализации область полной комплементарности имеет от 6 до 14 азотистых оснований в длину.

В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения и антисмысловые олигонуклеотиды содержат одноцепочечные соединения. В некоторых вариантах реализации антисмысловые соединения и антисмысловые олигонуклеотиды содержат двухцепочечные соединения.

Некоторые модифицированные олигонуклеотиды

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 31. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 33. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 34. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 35. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 36. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 37. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 45.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 72. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 79. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 82. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 83. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 97. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 106. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 107. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 112. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 113. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 130. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 140.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 141. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 142. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 143. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 144. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 145. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 146. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 147. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 148. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 149.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 150. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 151. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 152. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 153. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 157. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 158. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 160. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность SEQ ID NO 200.

Некоторые каскады и механизмы, связанные с нейродегенеративными расстройствами

В некоторых вариантах реализации изобретения нейродегенеративный синдром или расстройство может быть любым нейродегенеративным синдромом или расстройством, связанным с Tau. Неограничивающие примеры нейродегенеративного расстройства, связанного с Tau, могут включать болезнь Альцгеймера, прогрессирующий надъядерный паралич, деменцию боксеров, лобно-височную деменцию, паркинсонизм, связанный с хромосомой, болезнь Литико-Бодига, деменцию с преобладанием нейрофибриллярных клубков, ганглиоглиому, ганглиоцитому, менингиоангиоматоз, подострый склерозирующий панэнцефалит, свинцовую энцефалопатию, туберозный склероз, болезнь Галлервордена-Шпатца, болезнь Пика, кортикобазальную ганглиозную дегенерацию, аргирофильную зернистую болезнь, надъядерный паралич, кортикобазальную дегенерацию, лобно-височную деменцию или лобно-височную долевую дегенерацию. В некоторых вариантах реализации способ согласно изобретению включает модифицирование лобно-височной деменции (FTD). В других вариантах реализации способ согласно изобретению включает модифицирование болезни Альцгеймера (AD). В других вариантах реализации способ согласно изобретению включает модифицирование прогрессирующего надъядерного паралича. В других вариантах реализации способ согласно изобретению включает модифицирование кортикобазальной ганглиозной дегенерации.

В некоторых вариантах реализации в данном документе описаны композиции и способы модифицирования нейродегенеративного синдрома путем изменения сплайсинга нуклеиновой кислоты, кодирующей Tau. Tau представляет собой белок, который находится во многих тканях, но особенно распространен в аксонах нейронов. Основная функция Tau заключается в связывании и стабилизации микротрубочек, которые являются важными структурными компонентами цитоскелета, участвующими в митозе, цитокинезе и везикулярном транспорте. У людей существует шесть изоформ Tau, которые образуются путем альтернативного сплайсинга экзонов 2, 3 и 10. Сплайсинг экзонов 2 и 3 на N-конце белка приводит к включению нуля, одного или двух 29-аминокислотных доменов, которые называются 0N, 1N или 2N Tau, соответственно. Включение 10 экзона на С-конце приводит к включению связывающего микрорубочки домена, кодируемого 10 экзоном. Поскольку существует 3 связывающих микротрубочки домена, находящихся в любом месте Tau, то эта изоформа Tau (с включенным 10 экзоном) называется 4R Tau, где R относится к количеству повторений связывающих микротрубочки доменов. (Фиг. 1). Tau без 10 экзона называют 3R Tau. У здоровых субъектов соотношение 3R:4R Tau регулируется в зависимости от уровня развития, при этом плодные ткани экспрессируют почти исключительно 3R Tau, а ткани взрослого человека экспрессируют приблизительно равные количества 3R/4R Tau. Отклонения от нормального соотношения 3R/4R Tau характеризуют нейродегенеративные синдромы, такие как FTD таупатии.

В некоторых вариантах реализации изобретения соотношение 4R:3R Tau в центральной нервной системе субъекта может быть нормальным, низким или высоким. При использовании в данном документе «нормальное соотношение 4R:3R Tau» в центральной нервной системе означает соотношение 4R:3R Tau в центральной нервной системе, которое является, по существу, таким же, как соотношение 4R:3R Tau в центральной нервной системе субъекта того же вида и приблизительного того же возраста, не страдающего от нейродегенеративного заболевания. В некоторых вариантах реализации изобретения некоторые композиции антисмысловых олигонуклеотидов и/или способы обеспечивают снижение нормального соотношения 4R:3R Tau в центральной нервной системе субъекта. В других вариантах реализации изобретения некоторые композиции антисмысловых олигонуклеотидов и/или способы обеспечивают снижение низкого соотношения 4R:3R Tau в центральной нервной системе субъекта.

В некоторых вариантах реализации изобретения некоторые композиции антисмысловых олигонуклеотидов и/или способы обеспечивают снижение высокого соотношения 4R:3R Tau в центральной нервной системе субъекта. В некоторых вариантах реализации изобретения некоторые композиции антисмысловых олигонуклеотидов и/или способы обеспечивают снижение высокого соотношения 4R:3R Tau, обусловленного дефектом сплайсинга нуклеиновой кислоты, кодирующей Tau, у субъекта. Дефекты сплайсинга нуклеиновой кислоты, кодирующей Tau, у субъекта могут быть обусловлены, например, генетическими мутациями, изменяющими сплайсинг нуклеиновой кислоты, кодирующей Tau, и приводящими к высокому соотношению 4R:3R Tau. Мутация может быть либо мутацией замещения, либо мутацией делеции, которая создает новый, аберрантный сплайс-элемент. Неограничивающие примеры генетических мутаций, которые могут изменять сплайсинг нуклеиновой кислоты, кодирующей Tau, и приводить к высокому соотношению 4R:3R Tau, могут включать N279K, P301S, 280, L284L, N296H, N296N, 296N, P301S, G303V, Е10+11, Е10+12, Е10+13, E+10+14 и Е10+16, и Е10+19.

В некоторых вариантах реализации изобретения введение антисмыслового олигонуклеотида обеспечивает снижение соотношения 4R:3R Tau в центральной нервной системе субъекта за счет изменения сплайсинга нуклеиновой кислоты, кодирующей Tau.

В некоторых вариантах реализации изобретения повышение исключения 10 экзона транскрипта Tau подавляет одно или более расстройств, связанных с Tau. В некоторых вариантах реализации расстройство, связанное с tau, может быть любым из болезни Альцгеймера, лобно-височной деменции (FTD), FTDP-17, прогрессирующего надъядерного паралича (PSP), хронической травматической энцефалопатии (СТЕ), кортикобазальной ганглиозной дегенерации (CBD), эпилепсии, синдрома Драве, деменции боксеров, паркинсонизма, связанного с хромосомой, болезни Литиго-Бодига, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, ганглиоглиомы, ганглиоцитомы, менингиоангиоматоза, подострого склерозирующего панэнцефалита, свинцовой энцефалопатии, туберозного склероза, болезни Галлервордена-Шпатца, болезни Пика, аргирофильной зернистой болезни, надъядерного паралича, кортикобазальной дегенерации или лобно-височной долевой дегенерации.

Некоторые целевые нуклеиновые кислоты и механизмы

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения содержат или состоят из олигонуклеотида, содержащего область, которая комплементарна целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации целевая нуклеиновая кислота представляет собой молекулу эндогенной РНК. В некоторых вариантах реализации целевая нуклеиновая кислота представляет собой пре-мРНК. В некоторых вариантах реализации целевая нуклеиновая кислота представляет собой транскрипт tau. В некоторых вариантах реализации целевая РНК представляет собой пре-мРНК Tau.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловое соединение комплементарно области пре-мРНК Tau. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение комплементарно в пределах области пре-мРНК Tau, содержащей экзон, кодирующий изоформу 4R. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение комплементарно области пре-мРНК Tau, содержащей интрон-экзонную границу сплайсинга. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение комплементарно области пре-мРНК Tau, содержащей интрон-экзонную границу сплайсинга, смежную с 10 экзоном. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение комплементарно области пре-мРНК Tau, содержащей интрон-экзонную границу сплайсинга между 9 интроном и 10 экзоном. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение комплементарно области пре-мРНК Tau, содержащей интрон-экзонную границу сплайсинга между 10 экзоном и 10 интроном. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение комплементарно области пре-мРНК Tau, состоящей из 10 экзона.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловое соединение комплементарно в пределах области пре-мРНК Tau, содержащей экзонный сайленсер сплайсинга в пределах 10 экзона. В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение комплементарно в пределах области пре-мРНК Tau, содержащей экзонный сайленсер сплайсинга в пределах 10 экзона.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловое соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 8-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность азотистых оснований, содержащую область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований, комплементарных целевой области равной длины транскрипта Tau.

В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121708 и азотистого основания 122044 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121796 и азотистого основания 122044 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121796 и азотистого основания 121885 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121873 и азотистого основания 121898 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121869 и азотистого основания 121943 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 122020 и азотистого основания 122044 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121881 и азотистого основания 121898 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121880 и азотистого основания 121897 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121879 и азотистого основания 121896 SEQ ID NO: 1.

В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121878 и азотистого основания 121895 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121877 и азотистого основания 121894 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121876 и азотистого основания 121893 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121875 и азотистого основания 121892 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121874 и азотистого основания 121891 SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область находится в пределах азотистого основания 121873 и азотистого основания 121890 SEQ ID NO: 1.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид модулирует сплайсинг пре-мРНК. В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид модулирует сплайсинг пре-мРНК Tau. В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид повышает количество мРНК 3R Tau. В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид повышает исключение 10 экзона в мРНК Tau. В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид снижает включение 10 экзона в мРНК Tau. В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид повышает количество мРНК 3R Tau. В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид снижает количество мРНК 4R Tau.

В некоторых вариантах реализации изобретения желательно изменить сплайсинг пре-мРНК Tau для исключения 10 экзона. Изменение сплайсинга пре-мРНК Tau для исключения 10 экзона приведет к повышению экспрессии 3R Tau и снижению экспрессии 4R Tau. В некоторых вариантах реализации изобретения желательно изменить сплайсинг пре-мРНК Tau для снижения экспрессии 4R Tau.

В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид снижает количество мРНК 3R Tau. В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид снижает исключение 10 экзона в мРНК Tau. В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид повышает включение 10 экзона в мРНК Tau. В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид снижает количество мРНК 3R Tau. В некоторых вариантах реализации антисмысловый олигонуклеотид повышает количество мРНК 4R Tau. В некоторых вариантах реализации желательно изменить сплайсинг пре-мРНК Tau для включения 10 экзона, например, для обеспечения фенотипического эффекта в животной модели на мышах.

Некоторые фармацевтические композиции

В некоторых вариантах реализации данного изобретения представлены фармацевтические композиции, содержащие одно или более антисмысловых соединений. В некоторых вариантах реализации такая фармацевтическая композиция содержит подходящий фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция содержит стерильный солевой раствор и одно или более антисмысловых соединений. В некоторых вариантах реализации такая фармацевтическая композиция состоит из стерильного солевого раствора и одного или более антисмысловых соединений. В некоторых вариантах реализации стерильный солевой раствор представляет собой солевой раствор фармацевтической марки. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция содержит одно или более антисмысловых соединений и стерильную воду. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция состоит из одного или более антисмысловых соединений и стерильной воды. В некоторых вариантах реализации стерильный солевой раствор представляет собой воду фармацевтической марки. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция содержит одно или более антисмысловых соединений и фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция состоит из одного или более антисмысловых соединений и стерильного фосфатно-солевого буферного раствора (PBS). В некоторых вариантах реализации стерильный солевой раствор представляет собой PBS фармацевтической марки.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения могут быть смешаны с фармацевтически приемлемыми активными и/или инертными веществами для получения фармацевтических композиций или рецептур. Композиции и способы составления фармацевтических композиций зависят от ряда критериев, включая, но не ограничиваясь ими, способ введения, тяжесть заболевания или дозу, подлежащую введению.

Фармацевтические композиции, содержащие антисмысловые соединения, подразумевают любые фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры или соли таких сложных эфиров. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтические композиции, содержащие антисмысловые соединения, содержат один или более олигонуклеотидов, которые при введении животному, включая человека, могут обеспечивать (прямо или косвенно) биологически активный метаболит или его остаток. Соответственно, например, настоящее описание относится также к фармацевтически приемлемым солям антисмысловых соединений, пролекарствам, фармацевтически приемлемым солям таких пролекарств и другим биоэквивалентам. Подходящие фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничиваются ими, соли натрия и калия.

Пролекарство может включать внедрение дополнительных нуклеозидов с одного или с обоих концов олигомерного соединения, которые расщепляются под действием эндогенных нуклеаз в организме, с образованием активного антисмыслового олигомерного соединения.

В различных способах в терапиях с нуклеиновыми кислотами используют липидные фрагменты. В некоторых таких способах нуклеиновую кислоту вводят в предварительно сформированные липосомы или липоплексы, полученные из смесей катионных липидов и нейтральных липидов. В некоторых способах комплексы ДНК с моно- или поликатионными липидами получают без нейтрального липида. В некоторых вариантах реализации изобретения липидный фрагмент выбирают для усиления распределения фармацевтического агента в конкретной клетке или ткани. В некоторых вариантах реализации липидный фрагмент выбирают для усиления распределения фармацевтического агента в жировой ткани. В некоторых вариантах реализации липидный фрагмент выбирают для усиления распределения фармацевтического агента в мышечной ткани.

В некоторых вариантах реализации фармацевтические композиции, представленные в данном документе, содержат один или более модифицированных олигонуклеотидов и одно или более вспомогательных веществ. В некоторых таких вариантах реализации вспомогательные вещества выбраны из воды, солевых растворов, спирта, полиэтиленгликолей, желатина, лактозы, амилазы, стеарата магния, талька, кремниевой кислоты, вязкого парафина, гидроксиметилцеллюлозы и поливинилпирролидона.

В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция, представленная в данном документе, содержит систему доставки. Примеры систем доставки включают, но не ограничиваются ими, липосомы и эмульсии. Некоторые системы доставки пригодны для получения некоторых фармацевтических композиций, включая те, которые содержат гидрофобные соединения. В некоторых вариантах реализации используют некоторые органические растворители, такие как диметилсульфоксид.

В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция, представленная в данном документе, содержит одну или более тканеспецифичных доставляющих молекул, предназначенных для доставки одного или более фармацевтических агентов согласно данному изобретению в конкретные ткани или типы клеток. Например, в некоторых вариантах реализации фармацевтические композиции содержат липосомы, покрытые тканеспецифичным антителом.

В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция, представленная в данном документе, содержит систему сорастворителей. Некоторые из таких систем сорастворителей содержат, например, бензиловый спирт, неполярное поверхностно-активное вещество, смешиваемый с водой органический полимер и водную фазу. В некоторых вариантах реализации такие системы сорастворителей используют для гидрофобных соединений. Неограничивающий пример такой системы сорастворителей представляет собой система сорастворителей VPD, которая представляет собой раствор абсолютного этанола, содержащего 3% масс./об. бензилового спирта, 8% масс./об. неполярного ПАВ Polysorbate 80™ и 65% масс./об. полиэтиленгликоля 300. Пропорции в таких системах сорастворителей могут значительно варьироваться без существенного изменения их характеристик растворимости и токсичности. Более того, может варьироваться природа компонентов совместного растворителя: например, могут быть использованы другие поверхностно-активные вещества вместо Polysorbate 80™; может варьироваться размер фракции полиэтиленгликоля; полиэтиленгликоль может быть заменен другими биосовместимыми полимерами, например, поливинилпирролидоном; и вместо декстрозы могут быть использованы другие сахара или полисахариды.

В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция, представленная в данном документе, получена для перорального введения. В некоторых вариантах реализации фармацевтические композиции получают для буккального введения.

В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическую композицию получают для введения инъекцией (например, внутривенно, подкожно, внутримышечно и т.д.). В некоторых таких вариантах реализации фармацевтическая композиция содержит носитель и составлена в водном растворе, таком как вода или физиологически совместимые буферы, такие как раствор Хэнкса, раствор Рингера или физиологический солевой буфер. В некоторых вариантах реализации включены другие ингредиенты (например, ингредиенты, которые способствуют растворимости или служат как консерванты). В некоторых вариантах реализации инъецируемые суспензии получают при помощи подходящих жидких носителей, суспендирующих агентов и т.п. Некоторые фармацевтические композиции для инъекции представлены в единичной лекарственной форме, например, в ампулах или многодозных контейнерах. Некоторые фармацевтические композиции для инъекций представляют собой суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных средах и могут содержать формообразующие агенты, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Некоторые растворители, подходящие для применения в фармацевтических композициях для инъекций, включают, но не ограничиваются ими, липофильные растворители и жирные масла, такие как кунжутное масло, сложные эфиры синтетических жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, и липосомы. Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества, увеличивающие вязкость суспензии, такие как натрия карбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран. Необязательно, такие суспензии могут содержать также подходящие стабилизаторы или агенты, увеличивающие растворимость фармацевтических агентов для обеспечения возможности получения высококонцентрированных растворов.

В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическую композицию получают для трансмукозального введения. В некоторых таких вариантах реализации в композиции используют пенетранты, соответствующие барьеру, через которое должно пройти лекарство. Такие пенетранты хорошо известны в данной области техники.

В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция, представленная в данном документе, содержит олигонуклеотид в терапевтически эффективном количестве. В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество достаточно для предупреждения, уменьшения или облегчения симптомов заболевания или для увеличения продолжительности жизни субъекта, подлежащего лечению. Специалисты в данной области техники могут легко определить терапевтически эффективное количество.

В некоторых вариантах реализации один или более модифицированных олигонуклеотидов, представленных в данном документе, составляют в композицию в качестве пролекарства. В некоторых вариантах реализации при введении in vivo пролекарство химически превращается в биологически, фармацевтически или терапевтически более активную форму олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации пролекарства находят применение из-за более простого их введения, по сравнению с соответствующей активной формой. Например, в некоторых случаях пролекарство может быть более биодоступным (например, при пероральном введении), чем соответствующая активная форма. В некоторых случаях пролекарство может обладать улучшенной растворимостью, по сравнению с соответствующей активной формой. В некоторых вариантах реализации пролекарства менее растворимы в воде, чем соответствующая активная форма. В некоторых случаях такие пролекарства превосходно переходят через клеточные мембраны, где растворимость в воде ухудшает подвижность. В некоторых вариантах реализации пролекарство представляет собой сложный эфир. В некоторых таких вариантах реализации сложный эфир при введении метаболически гидролизуется до карбоновой кислоты. В некоторых случаях соединение, содержащее карбоновую кислоту, представляет собой соответствующую активную форму. В некоторых вариантах реализации пролекарство содержит короткий пептид (полиаминокислоту), связанный с кислотной группой. В некоторых таких вариантах реализации при введении пептид расщепляется с образованием соответствующей активной формы.

В некоторых вариантах реализации данного изобретения представлены композиции и способы снижения количества или активности целевой нуклеиновой кислоты в клетке. В некоторых вариантах реализации клетка находится у животного. В некоторых вариантах реализации животное представляет собой млекопитающее. В некоторых вариантах реализации животное представляет собой грызуна. В некоторых вариантах реализации животное представляет собой примата. В некоторых вариантах реализации животное представляет собой примата, не являющегося человеком. В некоторых вариантах реализации животное представляет собой человека.

В некоторых вариантах реализации данного изобретения представлены способы введения животному фармацевтической композиции, содержащей олигомерное соединение согласно данному изобретению. Подходящие способы введения включают, но не ограничиваются ими, пероральный, ректальный, трансмукозальный, интестинальный, энтеральный, местный, суппозитории, через ингаляции, интратекальный, интрацеребровентрикулярный, интраперитонеальный, интраназальный, интраокулярный, интратуморальный и парентеральный (например, внутривенный, внутримышечный, интрамедуллярный и подкожный). В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтические интратекальные введения осуществляют локально, а не системно. Например, фармацевтические композиции могут быть инъецированы непосредственно в область желаемого эффекта (например, в глаза, уши).

В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическую композицию вводят животному, имеющему по меньшей мере одно расстройство, связанное с Tau. В некоторых вариантах реализации такое введение приводит к снижению экспрессии изоформы 4R. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическую композицию вводят животному, имеющему по меньшей мере один симптом, связанный с расстройством, ассоциированным с Tau. В некоторых вариантах реализации такое введение приводит к облегчению по меньшей мере одного симптома. В некоторых вариантах реализации введение животному фармацевтической композиции приводит к снижению мРНК 4R в клетке животного. В некоторых вариантах реализации такое введение приводит к повышению мРНК 3R. В некоторых вариантах реализации такое введение приводит к снижению белка 4R и к повышению белка 3R. В некоторых вариантах белок 3R предпочтителен по сравнению с белком 4R. В некоторых вариантах реализации введение некоторых антисмысловых олигонуклеотидов обеспечивает отсрочку возникновения одного или более расстройств, связанных с Tau. В некоторых вариантах реализации введение некоторых антисмысловых олигонуклеотидов обеспечивает предупреждение или снижение судорого. В некоторых вариантах реализации введение некоторых антисмысловых олигонуклеотидов вызывает снижение количества белка 4R в ЦНС. В некоторых вариантах реализации введение некоторых антисмысловых олигонуклеотидов восстанавливает клеточный фенотип.

Неограничивающее описание и включение посредством ссылки

Несмотря на то, что некоторые соединения, композиции и способы, описанные в данном документе, были подробно описаны в соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, следующие примеры служат лишь для иллюстрации соединений, описанных в данном документе, и их не следует считать их ограничением. Каждая из ссылок, номера доступа GenBank и подобные ссылки, упоминаемые в настоящей заявке, включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

Несмотря на то, что перечень последовательностей, сопровождающий этот файл, указывает каждую последовательность либо как «РНК», либо как «ДНК», по необходимости, в действительности эти последовательности могут быть модифицированы любой комбинацией химических модификаций. Специалистам в данной области техники понятно, что такое обозначение как «РНК» или «ДНК» для описания модифицированных олигонуклеотидов, является в некоторых случаях произвольным. Например, олигонуклеотид, содержащий нуклеозид, содержащий 2'-ОН сахарный фрагмент и тиминовое основание, может быть описан как ДНК, имеющая модифицированный сахар (2'-ОН вместо природного 2'-Н в ДНК) или как РНК, имеющая модифицированное основание (тимин (метилированный урацил) вместо природного урацила в РНК).

Соответственно, последовательности нуклеиновых кислот, представленные в данном документе, включая, но не ограничиваясь ими, последовательности в перечне последовательностей, предназначены для охвата нуклеиновых кислот, содержащих любую комбинацию природных или модифицированных РНК и/или ДНК, включая, но не ограничиваясь ими, такие нуклеиновые кислоты, которые содержат модифицированные азотистые основания. В качестве дополнительного примера и без ограничения, олигомерное соединение, содержащее последовательность азотистых оснований «ATCGATCG», охватывает любые олигомерные соединения, имеющие такую последовательность азотистых оснований, модифицированных или немодифицированных, включая, но не ограничиваясь ими, такие соединения, которые содержат РНК основания, такие как те, которые имеют последовательность «AUCGAUCG», и те, которые имеют некоторые ДНК основания и некоторые РНК основания, такие как «AUCGATCG», а также олигомерные соединения, имеющие другие модифицированные или природные основания, такие как «AT^meCGAUCG», где ^meC означает цитозиновое основание, содержащее метальную группу в 5-положении.

Примеры

Неограничивающее описание и включение посредством ссылки

Несмотря на то, что некоторые соединения, композиции и способы, описанные в данном документе, были подробно описаны в соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, следующие примеры служат лишь для иллюстрации соединений, описанных в данном документе, и их не следует считать их ограничением. Каждая ссылка, цитируемая в настоящей заявке, включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

Пример 1: Влияние однородно 2'-МОЕ модифицированных олигонуклеотидов на 10 экзон человеческого Tau

Для нацеливания на 10 экзон человеческого Tau разработали серию модифицированных олигонуклеотидов и проверили их действие на уменьшение включения 10 экзона in vitro. Эти модифицированные олигонуклеотиды были созданы сдвигом 4 нуклеотидов вверх или вниз (т.е. микропереходом) по сайту-мишени. Они имеют 18 нуклеозидов в длину, причем каждый нуклеозид имеет 2'-МОЕ модификацию. Каждая межнуклеозидная связь в модифицированном олигонуклеотиде представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь (Р=S). Все цитозиновые остатки в модифицированных олигонуклеотидах представляют собой 5-метилцитозины.

«Сайт инициации» указывает самый 5' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. «Терминирующий сайт» указывает самый 3' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. Каждый модифицированный олигонуклеотид, перечисленный в представленных ниже таблицах, нацелен на SEQ ID NO: 1 (GENBANK, номер доступа NT_010783.15, усеченная по нуклеотидам с 9240000 по 9381000).

Клетки А172 трансфицировали при помощи Lipofectamine 2000® с концентрацией модифицированного олигонуклеотида 5 нМ. Спустя примерно 24 часа обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК транскриптов Tau, содержащих 10 экзон, при помощи количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор затравочных зондов человека 9_10 или 10_11. Уровни мРНК 10 экзона Tau скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены в процентах экспрессии мРНК 10 экзона Tau относительно уровней необработанного контрольного образца и выражены как «% UTC».

Набор затравочных зондов человека 9_10 (прямая последовательность CACTGAGAACCTGAAGCACC, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 2; обратная последовательность GGACTGGACGTTGCTAAGATC, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 3; последовательность зонда TTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCC, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 4).

Набор затравочных зондов человека 10_11 (прямая последовательность GGATAATATCAAACACGTCCCG, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 5; обратная последовательность TGCCTAATGAGCCACACTTG, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 6; последовательность зонда GTCTACAAACCAGTTGACCTGAGC, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 7).

Как показано в Таблицах 1 и 2, ISIS 549583, 549584, 549585, 549586, 549595, 549571, 549566, 549570, 549587, 549568, 549617, 549567, 549576, 549577, 549580 и 549581 демонстрируют 70% или более высокое снижение включение 10 экзона Tau человека, по сравнению с необработанным контрольным образцом.

Пример 2: Влияние однородно 2'-МОЕ модифицированных олигонуклеотидов на 10 экзон человеческого Tau

Для нацеливания на 10 экзон человеческого Tau разработали серию модифицированных олигонуклеотидов и проверили их действие на уменьшение включения 10 экзона in vitro. Эти модифицированные олигонуклеотиды были созданы сдвигом 1 нуклеотида вверх или вниз (т.е. микропереходом) по сайту-мишени. Они имеют 18 нуклеозидов в длину, причем каждый нуклеозид имеет 2'-МОЕ модификацию. Каждая межнуклеозидная связь в модифицированном олигонуклеотиде представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь (P=S). Все цитозиновые остатки в модифицированных олигонуклеотидах представляют собой 5-метилцитозины.

«Сайт инициации» указывает самый 5' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. «Терминирующий сайт» указывает самый 3' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. Каждый модифицированный олигонуклеотид, перечисленный в представленных ниже таблицах, нацелен на SEQ ID NO: 1 (GENBANK, номер доступа NT_010783.15, усеченная по нуклеотидам с 9240000 по 9381000).

Клетки А172 трансфицировали при помощи Lipofectamine 2000® с концентрацией модифицированного олигонуклеотида 5 нМ. Спустя примерно 24 часа обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК транскриптов Tau, содержащих 10 экзон, при помощи количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор затравочных зондов человеческого Tau 10_11 или 9_10 R5. Уровни мРНК 10 экзона Tau скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены в процентах экспрессии мРНК 10 экзона Tau относительно уровней необработанного контрольного образца и выражены как «% UTC».

Набор затравочных зондов человека 10_11 (прямая последовательность GGATAATATCAAACACGTCCCG, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 5; обратная последовательность TGCCTAATGAGCCACACTTG, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 6; последовательность зонда GTCTACAAACCAGTTGACCTGAGC, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 7).

Набор затравочных зондов человеческого Tau 9_10 R5 (прямая последовательность CACTGAGAACCTGAAGCACC, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 2; обратная последовательность GGACGTTGCTAAGATCCAGCT, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 3; последовательность зонда TTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCC, в данном документе обозначена как SEQ ID NO: 4).

Пример 3: Ингибирующий эффект однородно 2'-МОЕ модифицированных олигонуклеотидов на 10 экзон человеческого Tau

Выбрали несколько модифицированных олигонуклеотидов из Таблицы 3 и 4 и дополнительно оценили их влияние на ингибирование экспрессии 10 экзона человеческого Tau in vitro. Для сравнения в испытание включили ISIS 549595.

«Сайт инициации» указывает самый 5' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. «Терминирующий сайт» указывает самый 3' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. Каждый модифицированный олигонуклеотид, перечисленный в представленных ниже таблицах, нацелен на SEQ ID NO: 1 (GENBANK, номер доступа NT_010783.15, усеченная по нуклеотидам с 9240000 по 9381000).

Клетки А172 трансфицировали при помощи Lipofectamine 2000® с концентрацией модифицированного олигонуклеотида 0, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 или 30 нМ, как указано ниже в таблицах. Спустя примерно 24 часа обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК транскриптов Tau, содержащих 10 экзон, при помощи количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор затравочных зондов человеческого Tau 9_10 R5, за исключением ISIS 549581. Для этого олигонуклеотида использовали набор затравочных зондов человеческого Tau 10_11. Уровни мРНК 10 экзона человеческого Tau скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®.

Полумаксимальная ингибирующая концентрация (IC₅₀) каждого олигонуклеотида представлена ниже в таблице, ее рассчитали при помощи построения графика зависимости процентного ингибирования экспрессии мРНК 10 экзона человеческого Tau, ожидаемой для каждой концентрации, от концентрации олигонуклеотидов, отмечая концентрацию олигонуклеотида, при которой достигнуто 50% ингибирование экспрессии мРНК 10 экзона человеческого Tau, по сравнению с контрольным образцом. Результаты представлены ниже.

Пример 4: Ингибирующий эффект однородно 2'-МОЕ модифицированных олигонуклеотидов на 10 экзон человеческого Tau

Выбрали несколько модифицированных олигонуклеотидов из Таблицы 4 и дополнительно оценили их влияние на ингибирование экспрессии 10 экзона человеческого Tau in vitro. Для сравнения в испытание включили ISIS 549595.

«Сайт инициации» указывает самый 5' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. «Терминирующий сайт» указывает самый 3' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. Каждый модифицированный олигонуклеотид, перечисленный в представленных ниже таблицах, нацелен на SEQ ID NO: 1 (GENBANK, номер доступа NT_010783.15, усеченная по нуклеотидам с 9240000 по 9381000).

Клетки А172 трансфицировали при помощи Lipofectamine 2000® с концентрацией модифицированного олигонуклеотида 0, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 или 30 нМ, как указано ниже в таблицах. Спустя примерно 24 часа обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК транскриптов Tau, содержащих 10 экзон, при помощи количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор затравочных зондов человеческого Tau 9_10 R5. Уровни мРНК 10 экзона человеческого Tau скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®.

IC₅₀ каждого олигонуклеотида рассчитали так же, как показано в Примере 3, а результаты представлены ниже.

Пример 5: Ингибирующий эффект однородно 2'-МОЕ модифицированных олигонуклеотидов на 10 экзон человеческого Tau

Выбрали несколько модифицированных олигонуклеотидов из Таблицы 3 и 4 и дополнительно оценили их влияние на ингибирование экспрессии 10 экзона человеческого Tau in vitro. Для сравнения в испытание включили ISIS 549595.

«Сайт инициации» указывает самый 5' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. «Терминирующий сайт» указывает самый 3' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. Каждый модифицированный олигонуклеотид, перечисленный в представленных ниже таблицах, нацелен на SEQ ID NO: 1 (GENBANK, номер доступа NT_010783.15, усеченная по нуклеотидам с 9240000 по 9381000).

Клетки А172 трансфицировали при помощи Lipofectamine 2000® с концентрациями модифицированного олигонуклеотида 0, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 или 30 нМ, как указано ниже в таблицах. Спустя примерно 24 часа обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК транскриптов Tau, содержащих 10 экзон, при помощи количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор затравочных зондов человеческого Tau 10_11 R5, за исключением ISIS 549595. Для этого олигонуклеотида использовали набор затравочных зондов человеческого Tau 9_10 R5. Уровни мРНК 10 экзона человеческого Tau скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®.

IC₅₀ каждого олигонуклеотида рассчитали так же, как показано в Примере 3, а результаты представлены ниже.

Пример 6: Ингибирующий эффект однородно 2'-МОЕ модифицированных олигонуклеотидов на 10 экзон человеческого Tau

Выбрали несколько модифицированных олигонуклеотидов из Таблицы 1 и 4 и дополнительно оценили их влияние на ингибирование экспрессии 10 экзона человеческого Tau in vitro. Для сравнения в испытание включили ISIS 617782, 617781 и 415833.

«Сайт инициации» указывает самый 5' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. «Терминирующий сайт» указывает самый 3' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. Каждый модифицированный олигонуклеотид, перечисленный в представленных ниже таблицах, нацелен на SEQ ID NO: 1 (GENBANK, номер доступа NT_010783.15, усеченная по нуклеотидам с 9240000 по 9381000).

ISIS 617782 имеет 21 нуклеозид в дину, причем каждый нуклеозид имеет 2'-ОСН₃ модификацию и обозначен нижним индексом «m». Каждая межнуклеозидная связь в модифицированном олигонуклеотиде представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь (P=S).

ISIS 617781 имеет 18 нуклеозидов в дину, причем каждый нуклеозид имеет 2'-ОСНз модификацию и обозначен нижним индексом «m». Каждая межнуклеозидная связь в модифицированном олигонуклеотиде представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь (P=S).

ISIS 415833 имеет 20 нуклеозидов в длину, причем каждый нуклеозид имеет 2'-МОЕ модификацию. Каждая межнуклеозидная связь в модифицированном олигонуклеотиде представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь (P=S). Все цитозиновые остатки в модифицированных олигонуклеотидах представляют собой 5-метилцитозины. ''

Клетки А172 трансфицировали при помощи Lipofectamine 2000® с концентрацией модифицированного олигонуклеотида 0, 0,1, 0,3, 1, 3, 10 или 30 нМ, как указано ниже в таблицах. Спустя примерно 24 часа обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК транскриптов Tau, содержащих 10 экзон, при помощи количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор затравочных зондов человеческого Tau 9_10 R5, за исключением ISIS 617781 и 415883. Для этих двух олигонуклеотидов использовали набор затравочных зондов человеческого Tau 10_11. Уровни мРНК 10 экзона человеческого Tau скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®.

IC₅₀ каждого олигонуклеотида рассчитали так же, как показано в Примере 3, а результаты представлены ниже.

Пример 7: Модифицированные олигонуклеотиды, нацеленные на 10 экзон человеческого Tau

Разработали серию модифицированных олигонуклеотидов для нацеливания на 10 экзон человеческого Tau. «Сайт инициации» указывает самый 5' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. «Терминирующий сайт» указывает самый 3' нуклеозид, на который нацелен модифицированный олигонуклеотид. Каждый модифицированный олигонуклеотид, перечисленный в представленных ниже таблицах, нацелен на SEQ ID NO: 1 (GENBANK, номер доступа NT_010783.15, усеченная по нуклеотидам с 9240000 по 9381000).

В представленной ниже таблице «^mC» обозначает 5-метилцитозин, нижний индекс «е» обозначает 2'-O-метоксиэтил, нижний индекс «f» обозначает 2'-дезоксифтор, нижний индекс «d» обозначает 2'-дезокси, нижний индекс «р» обозначает пептидный мономер нуклеиновой кислоты, нижний индекс «s» обозначает тиофосфатную межнуклеозидную связь, нижний индекс «о» обозначает фосфодиэфирную межнуклеозидную связь, «Р-» обозначает O-линкер на 5'-конце (PNA Bio, Таузендз-Оукс, штат Калифорния), «-N» обозначает 3'-концевой карбоксамид.

Пример 8: In vivo анализ олигонуклеотидов, нацеленных на 10 экзон человеческого Tau

Крыс Спрага-Доули разделили на группы по 3 крысы для эксперимента, представленного в Таблице 11, и на группы по 2 или 4 крысы для эксперимента, представленного в Таблице 12. Каждой крысе в каждой группе крыс ввели одну 3 мг интратекальную (IT) дозу олигонуклеотида, выбранного из Таблицы 3, 4 или 9. Для каждой крысы в различные точки времени после инъекции от 3 часов до 8 недель оценивали движение 7 различных частей тела. 7 частей тела представляют собой (1) хвост крысы; (2) положение задней части тела крысы; (3) задние конечности крысы; (4) задние лапки крысы; (5) передние лапки крысы; (6) положение передней части тела крысы; и (7) голова крысы. Каждой из 7 различных частей тела крыс давали оценку от 0, если часть тела двигалась, или 1, если часть тела была парализована. После оценки каждой из 7 частей тела оценки суммировали для каждой крысы, а затем усредняли для каждой группы. Например, если у крысы двигался хвост, голова и другие оцениваемые части тела спустя 3 часа после 3 мг IT дозы, то она получает общую оценку 0. Если у другой крысы хвост не двигался спустя 3 часа после 3 мг IT дозы, а другие оцениваемые части тела двигались, то она получает оценку 1. Крысы, которым вводили солевой раствор, обычно получают оценку 0. Оценка на верхней границе диапазона дает основания предположить токсичность. Результаты в Таблицах 11 и 12 представлены как средняя оценка для каждой экспериментальной группы.

Пример 9: Ингибирующий эффект модифицированного олигонуклеотида, нацеленного на 10 экзон человеческого Tau, in vivo

Мыши B6.Cg-Mapttm1(EGFP)Klt Tg(MAPT)8cPdav/J (The Jackson Laboratory) экспрессируют изоформы 3R и 4R человеческого Tau. В этой мышиной модели оценили влияние олигонуклеотидов, выбранных из Таблицы 3, 4 или 8, на изменение изоформы 4R на изоформу 3R.

Группам по четыре мыши B6.Cg-Mapttm1(EGFP)Klt Tg(MAPT)8cPdav/J (возрастом 3-4 месяца) ввели 500 мкг олигонуклеотида путем интрацеребровентрикулярной (ICV) болюсной инъекции. Контрольной группе из четырех мышей точно так же ввели PBS. Спустя две недели после введения дозы животных умертвили и экстрагировали РНК из коры головного мозга, гиппокампа и/или спинного мозга. Экспрессию мРНК изоформы 4R общего Tau человека анализировали при помощи количественной ПЦР в реальном времени. Изоформу 4R анализировали при помощи набора затравочных зондов сочленения 9_10 hTau (прямая последовательность 5'-CACTGAGAACCTGAAGCACC-3', SEQ ID NO: 219; обратная последовательность 5'-GTTGCTAAGATCCAGCTTCTT-3', SEQ ID NO: 220; последовательность зонда 5'-TTAATTATCTGCACCTTCCCGCCTCC-3', SEQ ID NO: 221) или набор затравочных зондов сочленения 10_11 hTau (прямая последовательность 5'-AATATCAAACACGTCCCGGGAG-3', SEQ ID NO: 222; обратная последовательность 5'-TGCCTAATGAGCCACACTTG-3' SEQ ID NO: 223; последовательность зонда 5'-GTCTACAAACCAGTTGACCTGAGC-3', SEQ ID NO: 224). Общий Tau анализировали при помощи набора затравочных зондов RTS3104 (прямая последовательность 5'-AAGATTGGGTCCCTGGACAAT-3', SEQ ID NO: 225; обратная последовательность 5'-AGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATT-3', SEQ ID NO: 226; последовательность зонда 5'-CACCCACGTCCCTGGCGGA-3', SEQ ID NO: 227). Отношение уровней изоформы 4R к общим уровням мРНК Tau нормализовали к уровням мышиной глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH), которые анализировали при помощи набора затравочных зондов mGapdh_LTS00102 (прямая последовательность 5'-GGCAAATTCAACGGCACAGT-3', SEQ ID NO: 228; обратная последовательность 5'-GGGTCTCGCTCCTGGAAGAT-3', SEQ ID NO: 229; последовательность зонда 5'-AAGGCCGAGAATGGGAAGCTTGTCATC-3', SEQ ID NO: 230). Результаты представлены в Таблицах 13-15 как среднее отношение изоформы 4R к мРНК общего Tau, нормализованное к уровням GAPDH для каждой экспериментальной группы, деленное на среднее отношение для группы PBS. «Н.д.» означает отсутствие данных.

Оценили также воспаление, выполнив ПЦР в реальном времени для определения уровней экспрессии AIF1 в коре головного мозга, гиппокампе и/или спинном мозге. После нормализации всех образцов к GADPH среднее значение AIF1 для каждой экспериментальной группы разделили на среднее значение AIF1 для контрольной группы с PBS. Результаты представлены в Таблицах 13-15.

Пример 10: Влияние in vivo олигонуклеотидов со смешанным скелетом на перепрыгивание 10 экзона человеческого Tau

Группам по четыре мыши B6.Cg-Mapt1.m1 (EGFP)Klt Tg(MAPT)8cPdav/J (см. Пример 9) ввели 125 мг олигонуклеотида, выбранного из Таблицы 3, 4 или 9, или PBS, путем ICV болюсной инъекции. Спустя две недели после введения дозы животных умертвили и экстрагировали РНК из коры головного мозга и/или гиппокампа, и анализировали, как описано в Примере 9. Результаты представлены в Таблицах 16 и 17 как среднее соотношение изоформы 4R к мРНК общего Tau, нормализованное к PBS, для каждой группы.

Проверили экспрессию аллогенного воспалительного фактора (AIF1) как меру воспаления, выполнив ПЦР в реальном времени для определения уровней экспрессии AIF1 в коре головного мозга и спинном мозге. После нормализации всех образцов к GADPH среднее значение AIF1 для каждой экспериментальной группы разделили на среднее значение AIF 1 для контрольной группы с PBS. Результаты представлены в Таблицах 16 и 17.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Isis Pharmaceuticals, Inc.

<120> КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ МОДУЛИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ TAU

<130> BIOL0220WO

<150> 61/785177

<151> 2013-03-14

<150> 61/943931

<151> 2014-02-24

<160> 232

<170> PatentIn, версия 3.5

<210> 1

<211> 141001

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 1

aatttataaa ggaaaaaggt ttaattgact cacagttcag catgtctggg gaagtgttag 60

gaaacttaca atcatggcag aagagaaagc aaaccatcct ttctcacatg gtgacaggaa 120

gagcaaagcg gggtaagccc cttacaaaac caccagatct catgagaact cactatcacg 180

agaacaccat ggaggtaact gcccccatga ttcaattacc tcccaccagg tccctcccac 240

gacatgtggg gattatgcga actccaactc aagatgagat ttgggtgggg acacagccaa 300

accatatcag aagcttaacc ttctttggag catgattatt cagttgaacc taagttcagt 360

agtcacccag ttatgctgtc ttcagctact attttccata tgtttctcaa acatctgata 420

tatcacactg gctagtgcac tttcttccac cagcatacca tctcaattta ccactttaac 480

aattggactg ccactttgtg tcagggacta tctgtgctcc aactactaca agtgataagg 540

tcctcactga cagccaggga gcaagtgatc cagctctaaa actcacctta tcatctgctt 600

tcctagacca ctcctaacaa ccaactattc tgggttgagt tctccaagag gcagagagtt 660

caggatacag aatgttgttt tgtttttgtt gttgttgctg ttgttgtttg tgtgtgtgtt 720

tgggcttttt tgagacggag tctcactctg ttgcccaggt agaagtgcag tggcatgatc 780

tcagctccct gcaacctcca cctcctgggt ttaagtgatt cccctgcctc cacctcctga 840

gtagctggga ctacaagtgt gcgccaccac acccagctaa tttttgtgtt tttagtagaa 900

atggggtttt accatgttgg ctaggctgct cccaaactcc tgacctccag tgatccacct 960

acctctgcct cccaaagtgc tgggattaca ggcgtgagcc accacaccca gcccagaatg 1020

tttattagaa tgcacaatta ataccagagg cagtggggaa ggaaggactg agcagaggag 1080

gaagttgagt tgtgattcaa cccaacaact gcctggctgg catggggagc tctggagtta 1140

aatagggcca tcagactttc ccagtgtggg gccaacatga ctgggtcttt atacccccac 1200

ctctgtcagt cactcaacgt ggtctccctg caacaaggtg actcttgcag ccgagacaat 1260

ccctgaaggg acagagggct gaagcctgtc tgccaacagc actcccagtg gctggaacaa 1320

gtccttccct ataggggaat ctgggcggca cacctccatc tccatgtcca tcacatacga 1380

tatcacagac atttaaatat tttgataact gtacataaga gtttccttta taatcttata 1440

gatcttattt tatgcatttg aaaatattct tctgagacag ggcttttatc atattgccat 1500

agggtgccac gatataaaaa aggttaaata ctctctgatt cagaagtatc caatgatgac 1560

ttctctctca tgcatttaat tgaaaatctg gtttttctcc ttctctgcta gttctctacc 1620

tctctcccca cctcccacat catagcctat tcacatatgt ctgaatctca tgatagacaa 1680

gttcaggttc ttttcccagg ttctttttac cacatccccc cacccccaca taaaaagtat 1740

atatggcaca gcctaggttc cacccaaatc ctttctcctc ttcttcctgg gcccacaact 1800

ctcctacata cattggtata ccttgcgctt agggatggcc atgtgactaa gttctaacag 1860

tggaacatga tcagatgcca cttccagcct ctaagacagc cagtgtgttt cctccataag 1920

ctccttctct tcctcccaac tggagactct aaatgatgac cctgcctcaa gcaagcaaac 1980

aacaagtccc tcaggggtgg tgtaggctgc aaatggaagg agcttgagtc ccaaaccttc 2040

cacggagaag gctggctacc aacctggatc actcacccaa gactgctcga agagttggtt 2100

tgaaccattg tgttttgggg tctatttatt acaacagttt agcttgcttt gtgaatagat 2160

ttagtggcag agcctccaaa ttctatagat acattgatct cagtcctaac cgcatctgga 2220

acaccattaa ataaaggaat tgcaaaccca gagaaggtaa tgaatttgtc taaggtcata 2280

caagatggct aggatcagga cccaactctc cagttttctt tcttctctgc tattctgcct 2340

tctgtgatcc tacataagtg ggcatgattg tataacatat gcggccatga gatttctctt 2400

tcagcaagag aaagggacag gaagaaagag agggaatgca ttttcttggc ctgaattagt 2460

gtgagccatt agttacctac attgactaaa ttatctggaa tgaacattca actctacatc 2520

acatatagtt aaaatgacag atctgcttaa gattgtttct agcatacgtt atttcaattt 2580

aggcaaatgt gaccattcag tgtgagggga ccatactgtc attaggtccc tgtcagttct 2640

caattatact gttatcttag agggggaaaa atgtgaaatt tgaatgtaga cgagtgttga 2700

tttgactgct acagtttatt ttacgtatag aaataaaata atgtgtagca aaagcattat 2760

tacaaagatg ataatgaaat aactagtatt tataatagta taatagtata gtatttataa 2820

tagtatgata gtttaatgac tatttgtcag atgttgtgta agaaacttta tacacacaca 2880

cacacacacc tcatttaatt cctgtatcaa tcaggataca ggacgctgtg gtaacaactc 2940

ctcaaatctc ggtggcttgc acaacaaatg cttatttctt tttttttttt gacaccaagt 3000

cttgctctgt aacaggctgg agtgcaatgg tgcaatctcg gctcactgca gcctctgcct 3060

cctgggttca agcgattctc ctgcctcagt ctctcgagta gctgggaaca caggcacgcg 3120

ccaccacatc tggctaattt ttgtgatttt agtagagatg ggatttcacc atgttgctca 3180

ggctggcctt gaactcctga cctcaagcga tccacccacc tcagcctccc aaagtgctgg 3240

gattacaggc atgagccact gcgcccagcc ccaaatgttt atttcttgct catgtgacat 3300

gtacttcctc gagtttttcc ttcctgagat ctaagctgaa ggaacagctc tctggagcca 3360

cgccattctg gtggcggaaa ggaagagtaa aagtggtaga accttgcaat gctcttgaag 3420

cgcctatttg gaatgtctac atcatgtaaa tggtaatgga caagtatgta taatccccac 3480

accaaaaaaa ggggacacta ttggggacaa taaccacatt tcaatgctgc aagacggata 3540

ttgactgcac ccccttccca ctttcagaaa gaagaagagt aattttgctg aactccttct 3600

agagactgga aatgtccctt ccagttgggg tgattaggga aggctttggt aaaatttgag 3660

ctagagtttg aaggttaggt agactactgg tgggtgaaga aagaacaagg acctttgtag 3720

gcaaaggaaa acctcagaat tacagaggtg gaaaaagagt tctagtcaag ccacttcagc 3780

tggctacaga gtaggtggga aagaaaatgg gaggacaagg gctcagatga tggggggttg 3840

gggcattggg gggacacttg aaagctaaac taaggggttg aacttaattt aggaggcagt 3900

tagaagcttt tacatatttt tgagcaagag agtgacataa ttaaaatgat ctgggccagg 3960

tgtggtggct cacacctgta atcccagcac tttgggaggc tgaggagctt gggtcacctg 4020

aggtcaggag atcgagacca gcctggccaa catggtgaaa tcccgtccta ctaaaaatac 4080

aaaaattagc cgggagtggt ggcatatgcc tgtaatccca gtagctggga ggctgagaca 4140

ggaaaatcgc ttgaacccgg gaaacaggtt gcagtgagcc gagatcgtgc cactgcactc 4200

cagcctgggc aacagagcga gactccatct caaaaaaaca aaacaaacac acacaaaaaa 4260

ccaaaaataa ataaataaaa tgatcacttc tgaatactga tctaactagg ggttgcaggg 4320

tgggctgata tagggagaaa ctggagagca aggagatcac taaggtccct acatgtccag 4380

aaccaagata gaggtcttga actaggatgg tggcagttag aacaacaaca acaaaaagtc 4440

aattccaggc tgagtgcagt ggctcatgcc tgtaatccca acgctttggg aggctgaggt 4500

gggagttaga aagcagcctg ggcaacactg caagacctcc tctctaaaaa aaaaaaaaaa 4560

aaaaagttag ccaggtgtgg tggtgcccac ctgtagtccc agcaactcag aaggctgagg 4620

tgggaagatt gcttgagccc caggagttca agcttgccgt gagctacgat tgtgccactg 4680

cactccagcc tgagcaagac cttgtctcca aaaaaaggtc aattccactg acttttctaa 4740

ggtgtacacc atcaaggggc agctccatct ccaggccatt ggctcatgag acattctgta 4800

gtcagaaggc tagggcagat tgctttgagc aagcccccat ggtggttctc actcctactt 4860

ctttgggtat atgcccctct gtttaaaaat aaagttaata tgcatttaaa aaaaaaaagg 4920

agaaaaaggt cagttccaga aactgtgtga ataaagcatt ttacttgctt tttctattaa 4980

tctataacat atgttgattt tttaaaaaga atataagagc tatgcaaatt ggagcttcaa 5040

gacaacttcc catctcccta ggaggagatg gctgccctaa acccccctac atagaaatca 5100

tcccactgct tgggcttaaa cttgatgttg gggaaatgaa aaatccaagc taaggccgaa 5160

gcctggggcc tgggcgacca gcagaatgag gaccactggt cagtttcagg ctgaggtgcg 5220

tcttccaggg gacaatctct agctggccct taaacattca gacttcaagc tctatttaca 5280

gcataaaggt gtttcaaaag acgtgataca aataactgca aatgctctgc gatgtgttaa 5340

gcactgtttg aaattcgtct aatttaagat ttttttttct gacgtaacgg ttagattcac 5400

gtttcttttt ttttaagtac agttctactg tattgtaact gagttagctt gctttaagcc 5460

gatttgttaa ggaaaggatt caccttggtc agtaacaaaa aaggtgggaa aaaagcaagg 5520

agaaaggaag cagcctgggg gaaagagacc ttagccaggg gggcggtttc gggactacga 5580

agggtcgggg cggacggact cgagggccgg ccacgtggaa ggccgctcag gacttctgta 5640

ggagaggaca ccgccccagg ctgactgaaa gtaaagggca gcggacccag cggcggagcc 5700

actggccttg ccccgacccc gcatggcccg aaggaggaca cccacccccg caacgacaca 5760

aagactccaa ctacaggagg tggagaaagc gcgtgcgcca cggaacgcgc gtgcgcgctg 5820

cggtcagcgc cgcggcctga ggcgtagcgg gagggggacc gcgaaagggc agcgccgaga 5880

ggaacgagcc gggagacgcc ggacggccga gcggcagggc gctcgcgcgc gcccactagt 5940

ggccggagga gaaggctccc gcggaggccg cgctgcccgc cccctcccct ggggaggctc 6000

gcgttcccgc tgctcgcgcc tgcgccgccc gccggcctca ggaacgcgcc ctcttcgccg 6060

gcgcgcgccc tcgcagtcac cgccacccac cagctccggc accaacagca gcgccgctgc 6120

caccgcccac cttctgccgc cgccaccaca gccaccttct cctcctccgc tgtcctctcc 6180

cgtcctcgcc tctgtcgact atcaggtaag cgccgcggct ccgaaatctg cctcgccgtc 6240

cgcctctgtg cacccctgcg ccgccgcccc tcgccctccc tctccgcaga ctggggcttc 6300

gtgcgccggg catcggtcgg ggccaccgca gggcccctcc ctgcctcccc tgctcggggg 6360

ctggggccag ggcggcctgg aaagggacct gagcaaggga tgcacgcacg cgtgagtgcg 6420

cgcgtgtgtg tgtgctggag ggtcttcacc accagattcg cgcagacccc aggtggaggc 6480

tgtgccggca gggtggggcg cggcggcggt gacttggggg agggggctgc ccttcactct 6540

cgactgcagc cttttgccgc aatgggcgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 6600

tgtgtgtgtg gaggggtccg ataacgaccc ccgaaaccga atctgaaatc cgctgtccct 6660

gccgctgttc gccatcagct ctaagaaaga cgtggatcgg gttctagaaa agatgactcc 6720

ctgcacgccc ctccctgcac ctcccgagca gtgattccga cagggccttc actgcccctg 6780

attttaggcg ggggccggcc ccctcccctt ttcctccttc agaaacccgt aggggacatt 6840

tgggggctgg gagaaatcga ggagatgggg aggggtccac gcgctgtcac tttagttgcc 6900

cttccccctg cgcacgcctg gcacagagac gcgagcagcg ccgtgcctga gaacagtgcg 6960

cggatcccac tgtgcacgct cgcaaaggca gggttcacct ggcctggcga tgtggacgga 7020

ctcggcggcc gctggtcccc gttcgcgggc acgcacagcc gcagccacgc acggatgggc 7080

gcggggctgc aggtgcatct cggggcggat ttctttctca gcgctcggag cgcagggcgc 7140

ccggcgtgtg cgctccctgc cggaggcgcg gggctggcgc gcagggctcg cccctcactg 7200

cggcagtggg tgtggaccct ggtgggcgag gaagggggag gataggctgt gcctcctccc 7260

actcccgccc ccagcccccc tttttttccc cctcggaacg cgaggtgcca tcttttttcg 7320

gcgtgtcacg tctttacggt gccatgccaa accgggtggc cgggcttcat aggacagggc 7380

ggggcctggc attaaaggga gggggacaat cagcgctgaa atcttggcgt tttgctgctg 7440

cgggcgtgag cactgggggc gttcgcccag caccttcttc gggggctctt tgctttgtct 7500

gtagaggtta cgtgatctgc gctcccagcc ctggtttctg gcttttattc tgagggtgtt 7560

cagtcaacct cccccctacg cccatgcgcc tctctttcct ttttcgctcc tcatttccga 7620

gcccattgtt ggatctcgag gcttgctggg ttcgatgaac tcgagtcaac cccccgaccc 7680

ccggcacgca tggaacgggc gtgaccgcgc gcagcctcgt ctcggagtct gccggcgccg 7740

ggaagcttct gaagggatgg gattcgagtc tccgtgcgcg ctgcgggcgg cggcagaggg 7800

atctcgcccc tccctacacc ccaagtgtcc tgagggccac gccacaccag gttgcccagc 7860

gagggacgct ggctacccat ccggggatgg gtggggagcc ctggcggggc ctctccggct 7920

ttacgccctg ttgcttcgcc tggccggaga atgtgaggaa ggggcataag gttactggtg 7980

cttcggccac acccatcttt ctgagcccac tggactgggc gcagaggggg gattgccatg 8040

gaaaccacag gtgtccggag aggggatctt ggggctggcc tcaccccttc cctgcggaga 8100

ttggggaccc tggggtaggg ggagccgcgc ccagtcggcc tcctggagga cacgggagga 8160

agccccgaac ccccgcgcct gaggctgttt ctgattggcc cctggaggcc gcagacacgc 8220

agataggcgg ccctgggtgt atttttatta atattatgtc cgtactgatt aatattattt 8280

atcttaaata aatttcaccc gtgtccaagt tcaccgcgcc cccaaaaccg agtctggggc 8340

ggcaggggga actcctggcc aacgaatcca tgcctcgccc tcctgtgatg aacctggtac 8400

gcacggtttt ctggttaatt ctatcgctga aaactggtgc ggggggcgca cttctgagac 8460

ggaagagcat ctaggagctg aatcctccac gcgggtcgcc caggttgatc tgaatttctg 8520

gggaatggct tggctgcccg cccgggacca ggccgaccct ccttgacggt ggcgtagagg 8580

gctggagcct gggtactgcg aggctcctcg catggctggg cccgccgcga ggggttgcag 8640

agcggctcag ggatcgattc aagcatcgtc tctcctccct cgcccccaga cagagctggg 8700

cgcggggttc cccttccaga tggagcgagg gtctcggggt ggccccggaa aaggggagcc 8760

cgcggccacg gctacgtatt gccatctcgc gagcagagat gtcacctcct gcctttggag 8820

gaaagggagc ccggtgggga tgagcgcatt tagcccaatg ctgggaacaa agcgcactcc 8880

gcgcttctgc gatttcgctc cattttgaaa tgtgttggcg ctttggtggg gccgctgcgg 8940

tgggcaaggc cgggggcgct gttaatggag gaacctcagg gggacggtcc ttcgtaggaa 9000

actctatcct ggctctgcgc gcgctttaag gaaatggctt ccctccagga cctcgaggga 9060

tgcagctttt gcgcggatga cggtggggtg ctgaaccagc cggtgcgcct ctggaaatgt 9120

ctgggcacgg atcctggggc catcgacgac tcctccccat tcccagcagg cgggagctct 9180

tacattccga gcgagtgacc cctctcaccc tctggcgctc acacacctgt aactccaaac 9240

ctccgtctca gaatggtcca ggctggaagg gatgatgggg gctccgacag cgactgccta 9300

gctcacccct ctgcgtgctc aggctccagg ctcagcagga ccaatttgag ttctatctga 9360

tccccctcgg ccccttaact gacccatcct acaggagaca gggaaatgtc tttcctaccg 9420

cggttgattc tggggtgtca ttttgtgttt tgtgatggct gcttatattt actgtataag 9480

cattgtattt actgtataag cattgtatta taattactgt ataagctgct tatatttact 9540

gtataagcat ctccaaatcc tccctctacg taaacaaatt aatggataaa cagataagtg 9600

tatcccctgc ccccacccct gctacgcagg tccggagtga ctcttgaagc tcatacattc 9660

cttggccaag tttgcttctc taacagatgt ttatatagca ataacctggc ttggctcttg 9720

ggttcacctt tggacgattt ggggaagggg cttgttggct ttgctgggtt ttggatgagt 9780

gacagtccat gactgttcct gctggaaggg cgtgactttt aagtggtttc taatatcagg 9840

cattgctcct ccgacaggaa caaaagaaat ggatactgcc cataaattgt tagaaaactt 9900

agaatcgctt tgattgagga aaggttagat ttattccggt tggaaaaagt ggcctttcta 9960

ttaaacgtgc cctttgaccc tcatgccctt ggaggtcggt gccagcctgg agatgggata 10020

agattgtggt tttccttctg cctttttaac atctgttgtt acagtccatt tgttgaaaat 10080

ttaaagaaac tgttttattc cactttccct cagcatttat gtgtgtggtt tcagtagctc 10140

tgtggctata tgtacgaaca cgtgttattt ttccaattgg acatgtgata attttccaac 10200

tggaccttgc cttctattga tgtatttatt tagcatcttc cttactccct ccttgaaaaa 10260

gaatcactca aaaacaaata aaaacagccg taggggccta atacagtgct agacatacaa 10320

gaggtattcg gtccatacca aatggatttt atccatgaag gataaatggg gaaatacagt 10380

gggaagcagg tgggaaactg cgtttgactc tgctctttcc tccaccacca ctttcctcat 10440

caccgtgttc agagaccccc aaagccccct cacactccca gaaacacccc cctggccact 10500

cctaacttgc catgcccagg agttaggtgc ttccactagt gacatggagc tggcgtttgg 10560

ggggcacctc agcaggtgac gggaagagaa gaccccagcc tcaccagctg ggctgcagca 10620

gggagaggag tcctcatgtt ccagcaggga ctctcagctg ttttcctgta aaaccatggt 10680

tctcaactgg gggccactga gatgtctaga gagatgtttt tgttttcaca actcggggag 10740

ggtgctactg acatcttgtg ggtagaggcc aggaatgctg ttaaacatcc tacaaggaag 10800

gcacaggaca gtctcctaca tcaaaatatg acccagtccc aatgtcacca ctgctggggt 10860

tgacactggc actgctatct taattacatt cattgagtgt cttttaggag gccctattct 10920

aagtgcttgc taagattatc tcatttaatc ctcacaacac ttccgctatg tagcaggtgc 10980

tgttattatc tccgtgatgg ggaaactgaa gcacagagag ggttagtaac ttgctaaagg 11040

tcacagagcc agtgggtggt ggagctggtt gcctgacact agttccctcc cctctcagcc 11100

acatgtgggt ttacttggcc attgtggact agtctgggaa cccagatatg atctataaca 11160

ttgacccagt agaatattga ttccaaaacc actgtctcac aaatgaattt ttacaagagt 11220

ctgtaatcgg agcatgaccc agaataaggt tagggagatg tggagttaaa gctctcaatt 11280

tcttatctgg ccccgacaca gagagcaagg catttcactc tacattggtg ctctgtttat 11340

aaaacaaaga gcaaatatct cttcctaagg tccttaaacc tcttccccca atccagggtt 11400

tctggactgc tctgccatat gacggggcag ctggtttgat tgacccaggg aaggctggaa 11460

atcaagactg ggggatcaag acgtagattc agtgtggcca aggtcaagtc tctgaggttt 11520

agggacatca gatccccagc ttaggttctg tacctcggca aggtgaaagc gttggcgccc 11580

actgatgagg cctgctctga gattgtgggt gtgggttgag ttgggtgggc ataggcaagt 11640

cctcttgtaa gaatcttttg gcaaagatgg gcctgggagg cttttctcac ttcctggggc 11700

ccaggctttg caataagtat tccattatac tgtggtacct tggggctacc tgagaatcct 11760

ctgtctcgcc cctgttgcct tgccaaagag tttgctgtcc aagaattcct ttcctgtctc 11820

caggtgccat gctcctgcca cctctgccag gttccctgcc tgcccagatg gctcccaact 11880

gagtgtgagg aggaatttga gacaggtttt gagctttctg ggttctccag ttaggaaact 11940

ttctgtaagc atgcagatag aatgggcttc agcaaaatac aaactcgaac aacttccatg 12000

tatagtccct taattttctt tgcttttttc atatttcatc aggctccatg ctgagcccaa 12060

tcagggaccc gatagaaatc caaacaccat gtcagcgagt ccccaagaaa tgcattttgt 12120

gccaaggcta ttcaaggaag gtttgggagc agctcaaggg cagacactgt taccctcccc 12180

caggtcccca gtgcagggca gtgttctgca tgtggaggca gtttggccta atggttaagg 12240

aggtaggctc tgatcgggcc tcctgggcac aaatcccagc tccctgctca ctgtgagacc 12300

taagccatat tgtttagctg cttggagagt tttttgtcat ccacaacttg gagtatgatg 12360

gtacctgtct cacgggttgc catggggttc acacaagcta acccggtact cactagggcc 12420

aagcacatag taactgctca gtaaatggca tcatcggcgg tgtcctgtgg atgagtgctt 12480

gtgattggct gaatgaccag aggggtctaa agatcctggt gatggaatca gttgtacaga 12540

taaattgtta cactgagtag ggatcaagat aggaaaagtc ggcaactacc cagctcccct 12600

gcaccaaact gggcagaagt ggatcctctg aaaattgcac acacccatgt ttaaatgtac 12660

acacagaact cttgccacag gcaagcggag atttgtcatc tgctgtccct gcctcatctt 12720

cttcctgaaa tccactccat gccaggaata aactgcatgc tctccaccag cccaaactga 12780

cctgccttcc cgccagccat cccgggcagg gtgacctggc ttagtacatc gggttcagag 12840

atctttccag tttactcgtt gaataaaaag tgagggctga tcgagaaagt aatggcagtc 12900

agggaaggcg aaggaggtaa agaagagatt ttacaaatga agtaattcaa cagagtgctg 12960

acattggtaa actggcaaac agatttcagg gtggttggtt gagagtagag tagaaaagga 13020

ttaaataaag caaacttgtg gtgtactgaa tcttaggaat tccatgtatc caataagtat 13080

agtcatttat gaattaataa attcggccta agaagccttc ttatcgctta aatcaagact 13140

aagtaacaat atatcagttt taaaaagtca ttatatcaga aaatcattta aatgatacac 13200

atagatttcc aagattttac tttaaccgaa actatataaa tgtgaatttg ttcacccatc 13260

ttttgacaca gggctcaggt cttctcttgg tgtctggatc agccagttga aatttcttgt 13320

ctgttttgcc tatgccacat taataatgca ctgtctgggt cctccgattt cagtttggat 13380

tttgggttta cattgtggag tcatctgaat gcagaatcct tcagggattt tacttttttt 13440

tttttttttc atggtcttta ccatcccatt tgatagtaaa tattactcac ctttatgaag 13500

tctttccaaa acattcaact aaattttctt aaaatcattg aatgatttga agagcttatt 13560

cctcagcact tttactccat cagcttgcac cttatttttt aatctttttt tgagacggag 13620

tctcgctcta tcgcccaggc ttaagtgcaa tggcgcgatc ttggctcact gcgacctcca 13680

cctcctgggt tcaagcaatt ccgcctcagc ctccgccgta gccgggacta caggtacaca 13740

ccataatgct cggctgattt ttgtattttt gtagggatgg ggtatcgcca tgttggccag 13800

gctggtcccg aacttctgac ccaagtgatc cacccacctc ggcctcccaa agtgctggga 13860

ttacaggtgt gagccaccgc gcccggccag cttgcacctt atttaggata tgtgattatt 13920

atagcaagtc tggtgtacat acaagatttt gaatgggcac agatgacctt tagtaagtgc 13980

ttggctgtga taagaggcag tcctgactgc agatcaggct gtgtggaccc cagccttgca 14040

tgtttacaga ccttcatgtc ttattcttac agggtatcag aagaacacct actggggaaa 14100

cttataaatt agtaaaaggt gggcattctc cccgcccatc ttctgtctgt ctgccaggac 14160

tagcacagca ctttgaagtc attcacatag aatcccaact taagagggta aaatcctcct 14220

caacagactg aaaataagtt taaattccct ttgctatatt aactcccctg aggaaagagt 14280

cttagatcaa tgtccaacac taaaaacagt tttaaatcag caagtgagaa ttaaatctga 14340

agcaattgat aataatgttt cattcattcc tctcctttgg ccccgtccac cctactgcta 14400

aatccaggca tcaaagagaa gagggacata attatctcta gtcccagctg ctggttttcc 14460

ttccagccta tggcccagtt ttctgtttta ctgagaaggc tggtgatgtt atcttgggat 14520

ctaagtctgc agtttcacca caaaaagtcc agggatgcac tttcatgctt gtgtcctcct 14580

ccctgggata gcaaggatat tagaagaccc ctggctctgt aattgcttgt catgtgctct 14640

acagacgcca cagaatgcca agaacgaagt gctgggaagg acaaattcat ggaaccgtgg 14700

gacggtgctc ctcccccagc gtaaaggaca gctcctcctc ctgaattgga gccagcgttc 14760

taaatcatgt gtcaacagag ttgtcctgga tcggatccag ttctgccatt gatttgcagg 14820

tcatttcagt ggtacctgtt tccagttgtt cttaattgaa cagtggcacc aaactattgt 14880

cttgcctcat ccccctccca tggcctgtcc cccaaaaaga gacttcttgg gtaattaatc 14940

agggcaacat caggcagtct gggcgcggtg gctcacgcct gtaatcccag cactttggga 15000

ggccgaggcg ggcagatcat gaggttagga gattgagacc atcctggctt tgtgaaaccc 15060

cgtctctact aaaaatacaa aaaattagcc gggcgtggtg gcgggcgcct gtagtcccag 15120

ctactcgaga ggctgaggca ggggaatggc gtgaacccgg gaggtggagg ttgcagtgag 15180

ccgagatcgc accactgcac tctagcctgg gcgacagagc tagacttctt ctcaaaaaaa 15240

aaaaaaaaaa ggaatctctt tggttttata tatatttttt ttatatatat aatatatatt 15300

aaaatataat atatatattt atataatata atatataaat atattatata ttatatattt 15360

tatatattat atattatata tattatatat tatatattta tatatttata tattatatat 15420

atttatatat tatatattta tatatattat atatttatat ataatatata ttatatatta 15480

tatattatat attatatatt atatatttat atatattata tattatatat attatatatt 15540

atatatttat atattatata tttatatata ttatatatta tatattatat atttatatat 15600

tatatattta tatattatat atatttatat atattatata ttatatatta tatatgtata 15660

tattatatat gttatatatt atatatattt atatatataa tatattgtat atattatata 15720

tctaatatat tatatatatt atatatatta tatattataa tatatattat atattatata 15780

ttatatatat ttttatatat ataatatgta taatatataa tatatataaa aacatatata 15840

atatatatta tatattatat atatattata tatattatat atattaaata tattttatat 15900

atattatata tatatacaca tatatatata taaatgaggc caggctcggt ggctcacact 15960

tgtaatccca gcactgtggg aggatcactt gaagccagga gtctgagact agcctgggca 16020

acaaaacaag atcctgtctc tacaaaagga aactgtaaaa attagctggg catgatggca 16080

tgtgtctgta gccctagcta cttgggaggc cgaagcagga ggatcgcttg agcccaggag 16140

ttcaaggcta cagtgagcta tgattgtccc atagcactcc agcctgggta acacagcaag 16200

gccctgtctc taaacttttt ttttttaatt ctatttatat ttacatgtat ttaaatgtga 16260

atattcacta cctatttgtt gcatgcctgc attttttata ctgggcttgc caaaaacccg 16320

aacagctttc tactttgaca atgtatcaga atttaaatca gcaatatgtt aataagccaa 16380

gcaaaggtta tatatgcaaa taaaactgtt gtctataacc tcctgttaca ctggggcaca 16440

gcaaaagtca tggtgtagtc gcatgtgaac ctgtcccttt catagctgct cattgccagg 16500

aaacatcagg aatagccatt tggaagagtc atcagccctc ccaccatccg ttttctgtct 16560

tgtcttttcc ctatgagcag gggaaattcc acgctggccc caatccccag tgcagcggct 16620

cagcctctgc ctctgctgct ggtccccatg aggccagctt agaaacggag gattttgcag 16680

aacatcccta aatccgcttg aataatgaag tgatcattca taaactcacc tgaaccttat 16740

taaaacctat ttaatatttt tcctggataa tcctataggg ataacttgcc tcctgggctt 16800

ctctccaccg ggttcagttc ttcctttagt ggtgaagttc ctcccttctt agcatctcaa 16860

ctgtgcctga gaaaaggcca gtggcggctg cactctgttc cctgtggagt gttaataaag 16920

actgaataaa ttgaaataaa tccctttcaa tgtcattaag tgctataaat aatcatgaac 16980

caatgttcga tggctgatga gaaatgcaag aaaaaatttt taatcagtag gattcataag 17040

ttgacaatct gggccaagtt aaaaaaaata aaaataaaaa gacttttaaa aagatcttat 17100

cgtttgttac cagtaagact gaattccaga agcaagctac tccctcattt gtgggcccct 17160

gttatcactg gctgcttagg gttgccaagc cctgaattca tttgtcaact aagagatttt 17220

tggccaagat taagatttcc catgcctcca tatttccatc tgagaaatgg agattatact 17280

gtcttccccc tcagaatgga tgataatgtg gtctctcttc tgttcgcata gtcatagaac 17340

tgaaataaaa caacttaaga gaattccttt gagcttctca gaagtgctgc agggctgggg 17400

gatgcctccc aggagccgca gtcaggtgct gatctgaagt ctttggtggg ctgactttag 17460

cctgacctga aatagtatag ctgctgccac ctggctccct tagcgtcagt cagacggtgc 17520

agctggttcc taggggtgag ggctgagcca gcagggtccg tgcccaggag ggatgcatgg 17580

gtggccacag cccagcctgc actgatcttg tctgtcccct tctttggaag gaaggagccc 17640

caaaccaggg tgcaagacag tgggtggggg tgccttgagc atgacctcaa gtgatttcca 17700

gcccctgcca gtgctgactt ctctggggaa gggctgggac ttccttctgg gctcaagtca 17760

cgacccttgg atggaatttc ctgggagctt ttctgttttt tctggagttt tcagtttttt 17820

cctaaccaga cagggacttg gtacagaatc tcatattcta attatgccta ggagcagcct 17880

ctccccacca ctcacagtgt ttagcatgtg acaggaatcg attaaggcat gagtgattaa 17940

attaaagcca ggcattgact tggatggtgt aatattctga catctgtttg gtgtcaaagg 18000

cacggggcag gcgcgttaat tgaactgctt gcacctggca tttgaattga gccagagcgg 18060

ggctaaagtc agtttgcctt caccctgtaa atggagggtt tctccggagc gtggatggtg 18120

ggaggtattt cagggtgtat gcataacccc caccctgaca atggcccatc tcttctccag 18180

cgtggccagg tttgagtgcc agtcctgggt gtccagtggc cccatagcct tgcgttttag 18240

taaaatgctg cccccattac cacctggtct gtgcacttcg gtcactggaa tttgccatct 18300

tccagtcccg aatgtggcaa gccatggagc cttaagctct tctccctcca catcctggaa 18360

cagacccgcc agtttcttcc aggcattgcc tcagtttgcc cctctgtttc cagtcacact 18420

ctcaccagcg ataaaatgat tttagacctt atcatctcac cctcggatcc ttatggaaac 18480

aataatgagt tgttccctgt ttcaattcca aaattcatat ccaatccgtt ttgcatgcca 18540

ttgccaaatt cctcccagag caaccccgtc acctgccctg gccctctcca agtgtggtcc 18600

tgccatgggc atcgcctgct aagccaagct ggcctcgagc tgcctgcccg ggtccccaca 18660

ccttggctca cctccctgcc cagtcccgcc tcctgccagc ctgccctgtg gctccttcat 18720

agatgccgtg ctctttctgc cccttgctca cccatggcag ccttgcccct ctctccctgc 18780

cccaccccct atttaaattg acctgacctt cctcagtgtc catcttcccc gaagctttcc 18840

ccagccttgg cactcaaggt ccagaggcta cgcgtttcct ctcacctgtg gcagcgccgt 18900

gctccccagt gcctcacagt ttccttcttg cccccgcttc ctgtgtagga ctcatctgcc 18960

cacaggttgc acgtcctgtg agggcaagga ctgtgtctta tgtgactttc cttctccagt 19020

cacagagctg ggcacataga tagctcaaaa ccctctttat taacacagtt ggatgttgag 19080

aaatcaaaca ggccaatgtc aaatgagctc tccttattta aatcaagtca gttctccacc 19140

tcctagcact cagttccagt actctatata catggaaata ataaaaaaca catttccttt 19200

gaaacattct ataatcgttc ctttgcccta cttcagacca acttaacgca ctccccattg 19260

gtccaaatga gttttgctat acgaagatgc tgataataat agcagcagtg gattattctg 19320

ctaaaaccat tgcctcgtta atcctcagtc ccgaggtggg gattattatc ctcattttgc 19380

agagaagcaa actgagactc agagatttca cagctgggga gggagccagc tcatccctct 19440

gtccaggccc aagctctctc ccgcttgcct tcctgcctct gcaacctcag agcatccccc 19500

atctggttct actgcctgtg ctagtcgtgc aggagccaaa agacacgtct ttagtgctaa 19560

ggactggaga agccatgccc tccagcctct gtgaatgggt catatgtaac atgagcctgg 19620

agaaattatt tgaaaccaaa ggcaagcctc taaaccaggc tgctgcttca tggcgccggt 19680

gacggcagaa ccaaatttag tgctgtgggc aggtccacac ttatcaaata gagaagctca 19740

tttttcttcc ggctcacatc aagcatgaaa aatgttcaca catacccccc acacacacat 19800

gctttccgga ggggtccatg tggctagagg ctggaagatg tggatgagag gagcctggca 19860

ggtaagccca gggaagatga cattcagctt cccagacagc atctacaggg agaaatttaa 19920

ttaaaagtgg ggcggtttcc ctgagcaagg cagacaaagt cagccctcta ctgttaagaa 19980

aaagggtcac agtgagaggg gaggtgagga gactgagtct gtattttcta gtctgttggg 20040

ctacactacc tgatccccct tcctcaaaaa tccactttac tttccccatg tctacaccaa 20100

tgtggttcac actctgggac caggaaaagg gggagtgatg gggaacagag aagggaggag 20160

ctcacacagc tgaggctggg gttatgcata tcgaattact tagaatttgc aacctcacag 20220

ggtactttca tggcgttgaa atacacttcc cacagccacc ctccctctaa ctaaaagcaa 20280

gagtcatttc tcagttctgg tcttgcctcc cacgttctcc tccacattta agaaaatcca 20340

ccagctacaa agtgaagata ccatatgtga tatcccaccc tagtttctgt tttatcaggg 20400

tttggagcag gtggagcagg cagagggatc atttcagcct ataaattgta ttaagggtga 20460

gtactgagtc attcttcaag aaaagtttta gaagcatcca aaactgaagg gtggagccac 20520

ctggagacag tatcatcagt cctggccccg agcatggcct gcataggccc ccatggatcc 20580

cagcgggagc tgcagagtgc gggcaccttg gcacacagcc ctgagtgcaa aattaggagc 20640

tgggcagagg gcatctctct gtcgccattg ggcagcccag ggcacactgg tcatagcctt 20700

agaccacgaa caccctgtgc ccgggggaca gatgcaacca gtgtgccctg ggctgcccaa 20760

tggcaacaga gagatcgaca cctggacccc atgtcacggg gactccacta ctaaggctcc 20820

taagactgcc accttccagt gggataagcc ctgcctccta ctgggcccac aatgtgcaga 20880

gaacacttgg gactacctgg ctttctggat acacaaatat tgatccaatc tggactaatt 20940

agaaggtcag tcccaataac aaatcgaagt cagctgggcg tgatggctca ctcctataat 21000

cccagcactt tgggaggctg aggtgggcag atcatttgaa gccagaagtt caagaccagc 21060

ctgggcaaca tagcaaaacc ctgtctctac taaaaataca aataattagg ctgggtgtgg 21120

tggctcatgc ctgtaatccc aacagtttgg gaggctgagg caggtggtca cctgaggtca 21180

ggagtttgag accagcctgg ccaacagggt gaaaccccgt gtctactaaa aacataaaaa 21240

ttagccaagc atgatggcat gtgcctataa tcctggctac tagggaggct gagacaggag 21300

agaatcgctt gaatccagga ggtggttgca gtgagctgag atggtgccac tgcactccag 21360

cctggttgac agagcaagac tctgtctcaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aagccatgcc 21420

tggtggagca ctacgtgtaa tctcagctat ttgggaggct gaggcacgag aatcacttga 21480

acctgggagg cagtggttgc agtgagctga gatcgcgcca ctgcactcca gcctgggcga 21540

cagagtgagt gagactccat ttcaaaaaaa taataaatct gagtcacttt aatattgtta 21600

tttggatgtc aacctctagg tgtttgagac aggagagtga tatgggggca ctggaaacac 21660

acaggcacgg ggtgtcctca cacttgggta gcccacacga tgtgatttca gggtgctggg 21720

aggtcccccc actccccaaa ttactaacaa gtggatagta ctttacagtt tatatgatct 21780

catttgattc ttaacatgag cctgtgagtg aaaaattcct tcccctcttc tacagattag 21840

gacgttgaga ttcagggagg ttcagaggga ttcagggaag tcaagtggca cctggagtcc 21900

cgtggctaat ttgaggccgg taggggattc gaacccagga tttgtgcttc ttatgcctgg 21960

gcttctgctc cctggggcat ggtcttcccc ctagctttcc cattcactgc tttagcctag 22020

gggtcctacc ctttattaaa ctgccagtgc ctcactgctt ttctccccca aagacaaaaa 22080

aaaagtgttt ttgcttttgt tttgtttttc atgggcagag acctggaatt tcagcttgag 22140

aatttgtgcc atatgataaa taaatcaaca gatggctttt tccttaaaaa aaaaaaaaaa 22200

aaaaactaag atgtatttgc agtgaggcat aatttgtacc aaaaagtgct caccacactg 22260

tagtcatggg ggcaggaggc agccgcgggt gaagggagaa atcttggagt ccaggcagcc 22320

cccttctggg ctgaactggg gagctggggg tgctgccagc cctgccaggt tctcctagga 22380

ggcggcagct catatggctg tgggaggagg cagagggagc ctcatatgca cccacatttc 22440

cagggatcta gaagacagaa ggaggaaaac caccatcatg ttaaagcaga cagttaggta 22500

acacatcctg taatacaagt tattttttcc acatctaaag gctaaaaata gttgttagaa 22560

tttaaagata attggtaaat gagtttctat ccttctagtt tcacatcaaa tggaatcatg 22620

ctgccttcac atcactagtg cccgttattt gtgtttaatt tccacaatgt tgtctaattc 22680

cactctttgg gcttccccag ggatccagcc tccctcactc gcccatcgca gggagatgct 22740

ttattcatct ttgtgtcttc tgtgccgggc atagcgcatg gcacagaata agcactcagt 22800

aattgattca cgagtgaata aatggatgag tgggtgagtt caatattgac tacaaaaacc 22860

ctaaggccac actggtgagt ggctgcgcct gtagtcccag ctgctgggga atctgaggca 22920

ggaggatctc ttgagcccag gagtttgaaa ctagcctggg cgatatagcg agaacctgtc 22980

tcaaatgaca aaaacagggc caggtgcagt ggctcacgcc tggaatccca gcactttagg 23040

aggccaagat gggaggatca cttgaggcca ggagtccgag accagcctgg gcaacatagg 23100

gagaccctgt ctctacaaaa aattttttaa aaattagctg ggcatggcgg tgtgcgcttg 23160

tagtcccagc tactcaggag gctgaggcag gaggatcact tgagcccagg aaattgaggc 23220

tgcagcgagc catgatggca ccactgcact gcagcctggg cgtcagaacg agacctgctc 23280

tcaaaaaaac aaacaaacaa caaaaaaaaa ggctttctta aagagacttg agaacagaaa 23340

ggggaacaga tacataactt atatatttat ttgttcatct ttccaccttc ctggagggtg 23400

gaggggaaca ggtctgtatt tggagttttg aatgctaaaa gtgggaatac atgtactgtt 23460

tgccatgatc tgttcaaaag ttaagccaaa tgccttagat tctcctgaaa actggaatgc 23520

cactgtaaac tataagcccc acttcaaaga taaaagatct tgatgaacag ggctgggtct 23580

gtggactggg cctctcccca ccacacaagg aagggtggtg ccagttgaag gaaaatcact 23640

taaatccttg ctgtctccta ataaggtgtg gtcccaggta gggctgtcag aattagcaaa 23700

ttaaaacaca gggcatctgt gaaaattaga atttcagata acaacaaata attggcatag 23760

gctgcataat gtccctcaaa gatatcaggt cctaatctcc agaacctgta aatgtgatct 23820

tatttggaaa aggggtcttt gtagatgtgg ttaaattaag gattttgaga tggggggatt 23880

atcctgtatt atctaggtag gtcctaaatg cagtcacact catccttgta agaggaagga 23940

agagagagat ggaaaacaca gaagagaaga caatgtggtg atggaggcag agattggagt 24000

gaggtggcca caagccaagg actgctggca gctaccagca gccagaaaag tccaggaacc 24060

aattctctct tggagctcca gagggagtgt ggccctgctg acaccttagc ttcaacctag 24120

tgatcctgat tttggacttt ggccttcaga agtgtgaggg aatgaatatc tgttgtttta 24180

agccaccaag tttatggtca tttcctacag cagccacagg aatcaaaaac agtaagtatg 24240

tcccatgcaa tgtttgtgac acacaccaaa aatattactt gttgttcacc tgaaattcaa 24300

atttaactgg gtctcctgta ttttatttgg ccaacctagt tcccaggccc aaagaaagag 24360

gcttttgaaa tttgcaagaa agctggttgg agctgtcaga aagtggactt tgtaaacaca 24420

gtaccaccga accaatttga actgtactac ctctagacaa aagagagggc agtcagacag 24480

ttgttcgtga tttcttcttt caacagtcat ttgagcactt actacaaaac agaagctatg 24540

tgtaagggtg gaggcgttag ctgttaatca ggacctccag gctaagtttc tgtattagtc 24600

cgttttcacg ctgctgataa agacataccc gagactgggg aatttacaaa agaaagaggt 24660

ttaattggac ttacagttcc aagtggctgg ggaagcctca caatcatggc agaaggcaag 24720

gaggagcaag ccacatctta catggatggc agcagacaga cagggagaga gagcttgtgc 24780

aggggaactc ctctttttaa aaccatcaga tctcgttaga cttattcact atcaagagaa 24840

cagcacagaa aagacctgcc cccatgattc agttacttcc caccagatcc ctcccacaac 24900

atgtgggaat tcaagatgag atttgttacc atatcagtta ccaacccttc cagataaatc 24960

acgtgaaata tcgccattaa cagagtgagc tcaggtggtt cttcagtgca tttctgatac 25020

ctgaaccttc cctgggaatt tcacagacca tcaggctctc caccctttga tagcaggata 25080

gcagggccca ggttctgcag gaggagatgt taccacaggc ctgaaaggga gggaggggca 25140

gatgctacag gaagatgctg gctctggatt cgctggagga gctttcaagg gaagtagata 25200

cacactgtct ccatcatttc atgtccatca cactctaaaa tgctttggac aagaagcaaa 25260

tgttaaagac aaatgtggcc cattttcctg tacaaagagg gctgctccca tgccaggcta 25320

ttggcactgg tgggcatgag gcttctctgc tgccctggcc ggggggttct ctcactcacc 25380

attggctctc tgacacctgg agagaccacc acccttgggc tttcatgatg ctcacagaat 25440

ccacactgtt ggagctttaa ggagcctgga tcaactggaa caggcaggga gtactaggac 25500

agcccagcat tgccccaaaa tatccaggcc tgataaaaga gaaaaacagg tagctcacag 25560

gaaaaggata aaaaaaggag gagggattta acatgaaaag gtgcttgatc tccctcataa 25620

taaaaagact gctgattcca tccaggcaag tgacagaaaa aaaaaaatta atttaaaaag 25680

actgctgata aaaccacagc gagacactgc tgctcaggga tctgagggtg tgggcagcca 25740

ggctgccacg catcatgggt cggagaggaa gaccacaccc ctggagcaga gggcggctga 25800

tctgtcagat gccctttgac agcacctcag cttccaagaa ttaacccttt ctatgtgagc 25860

agaggcatcc atggggggac acactggtga atcatctgtt atgtagaagt ctggaaaaca 25920

tcaggatgga actggtgaaa taagtgtggc ctctgacgga atggagcggt ccgtctgcac 25980

tgctgcgggt gcccctcaga tcctgtgggt cagtgagaaa agcagtgagg aacaaggcag 26040

gtactgtgta ctgtcctctg cgtgcaagga aggccagcgc atgcaacaga gtccacacag 26100

acatagccta actctggaag gaagaatgag aatgcagttt cagtggtggc ctctggtggg 26160

gagaaactgg gtgaagggag atgtcatttc catttctcta ctattaattt tgtattacca 26220

tgcttaaatg ttacttttta cctttttttt tttttttgag acagggtctc tctctgttgc 26280

ccaggcagga gtgcagtggt acaatcatgg ttcactgcag cctgaacctc ccaggctcaa 26340

gcaatcctcc cacctcagcc tcctgagtag ctgggactat aggcacgcat accaccgtgc 26400

ccagctattt tttttaatca agatggagtt tttctatgtt gcccaggctg gtctcaagct 26460

cctggactca agcaatcctc ctgcctcagc ctcccaaagg gctgagatta aaacgtgagt 26520

caccctgccc agccaattgc tttttaaaaa agattaaatg catgtatacg ctcaggcatc 26580

agcacacttg gaaaggatga aaatatccgg aagaagggtt cttttaaaag gctcctcaag 26640

tgatgctggc aggcatgacg aatgtccctg gtcacaaaag ctctgatctg gcctaaccct 26700

gtcatgttag agactggagt gcgtgtgtgt gcgcgcaaag tgtgggggga tgggggtgag 26760

tgtgtgtggt gtgtaagcat gagtgtgtat gtgtgtggtg tgggggtgtg tgctgtgtga 26820

gcgtgtgtga gtctgtgtgt gtagtgtgtg tgtgaagtat gtggtgtgta tgtgtgacgt 26880

gaggtgtgtg tggtgtgtga gttgtgtatg gtgtgtgcat gagcatgtgt gtgggcatgt 26940

gatgtgtgtg tggtgtgtaa gcatgtgtga gtgtgtatgt ttgagcatgt gtggtgtgtt 27000

gtgatatgtg tgtggtgtgt gagcatgtgt gtgtgatgtg tctgtgtgtg gtgtgtgtga 27060

gcatgtgtgt tgtgtgtgtg gtgcatgtgt gtggcgtgtg agcgtgtgtg tgcattgtgt 27120

ctgtgagcat gtgtgagtgt gtgtgtgttc agcatatata aggcatgtaa ctgaacacag 27180

cactttagag ggctctcctg gagtcagagg gggtgggtag gaggagaagg gaggtgggct 27240

agtgtgctga agtatctact ccttgtcata gtctgtgaca acccagacta gcccatgagc 27300

caccctgttc cctgcatttc caatgagacc tcggtggaca tgttccctga ggtgaggctg 27360

actgatgtca tttgacgatc ttgatgccaa atccttttat atcaaaaaca accagaacac 27420

tctcttttct cttagtgctt tcacccagat gaccacattt catcctccca gccactctgg 27480

gccaggtggc actgctggtt tgaaagggag gtctcccctg gagtaacttc cgtgggcgga 27540

ttcacaccct gcccacagtc ctgtcccagt cagcccacca tggtggtctc cggttcctcc 27600

agaattcccg cttttcagct catccccaca ttcccggagg gactgagagc gcagccccag 27660

ggccctgctc tttgggggcc gtctctacac ccagagaagc agcaaggcat tcctaggttt 27720

ctctttcaga tgcagaactt cagtgttcag agatgttccc actggtcctg agagggctca 27780

gttcagcttt aatgactgcg ctgttgcgtg tgctctgcag agggcgggtg gcccagcgtg 27840

gctgactgca gttttcctga cgtggagccc gagcctgccc cgctgtttat taattaagga 27900

tcactctgct tgcagaaccc tgaactcccc agaactgtga ggtgggagaa ccccgagagg 27960

ccacctggcc ccacttccca cctgctgccc aaaccccctc tctgccttcc tgacagtcac 28020

cccaactccc agtgatcccc atcaaccatc tgacaagggg actgagaggg aagagaaagg 28080

aggggcccaa agaggaaggt aaaactgtcg ggaacagccc ccaaatgtgt gacagccttc 28140

agtggagttg cccactttcc cttttctcct ccctgcagga cctcccttct ccccagtcct 28200

ccccaacttc tgaggttaca ttgagaaaag tctgcagaga ggtgccagca tcacaaggtg 28260

ttaaggacca cgagtttggc attttaacag atgccagagc cacttgagaa atgtggtaac 28320

taagcccaga gaggtacagt taacctcccc agagtcacac agcaggttca tggcaaagct 28380

ggactagcac aggtgtcctt cccctgcaga tccccttctg tgccccacat cacctccctc 28440

cagtgtctgg gccacctgga gatgggccct cagactcacc cggccagagg tgccatctca 28500

tgggagaggt ctggccagga agcatcgata tttgagatcc caagaaatga agacttggcc 28560

tgtcagatga cagacttcgg tcatgggaac acgtgatctg ttttacacat gcgtcccctc 28620

agcagcagct ttccagaaca ttcccacttt cttctgtagt gagaagaact ctttccctgc 28680

agcctcctgc ccaactcctc cttcagtgtc tttgcttcag tgtctttgat aaaccattct 28740

gctttgcaga gtgcgagctc tgccttgcag ggttcgcatc tgcctgtgct gagtaaccaa 28800

cgctaaggtc gagtggtcgg tcacctctca taagagctag ggttgtctca tgctgatgac 28860

taggacttgc cctcaaggag aaaaataaat caaaacaaaa gcaaaaacag caaacatgca 28920

tctcttaaag aaggctctga gtccaggtaa atttccttcc actgaagcag ccaggctgaa 28980

ttcgaattat ctttgcccct gcttaaaaac taatgcaaat tttcctagag aatatccact 29040

aattcctgga gggggcatgg gcattcctga tgcccatgag aggaccattt gctcttccct 29100

cagtatgcta aataacagaa gcgacatttg ttgctggaaa gtatcagtga agttaataag 29160

gtttttcttg cccagggtga gggaacagtt cccaatgaca aatgctgtat gggaaggggc 29220

tgtagaactg ccagcccctt tggtccatcc gtaaagtgaa ctctgtggat cctggaggat 29280

tccagcgtct tttttttttt ttcttttttt ttaagacaga gccttgctgt cacccaggct 29340

ggagtgcagt ggcacgatct cagttcactg caacctccgc ctcccgggtt caagcgattc 29400

tcatgtctcg gcctcccgag cagcaagact acaggtgcgc accaccatgc ccgactaatt 29460

tttgtattat tagtagagac gggggtttca ctctgttggc caggctggtc tcaaactcct 29520

gacctcaggt gatccacccg cctcagcctc ccaaagtgct gggattacag gcatgagcca 29580

ccatgcccag ccagcatctt tcatttttct gtctgctttg gccctttcct ctctcactgt 29640

cttccttttc catttccaaa gtcagtccat ctcactatta gcacaaaaac tgctagagcg 29700

cttgtcattg gtcatctctc cctgcacctg gctggtctgt tcttggccac tgaagcgttt 29760

cccccagctg ttgctttaat cattttattg ttattatgcc ttacttaaga aatggatatg 29820

agatgcattt acctgtctct tcctgccact ctgcagagcc agtaagatgt ggtggaaagg 29880

gcccaggctt tggaggaggg ctggctgggg ttggatcttg gctgccccct actagctgtg 29940

tgaccttggg taagtagctg gacctctctg agcctggttc ggaatcatag cacctctctt 30000

tcagggctgc tgtaaggaat agcagtggtg tgtataaagc agagcgcaca gccagcaact 30060

ggcccctagc cacactgctg agcacctact gtgataagct gccattgtgg tgtgtgaagc 30120

aaaggggaaa catgcctgct gtagtgagct tcctgtaggg caggttgtag aaccagaggt 30180

gggttccaag gttacaaagg gactcttagt gtattagtct gttctcacat tactataaag 30240

acctacctga gactggatca tttataaaga aaagaggttt aattggctca cattggctgg 30300

gtgcggtggc tcacgcctgt aatcccagca ttttgggagg ccaaggccgg cggatcactt 30360

gaggtcagga atttgagacc agcctggcca acatggtgaa accctgtctc ttctaaaata 30420

aaatacaaaa attagctggc catggtggtg tgcgcctgga atcccagcta ctcaggaggc 30480

tgaggtggaa gaattgcttg agcccgggag gtggaggttg cagtgagcca agatcgcccc 30540

actgcactct agcctgggca gcagactgag actctgtctc aataaaaaaa aaaaaaaaga 30600

aaagaaaaag aattgcaaga aataaattat tgtttatgag ctatatggtc tgtggtacct 30660

tgttgtggga ctgggagtct tggcgtctcc ctgaccctgc ctgttgctgc agcaccgctc 30720

agccctgcct gctccctacc tgcctcccct cggcctctcc tgcctccacc gggcccctgg 30780

tgcctcctct agagacagtc ctcctgggac cgattgtgtt ctcacttaca cgaggcatcc 30840

aggactacag ataaccagag gaaggggcgc cccccccgcc tgccctcctc cctggcatcc 30900

tcacgctgca gaggtcagag cctcatccca gccccttacc tgcccctact ctgtggagaa 30960

ccgtggtcag ttcgccaggc cggatccacg aacggccttg tggaagatgg tgagctcaca 31020

cccagagctg gctccgatga ccctgtctcc tttacatgtt tctaccttcc cctccctacc 31080

ttcccccact gctgggcgca gagtggaggc agatgaggtt taaagctcag aagggcttaa 31140

acgggttggg gcgcagtggc tcatgcctgt aatcccggca ctttgggagg ccaaggcaga 31200

ggatcacttg agcccaggag ttcgagacca acctgagcaa catagtgaga ccgcgtctct 31260

acaaaaaata aaataaataa aattagcttt gcagggtggc atgcacctgc agtccctgct 31320

actcagaagg ctgaggtggg aggatcgctt gtgcccagga gtttgaggct gcagtgagct 31380

atgctggcac cacagcactc cagcctgagt aacagaatga gatcctgtct caaaacaaac 31440

aaacaaacaa acaaaagaag gcttaaaggg ggctccaggt gggcttggca gcacaaagct 31500

atgaagttct atcttagaca caagttctgt tactgggcct ttgcaggctg gcctgggtac 31560

ctggctgcca tagacaggga accttccaga tgagctgcag gcgtggagca caggagccag 31620

ggtgctcttc ctgggctctg tccacaggca gaacgtacac agtctttgta cacgtccggc 31680

ggctctggtg cctatttttg tttgtgtttt tcttttgttt ggggggatgg atttggtttc 31740

ccccgagccc tctgtcctcc tgtcacctgg ctggtgctcg gcaatgttga ccagctgcct 31800

ggctggagtt ggcagtggct aaggctgtga cagctaacat gttcctgagt cctctcattt 31860

cttcaccata atgccctgtt gagtttgcag atactgtctc tgtttttatc tcccggggaa 31920

actgaggctc agagtggcta ggccaccttc ccatggtccc tcagctcatg agggccacac 31980

agggcattgc ggtggccttc tcctcagcct tgaccctccg gccccagcat tgctgcctca 32040

aggggtctcc tctgctgagc cgtgcacctt ctgcctggca gctccaactc tgtggctgtg 32100

ttcagtggct cagcactgcc ccttgaccct ccctggcctt ctgcggatgc cagactggag 32160

cactctgaca aggtctgggg tggttgtatg ggtcctgtga cctctataca cctcccagtg 32220

cctgggaatc ctgcagatac accctcctta gccgtcccta accatagagg acatttctga 32280

ggtccccgag agagtggggc acccctgcag gatccaactg ctgggcccag gaaggatagc 32340

agcagcatga ggggttccat tagccacaaa ctcacggcat ggaaccttca cccacctcgc 32400

ccctcatctg ctgtttagca cctggcacgc cgtgtatact tactgattat tacattttaa 32460

tggcaaatta tagtggcaaa cgtatgcatc tttgcacaat tgttgtacag catgatgaac 32520

aagtcattaa tagtaaagaa taaatgtgaa agtgagaaaa atctgactgc caaagttttt 32580

actccttcct tccctcccca gacttttaaa tgaaagttta gggataatcc cttagttgtc 32640

ctgctagtag gacttgcaat taaaagaatt gggccaagaa cacttctacg cttctccttt 32700

taggtttggg tgtaaattcg gggtatttct cactgatgaa agcctggtgc agggcagacc 32760

gtgggaagct ttcatttccg gaatggacca tcaacatccc ttggagaaga attctcttct 32820

ccagacccag acctggtgtc ctggcaccca ttgggcaagt gggtcctaga agacaaacct 32880

ggtcagagcc tggaggctgc ttagcattcc ccacgcacat tagcagctcg gagagctcag 32940

gaagccgcag cccctccttg cctcaccagc ctggatcagg acagcatccc ctggaagaca 33000

cacagggcct ggcctctgat tacccagcct ggagggaaag ctcaatcgag catcatgtca 33060

cccggtgccc ccatgcaggg tggcactggt gagaccccca agccaatgat accacctcac 33120

aggagtgcag gcccattgtg gccagatcat cttgactttt caagataaat cagaaatcgt 33180

atttccatga gatatcccta tttgcaagtg atggtgacta aattagaagt ttttgaatat 33240

tgtaacatgt tcgtaggctg tttgtctggt ttaaactcta tctggaggaa ttcaagctag 33300

acttcaggaa taacttcttg aggcaaggat tttgagacct tagggaaaga aggacgtctt 33360

gggggtattc tgactgttgt cctcctggaa gggaagaaca gagaactaga agactgccct 33420

tagcgaagtt caaagcacct aagcccggga ccctcagcaa gtgttcttga gtcacagatt 33480

ctccctgagg cgcctctttc tggctccata gaatggctga ttctgtaact cggtgagttt 33540

gctttttttt tttcctccat cacccaggct ggagtgcagt gaagctggag tgccgtggag 33600

cgatcactgc aacctctgtc tcccaggttc aagcaattct ccttcctcag cctcccaagt 33660

agctgggatt acaagcatgc agcaccacac ctggctaatt tttgtgtttt taatagagac 33720

ggcccgaagt gctaggatta caggcatgag ccaccgcggc cagccataac tctgtgactc 33780

ttgttacaaa ggccttatat tttgctcttt gagggtggtt ttggtttgat gcctgttggt 33840

tgccatcttt taactaggga tgttttatca aaatgcccag ccaaagtgtc caaacaaatt 33900

ataccttaaa gtttgaaaat gtctggcact tctaattcaa tgcctgttgt gccaggcact 33960

gggctgctga ggaactgagt cccgtccctg caggctagct agagaacaca cacacacaca 34020

cacacacaca cacacacaga gtggtcttac aagtcagttt tatattctac ctatatgcaa 34080

taaaggtatt attatgttga ggtgccttga tataaaaatt tttcttaaag gagaggatgc 34140

ctaaaacagg cattacctga aacctcctct ctccagcatt ggttgtcttc tgtcatgact 34200

cagggttttc actgagaatg ggatggaaat gtggtctaaa gatagggcca atgttgggac 34260

tggatcccct ctgggaagtc agaccaggct agggcaggtc cttgaagcca tcaggaaaag 34320

cctctggagc cagaaacaaa acaaaaaaaa aatggtgtta actaaactca gtctcaaatc 34380

ctgaatagga ctcaagtcaa gcaaaataat taaaggagtt agcaaagggc aagtcagaga 34440

gaccgagcaa caccaatgtc ttccgggagc cctgtggcga gtgacagagc ctggactctg 34500

gagtagaact catcttgtgt cttcttctgc cactcgttag ctgggtgacc ttgagccaag 34560

ccccttaacc tcttggaccc tatgttctta tctctaagta ggggctggta atatcttccc 34620

ctttgaggaa tgccctctaa ggggtgttgt gaagattcgg taaggtggca ggggtaggac 34680

tcctggccag aaacaggcac ataataaatg ctaagtctct ccttctctcc acctgctgga 34740

tgctgtagat actaaggatt tcgatgtgaa tgagacaaaa cccctgcctt ccaggagcct 34800

ttgagaatca gagaactaga cccatttcca gaacaagggg atgcagggtc tggataaagt 34860

tttggggatc aatagagcag agggctccca gaggatccca tagggttgac tcctaactca 34920

agggcatgag acaaccccca ggaagggcac cctggaaggg gtccggctgt ccctgattta 34980

cttgtgggca ctgggggaat gcccggagcc atccagccct cagggctctg tgtgattctg 35040

ggttcctccc ataaaagata atcagattct ttcacgttaa tgtctttctc cacctcattg 35100

cacatcatgc agctattcat tgactcagca agtatcagct ttgcatgcga ccttggccta 35160

cccactttag cttttagtaa tagctccctt cttgaataat acaaccagtg gggaaacaga 35220

acctaactct tacctctggg aggcttattt gctttgagaa catatgtcct gcagttttgt 35280

tcatatggca gtgaagtttc gtgcacacac tctagagcca ggcagcctgg gttcaaagcg 35340

cagctctgcc aggtcctaac tgcatgaatt tgggcaagtc gctcaacctc tccatgcctg 35400

agtttcctca tctgtaagat tggagcaatg gtaatacctg ctttttaggg ttgagaagag 35460

aattaaatga attaagatgg gtaaagtgct tagagtggag ctttgcaagt agtaagtgct 35520

atgtaagtgt tcgatttaaa atgaaagacc cttaaataca ttctttgttc atttcacaag 35580

cccttcattt cacaacctta catttcacaa ccaagctctg tctcccctgg aatccagcca 35640

taactctgct cacaagtgtg agacaggccc cagcagagct gcacgaagag gagagaaggc 35700

agccccccag actcccaacc ccctgtccaa gatggcaaaa ccagaacaca gcctctgtac 35760

caccccagca ggtattcaga atctgcaatc tccaaagccc acttcaattg taaatgtaga 35820

gccacgtgcg ctttaagtca cctgtcactc tggaggctct tttgctcagt tcctcaccat 35880

tagcagggat gacagggagt gcaggagtgc ggtcgactcc cagatattgg agagcgctgg 35940

gctagctgcc cattctcccg gcctccactc ctctttgctg tccagccatc acttgctctt 36000

tgaaggcaaa caaaacagaa aacagtgcca aaagtatggg aagaaagcca gcttctcccc 36060

tggggtgcct gtgatgccat gcccaccctc cctgaccacg cagcccctgt ggaccctcag 36120

ggccccaagc ccccatttcc atcacatgcg tacacccatg tgtgtccata gccgcccatc 36180

tcagtcaata aggctgctcc tgcccacttg gaatagtggt gacaaccagg agtggcttat 36240

gggaactatc ccaatggcct gacagcatgt ccgctgcaaa ccgctgaggt aggacactgc 36300

cctcatgtct agctgatcag caagaggcgc agttgctttc ttaggtaaca ttgctgctgt 36360

gtcctggcca ttgctggggg gtggcactta atctacacca gaattttccc tcctgtatct 36420

tccaagctgc ttggatcttg gtgctgaatt aggttggact ttgtcttgtg gggaagggag 36480

gactatagac cctcaacgta agcaatggtc agactattct aagaaaactc gccgaattaa 36540

agcatgaggt aaatttagtt ctgacttctg tccaccccac tgccactgtc cccttttatc 36600

ccatgatccc ttgcttttct tttcctcctc tctccctatc tcttgtgttt gacgcatgat 36660

aggaattcag aaatatatgt ttgtggattt gtttattcac gtagcaaacc atttcttgag 36720

tgcctaccat gggccaggta gaatgggcgg ccccgggctg cagtggtttc ttcagcccct 36780

ctccagggtt tacactgtgc aagacggttt gtgatgggtc ctcccatcga ggaccacact 36840

cttctttctc tgtgcccctt ggtcctcagt ctctgacccc acttcaaagg cagcattcac 36900

tcagggaagc tcccatacaa tgctagtcag agtaaaagtt tggacaaatt gccaggaagc 36960

agcttgtcag tatgcataaa cagcctttaa aatattacta ctctttgacc cagaatttca 37020

cttctaggaa tctgtcctaa ggaagtagtc acatgcaaaa gatttatgta ccaagatgtt 37080

catcaaagtg ttgttttata acaggaagtc tcagaagctg gataaatatc caacctctgg 37140

aaatggttag atagaatagt atgtagccat tagaaaatta tgtctatggg gtttaaaatg 37200

tcatgggaaa acacttctga cataaaagag catgagaact gtatatttag cataatctta 37260

actatgtttt agaatgcaca ggaaaaaaat gtacaaacat attcatagtg atgtctctgg 37320

tggtaggatt atgatcagta agtacttctg tctcttcata ttttcctgta tttgataata 37380

catgcatatg ttgtttttaa aataagaaaa attttaagtt taaaattgga gctgaaaagt 37440

gtttttaggt caggcgaggt ggctcacacc tgtaatagca ccactttggg aggctgaggc 37500

agtcagatca cttgagccca ggagttcgag accagcctgg ccaacatggt gaaaccccat 37560

ctctactaaa aataaaaaaa ttagccatgt gtggtggcac acatctgtaa tcccagctac 37620

ttgggaggct gaggcatgag aattgcttga acccaggagg tggaggttgc agtgagccaa 37680

gatcgtgcca ctgcactcta gtctgggcaa cagagtaaga ctctatgtca aagaaaaaaa 37740

aaaaagaaaa gcctttttaa acagtagcag acataactat ataatcctta ctaagctgtc 37800

ggtcaaattt ttatttatat atttatttta ttcatttatt atttttagac agggtctcac 37860

tctgttgccc aggctggagt acagtggcgt gatcatggct ctcttcaaac ttgacctccc 37920

gggctcaagt gatcctccca tcttagcctc ccaagtagat gggaccacag gtgcatacca 37980

ccacacctgg ctaatttttt ttatttttta tttttagaga tggtgtttac tatgttgccc 38040

aggctagtct caaactcctg ggctcaagct atcctcccac ctcggcctcc cgaagtgctg 38100

gggttaccag catgagccac tgtacccagc cctcaaattt ttaaaaatct ataagagaca 38160

ttattggaca attagagaaa ttcacatatg gacttataat agtatcagag tgtgtggtgt 38220

gatggttctg gagggaatgg actttttctt tggagacagg cttttctatg cccacccttt 38280

tatcttgcta acttatcatc atccaggttc cagcagaaac attacttccc ccaggaaatt 38340

tcttaagggt gcagtatcat gatgtctgca gcaaattctc aaatagctca ggaaaaaagt 38400

acgtgtgtgg tatgagtgtg tgtatgtatg tgtgtatata tatacacata tatacacata 38460

tatatacata tatgtgtata tatatacata tatgtgtata tatatacaca cacatacaca 38520

tatatataca cacacacata catacatgta tttttatata attatatatg cagagagtgc 38580

aaatgttgcc aagttaaaga ttggtgagtc taggtgaagg gaatatggta tttattgtat 38640

tatttgtgca acttttctta agtttgaaaa ttttcaaaac aaaaaattgg aggaagaagg 38700

catgccagtc taccccaagc cctccattgg aatgctgaaa atctaaacaa tgtgatttgg 38760

caatttcatt tcttttctgt tgtgggccag tagtccttag atgttgggga agggggtagt 38820

cgctgaggtg tggttgactt aggatggaag aagcagaagt caagactccc agggtcaaag 38880

tggtttgctc tgctgaccca agtgtgggag gcccagagtc agcgtttcag gtgtgctaat 38940

tcagcatggt tctattcacg gccaaagtcc accctgggca cctctctggc agcaatcttg 39000

ggtgactcta ctaaggccag gcctccatga ccctatgtct ggatcccata tctccacctc 39060

tcccactgtc tcaggaacgg tgcttagctt tttcttttcc ctctcctgtc ttctttgcca 39120

gcatgtagaa agtttaaata attcccctct ttacaacaaa acaaaacata cccccttcag 39180

tcaaccaccc tagctctctt ctccttttcc cagccagatt tttttaaaag catcctaggc 39240

caggcgcggt gactcacgcc tgtaattcca gcactttggg aggccaaggt gggtggatca 39300

caaggtcagg agatcgagac catcctggct aacatggtga aaccccatct ctactaaaaa 39360

tacaaaaaag tagccgggag tggtggcagg tgcctgtagt cccagctact cgggaggctg 39420

aggcaggaga atggcgtgaa cctggtaggc ggaggttgca gtgagccgag atggcgccac 39480

tgcactccag cctgggtgac agagtgagac tccgtctcag gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 39540

aaaaaagcat cctcagcact ttggcaactc catctcctcc caacatgtcc ctgttactgg 39600

aatccagcca ggactcagcc ccgatctttc tactctaacc agttgtctca gttaacaagg 39660

acaggtttat gctgcagtga caaacaagat cccaaattct tgtggcttca cacatctggc 39720

accacctcat cttccagcct taggagtcat cttttagttc cttgaaaact ctttacagtt 39780

ttctgttggg gccttgtcat atactattcc cctggaatgt tctttcctat cccctccctt 39840

tcaccttgct aacttgtgcc catccttcag gtctcagcag aaacatcact tccttgggga 39900

agttttctcc aacacccaca ctacacaggt gtcccatcta cactcctatg actttgtggt 39960

acttgtctca cttcattttc cactgccttc cccacaaggc acctgcacaa gggcaaggac 40020

cgtaccactg tacctatgtc actcattgct gtggtcacct gcactctggc tgcctacctt 40080

aactacacat tagaatcacc tgaggagctt ttaaagccac aatgcaagac tccaccctag 40140

gccaattgga tccaaatccc tggggtaggg ccagacatca gtggagttat atatacatat 40200

atatattttg tttgtttgtt tgtttgtttt ttgagacaga gttttgctct gtcacccagg 40260

ctggagtgca gtggcgcgat cttggctcac tgcaagctcc gcctctcggg ttcacaccat 40320

tctcctgcct cagcctcctg agtggctgga actacaagtg ctcgccacca cgcccagcta 40380

atttttttgt gtttttagta gagatggggt ttcaccgtgt tagccaggat ggtctcgatc 40440

tcctgacctc atgatctgcc tgcctcatca gcctcccaga gtgctgggat tacaggcatg 40500

agccactgca cccggccatc agtggatata tttttaaagc actgcagaga attctgttgc 40560

atcagcttga gaaccactga tctgccttgt gcttcacatt taaaactttt ttttaatgaa 40620

taaataaacc ccaaaaaatt aatctcccta agcctcccta gaagatagga tggtaaggat 40680

attttcctag gtaaaaatat gttaatttca tatttcatga aatttcatgt ttcatttcaa 40740

tcaagctctg tcatacacct tacatggggc aagcccagtg cctgggcagg gtgtaattat 40800

actcattaca caggcaagga aaagtcacat taggtgatgg agcacaaata ggcagttaat 40860

ggtttcaggg ctagttagga tatgtttgtc tttcaattgc aagtaataga agcccaaaga 40920

aattggttat ttatataata taattgattg gttcccaaat ttgaaaaatt caggaataga 40980

cccagcttag gtacagctgg atccagtcac tcaaacaatg tcacaaagaa ccctttgaca 41040

ggaatgtatc ctgtgttgac tctactttgc tctgagtagt ctttccccag gtgatgataa 41100

aaatggtcat catcgccagg cttgtgtcct gtttagtagg aatatacaag aagagctcag 41160

taaatgctgg ccccaccact aagcaaaaac aaaacttttg ttgttgttat tgttgtttta 41220

aataacagct tagacctttc ttctttcctt gttattctct ttcatctgta atccagtttt 41280

ctacttctga agtatagaat gttctgatga tttattcttc attacccaca acttgcacat 41340

gtttatttaa aaatgccagg attgcctggc cgttgtgtgc tgttaacctt tgtttgctgt 41400

tagtggatcc ctgaagttca ggctcccagg ggagcagata atgggtatcc agttcctgca 41460

atatccaccc tctggcaagc caagttcctt cctgggtaag gttttgccta cctgcattcc 41520

tagggaagtt tctgggcctg accaccaagc cagctctgag aaggggtgca taagccccac 41580

catgctttgg ctctgtccct atagaatatt ttatgttgtt actgaaaact aaaggaagat 41640

gggtgcggtg gctcatgcct gtaatcccag cactttggga ggccaagaca gattgatcac 41700

tcgatgccag gagttcaaga ccagcctggc caacatggtg aaaccttgtc tctacaaaaa 41760

caaaacaaaa caaaaattag ccgggtatgg tggcatgcac ctgtggtacc agctactcaa 41820

gaggctgagg cacaagaatc tcttgaacct gggaggtaga ggttgcagtg agccgagatc 41880

gcactactgc attccagcct gggtgacaga gcaagattct gtctccaaaa aaaaaaaaaa 41940

aaagaaaagg aaagctaaag gagagagact aaaatgatat caggttcctg gagaacaaac 42000

agacatgatt ttgcttcatg gcaggacagc cggaagaagt gggattatat cctcacatta 42060

caaataagaa aactgagact cagaatggtt aagtcacttg tcccaggcca cacagccagt 42120

aaattacaga aacagaattt gaacccaaat cttccagctc caaagcttgt gttcttttca 42180

ctacctcctg cttaattttt taatttctaa gattagaccc ttcatctatc catgacacct 42240

gcctgtcatc ccctgaaaaa aggtgaacgc cgttcagaaa tttttctagc ctgagctcac 42300

tcccagttca cttatttttg ctttgtcatg gctgcccagt ccccacttgt agaccaggaa 42360

taggtcatgg ctgcggggac tacacgctgt cgctgctgca agggccggcc tctgtttccg 42420

gggctgagtg ggggccagac ctgccaggag caccatcttc tgtgggtcct gcctggatgt 42480

cacatcccgg ccccaagaag tcactgcaaa ccttcgtatt attgagcttc acatcctaga 42540

atttgctgtc actgtggctg ctgcatgaag ttgtcctgag agaaacgggc attgtcatta 42600

acagggaaat tgatggtctg ggggaaaagt catcctcatt ctcttgcaga tctatgggtg 42660

attgagactg gctgatgttg aaggggtttc tcagccatcg tgtgccatgt tatggaacag 42720

tggtgtagcc agccatttga cacccagcgc tgacctttgt ttaacaacct cacctatata 42780

tgacaaaatg attgtcagaa ataatcgtgt aatgaaatga ctgtaataat ggccagaaaa 42840

gaaacgcaga tagtaaaatg tttctcttgt tgaactctgt acatataatt gcaccaggat 42900

ttttttcaaa taaaaagtaa atattatact acaaaaaagg gaaaaagcac aagcatttat 42960

taaatagctt tctatatctt tctgagtttt gatcctttga ttgcagactg atgtaatatt 43020

ttatgtaaat cattgcttgg ttactaagtg aactttaaga aaagtgagac gtctgcagaa 43080

gttgcccata atttagcagc tactgtattg taccattgat gtacggcttt attttcttga 43140

ttaattattt aaacaatata attcacaatt ttaaaataat aaatttccac ttaaaatggt 43200

atttaaactc agcaaaatat atcatctatg agtaaaattt gtatttacca agcaaaaata 43260

ttacagtttg tggttcacat gctgtctcac tgttttaaat tttaaataca aaaactccaa 43320

gtaggctggg tgtggtggct cacacctgta atcccagtac tttgggaggc tgaggcaggc 43380

atatcgcttg agttcaggag ttcaagattt gcctgggcaa catagtgaga tcctgtctct 43440

actgaaaaca attagctggg tgtggtggca catgcctgcg gtcccagcta ctcaggaggc 43500

tgagatagga ggatcacttg aaccctgggg gacagaggtt gcagtgaggc aagattgcac 43560

cactgcactc cagcctgggt gacagattga gaccctgtct caaaaaaaga aaaaaaaaaa 43620

agaaacacaa aaactccagg tggtcgcaca gaatgacagg actgaagtaa cttagctcca 43680

atttctgtct tcataatcac tgtcctacca ttgtctgtgc ttagaatcta cttgcttaat 43740

gcaggaacat gtgttctcac agagatggaa aatgcaaatg gcgccagaag caagctggaa 43800

attctgaacc attaagaatt tactctctgc caggcacggt ggctcacgcc tgtaatccca 43860

ggactttggg aggctgaggc aggcagatca tctgaggtca ggagttcaag accagcctgg 43920

ccaacatggt gaaacttcat ctctacaaaa atacaaaaat tagccaggca tgatggtggg 43980

tgcctgtaat cccagctact cgggaggctg aggcaggaga atcgcttgca cctgagaggt 44040

ggaggttgca gtgagccgag atctatctgc accattgcac ttcagcctgg gagacagagt 44100

aagactccat ctcaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaagaactt actctcaaaa taaatacgtg 44160

tggctgactc cacatatggt agggccaact gtataactag aagttctcca aataacttct 44220

gtggagaaaa aaaagtttat taaaggttaa cttttttaaa gtgctaacta gaaccttact 44280

aacactgaga tcgcaccaat tgtttataac ttagacaggg ccgggtgcag tggctcatgc 44340

ctataatccc aacactttgg gaggccgagg caggtggatc acttgatgtc aggagttcga 44400

gaccagccta accaacatga tgaaacccca tctctactaa aaatacaaaa attagccagg 44460

cacggtggta cacgcctgta atcccagcta ctggggaggg tgaggcagga gaatctcttg 44520

aacccaggag gcggagattg cagtgggcca agatcgcacc attgcactct agccccagca 44580

acaagagtga aactctgttt caaacaaaca aacaaaaaaa aaaacctctt ggaccaggaa 44640

aatatttttt aagggaggag tattttatca ctggcattgt ttaggattgc aggcacatga 44700

tgctaatgaa aagcagacta actattagtt ggttttatta ctgtttttga actctctctc 44760

tccctttttt ttttttttga gacagagtct ctctctctgt cacccaggct ggaatgcagt 44820

gactgcagtc tcagctcact acatcctctg cctcctcagt tcaagtgatt ctcgtgcctc 44880

agcctcccga gtagctggga ttacagggca ccacaccagg ctaagttttt gtatttttag 44940

tagaggcagg gtttcaccat gttgcccagg ctggtctcaa actcctggcc tcaagcgatc 45000

tgcccatctt gacctcccaa agtgttggga ttacaggcgt gagccaccgt gcctagccct 45060

gtttttgaac tctctagaga cagtccagcc ccttattact tgtcctgagg cagctgctcc 45120

cttcacctgg ccccccgcat tgtgttccgg acccttgtcc tggtggtgct aaagaatatc 45180

tctgtcgatc ctttggggac tggggaaact gaggcccagt gccacgcgat gccatttgtt 45240

cagggaagat taggtcatct gctaggtccc cagtcacttg accttcttcc cagacaggaa 45300

gaagctgctc tgggtctctc agtgctccac gtgtctttgc acattgaaat gttttctgat 45360

tttttttttt tttttttgct gttacattta cttttaaaaa ataacaagca ataaaatgtt 45420

acatttgaga aggttgaaat gagaattgat ttgagttaaa ttctagcaga tttttcttag 45480

aagaatgata tcatcatctc cagctacctg caattgatct actctgaatt aagaaagaga 45540

cttccatttg ttgtttatat tttgcactct tgatgtgttt ctttaaatta tggtcatggg 45600

ccaggtgtag gagctcacac ctgtaatccc agcaccttgg gactctgagg agggaggatc 45660

actggaggcc aggagttcaa gacctcgtct gtacagtaaa ttttaaaaat tagccaggca 45720

tggtagcatt cacctgtagt cttagctact tgggaggctg agatgggagg attgcttgag 45780

ccagaacttt gaggctacag tgagttattt tcacgccact gccctctagc ctggctgaca 45840

gagcaagacc tgcctcaaaa aaataagtaa aaaataaatt aaatttcaat cattagcagt 45900

cattaggata tttaaataca gtatgttgaa tcaaagttac gcatgtgtgt attttttttt 45960

ccagagagtt gtttatcatg tgggttttaa tttaacttta aaaaaatgtt ggctggacag 46020

ttgcccaaat ggtatcatca gccatttggt tgagaacgta tgtcctgcgg gctcctctgt 46080

cactggagtt ttgctagctg acagccactg gctagttaga gactgcagtc agcacagatg 46140

caggcgtgga cttgcgcacg taaccatgtc aatgcaaagc catcacttct taaaaattct 46200

gaaccctgct gtctgagatg gtggtgcagc ggatagaact ctgctctaag aggcagtagc 46260

taattccatg tcttctttgc ccttgactag ctgagtgact ttgcacatgg ggcttgcctc 46320

tctgttgcct tgtctgcaaa gtggaatcat cttttccttg ctagacagaa ggtggaccct 46380

ggacctatgg cctttttgag tttccccccc gcttcttaga aggacctctg atcctactga 46440

gtttaatacc cacgggttaa taattgggaa aagcaaagga agcgcttctg tttaggtaat 46500

tatatgcatg tttttgtctt tttctggctg gaaagatatc caagccactg ggaaggtccg 46560

tggctaccca gggtagccct ctctggggag ggctgctata tccaagagcc cctcatgaga 46620

atttgaaaat cgaccatggt agggcctgct gacttttgac agctaatggt gtgctgagaa 46680

ttgtccctcc aaagatgcct ttccattccc tcgggagagt ctgggcagcc cctactgggg 46740

gctgggatgc tggctcttcc ctcagcctcc accccaactg ctctcttccc tcctcccctc 46800

cccagccccc taatttctct cacaaggctt tgttctgcag caacctttcc taatgcagtc 46860

ctggcctctt cgcagcttca ttacataacc ttccgtggac tcctggtcca aggatcaccc 46920

cagaaagcca gtcagaggta ggcacgcagc tggggtccat ttacttacct tccccacccc 46980

ctcggaactc agaggtggtg caggaatttg gactccaaga attaacagct ccaccaccat 47040

caccagagcc aaaactcagg atgcatgtgc ttcatctgct gcttatttcc agctgagagc 47100

cagtggtgcc atggttcctt agggagccgg tcccctgatg ccggctcctg gccccaaatc 47160

tctctgatcc gggctcttcc agaatgtctt gtctccacca tcgcctttga ccaatggtgt 47220

ccctttgcct ggtaatgtcc cctttgcctg atgatggccc tgtcactcct ctctttagca 47280

cagaggaggc tgtttcatcc cttcaagcct gccctccctt caagtcttag ctcaagttca 47340

ccttctccgc agagccttct ccaatcttct tgactacgtc tcctctcagc tccagcaacc 47400

tctgtctctg gcactgattc cttacttagc taagagaatc acagacactt ggggctcagg 47460

acaatctgct ttctctcttc ttacccatgg ccttggactg tgtgtacctc tttgtctcca 47520

ctcccaaacc caacccccag agggcagaga gcatgttgtc tgtccctttg ctcagcatga 47580

agccatgcgt gtggtagatc ggcagagttc cataacttgt gttgaccgag gggtcacttt 47640

gctctgaaat tacccctgtg tccttcagta tttgcacaga tagcttcctg gccagaccga 47700

atatatccaa gggcatggcc cacctctgct cctgtttcca ggtccctggt gggggttagt 47760

tcatgccttc ctcataatct gcccactggc ctggtcctca aggtcttccc aactgctcag 47820

ccagagttga gaaaatgggt cgctccatcc tgtttgtgtc gttctctcct tcctggccca 47880

ctctcctgcc cacaggtatc caggggctgc ctgtagcatt agaggacata catgcacatg 47940

cgtgggcatg ggacactcac gtagcctcca agcacagcat caataatgca ttctgtgctt 48000

tatagcatgg aaagctgctc taaactttat tacacagtgg acatgtctga agcagctccc 48060

aaatccaccc ctgagtgtgt tggaattggc aagcctatca cttgggagtc tagttttttt 48120

gttcgttaat aatagatgct tcctgtggcc ccagcttggc aattttgatt taaagtgatc 48180

ttaactgaag agactaatgg acgggtctga atttgtgcct tttaagcaca aagtattgct 48240

cttaattaac tggattctat cctttgagca ggcagaggcc ttcccccaag ggcgtcatta 48300

acgatccaca tctggacatc ttccaaagcc ttcttctgtt tcaggccaac cgcaggtgtg 48360

ttcctgaaca cccaggaggc tatgagagcc acatatgcct cccaaataca cacagtgtgc 48420

atgcccaggg acatagagca gtgtgcaaag tcccattcca tctctctcca cctgggagag 48480

gatggctctt ctgtctgatt catggctcaa agtggtaaag gagctcccca ctccccgtcc 48540

cacgcctact cagagtctgc aaatatgtat gcgatatgag agctcgtcag ttagctgtct 48600

tcagtgtggc gcacatttga ggagtctgac tcccctccag cacaggccaa tgtgcactgc 48660

tctcctatct ttgtaccccc actgttgcac tgtgcagagg ttggagccat agaagtacca 48720

gagctgtgaa aggagaggcc ccctctcacc tctgccctgg tctccatccc cactttctct 48780

aggaagctag taggtgctga caggggagag aagggagggg aggggtccag aaacagtggc 48840

tcatgcctgc aatcctagca ctttgggagg ctgaggcagg aggatcattt gaggtcagga 48900

gtttgagacc agcctgggca atgtagcaag accctatctc tacaaaaaga aaaaatgtaa 48960

ttagctgggt gtggtggtgg gcacctgtag tcctagctac ttgggaggat gaggtgggag 49020

gattgcttga gcccaagagt ttgaggttac agtaagctgt gattgcacca ctgcactcca 49080

gcctgggcaa cagagctgag accctatctc aaaaaaagaa aaaaaaaaag aaaggagaga 49140

gagagaaaga aaagaaaaga aaaaaaaaaa agaagggaag ggaaagccca gaagagtgtg 49200

gggagaggag gcggccgtca ttctggggcc ctcagtgtgc acaaccagat aacacatgct 49260

ctgtgggctt ttgtaccatt ttgcttgagc ataaagaaag gaaggctgcc cctaaataga 49320

aagcactctg gaggcaaaca aatctgactc caatcctggc cctgccactt tcccagctga 49380

ggacttagac aagcacccta gcctcttgga cattctcaga gccatctgct gcaagtgggt 49440

gctgccatac ccaccttact gggcaggctt gggggaccaa gggtggtaaa tggctcagtc 49500

tttcatgatg cggccacaca gcaggtgcgc catccaggtc catttctttc cttcctttcc 49560

cccaaatcaa gttgtcatta aagtactagt ccacattaat gaaatcaact gtattaattt 49620

tctatttgct gctataataa atcatcagaa atttagtggc ttaaaccaac acaaatgtat 49680

taccttacag ttctggaggc cagaagccct ccataggtgt cactgggctg aaatcaaggt 49740

tttggcaagg ttgcggtcct ttctggaggg tccaggggag aatccatttt cttccttttt 49800

ccagcttcta aaggtttcat gcattccttg gctcatgatc ttctatagct atagtcagaa 49860

aaattttcca tcaatcatct tcaaagccag caatggcagg atgagtcctc acatcacctt 49920

gctctgacac cagttctctg cctccctctt ccacatgtca ggaccctcat gattactttg 49980

ggctcactct gataatctgg gatgatctct ctattttaga gtcagctgac tgggaacctt 50040

aattccatct acaaccccaa ttcctctttg ccatgtacag tgacatattc acaggttctg 50100

gggattagga cgagcctgtc tctgaaaggc tactttacat gaaaattcat ttttttaatt 50160

aagatttttt tttcctcttg agacaaggtc tcactctatg gttcaggctg gagtgcagtg 50220

gtatgatcac agctcactgc agcctcgacg tctctgggct caggtgatcc tcccacctca 50280

gcttccctag tagctggaac tacaggggtg agcccccatg cccagctaat tttttttttt 50340

tttttttttt gagacagagt ctcactcagt cacccaggct ggtgtgcagt ggtgcaatct 50400

cagctcacag caacctccgc ctcctgggtt caagtgattc ttgtgcctca gcctcccaag 50460

gagctgggac tacaggtgtg caccaccacg cccgactaat ttttgtattt ttagtaaaga 50520

tggggtttca ccatgttggc caggctggtc tcaaactcct gatctcaagt gatccaccaa 50580

cctcagcctc tcaaagtgct gggattacag gtgtaagcca acatgcccgg ccccagctaa 50640

tttttaaata ttttttttgt agagatgggg ttttaccatt ttgtctaggc tggtcttgaa 50700

ctcctgggct caagcaaacc tcccaccttg gtctcccaaa gtgctgggat tacagcatga 50760

gccactgcac tcggccttaa gagaagattt aataattaat actttacaac aagatctgga 50820

agaggtggga tgagtaacta aatgaggata caagtaaccc gggtcatatt tgctaatacc 50880

cttggtcaca ttgaacttga tatcttatca gattttccta atcagctcct ttagcagcag 50940

tgttgcagca tcttatctca ttttgttttt tgtttttttg cctagcacat gcctgtaaat 51000

cactggattg aggtgtttag atgtttgttg tcctttggat gcttcttata aatccatatt 51060

tcatggctcc ctggaaagtg ctatgcaaat gataagctgc aaggatggaa aggaaattgc 51120

agtgctcctg aattgtaaat gggcttttac gaggaggttt ctaattactc gctctttctc 51180

ttgaactgag gagttgaagt gtaggtggca gatccataac agataatcat gtgtgtgatg 51240

tgacttcagc ctgagcgtcg aggaccaagt cacagagcag gaacagccac tctccagtgt 51300

ccttggggct acgtctgagg agaacctggg atttcatata tgacctgcac tggctggggg 51360

gctctcttga cgtaacgtgt tccctctgag catgttacag attctgacat tcttatgttc 51420

cttctgtgga gagacatgta cttagtgacc taactcactt tagcatattt ttgctcatcg 51480

tttgtgtagc ttaaaggaat cagataatta ccccctcccc actactttcg gaagcacaaa 51540

tgcaatgccc tagaattgta ctggggactc aaaaagaaaa gagagtagta aaatctatta 51600

aaggggacaa agacagccta tatactacaa gctttctatt tttatggcag agaatgccat 51660

tttctaagta aacagagaac tgcatttgac ctgcaatatc aaatgcatgg atttgatgct 51720

ttggaaagca actgttttct gcgttaatct gggtgtcttc cgtgaaatgt cctcctgcct 51780

ttggcttaaa cactagcttt gtctacagcc attccatcct gaacctgccc aatcttgtct 51840

gaatcctggt ttcaccactg acaagctgtg tgtccttggg caagttactt cacctgtctg 51900

tgcttcagag tcctcatctg tgagttgggg aatctggaca gaatctaccc catagggcgt 51960

agtgaggatg tgttgaatta tcccaagtgg ctacacagag taagcactca aatgatgtca 52020

tcgttgtcat gattgctgtt accagagcct agagttcatt ctgatactcg agtctgtggc 52080

ccatccagcc caggtaagga atagttggag gagttgggca tgttcagctt gaagaggaga 52140

cgacagggga tatgggatag ttgaatctgt gaagggcccc ctgggatgaa gaactggcat 52200

gttctgtgtg gctccagggc actgagcagg acccatttgc caaagtctca gggacacagt 52260

ttctagctat agacagaaaa attttctgtc actcagagga tgaaaataga atgagccccc 52320

ttaagaggta atgagctccc tgtcattgga aggattccag aagagctagg taaccacttt 52380

aggtgctatc aaggggcttt tttctttaaa gtcctttcca aaagcttctg agattgcata 52440

aacaatagga agccatcttg gtgctttaac acaaactctc cccagtgatg agggttgagc 52500

caaagccaga ttggcaagca gagaggagac ttgtgtacaa ggagttcctc gagtcaattg 52560

ctttttcctt gttctagcca gccagagggc tcctgttgga aaacaggaga ccggagaggc 52620

tgaggcctga ccaaaccagc ttctgcaggc cagctgggag gccacaactc ctacctacgg 52680

gaaaactgaa gggcatctct atttttagat tagcaaaaga aaataaattt aagtttgagt 52740

ctcctttgca acttttaaaa gacatcttta ttgagatgat cattcacatt ctataaaatt 52800

cccccacttt gagttacaat tcagtggttt tagtcttcct tgatgatttt gatggtcttt 52860

tcttaaggct cttggaagac ccagaagcct ctcagacaca ggtgggtgtg gagggcgtag 52920

cacagaggca gacttctcat ttcctgggtc tcccctttaa tgactctcag agacccctcc 52980

ttccccctgc ccctggcttc taccccaggg gtgtagagtt ttgccatttt ccaagcagaa 53040

cttcatttcc tcttctgtgt ctacactctt tgtgcttctt tcttgccagc tttttctcct 53100

ttgcccgccc ttccttcctt ccttccctcc ctcccccctt ccctccttcc ctctttccct 53160

ccttcccccc ttccaccctt ccccccttcc ccccttccct ccttccttcc ttccttcctg 53220

cctgccttcc ttccttcctt ccttccttcc ttccttcctt ccttccttcc ttcctggtat 53280

gtgactaatt tctgtttcag gacataaatg ttgtccaggc tgttctttgg tctttctgtt 53340

ggataatgga catttggcat tgagagaggc tgctttttct gaaatcatgt tcttggggcc 53400

cagaacctag gtgtgtgctt ctgactttgt tttcttcctg atccaaattc tgatatgtcc 53460

atttaaattg atctagaccc acagggcact gtgggacaga tcctcagtgg aacatgactc 53520

tgtaacgaga gcattttgtt ttgtcaaaat gagaacatat tattgccttt catctgattg 53580

taaacataat acatgtttat aaaacagtat aatgagacaa aaatgtagac actaataagg 53640

gaaaatctcc ctaattgtat ttctcttcac agagaaagcc cctgttgggc atatatactc 53700

tagtttgttt atttgtttga ctacacatat atgtattctt ttcttatgta taaaaattct 53760

gaacatgcac atttctgcaa ctactgtttt cacttgatga tgcatggacc tctctagagt 53820

gtacgtttct tcttccttac aaagcagttg gcttcgccca gggtgcacca ggacacggtt 53880

ttggctctgt ccccagggtg tcacgggacc aggggatgat ctcacagggt ctgccatctg 53940

ccctgcctgg ccggaggctg catcgagagg gccaaggggc accacgtgtc gtgggtactg 54000

tcaaacaaga gccttcagag ccttccacag tctttctttt gcttcccagc attgcttccc 54060

cgctggtgga ctctgaatct agaactagct ccaggcgcct ctccaaattc agacgggagc 54120

tggggcacta ttataatgca aatctaggca aagccctccc aataccagga tccagaatgg 54180

ggtggggccc tttgccctga aaagctgttt agtttgaaaa tacaaacagg agacagaaaa 54240

gtttggctaa attaatggat aaagttttaa cgatggtaac catagtaggg ttcatcgaca 54300

gccagcgatg gttctgaaca cttgacatgt attaactcac ctaatcccca cattttacag 54360

acaatgcaaa ggaggctctg ggaggttgag tgacttgccc caaagtcgca cagctcctaa 54420

gtgaaggatt cggagtggac tccaggcagc ctggtctgac tccctgcact gcgctgtgct 54480

tatctctggc cccaatgccg ccatgcagaa gtgtctgggg gcactttgtc tctgtcagac 54540

agaattcgga gatgtgtatg cttgccctgg tatggcactt ctcttttttt gagacagaat 54600

ctcactctgt caccctggct ggagtgcagt ggcatgatct cagctcactg caacctccgc 54660

ctcccaggtt caagcaattc ttgtgcctca gcctcccaag tagctgggat tatagatgtg 54720

caccatcgtg cctagctaaa tttttgtact tttagtaaag atgttgtttt gctgtgttgg 54780

ccaagctgat ctcgaacttt tggcctcaag tgatctgcct acctcagcct cccaaagtgc 54840

tgggattaca ggcatgagcc accatgcctg gcagtgtggc acttcttacg tgtgttcagc 54900

ggacactgtt tatcttctgt ccctccaaga cggtgctgag ctcaggtcgt tcattactgg 54960

cagacaactg ctgatttcca acagaattgc catcctcttc tcccctgcga ctttcagagt 55020

gtgacctcag actcaaaaat tagaagtgaa aacatcttaa aaactatcac cttttcttcc 55080

taatcctcct ctcccctccc tgtcttcctt gttgtcccca tctaatgaac tatcatggca 55140

aaaagagccc atttctggtc attttctgtg gcctttcaaa ctcccaccta ccccactgct 55200

cctgggtgca ttacccgaaa gctgagactt cagtgcagaa agtgccaggc cctctgtccc 55260

cccagatcgc cttccttgtc ttccctgtgc ttgcctgtca cattgtgtgg gttccagcgc 55320

tggaaggaat gaggaacaga ttctctggtt ctccttttga agtttacctt cgctccacca 55380

cttctgagac cttcccggaa gttgcccctt gtttctctcc tctccagggc tgccccagag 55440

ctgcctctca cctcttcctg ctgtcacccc accaccatca gggcagaagt tgggacaaag 55500

cctctcctac tggctcctgc ttttctccct taggtccagc ctcctcttct ccatcttcag 55560

gagtctcctt ctccactcac acgtcatgac ttcagcacct cgcatcagtc cagaatatga 55620

ctgcttgttc aagtgccacc tttctcatgc atttttttct agtgacaatc acagccaccc 55680

tgtggggcag gagtgtcatc atccccatgt ttcaaatgaa gaattgcagt tcagagaggg 55740

caagtgactg gcccagcctc aacagctagc cagtggaccc caccagggct tctgactcca 55800

gtccgggttc cctttccacc caaatccatg gagggagctg agccgagaac aggtgtcctt 55860

caggaagacg tgaagccaaa gcctccacct ccaaactcag gggcccaggg agtccaggca 55920

cccatccact cacaaggctg gatatggtgc attccaggag aggggttggg ggcgagtggc 55980

ctctctgtgt acccgtgggg atagatgcgc aagtggcatc gccacatcgt gagtcctggc 56040

ttcatgggtg agctccaggt ccaacgagaa gccaagcagg gggcccttca agctcagctt 56100

tgggcccggg tcggggtaca gggtagagcg ggcctcccca gcccctgcca tgaggccaag 56160

gcagtgcatc gttcgcagcg tacattcaga aaccaaagcc taggagctgg ttatcattcc 56220

ggtttacagc tgatggaaga gcaggtgctt ccgagaaccc acagtgctct ttggccagtg 56280

acccaagggt gcctctgaga ggcctcgcag cacccggagg tgctgctgag gcaacgccct 56340

gactgtaaga aggaccattc atcctcagag agtggccgtg atgctgctgc gacagtccca 56400

ccatccctcc cgactctcac tcccaacaga cttcccactg taaagctgaa ctctccagca 56460

aatcacctct cgccagactc tctcctcact ctctctgggt ccactagagg ttcctcagcc 56520

tctctttgcc ttggttttcc cagctgtaaa atggagcaaa gagggcctat gtacccacaa 56580

aggtgtggtt ggagcgactc ctcctacatt agggcctcga gtggggcttc atgattggtt 56640

ggtggaggtc tccaaaccca cccagtgcca ccgaaggctg agactgcaga tgcaatgcca 56700

caggtgtcct tcctcagcct gggcagctga acatcatgtg taaaacgggg ataataagat 56760

aataacagcc ccttgcacct atgtggctgt gaggattaaa caagataaat gtgtaacagt 56820

gcctggctat agaaatattt actcttgtta ttaagggaag aatatgtgtg gctaaaaagg 56880

gatcgaagat gtaaaagcca atccctcccc ctctagcata tttaagggta atgttgagtt 56940

ggtttgtgga ccatttgctg cctgttagag ctggaaggta gggaccccct ctcaacagcg 57000

atgctacaaa ttatacccat tggaggtcaa ccaaaagaca aagcttattg gctggacatg 57060

gtggctcaca cctgtaatcc tagcactttg ggaggccaag gcaggcggat cacttgagat 57120

caggagttcg agaccagcct ggccaacatg gtgaaacccc atccctacta aaaatacaaa 57180

aattagctgg gcgtggtggt gcacacctgt aatcccagct actcaggagg ctgaggcagg 57240

agaatcacta gaacccagga ggtgaaggtt gcagtgagcc gagatcgcac cactgtactc 57300

aaaccgaggc aacagaggga gacgcaatct caaaaaaaaa gaaaaaaaga caaagcttgt 57360

taataccagc atattgttaa gggaataaag taggctgcag aacaactggt gtaatatggt 57420

gccatgtagg gaaaattaca tgtgtgcata ggagaggggt ctgcaaggtt gtgccctaag 57480

atgttagagt ggttcctttg cttttctctt ttataatttt gtatttgact tttaaataag 57540

gaccataaat cacttttata aaatacattc tctccagccc ctactactcc tttaaagaat 57600

aagagtggtt tgcccaagaa agacagtttt ttttgctctg gttttcttga ttctgacatc 57660

agaggaaact gcttctcatc cacttggggc tctgggttca ggggattcat ttcaggcaga 57720

ttaaagtggt gaccaggggc attcgtggac acagggaggg acaggagcac catcagtttg 57780

tctcacacaa ccactgtcat cctcactgaa ggctgttgcc tgatcaaaaa cagtattggg 57840

ccaggcacgg tggctcacac ctgtaatacc accactttgg gaggctgagg tgagtggatc 57900

acttgaggtc aggagttcga gatcaacctg gccaacatgg tgaaaccttg tctctactaa 57960

aagttcaaaa attagccagg cgtggtgggt gcctgtagtc ccagctactt gggaggctga 58020

ggcaggagaa ttgcttgaac ccgagaggta gaggttgcag tgagccgaga tggcaccacc 58080

acactccagc ctgggcgacc gagggggact ctgtcttaaa aaaaaaaaaa aaaaatatat 58140

atatatatat atatatatgt caaaaatggg gtagttttta gatctatagt agttctaaaa 58200

acaaaggcca tccaagcatg acagatttac aagcactatt ggctattcca gtagttacaa 58260

tggaggagag aagcttttag ttaaaacaaa caaacaacac aacaaaccca gaaaccttag 58320

gtcaaaacca aaattgtcct ctcagacaca atctgggaat tttctcatga cagtgggcat 58380

tagccaactg acatcagcag caaccatccg tgtgcacaca gtggcaccac ctcctcccaa 58440

aaagcagcct tcatctatgc cctcatacaa tcgttgatta ttctctttgg attgaggccc 58500

ggaattattt aagtttcttc ttgccagcat gagtctttcc tttctgtatg ctccttatct 58560

tctctcttta atttggcagt tctgcttgaa atctgggtct ttcattagta gtagttcaat 58620

ttggttccag aacattctgt ggtgtgatgc aatgtgacca gagctcacac ttcagagctc 58680

ttcaagggcc agtcttactg agcacctccc agtggctgcc tgtgtgctgg gcgccacttg 58740

tggtgggcag gagagaggag gggacacaaa aggagacaca gctccttctt agaagctcaa 58800

agttggggac cagctgccac agaagagtat gtttagcatc tgagacacca agatccagcg 58860

tcacaagggt gtttattaag cctcctcatc tctttctttt tctttttttt tttttttttc 58920

ctcaggcagt cttactctgt cacccaggct ggagtgcagt ggcatgatct cggctcactg 58980

catgcaacca ccacctcccg ggtttaagca attctcctgc ctcagcctcc ccagtagctg 59040

ggattacagg tgcccaccac cacacccagc taatttttgt gtttttagta gagacagggt 59100

ttcaccatgt tggtcaggct ggtctcgaac tcctgacctc agatgattca cccacctcgg 59160

cctcccagtg tgctgggatt acaggtgtga gccaccgcgc ctggccttgc tgttgattca 59220

tctatagtat gtttgacttg atgacctcca gttaccttag acagaggttc tcatctaagc 59280

tccaactttc catttccttt gtcctcgtct ttccccttaa cccctccaca tttctctcaa 59340

aatcacccca cttctaaaaa atactgttta tttttctttt aaatttcaaa ttatctatac 59400

tcattgaaat aaatcaaaat agcatggaat aagcgaaaaa aatggatccc acccttcccc 59460

actcccattc cctagggcta accatagtta accatttaat gactaggttt ttttgttgtt 59520

gttatttttt atttatttat tttgagacag agtcttactc tgtcacccag gctggagtgc 59580

agtggtgtga tctcggctca ctgcaacctc tgcctcccag gttcaagcat tctcctgcct 59640

ctgcctcctg agtagctggg attacaggtg cctgccacca cacctggcta atttttgtac 59700

ttttggtaga gacagggttt ctcaatgtta gccaggctgg tctcgaactc ctggcctcaa 59760

gtgatctgcc caccttggcc ttccaaaata ctgggattaa ggtatgagcc accgcaccca 59820

gccctcctgg gctcttttcc tttagttgca ctcgctcccc gctcctggag tagagggatt 59880

tccgagagac tgtgggctcc agccttcacc taggcccagg actaggatgc ctgccctaac 59940

atttatcttt ataccttaaa gcaaaacagc tggaccataa gcattcaaga acaaactgtg 60000

aataaggaga aagttctccc aggaaacaag agctttagtt ctgttgggcc agcccttata 60060

ttccttagct gttaccagtc actgcttgat ttaatctcgg ctatcacttg gcctgacagg 60120

tctgctgctg gtgccaggat gtctgggttt tgaagcctgg ctccattaca tacttcctgt 60180

gtgaccttgg gcaacttact caacctgtct gttcctcagt ttccccagct gtattatgtc 60240

agcataatag tttgttgtgt gaattaaatg aggtaataac tggaaatgct tcaaacatgg 60300

ttcctatcat gagaaatcct gctttccgcc taaatgtgct ggaaaattcc tggtggtgca 60360

gaacaggaga ccagagcaaa ggaaagacag ggtgcagaag ccaaaaatta ccttggagaa 60420

caaagcgcat gttaaggtta tttttggatt ctaggtttat ctctgcttgg tcttcagtta 60480

cctgcaagag atccatttag gggatttttg tttgttttta acgatagctt tattgagata 60540

taattcatat gccataaaag tcactctttt aaaatgtttc cggtatattc acaaggctgt 60600

gcagccttcc ctgtccttga ttccagtctg agtttttaac tgaagggata aggaggacca 60660

cgctttcccc agaccagaac cgcgggccag ggggcgattc tgctgagtca ccgcgggcgc 60720

ctggtgcgcg gcggcggagc ccgggacctt ccttggctgc cccctagcga gggccgcagc 60780

gcagcctgag acacccgccg gggccgctcc acggccgtcg gatttagact ggaagctcgg 60840

tccaggtccc cagcttgatg cgcccgcggt gtaggagacc agcccgactc gggcttcccc 60900

tgagcccctg gactcttgac tccagcaggg cctgggtaat gaacgtcagc tcccctttcc 60960

caaaggggtt gctctgttgg gaaggcaccc gtttgataca gtagcataga gatgggtttt 61020

agcatcaaaa tatcagaatt caagccttgc tctctgctta ctagctgtgt gaccctaaaa 61080

aggtttctga acgtctctga gcttcagttt cctcatcatt ccttctcacg gggtggttgt 61140

gagcattaca gagatcctct ctgtgaagcc cctgtgagtg gctcatcctg agggctgaaa 61200

taaacatgtt attaataatc caaaactggc aagggatgtt gactggtccc cctcccttgc 61260

ccaaggagct ttctagaacc tgagttatca ttaccaaact gtactgcctt gagtaagaaa 61320

gttagaagga atgggaagga tggtggcagg tggaggaagg cggattggtc atcacctcct 61380

tgcagcaaga aacagcccca gatcgtggga aacctacaga cctgctagac agactaggag 61440

caaaagctgg ggctttaaga atccccaggg aggttctcct gagagagtag ccagttggat 61500

tttgtaagca gagatttgtt tggggaggag gtgacaacgt agggagcaga ggggcaaagc 61560

tgtcgggaat cctgccttga gggcagggat gtgtgttggg gggagttggg tcactggggc 61620

tcggtggcct tgggcaagtt tctacctctc aggtccttta cccacctagg gtcgccatcc 61680

tgcccacctc acaggttaca gtgagcctgg atgcactgtc atgggcaggt gcccaggaaa 61740

atggcagaca tgttccaaac agcacgcagc attccccagt gatgcccagg gtcaccttgg 61800

aggtgggcga gatgcctggg gtttctcgtc caccccacaa cacctcaggg gacagccaaa 61860

gctgtccctt caggtaagct gcacagaaga tgtgaactct gctgcaaaga ctctattctt 61920

tgggagcaaa agggacccag ggtctcacct gcacatccct gtccctgagg gcctaggggt 61980

tcttggaggc cccagccttg gcaaaatgag gaagaaggtg aaggttgtct gggcccctgc 62040

caggctcctt cctcggccac gcactcccct tcctgcacac acacccttct ccctccaccc 62100

catctccatt gttgtcagaa aagtcacaat aaaaaggtcc atattgtcta gttcccatac 62160

ttttaatttt taaaatttta tttatttatt tatttatgta ttttttgaga cagagtctta 62220

acccaggctg gagttcagtg gcatgatcta ggctcactgc aacctctccc tcctgggttc 62280

aagtgattct catgcctcag cctcccgagt agctgagatt acagatatgt gccactatgc 62340

ccagctaatt tttgtatttt tagtagagac ggggtttcac catgttggcc aggctggtct 62400

cgaactcctg gcctcaagtg atctgcctgc ctgagcctcc ggaagtgctg ggatttcagg 62460

tgtgagccac cgcactcggc tccacacttt tcacttatta aaagactgtg gtgtccatca 62520

atggatgaat gaataaacca atgtggacta tccctcccat tacccaagga atgaagcacg 62580

gagccgtgcc aagatctgga ttcacagtga aagaagccag tcaccaaaag ccacgtgctg 62640

tgtgacttcc cttatacgaa atatccagaa gagatacatc catggtgaca gaaagtagat 62700

gagcagctgg ggactggcga aggggagaag ggggagcagc tgtctatgag gtccagcctt 62760

tcttctgggt ttggtgagaa tgttttggaa ctagatagag gtgatagttg tacaacattg 62820

tgaatgtact aaatgccact gaatcattca ttttaaatcg ttctttacgt tgcatgaatt 62880

ttaagtcaat caaaaacagt tgtttgaaaa gagaaaagcc tatgggtagc ggcagcagtg 62940

attggattta tgattcgatt ccatggctca tccctcccct gcctcacccc ctcgccctcc 63000

gacgtcttct tcttttactc tgaactgtta tctttgttct catctctctc tctctctctc 63060

aaccctgcag acacttttcc ctttctttgt ctgcccccac cctccagatt tccgtgtctc 63120

cagtgtctcc ctacgaggca tgaattgaga ctgggagggt gtgattctga agaaggcacc 63180

aacagtgact cagctagccc cttcccccac cccgcccccc gggcctcaat ttagctaaaa 63240

aaccacaggg acggactcag gaggcaatac ctttccaagg gtccctaaaa aatgtcccat 63300

tttagtgtcc aggtttcact caactttagt gcctccccta aaatgtgttc cttacctccc 63360

accccactgc atctaagtca ctgcctgaga aaacaggatt gaggaaagga gaaaggaaga 63420

gagagagaga ggaggagaga gagagagagg gaggaaggct gatggattta gaaaagaaga 63480

aaacaagtgg tctgaggaaa acagccttgg tgtgtttatt ttcctgtctg tgtatcgctt 63540

ctcggccttt tggctaagat caagtgtatt ttcctgtctg tgtgtctcgc ttagattaca 63600

gggatctgtg ggtgatgaca cgtctggtcc aggctgcgta gtcacctcaa gggcatgctt 63660

attgatgtgt ttttcaattc actatctttg catgggagtc ccaggccaag aggcacagct 63720

gcgccatttg tctgttggtt tagatatcct ttatccagtt cttccagaga aatcatcctg 63780

cccttctgga ggaggtgggc agcaggggtc agagatggga gggaaaggaa ggagccaggt 63840

ccttggctag gatgccaggg tcccctgcct ctcacctggc ctgggctgga ggcctcctgc 63900

tgtcctgtca ctgatcacta ccccgcccca gcctcctgag ttagaagaca caggctaaag 63960

tagagtattt cttcattgaa aaacccatac aaaataaagg ttcataaaaa ataaaaattt 64020

agactgggtg ctgtggctca cacctgtgat cccagcactt tgggaggcca aggcaggtgg 64080

atcgcttgag ccctggggtt catgaccagc ctgggcaaca tagtgaaacc ccatctctac 64140

aaaaaataca aaaaattagc caggcatggt ggtgcatacc tgtggtccca gcttctcagc 64200

ctatggaccc acatagaata caatgtcagc ataagaaggg agccctgggg tcaccaaatg 64260

gtttgggcgg caaagaacct gaaggttgag agaagtggct tggttaccca gctgttggat 64320

gtgagacctg gccactgctt cttccatacc ctagacctgc accctgacat ctcaagtaaa 64380

aagttggggg atgttttatg gtccaggatg aaggaagggc agtgaggggc agcggagcat 64440

cactttgcat ttctgtctgc ctcttactgg ctgtgtgacc tggggcaggt aacttcccag 64500

actcctggga atcataacac ctatgatgat gatgatgatg atgatgatga tgacacctac 64560

ctcaaggatt gccctgaagg gtcacagaga tgcctgcaag gcacctgcat ggagcaagcg 64620

ccccttctct ggcaggtgct gggtgagcac tacctgctgc caggccctgg ggctatggca 64680

ctgcgtgacc ctgcaagtcc tacctggcga agctgtcgtt cttgtgctca gtcagtgttg 64740

gttgtaagac tgagaagagt cacttcattt tgctctccag ggacatcttt ctgggtccta 64800

ttttctgcct atgtcaagta gcgcctcaag gatgctcctg aaaatgggct tgtctttctt 64860

aacatggcag gtaggtccca aagcattagc atggggcagc tgacctagcc cagccaatgc 64920

agtgcagtga ctcttgcaac cgagtctaat cagaaggtcc atgaacctac gagcatttcc 64980

tgtcccagga tcagggtgga ggctgagcct ccctgcttag agattcttcc catgcattcc 65040

acttttttcc ccaaaagaaa atattgaccc ttgagaggca cacagtttat ttattttgca 65100

tagtaaatag tagcctgtat tttaaggatg agttgatttc tgcatcagcc cctgtaggtc 65160

atcagccttc tattggtgca tctgactctc tctagccctg cagggatggt ggagggggag 65220

gggaaggagg gatctttatt ggaaaccagg acagtgagac tcattgccct gtcatctgct 65280

ctgtggtgct gaatgaggca gcccaacaga gaaataccct gagcgagcat ccccagcctc 65340

caaaacagtg gcgcattgcc ctgagtcctg ggaatgacct ttgattctcc tgctcctgac 65400

ttggaaccca tggaaacctc tagaagcagc tgaggaaaac ccaacatgaa aagcagaact 65460

ccacactgag aatataggag gtgatcggaa catacaatga ttcttgctaa gaccgattca 65520

cagtttttct tttttttcga tcgaagaaat actggagaag cctaaagaag gagtctaaaa 65580

actctggcac gtgggccaaa actgtccttg agctaagaat gattttcaca tttttaagtg 65640

gttgaaaaat gaaataaaat aagatgatgt tttgtgacac atgaaagcta tgggaaattc 65700

aaattctaat atctataaat agtgttttat cagaacacag tcatgctcat ttatttatgc 65760

tcgatggctg ctttcccgct acaattacgt tgagcagtta caacagagac cacgtggccc 65820

acaaagcctt acaatattta ctatctggcc ctttccagaa aaaaatgtgc cgactcttga 65880

ccttaacctc agcaatttgg gaggccgagg caggcggatc gcttgagctc tggagttcat 65940

gaccagcctg ggcaacatag taagactcca tctctacaaa aaatacaaaa cattagccag 66000

gcatggtggt gcacacctgt ggtcctagcc actcgggaga ctgaggtggg aggatcgcct 66060

gagcccagga agtcgaggct gcagtgagct gtgatggcac cactgcacct cagcctgggc 66120

gacagagcaa gaccttgtct ccaaataaat aaataatgca aagtaaaata aataaaacca 66180

tataaaaagg aatcaattta aaattataat gaaagctggc cgggcatggt ggctcacgcc 66240

tgtaatccca gcactttggg aggctgaggt gggtggatca cgaggccagg agatcgagac 66300

catcttggct aacacggtga aaccccgtct ctactaaaaa tacaaaaaaa aaattagccg 66360

ggcacagtgg cgggcgcctg tagtcccagc tactcgggag gctgaggcag gagaatgtct 66420

tgaacccggg aggtggagct tgcagtgagc cgagatcgtg ccacttgcag tccagcctgg 66480

gcgaaagagc gagactccgt ctcaaaaaca aaaacaaaaa caaaaacaaa aaaaaattat 66540

aatgaaagcc aaggggcata gtagaacaaa ttttctagag ctcattaagt caaatgagtc 66600

accagttagt aaaacgcagt cacggggaag agagggcagg attctttgaa gcagcggctc 66660

tcctaaaaac aacccaccct tgtccagctg ccttccctcc tgagggtgtt ccctttgact 66720

gtgtgacccc catcccctat ttcccaaccg tccaagccca cctctagcat aatacgagct 66780

tttaatccct ctccctgacc ccaacccgat tttgaagccc agtctagtat tttctcaaat 66840

acacttcttg gctccattcc ttcctttcca tcacctctgc cttttcactg catgcttgga 66900

ccactgcagt cagctcccta tgaacagttg ctctctaccc atccaatcgg ccccgcctgc 66960

tgctgccaaa ttcaccgagg gcacctctgt ggtgctgcct gtggacaaag tccaagccag 67020

ccacctcacc cacctacagg tgagtgggga gcagccagcg tgtccagtgg tttaccccat 67080

cgccacagac ttggtgatgt gtcgatgtgc agagaagggg tgttggcagc cacaacacaa 67140

gcaaccccgc cccatgtgag atctaagatg ggcgtgctgg gagccacctc tgagaatcca 67200

acagaaggca gaggggagaa cggctcacac ggcacaaaca ctccttcctt tttttttttt 67260

ctttttcctt tttgaaagga gtctcactct attgcccagg caggagtgca gtggtgcaat 67320

ctcagctcac tgcaacctcc gcctcctagg ttcaagcgat tctccagcct cagcttccca 67380

agtagctggg attacaggta cactccacca tgcccggcta atttttgtgt ttttagtaga 67440

gacggggttt ccctatgttg gccaggctgg tcttgagctc ctgacctcag gtgatctgcc 67500

tgccttggcc tcccaaagtg ctgggattac aggtgtgagc catggggcct agcctccttc 67560

catttaaatg tatgcctaat ttgcccattg agaacggctg agacgcattt taagtggcca 67620

gggtctactt agagttagtg ctcatgacca ggcccaggtc aagcctggct ggccagatgg 67680

tgcctttgac ctgctctgtc tctgtgcaaa ggaatgagct gaaggatggg ggtgcagtgt 67740

gtgggcagtg ggctggggct ggcaggactc agtgactaag ggaagagaac tttcctcact 67800

accagcctgt cttttcaggg caccgcgggg ggctttggga cttggtgatg aacacagcac 67860

agagagctgt ccagcatgcg ggtccctggc ttctcacact tcccaggctc cttcagaggc 67920

tctctccaaa gggagctgct ctctctagaa cccatgaatt tggaatatag gcaaccactg 67980

cattggggac cactgacctc aaacatagag accagagcaa atggggctca tcacgtgaaa 68040

ctcatctgga actctagcag gttcttttat atatatatat atatatatat atatatatat 68100

atatatatat atatatatat tttttattat tatactttaa gttctagggt acatgtgcac 68160

aacatgcagg tttgttacat atgtatacat gtgccatgtt ggtgtgctgc acccattaat 68220

tcatcattta cattaggtat atctcctaat gctatccctc cccactcccc ccaccccaca 68280

acaggcccca gtgtgtgatg ttccccttcc tgtgtccaag tgttctcatt gttcaattcc 68340

cacctacgag tgagaacatg ctgtgtttgg tttttttgtc cttgcgatag tttgctgaga 68400

atgatggttt ccagcttcat ccatgtccct acaaaggaca tgaactcatc attttttatg 68460

gctgcatagt attccatggt gtatatgtgc cacattttct taatccagtc tatcattgtt 68520

ggacatttgg gttggttcca agtctttgct attgtgaata gtgccgcaat aaacatacgt 68580

gtgcatgtgt ctttataaca gcatgattta tattcctttg gttatatacc cagtaatgag 68640

atggctgggt caaatggtat ttctagttct agatccctga ggaatcgcca cactgtcttc 68700

cacaatggtt gaactagttt acagtcctac caacagtgta aaagtgttcc tatttctcca 68760

catcctctcc agcagctgtt gtttcctgac tttttaatga tcgccattct aactggtgtg 68820

agatgttatc tcatggtggt tttgatttgc atttctctga tggccagtga tgatgagcat 68880

tttttcacgt gtctgttggc gaactctagc agcttctttt cacaagttca tggagagagg 68940

tttcccactg agggaatcac atctgtctga tcaaaagagg cttgggaaat ggctctcctg 69000

ttcattccct gaaaacctct gatggaacca ctgccactgt ggcagcccca gcactggcac 69060

cccagccatg attggtgccc cagccacatc tctgctgtga gccccagagc cctggttaat 69120

taatcatcca cgtgttgatg gggagaggcc cattcacaaa agcgacataa agcccaggga 69180

gacgtggccg tggcaagaag ggtgtgggac tacattccgc ccccaactga gagattcaga 69240

aaccagaaaa aaatggaaaa acatactgtg ctcttgggtg ggaaaactaa atatcatgaa 69300

gggagcaatt tttatagttt tggcctataa tacaattcca gccgaaatcc cagtggaact 69360

ttgagaattt gcaggaaaaa aaaaaatgtc taaagtacat ctggaagaca aacttacaag 69420

aaggtcaaat aattttgaaa aagaaaatga tatctaagcc cacctagaga ataagacttg 69480

agatccaaag ctaaatcagg aggctctagc aaaattgaca gataagcagg acagagtgca 69540

tggtgcattc acctggggaa gagggcagat tggtctacaa ataggcctgg gtccactgac 69600

tttagctgtt atatttgggg agaaactttt caacctcact ccatcttaaa cctaaaaata 69660

ttccagatga attaataaat ataaaaaatt agaccactaa aaatgtagaa gaaaatggat 69720

gatctttcta taccatagag caatggaata aatcacaaag gaaaacagat ttgactatat 69780

aaaacttaaa ccctgcccat caaaaaccat cagaaaccaa aataaaaggc aaccaactgg 69840

agaagatagt tgccacaaat atgatcaagg gttaatgtta ttcataaatt aagagcccac 69900

acaagtcatt agaataagca ctgagacctg aacagacaag caaaaagaat gagagtgggt 69960

cggcgcggcg gctcatgcct gtaatcccag cactttggaa ggctgaagca ggcggatcac 70020

ttgatcccag gagttccaac accagcctga gcaacatggt gaaaccctgc ctctacaaaa 70080

gtcataaata ttagccgggt gtgatggcac acgcctgtag tcccagctac tcaggaggct 70140

gaggtgggtg gatcacttga gcccgggagg tagagtctgc agtgagccaa gatcacaccg 70200

ctgcactcca gctggagcaa cagagtgaga ccctgactta aaagaaaaaa aaaaaaaaag 70260

aggagaaaaa tgctgatctc actagtaatt aaaacatcag gccaggcgca gtggctcaca 70320

cctttaatcc cagcactctg ggaggctgag gcaggcagat cacttgagat caggagttct 70380

agaccagctt ggccaacatg gtgaaatccc gtctctacaa aaaatacaaa aattcgccaa 70440

gcgtggtggc acatgcctgt gatcccagct actcgggagg ctgagacagg agaattgctt 70500

gaacacggga ggcagaggtt gcagtaagct gagatcgtac cattccagtc cagcctgggc 70560

tacagagcga gactctgtcc cagaaaaaat taaaacatca catatttaaa caactctagg 70620

atatcattta aaaaaacatt aatagactgt tttttagagc acttttaggt tcacagtgaa 70680

actgagtgga aggtacagag acttcccgta tgttccctgc cctccacgta cagcctcccc 70740

cactgccaac gtcctgcacc agagtggtac acttgttaca accaatgaat cctcattaac 70800

atatcattat cacccaagtt catagtttac attagtaaaa catcatcttt catctataag 70860

cacaaaaatt ttttggcatt tatttaggtg tatgattaac tcagtgttga caagactcac 70920

acttcatacc cacttgcact gcatctgaga agcaattggt gtctacagcc gctacaccct 70980

caacaagccc gatcttgttt gaaaagcaat tggtgatgct tctcaaaatt ctatggacaa 71040

agtcagccgg gcatggtggc tcatgcctgt aatccctaaa ctttgggagg ccgaggcagg 71100

cagatcacct gaggtctggt gaaaccctgt ctctactaaa aatgcaaaaa ttacccaggc 71160

atggtggctg gggcctgtaa tcccagctac tcgggaggct gaggcaggag aatcgcttga 71220

agcaaggagg cggaggtttc agtgagccaa gattgcacca ctgcactcca gcctgggtga 71280

caagagtgaa actccatcta aaaaaaaaaa attatggaca aagtttttca aaaagatatt 71340

taatgcaact ttatttgtaa tattggaaca tctgaggcca tttcagtgct aactattagg 71400

ggatggttag gaaaatatgg tacatatgtg gaaaggaaca tttggtagtt agtgcccctg 71460

atgtttacaa aggcttttag tgaccaacaa atgctcatgc tataatctta tgtgaaaaaa 71520

gcaagtagca taattgcaac tatattttta atgcatagaa taaaaggcta gaaggaaata 71580

tcacagatcc ttgacataca ttcccaaacc tttgtaaatc cgcggattca tgaaaacaga 71640

cacatttgca caagtgcctg atcttttctg ttatacattc attagaagtc aagccctggt 71700

gccacaaagt atctgccttt tcaaatgtga tcagaatgtt ctcttttgct tcaaggccat 71760

ttttcacgaa gcagtggcat ttttgcctct tcatcagagt caccgtgtgc cctggaggac 71820

tgagaacagc agagccgttt taggatggga cagggcagcc aggaggattg ggctcactcc 71880

ctactgagtg cctcactccc gtacagcccc catagaggaa gaggggttca aatttattcc 71940

tcagccagat ggcatgtgcc gcctgtcctg gaatttcaca tcacttatga tggaccaaaa 72000

ttccaaaagc tgaatccatg attgtcaaag tctggtatgg caggatgtca acagtaatcg 72060

tttctgggca gagggatgat tttctcttcc catcttgctt tgtataaata cattttctat 72120

aataaggttg tattactttt ctcatcaaga aatagcaaag tactgtttta ctcaaaatat 72180

gaatagagcc aggcatggtg gcagcttatg cctgtaatcc caacactttg agaggcggat 72240

atgggaggat cactttagcc caggagtttg agaccagcct gggcaacata gtgagacccc 72300

cgtccccact cccccaaaga aaacccacaa agcatttatc ctggattatt cacaggggcc 72360

aaaaaaaaaa aaaaaaattc aggcctccta tagccatgag ctacgaatat gaaaatatgc 72420

aaatgtgtaa gaaaagccag cacatccgat ttttactttt actttcacac ctctgtccac 72480

catgttccaa gagaagaaac ttggtcattg aaaggaatag atcaaatcca aagaacaaaa 72540

ccactgtgct cattaaactt cttagtgttc acaaagcttt agctgcaggt tgaatggggc 72600

aacccgaatt ggctggctca cctgggctgc agggagcaga gatcgcgaca ctgcactcca 72660

gcctgggcaa caaagcgaga ctctatctca aaaaaaaaaa agttcataaa ttcaaagtta 72720

tgaattattt ttaaaataat aataatttac aataaagatg aggacaaagt gtgagtaaat 72780

ggtggtttct atccagctct gttgagctga agtggcatct ccctgctggg gcttttgggg 72840

aagaagggtg tgtgttgctc ttcagatccc aagcctcatg cccctactgg gccctgtggg 72900

gtgcttctca gcccaccagg agagccaccg ttggaacaca cacgtggggg acctggtggg 72960

tgccggtgtg gtgaatgggg gccacagcct gactccagga agccagcaaa ctcggagctg 73020

gaggagtcag gacacccccg atgagtcaag agttggtttt gctgccagtt gacatctgat 73080

tgaaccatct cttcacttct ccgtgcctca ctttccttac cagacaggct ctgctgatgc 73140

tgtccctctc ctgttcagtc gtgccctcac cgttaaagag aaagagcaaa ctgctgggca 73200

gcagcattga tttttttaat gaagtggaaa gagagctggg aataacaagt cgggcccacc 73260

tcacctgcct cacctggtgg gtttatttgt tttgtttttt tttttttgtt ttgagacaga 73320

gtttcaccct gtcacccagg ctggagtgca gtggtgtaat ctcagctcac tgcaacctcc 73380

acctgccagg ttcaattgat tctcctgcct cagcctcccc agtagctggg attacaggca 73440

cctgccacat gcctggctaa ttattgtatt tttagtagag atggggtttt accatgttgg 73500

ccaggctggt ctcgatcccc tgacctcagg tgatccaccc acctcggcct cccaaagtgc 73560

tgagatcaca ggcgtgagcc accatgcctg gccgtcacct ggtggtgttg aatatgaact 73620

gctgcggtgt tggtaaatta agcaagcaga tagatgtaaa taacgcttgg gcaggaatat 73680

ggagcacggg atgaggatgg gcggccaact gttagagagg gtagcaggga ggctgagatc 73740

tgcctgccat gaactgggag gagaggctcc tctctctctt cacccccact ctgcccccca 73800

acactcctca gaacttatcc tctcctcttc tttccccagg tgaactttga accaggatgg 73860

ctgagccccg ccaggagttc gaagtgatgg aagatcacgc tgggacgtac gggttggggg 73920

acaggaaaga tcaggggggc tacaccatgc accaagacca agagggtgac acggacgctg 73980

gcctgaaagg ttagtggaca gccatgcaca gcaggcccag atcactgcaa gccaaggggt 74040

ggcgggaaca gtttgcatcc agaattgcaa agaaatttta aatacattat tgtcttagac 74100

tgtcagtaaa gtaaagcctc attaatttga gtgggccaag ataactcaag cagtgagata 74160

atggccagac acggtggctc acgcctgtaa tcccagcact ttggaaggcc caggcaggag 74220

gatcccttga ggccaggaat ttgagaccgg cctgggcaac atagcaagac cccgtctcta 74280

aaataattta aaaattagcc aggtgttgtg gtgcatgtct atagtcctag ctactcagga 74340

tgctgaggca gaaggatcac ttgagcccag gagttcaagg ttgcagtaag ctgtgattat 74400

aaaactgcac tccagcctga gcaacagagc aagaccctgt caaaaaaaaa agaaaagaaa 74460

aaagaaagaa agaaatttac cttgagttac ccacatgagt gaatgtaggg acagagattt 74520

tagggcctta acaatctctc aaatacaggg tactttttga ggcattagcc acacctgtta 74580

gcttataaat cagtggtatt gattagcatg taaaatatgt gactttaaac attgcttttt 74640

atctcttact tagatcaggc ctgagtggcc tctctttagc aagagttggt tagccctggg 74700

attcttactg tagccacatt aataaacaac atcgacttct aaacattcta taataccatc 74760

ttttggccaa attgacttcg cctcttcctc tctctttcca aatgaaatgt gtttcatttc 74820

actgtcagac cacatggttg gggaccccac agagcacaca gccctccctc tgccttccca 74880

tgctggccct tcacccactg ctggagtgcc aggttggtcc aagggttgga ccaagttgtc 74940

tgaggttgtc tcaaggttgg tcgaggctgt ctccgcgctg ggttgtgcta caaggagccc 75000

ttctttccat gggtgtggct ggcagtgagt gctcacagca acagcccaca gtgcagcccg 75060

agggcaggat ggactcagtc cctgcctcca tacccatttc taaggaggca aaatggcaaa 75120

cactctactt ttctctttta atgctaaaaa taagaaaaca ccttgcagcc cagggtatgg 75180

gtagtgcatg gaagccgtgg agttgtgagg tgggaagtga cctctgctgg atatgtctat 75240

tcaggaagat tgctggagtg ggtggggtct ctgggaggtc ccctgagtgt gggaagctgg 75300

gaccaccagc tttctcgcac agggagtggc catcccagct tggagaggtt ccaggactgg 75360

ttgggaggca cgtttcagat ttctatctgt tgaatcagcg aagatattgg attatgagga 75420

atttgggaat taggaaagtg ggtgcaggtg ggttgggggt aggtgaagga agacatgggc 75480

gtattggggg agcaggggct gctcagaggt gttccagaag ctctgggtga ggaggtgaga 75540

gggaccgggg aatgcagctc ggcccagcct ccctgcctga ggtcagccat cacgtggtga 75600

tggcaagatg gaaatgtgct ttctgactgc tccagccagt gctgccagat tcagctcccc 75660

agggagggca cctgagaggc tccaagccag gagatctgtt ttctcctttg ttttgttttt 75720

ttttgttttg ttttgtttta ttatacttta agttctaggg tacatgtgca caacgtgcag 75780

gtttgttaca tatgtataca tgtgccatgt tggtgtgctg cacccatcaa cttgtcattt 75840

acattaggta tatctcctaa tgctatccct cccccctccc cccaccccct gttttctcct 75900

ttgaatcctt cttagaggcc gggcgcggtg gctcacgcct gtaatcccag cactttggga 75960

ggctgcggca ggaggattgc ttgagcccag gagttccaga ccagcctggg caacatagtg 76020

agacctcgtc tctacagata ataattttaa aaattatccg ggcatagtgg catgcaccta 76080

tagtcccagc tactcaagag gcagaggcag gaggatcact tgagcccagg aggcggaggt 76140

tgccgtgagc caagatccca ccactgcact ccagcctggg cgacagagac ccccatgtca 76200

aataataata ataataaata aatccttctc agtcccttcc tcactgtgtc cccctccact 76260

gaatttttcc acctcctctc ccacttcccc cactcccgct ttccctctcc ttctctcccc 76320

actccatctt tttctttctc tgctgtttct cgtccctccc tcctctccat cccacaacac 76380

tgcctaccct gtccctgccc caccctggtg ctcaggatgt gtgaagtgag gggtggtagc 76440

ccccaagacc tcaaccccga aggttagcct gttgaaacca ctttctccca gctgcccccc 76500

tggcagttgg tgctgctggg ggaaactggg attgggggcc agattttgcc tcttttcctg 76560

acaaagagag atgaagagtt ctctcaccag gtgcctggga ctggggtgtg ggtgtcccag 76620

cctatcccag cgcatctgtt ctgcatcatg attaatagtg ctgctttcag ccgggcgcgg 76680

tggctcacac ctgtaatccc agcactttgg gaggctaagg tgggcagatc acaaggtcag 76740

gagttcgaga ccagcctggc caacatggtg aaacctcgtc tctactaaaa atacaaaaat 76800

taaccaggtg tggtggtggg tgcctgtagt cccagctact tgggaggctg aggcaggaga 76860

atcacttgaa tctgggaagc agaggttgca gtgagccaag atcgtgccac tgcactccag 76920

cctgggtgac agagtgagac tccgtcctaa aaaaaaagga gttttgctct gtcgcccagg 76980

ctggagtgta gtggcgccat ctcggctcac cgcaacctgc gcctcccggg tgcaagcgat 77040

tctcctgcct cagcctccca agtagctagg attacaggcg cctaccacca cgcctggcca 77100

gttcttgtat ttttagaaga gacggggttt caccctgttg gccaggctcg tctgggactc 77160

ctgacctcag gtaatccgcc cacctcagcc tcccaaagtg ctgggattgc aggcatgagc 77220

caccgtgccc agtcaactcc ttctcaaaaa aaaaaaaata gtgctgcttt ctctttcaag 77280

tgtcctgatt tgggtgatag taaatgccac tctacttata agggatctac ctcagaatgc 77340

taattgggac atttttgtag cactctactg ttggcagcag gtgatgctca caacagcccg 77400

tgagggtgga tgacgtccgc ttcacagatg acaaaggagc ctcatgctca gaccgtgggc 77460

tgccagagca ggtccatggc tgcagcccca catggaccat atttccccct tgtcactctt 77520

tccaccaagc tcccttggaa cttcagttat taagctctct tgggtggaat ccaagttaga 77580

atcacaacat gtgcctcata tggattgtgc cagtgaaaaa tgacattcta tttagaggca 77640

gggcagcctg gcttagagtc agtttaaaat atgtattatg ctgcaacaaa tgtaccatga 77700

tcctgtaaga tgttcacaac aagggaactg gatgtggggt atactgtctg tactaacttc 77760

acaagttttc tgtaaatcta aaactgttcc aaaataacaa gttcgtttaa aattaactcc 77820

aggagaccag gtacggtagc taatgcctat aatcccagca cttcggaagg ctgaggcagg 77880

tggattgctt gagcccagga gtttgagaca agcctgggca acatggtgaa atcctgtctc 77940

taaaaaaaat cacaaaaatt agccaggtgt ggtggcgcat tcctgtagtc ccagctactt 78000

gcggggctga ggtgggagaa tcatctgagc ccaggagttt gaggctgcag tgagctgtga 78060

ttgtaccact gcactccaac ctgggcaaca gagcaagacc ctgtctcaaa aaacaaaaat 78120

gaaataaagt ccaggaaaga agtaggtttt accactctta ttttctgaag agaaaactaa 78180

atttaatgtg taaagtgagg acaagttcac caagttagtg tttgagttgc ctaaaatatg 78240

tttgctaaaa ctattcaaag ctttcacata aaacatgatc agaagttcta tgccaaaaca 78300

tatgtgtgtg tatatatata tgcactatat atactgtata taaaaatgca aaatctaaat 78360

tgccaacctt ttagaaattg ctctgaaagg aaagcatttc aagataattt gcttacccaa 78420

agaatatact ttccaagaaa gcaagtaata cttaaggtgt tcataatcct catcaaatta 78480

attcttgcta ctgaaagctt acaaggagct gttttgatgt cgggtgtgac aggtttgact 78540

tggcagaagg tgtcacttta ctaacaacat tttaaataag tgacagaaga caagaaacta 78600

cacgttaaat gccagaacaa agagtgtcta agtggatgct aagagttgaa atatggctgg 78660

atacctgccc aagagagctg aaaagtagat gaaagttggt tacctataaa ctagtgcacc 78720

ctaatgaatt aaaaggtgtt gatgagttaa cttgttatgc cttccagata agacatgcaa 78780

atggggcttc ttcctccttc actacttcca agggatttaa caaggagacc aatgcaaatg 78840

ataaggactg tagggctcaa gctggggaca gattggggaa agggggacca tcatgcccat 78900

atagatgtcc ctgtgccctg gcagtcaagg ctgctgaaaa ataacaaaac ccagaagtct 78960

gcgtgatgct gcctctccat ttgtccaaag ccttcttgcg gcagtttgca ggcttttgca 79020

aaagctccag gaccaaggag ctatgttcat gctggaagct tgttcaggat tagctgttct 79080

ttgtgggatg ggtgcagcca gggccaggtg tccagggaca gtgttttaac aaagggcatg 79140

aggtgtctga tctcacagtg gaactccact tgcctttttt tcatcttctc attctgcttc 79200

atgcacagaa ccagccccat cctgaaactg actctaaatt actcccgccc caggtggagt 79260

gcctttctcg gagttcaaca gagccttcct gtcgcccaag ggacaactcc actgaatgcc 79320

caagccacac ccaaaaccta acaagtaaaa accaaattct gtgctccccc atcctgggcc 79380

attcctggtt tctctactgc tgttggtgat accaccatca gcttgtccat catgaccctg 79440

gccagttcct cccacaaccc tccacagcac ccagggacct cacctccatt ccatccgaca 79500

cagatctcct caccacaaac cttggttttg caacagcagc catgagacct ttacaccctc 79560

cgcccttcat cctgtccccc actgaggccc cagagccatt ccttaaagca gcgcgccaca 79620

aactataacc cacaagccaa ttctggtacc cagcctgttt tgcacagcca gtgaactgac 79680

aatgatcttt tcatacagcc agaaaaacaa aacaaaacaa aaaacaacaa aaaaaaaccc 79740

caccattctg agcatgtgac ttccatgttc aagatgtctc atgttcagaa aggcccctgg 79800

aaaaggagga aggggagctg ggcacaaagg gagaccctct cagctgagct cctcccatcc 79860

agacattttc ctggacttcc tatccaatga cttcccttag cttcttatca gccacccctg 79920

tctgcccagg aggctggaag atgtggcctt ttaactgggc acagctctgt cctctatcat 79980

atcagggctc tgttcccaag gagggtagag agaatggaca ccaggtggac cctcagcagt 80040

ctgtgccaca gagggagtgt ttgcaatttc cagactaaaa gtccccatgt gcttgacggg 80100

gtatgtgact acaacgtgat gcttgacttt tcctcatatg accagagcca ctttgtccat 80160

ctggtacaat gtcagctatc tgctaggggc cctccaggat tcccagtcaa ttccatatct 80220

gcatcaccac cattggcact aaataaaata aaatactcaa gttcctgctg gtgagcatga 80280

gcagtgctac actgggccct tcaaccaagg tgacatgata atgactgaaa ataatcactg 80340

ccacttattg gggacgtctc atctgccagg catggtacaa agtgctttaa ataagcattc 80400

aacaatttca tgctgacaga agccctgtga gccagtggag ctactactat gcccattata 80460

caggggagaa aactgaggca gagagaggtt aggtaattcg ctcagcctca cacaaccaat 80520

aggtggtgga gccaggattt gggccccatc tgcctgactc tctagaggct ctatcttcca 80580

gtcttccaga gttgagtcta agccatgaat aggacaatta gacagcagag gaaacccatt 80640

cagccaccat gtgcatgaag agtaaggaat ttctgtcata cagaggggag tgaattcact 80700

gagctgagag ctgaggaacc attgatctga tggctgagac accactggga agactggaga 80760

ggcttttctg ggcatgcagt gccaggcaca ggaggagctg agggaagatg actaagaggt 80820

actggcaaag aattcagaaa ttctgatgga agctttacat gttaccatca catccatcca 80880

tctatccacc catccatcca cccatatctt cctccctcca cccaatcatg catacatcca 80940

gtcatctata caccacccac ccacccatcc atccatccat ccatcccttc atccatccca 81000

tcatccatcc aattatacat acatccaatc atatatctgt acataatcca ttcttccctc 81060

ggttcatcca tccatccatt catccatcca tccacccatc ccttccttca tccttcctat 81120

catccatcca atcatatatc tgtacataat ccattcttcc ctcggttcat ccatccatcc 81180

attcatccat ccatccaccc atcccttcct tcatccttcc tatcatccat ccaatcatac 81240

atatatccaa tcatacatct gcacatcacc agctcatcca tctatccatt tatccatcca 81300

tccttccttc catccatcat tcatccatca tacatacatc taaccataca tctctacatc 81360

attcattctt ccatcgattc atccaattat ccatcattcc ttcctccatc catcccatta 81420

tccatttgat catacatata tcatctatac atcatccatt catccatcca tccatccatc 81480

cacccatatc ttcatccaat caatcataca tacatcgaat catctacaca tcacccatcc 81540

atccatccat ccattcatct atccacccat ccatccatcc atccatccat tcatctatcc 81600

acccatccat ccatccatcc atccatccat ccatgtaacc atccagtcat atatccaatt 81660

acacatccat ccagttatac attcatacat gcatctaatc attcaattat acatacacac 81720

atccatataa ttctacatcc aattatacct ccatccaatt acacattcat acacccacct 81780

aataaattat taattcatat atccatccat ataattatac atcaattata catccatcta 81840

atcattcagt aattcaccca ccatccagtc atctatccaa taatacattc atccaatcat 81900

ccatccatcc atccacccat tcatccatcc atccgtccgt ccacccatca tggtatgagc 81960

catgatttac cacgatggtc ccctgtggac agcccaggtg gggcagaact gaagggaagc 82020

ccagggctgc ccccataaac atttgcctcc tttacatgga tgagaactag atccacatgt 82080

ataaatcctc atgatttgaa ggtgctttta ccaacattca ctcatgggat tctcccagga 82140

gctctaggag gaggcaggta gagttgaggt catctcacgc attttacaga tgaggaaacg 82200

gaggccctga gaggcaggtc caaggccacc tgaccagaaa gaagtggaac tgggacttga 82260

acccagccat cttgcccctt ggtcccatgc tctctagcct gtaactcctg cttcctggtg 82320

gggcatctcc aggaggaccc tatcggctgg ccatgggcct gccctggagt cttttgctct 82380

gtgtggccat ccttcctccc tcaggagagt gtgtgctccc agagcacagg ctgtatcttc 82440

tgagcatttt gtcccttccc agtacctagc actcagctct gtatacattg ggctctcaag 82500

aattctcaac cttccagagt gtaaggcctt gacctgctca gccctggata ctgcatgatg 82560

cattgataag cccataaaat aaccagggca gattgactcc cagtggccaa agtgccacag 82620

ggaagggaca attcagccct tctaggagga ggaggaggta gttttctcat ttctattaag 82680

gcaacaaaag ctgccttact aaggacattc ttggtggagg gcgtgactgt caaccactgt 82740

gatcatttgg gcctctcttg cccaggcttc ccattctgaa aggacagttt tattgtaggt 82800

acacatggct gccatttcaa atgtaactca cagcttgtcc atcagtcctt ggaggtcttt 82860

ctatgaaagg agcttggtgg cgtccaaaca ccacccaatg tccacttaga agtaagcacc 82920

gtgtctgccc tgagctgact ccttttccaa ggaaggggtt ggatcgctga gtgtttttcc 82980

aggtgtctac ttgttgttaa ttaatagcaa tgacaaagca gaaggttcat gcgtagctcg 83040

gctttctggt atttgctgcc cgttgaccaa tggaagataa acctttgcct caggtggcac 83100

cactagctgg ttaagaggca ctttgtcctt tcacccagga gcaaacgcac atcacctgtg 83160

tcctcatctg atggccctgg tgtggggcac agtcgtgttg gcagggaggg aggtggggtt 83220

ggtccccttt gtgggtttgt tgcgaggccg tgttccagct gtttccacag ggagcgattt 83280

tcagctccac aggacactgc tccccagttc ctcctgagaa caaaaggggg cgctggggag 83340

aggccaccgt tctgagggct cactgtatgt gttccagaat ctcccctgca gacccccact 83400

gaggacggat ctgaggaacc gggctctgaa acctctgatg ctaagagcac tccaacagcg 83460

gaaggtgggc cccccttcag acgccccctc catgcctcca gcctgtgctt agccgtgctt 83520

tgagcctccc tcctggctgc atctgctgct ccccctggct gagagatgtg ctcactcctt 83580

cggtgctttg caggacagcg tggtgggagc tgagccttgc gtcgatgcct tgcttgctgg 83640

tgctgagtgt gggcaccttc atcccgtgtg tgctctggag gcagccaccc ttggacagtc 83700

ccgcgcacag ctccacaaag ccccgctcca tacgattgtc ctcccacacc cccttcaaaa 83760

gccccctcct ctctctttct tcaggggcca gtaggtccca gagcagccat ttggctgagg 83820

gaaggggcag gtcagtggac atctgatctt ggtttagtat ccttcatttt gggggctctg 83880

ggtgtggcct gggcctctgg actttggcca cggtgtttgt tccagccctt ctcctaacct 83940

gtcctttcca gacactcggc atctaggtta ttagcacctc gcatactttc tgacatgctc 84000

ctcagtcctg attttgacca tcttctcttg cttcccatct gtgtcagtca agactgcatt 84060

tggctgtaag aaacagaaac cccaactaac tgtggcattt acatgaagag gtttactttt 84120

ctcacataat cagatgtcta gacttggcca gcacctcaag ggtcattgat gctctcctgt 84180

ctttattttc tgtcatcttt agtggttgga ttgttgcctc atggttacaa agtggctgct 84240

gcacttccag gcatcacatc tgcctttgaa gcaggaacaa gttgcaaagt aaagtggcca 84300

aaagggccct gaaactaaat gtgtcccctt aggaaagcag gagttttctt gcaagtggca 84360

atcttctgct tatgtctcat tggccagagc tgggtcttac ggccacccct tgctgcgagc 84420

aaggctggga cattgagcat tttgccgtcc aacctcttta gcagaataaa ccaaggggga 84480

agaacgttaa tagtggcttt tgagtcacta gttggcagta tctgcccctc tatctttcca 84540

tcctccccat ggagtttcaa ggttcctttc tcagtacttc ttcaggctct gcacgttcat 84600

ttggatcttg tgtcttgggg tgaaaaactg gcccaagtgt ctccccaagc atccaccttt 84660

ggattaattt ggaaaatggc tgtcaagtgc ccgcctcttg cttggtataa tgctacagct 84720

ttagaggacg cagcaggcat gggccttgcc gctgaggttc ttagcctcat gagaatatcc 84780

agatcagatt ctcttggctc cttcttagag ccagtgatgc aagacacttc ctgctcatct 84840

tgtcgggacg gttttacaag ttgcctgcca tcctgagaaa gtctacaaaa cgatgccaga 84900

cctcatgcca gcttcccaag ccttgactct cagtgctccc tcaacaggat tctggaagaa 84960

tctcccaaac aagtcgcaat gccctctgga ccctgtgcag gcatgagact caagagcatt 85020

ggctcccacc cctggtggag ggaacactgc tggggctggg atcttgcctg gttgctccgc 85080

ctgcacccaa gacaaccata attaaaatgt ccttcattga acttggaaag ccttcaaagc 85140

tgacaactcc ttatgtgtac ccggaaaggc ctgggagtgt gccagggcat tgctcgggag 85200

ggacgctgat ttggaagcat ttacctgatg agagactgac agcagctcct ggtagccgag 85260

ctttccctcc tgcctctgct gtgaaggtgg acccatccaa cagtcaaatg cctgactctg 85320

gacaggagcg gacctattta ttgccatgca agggactctg cacttttgaa ttgtgggtca 85380

tgggcttgga tttaggggtt agagctggga gaagtcttgg aagtcaccta gagatgacac 85440

tgccattttg cagatgagga aaccgtccaa tcaaaatgga ccaaggactt gcccaaagcc 85500

tcacagcaaa accataggcc cccgcactaa ccccagagtc cctgtgctgt cttaaggatc 85560

atatagttgt aagcaatcat ctggttttca gtatttcttc ttttaaaatg cctggggcca 85620

tgcccagcag tctgtttcac tgcagcgttt acacagggct gccgggcttt cctggtggat 85680

gagctgggcg gttcatgagc cagaaccact cagcagcatg tcagtgtgct tcctggggag 85740

ctggtagcag gggctccggg ccctacttca gggctgcttt ctggcatatg gctgatcccc 85800

tcctcactcc tcctccctgc attgctcctg cgcaagaagc aaaggtgagg ggctgggtat 85860

ggctcgtcct ggcccctcta aggtggatct cggtggtttc tagatgtgac agcaccctta 85920

gtggatgagg gagctcccgg caagcaggct gccgcgcagc cccacacgga gatcccagaa 85980

ggaaccacag gtgagggtaa gccccagaga cccccaggca gtcaaggccc tgctgggtgc 86040

cccagctgac ctgtgacaga agtgagggag ctttgcgtgt ttatcctcct gtggggcagg 86100

aacatgggtg gattctggct cctgggaatc ttgggttgtg agtagctcga tgccttggtg 86160

ctcagttacc tccctggctg cctgccagcc tctcagagca tttagggcct tctggacttc 86220

tagatgctcc tcatcttgcc tcagtcagcg cgtcagttcc agagacttct ctgcagggtt 86280

ttctggggca ggtggtggca gacccgtgcc ttcttgacac ctgaggtcag tccaccctcc 86340

tgctcagact gcccagcaca gggtcacctc ccaaggggtg gaccccaaga tcacctgagc 86400

gcacagaggg tgcagatgac tggaccacac cttttggtga tcttaatgag gtggtcccag 86460

aggagctcag acatgcaatc tagcatccag ttctgggact ctgtctcctt ttcaaacgta 86520

ttcatgtaga acaggcatga cgagaatgcc ttgtcaacat gggtgatggg gaatcaatca 86580

gacagggcgc cgggctcaag gctgcagtca cccaagagtg gctcagccca ccaggcccta 86640

ggaaacgcct gcacagcctg gagctcctgg agtcatttcc ttcatgtctt cttcactgca 86700

cttacgtaaa gatgccagcc attggtttgg tgatttggag ggtgcccagt tgcccaacaa 86760

gaaatgcaga agaggcctag ccaggatttc accagcagtg gagagtagag aagatgtggc 86820

cagaaaagag tttcctttcc ctcctaaaga tggtactccc tgcagctact ggggaagcct 86880

gcagcattct ctagggctct gtgtgttgag agcagcccca ccctggcccc ttctgagtgc 86940

atttctgctt tgtgacttga tccgtgaagt cccctgagat gggcagaggg gatgtcctcg 87000

aagctggggc agagcctcat ccttgaacgt gaaggacgtt tgaagactgt ggcatgatca 87060

caggatgaga tcacagggaa cttgagtttc tctcctcctc tcccttcaca gttatttcac 87120

tgagggaaat ccctcccctg cccagaatga aaactctagc caactcttga cttttccatc 87180

actccaaagt agttgaaagt acattagtct ccacagtggc aaaacagtgt gcaaaagcta 87240

aataattaga acagccagtc ccatgtgaca gtcaaagctt ctaactccat tcaaagttgc 87300

agccattccc ctcgagggct ggcagggagg ggaggggtaa gagaaacagg aaggttctta 87360

ctgagttggt cctggtgtga gctgcgtcac actccctgca gaggtttcaa ggagactctc 87420

tctctctctg tctccatggg gaccttattt gaattcttct actcttaccc cagcctgcca 87480

tctccagcta tcctcccctg aagagccctt ctgctgcgct ggattctggt ggccatgtca 87540

tctcctcggc cccgtgggag tctgaagatc tggctgcagc ctcacctctg aggtcctgct 87600

agttgccacc tcttaaacat gatctgaggc tcccatgcac tctgacctgt gcccacatgg 87660

ggcccacggg aaacacgctg gcaagcaaac tgtgggtgtg cagacggttc tcagggctgc 87720

agcacctgtc ctttgctctg cccccaaagc aaggccagcc catcttccat cctctagtgt 87780

tccttggtgg ggccctgacc acagtccacc aggtccctaa ccagagggga cacacaccag 87840

gtgtcctcaa tgtattgcct tgaaacagtt gtgctgggac tgtgatgggg ggtggccatg 87900

tagccacccc caccaccccc aagccactct ctccaaggaa atcctcctaa agatcccttt 87960

acatcctcca tgtggtgggg aggttctaga gttgggtgca tgtgtcttca gctactgaca 88020

atgcagacct tagttggcac ctcgctctgg cctatcctgt ttgctgttct tggcgctcca 88080

gtgaaactcc ccatgggcca tccagttggg gtgcagtgtg gccaccccct tgcaggttcc 88140

tgccttgctg gagagcacag ggccctcctg gctcttgtaa aacactcccc atggtacaga 88200

gaggccagca gtgatgtgag gcccaacctc cctccatggt gttcccaagc agctcccttt 88260

ctggggtcaa ggggtggcaa agacagtgca gcgtccaatt tctgactcaa gccgggcctg 88320

gctatcgcag ctctgcactg tgtgtgacag caaggcaact cacccagtgc cgtggcagtg 88380

accgtgtccg aggaagcctc ctcacaccct ctgtctcaag gactctggca tttagctgga 88440

cttgctgtag ctctgagcct ttctgccatt gccatcacct tgtcagaaac tcaggccgaa 88500

tctgcactca gagttgtgcc caggcagttg agccaacact tgctcagcga tattgtcaca 88560

tgacaaggca ctgtcaccac tgggcatcgt gggtagcgca gtgtcggctg gatggacccg 88620

gagggtgtct gtgtcatgct agtgctagtg atgggagccc cgtgagccca ttgcccgccc 88680

tcccatgccc tcagcagctg cctggggaca gccaatggcc tgggtgtttc tgaggctacc 88740

acatggcttc caggaaactc gagaaccttt ctctcccttg cctacactct tcacacaggc 88800

ctgtgctggc cagcggtggg gatccggcat tcctatctta ggtgcagaga gtgactgact 88860

cattgcaggc ctgggagata agactgatgg cccagccagc aagatgtatg gatttctcag 88920

aggcagtggc ctctgtcatt gtcctcagga aatgctggtg attctggtgg cctgaggtca 88980

atgcatgtca acgtggccaa cttgccttat aaactttttt tctggacaat tgcgtgcact 89040

gtcctgtaac agtgtcctgt tgtttatgat gcagaaatag gtgtttttaa agcctattga 89100

ttttggtact attaatgtgg tcaggaactt tctcagtctt tcttgtttgg ggtgagctgt 89160

ggcttcctaa acaggaaccc aagacacccc caaaagctgc tcaccagcac tgccagcctc 89220

cctcttacca agtagcaccc gttcaggaca ttctgcgaaa ggcatttgcc cagaagttgg 89280

gaggaaggaa atgtaacatt ttggggcacc taccatatgc caggcaccag gctaaacgtg 89340

ttcacacaaa ttctcttact aaccctcacc atccttctac aagacaaact agtatcttca 89400

tcttggggtt caagatgagg aaatggaggc tcagagaggt tgaatgaatg ccggtgcctg 89460

gatatgaacc ccatctgcct gactccgcaa cccaggcaaa gtctttcctt gaacttccca 89520

gcagccactg cttagacaca gcctccacaa ccatggctca gcagcaaatt gcttctctga 89580

cctcactcag cctgtgtgtc cttgttgagt gaggcattca ggaccctggt cccaaagtgg 89640

agaaagtctt tcctactagg tcatagctac acctgcatgt gggtgctgtg ccttttgttt 89700

agtgaacttt tatcaccagc atcctcagca atgacatttg cagagaagcc agagctgagg 89760

caccttggta ttcttgggat gtgactttcc tgaatgttta agggaaaatg cccgaaggta 89820

cagagagctt ggtttctagt aaacaataac tgtcttgctt ttacccccct tcatttgctg 89880

acacatacac cagctgaaga agcaggcatt ggagacaccc ccagcctgga agacgaagct 89940

gctggtcacg tgacccaagg tcagtgaact ggaattgcct gccatgactt gggggttggg 90000

gggagggaca tggggtgggc tctgccctga aaagatcatt tggacctgag ctctaattca 90060

caagtccagg agattttagg gagttggttc ttatcaaagg ttggctactc agatatagaa 90120

agagccctag tggttttttt ctaataccat ttctgggtaa ttcctaaggc atttagtgtt 90180

ctgaaagatg ctagccttgt ccagcctggg agttgagaat gaatgtctaa cagaaactct 90240

aggccgggcc tggtggctca cgcctctaat cccagcacta tgggagaccc aggtgggcag 90300

atcacctgag gtcaggagtt tgagaccagc ctggccaaca tgtgaaatcc tgtctcacta 90360

caaataaaaa aattagccgg gtgtggtggt aggtgcctat aatcccagct actcaggagg 90420

ctgaggcagg acaatcgctc gaacccagga ggtggacgtt gcagtgagcc gagatcgcat 90480

cattgcactc cagcctgggc aacaaaagca aaactccgtc tcaaaaaaaa aaaagaaact 90540

caaatatgtg tgacaggcga ttctcactgc aggctgccct gtggctgatc caggagcaag 90600

gccttaacca tgtcatcccc aagcgattgc ttgtaaactt tcttctgtgc agccttcaac 90660

ccttattatg attttcttct caggaaccaa actgctgtat tcaagaaagg cagctttgtg 90720

taatcattta tcataaatat cttaagaaaa atcctagaga ttcctaattt taggaaatgg 90780

gagacctatg gtactgatat aatgtgggct gggcttgttt tctgtcattt gctagataaa 90840

tgaacttgag agcctactgt aaaatgtgga agcttctaga ttgcagaagg gctggaaaga 90900

cactgttctt ttctcccgag tgatgggatc tgtccagtat ttagagctgc ctctgaggcc 90960

atctgattct aggagactct gcctcgttga ggatattttg aggcctaact acacattcct 91020

gcccccagag aggtcacagc ctatagcagg ctgatgtttc tcatgtcaca tggcacagaa 91080

aggcacattt tcgttctcag gctaacaaag agcttcaaaa actattagaa gggacagtgg 91140

ctataagaga agaacctcag tcaatgtgtg aaattaacta ggaacctggc tcctgtttct 91200

tttaggtcat gtttttcagc ttaggtaaaa ctagaggctt tgataaagca tgacctctag 91260

aaatcattgc ttttcataaa tggaagtggg tttgagtttt ttctactgat tgttagtgca 91320

ggtgatgtct acatgccccc agaacatatt ccatgcaaca aaaaaagccc aggtcaccgt 91380

ctttgctggg aacttgactt ttgtgctcac tgaattttaa gctttctgac agcagcctgg 91440

aatcatggag ggataaagta cctattagta agatggaaaa aggtgtttca ggttggagct 91500

gcagtctgtt gagagtaagc tatgggaagg cctgtatacg aggggtggac ttttcttctg 91560

taagtgtcca gagaccaggc ctcctgaaga gggcatgggg gcttaactta cctggactac 91620

tgtgtttaca atactcattt atcttgaact cctcctaacc cctgagaatt gctacattta 91680

gtatttgctg agtacttcct agcatcctag ggaatcaata gaacattctc ccaaccaggc 91740

tgggtgcggt ggctcatgtc tgtaatccca gcactttggg aggccaaggt aggcagatcc 91800

cttgaggcca ggagtgcaag actagcctgg ctgacatggt gaaaccccgt ctttactaaa 91860

aatacaaaag ttagccaggc atggtggtac acacctgtaa tcccagctac atgggaggag 91920

taggaggcag gagaattgct tgaacctggg aggtggaggt tgctgtgagc cgagatcatg 91980

ccactgcact ccagcctggg cgacagagtg agtgagactc tgtttaaaaa aaaaaaaaaa 92040

aagaacattc tcctaacctg gcttcttcct ccaggggtgt aattaatcat gtcagtttcc 92100

tcattgatac acacacacac acactacaat cctgtatcca ttacttttca aggtacattt 92160

actatttacg tttggggtcc ttgtctcttt tttaatagtg tttcttaaag tcttgtatta 92220

tatcagagta cagtaacatc ccagtcaaga gcactctagt aagctctagg aggaaagcga 92280

cttccggaag gcagtggaga cctgtcctgt tggggcagca taggggcagc ccctgcctct 92340

ggtcagttct ggcgctcagg ctcagggttg cctctgggct gttcttccca gagactgaca 92400

aagggctccc ataaggcacc tgcagagcct gtgagaagct gaagtcaatg ttttcctgac 92460

accagttgat ctgtgcagga tccattgatt taaccacctg ctgtgtggca tgcactgtgg 92520

tcgatgccag gaacaggaat tggaggggcc catgagcatg gccagtatca caggctggag 92580

gtgctgctgc gctctgaccg ggcctcttgg ggatgagccc atgtcaacca ccttgcctcc 92640

gatggggtcg ggcccacagg ttacctttgt gtgtccatga ccacaccttc ctccccgacc 92700

tcatccaaat ctctttcttt tccaagcccc tgaatccttc agggctgcag gttttgttta 92760

aagcagagct ggtgagttgc ataggttgtt gcattgggac tagatggggt gttcaaagag 92820

ttgggagtta aaaaacataa agggtattta ttaggagaac caaggagtgt aattctcctg 92880

ttcttaatat gcggccaggt taatgaatgt cacgtgaatg aaccagaaaa aaatgaagtg 92940

tgcccttgat cagctgggtt ggtgtgcagc aagctgtgtg accaggggac agcagtggtc 93000

ctgagggccg tcactgtctg ccgtgcagag cccttcctcc cacgggggcc tacctcacct 93060

gtgccaaggg cttgtctgtg gtcagtgacc tggatagatc tgaatggggc ttctttttcg 93120

aggagtctta tggcaggtct ctcagtaaag actccattct tgatgatcac acattttgga 93180

ttttccaaat ctgtcagaga atgggcttga ggcggggttt gtgggcacta gtttcactgg 93240

tttcatttac caaaaagggg agcagaagtc aagtatggtg gctcatccct gtaatcccag 93300

aggcaagaga attgcttgag cccaggagtt cgagaccagc ctgagcaaca taaggagacc 93360

ccgtctccac aaaaatgaaa aataacattt tagtcagacg tggtggcatg catctgtggt 93420

cccagctgct tgggagggtg agatgggagg gttgtttgag ccctggagtt aaagttgcaa 93480

tgagctgtga ttgcaccact gcactctagc ctgggtgaca gaacgagacc ctgtctcaaa 93540

aaaaaaaaaa aagaaagaaa gaaaggaaaa aaaaaactca tgcctgtaat cccagcactt 93600

tggggaccgg ggtgggcaga tcacgaggtc aggagatcaa gactatcctg gccaacatgg 93660

tgaaaccccg tttctactaa aaatacaaaa attagccagg tgtggtggca cgtgcctgta 93720

atcccagtta ctcgggaggc tgaggcagga gaatcgcttg aaccagggag tcagaggttg 93780

cagtgagctg agatcgtgcc actgtactcc agcctgggcg acagagtgag actctgtctc 93840

aaaccaaaaa aaaggggtgg ggggcggggg caggagaaca gtgagaggta gggagaggaa 93900

aggggattct cgctacaccc aaaccagata ccatctagag gctagaatct ttgggaggct 93960

caaattccct agaaagcagg agaagcttct gtagccctcc cgctttccca gtagattaag 94020

cccagggcgg ctccagatgt gtgacatgct ctgtgcccaa ccagagccca tcataggcag 94080

aggaataaca cccacaccag aagggccctc ggaggtcacc acgtccaaga accctcttta 94140

cagatgagga aactgaggcc cagagagggg agagccacct agcgagctgg tggcggctag 94200

accaggagag ctgtcattcc aagcaagcaa aggcaacgag acgagcccag agctgtgctc 94260

ccatctcttt gttagggggc ctgggatgcc ctctcagtgt cattttgtcc aggatgatgc 94320

tccctctctt aagcgattaa tgcgcccttg ctaacctttt gctatcgctg cctcttcaaa 94380

ccagaggagt tgagagttcc gggccggcag aggaaggcgc ctgaaaggcc cctggccaat 94440

gagattagcg cccacgtcca gcctggaccc tgcggagagg cctctggggt ctctgggccg 94500

tgcctcgggg agaaagagcc agaagctccc gtcccgctga ccgcgagcct tcctcagcac 94560

cgtcccgttt gcccagcgcc tcctccaaca ggaggccctc aggagccctc cctggagtgg 94620

ggacaaaaag gcggggactg ggccgagaag ggtccggcct ttccgaagcc cgccaccact 94680

gcgtatctcc acacagagcc tgaaagtggt aaggtggtcc aggaaggctt cctccgagag 94740

ccaggccccc caggtctgag ccaccagctc atgtccggca tgcctggggc tcccctcctg 94800

cctgagggcc ccagagaggc cacacgccaa ccttcgggga caggacctga ggacacagag 94860

ggcggccgcc acgcccctga gctgctcaag caccagcttc taggagacct gcaccaggag 94920

gggccgccgc tgaagggggc agggggcaaa gagaggccgg ggagcaagga ggaggtggat 94980

gaagaccgcg acgtcgatga gtcctccccc caagactccc ctccctccaa ggcctcccca 95040

gcccaagatg ggcggcctcc ccagacagcc gccagagaag ccaccagcat cccaggcttc 95100

ccagcggagg gtgccatccc cctccctgtg gatttcctct ccaaagtttc cacagagatc 95160

ccagcctcag agcccgacgg gcccagtgta gggcgggcca aagggcagga tgcccccctg 95220

gagttcacgt ttcacgtgga aatcacaccc aacgtgcaga aggagcaggc gcactcggag 95280

gagcatttgg gaagggctgc atttccaggg gcccctggag aggggccaga ggcccggggc 95340

ccctctttgg gagaggacac aaaagaggct gaccttccag agccctctga aaagcagcct 95400

gctgctgctc cgcgggggaa gcccgtcagc cgggtccctc aactcaaagg tctgtgtctt 95460

gagcttcttc gctccttccc tggggacctc ccaggcctcc caggctgcgg gcactgccac 95520

tgagcttcca ggcctcccga ctcctgctgc ttctgacgtt cctaggacgc cactaaatcg 95580

acacctgggt gcagctgctc cactccctcg gcctcctccc gtgctcaggc tgtggccgca 95640

cgcgcccctc acgcttgccc gccactctgc atgtcaccag cacccccgct ccgtgctacc 95700

caccttgttt gactctctgg ccacttgatt tgtccacaac ggcccatcag cccacaggag 95760

gtttggtggg tgccttccac cgacaggatg acgggtgccc tcatggtgtc tagaactctc 95820

caaccctccc atgtaggcat aagcagcccc actttgcaga tgaggaaacg gaggctcaga 95880

gaagtacagt aacttgccga aggccaatga gtagtaagtg acagagccag gtttgggatc 95940

caggtaggtt gtctctgaaa gacacgcctg tcctgcatcc cacaacgcct cccaggaggt 96000

gctggagtgt ggacgcctaa cacagagatg tgcagggcac acacagcagg tgacacacac 96060

agcatccaga ggtggcccag agctcatgct gtgcctttgg cccagtgccc tgcccccacc 96120

cactctgcct tgtggcagga agacaaggag cagacacaag atctccctgg tccacatgcc 96180

accacctccc tctgcagagg acaaggggat cctcatgctg gcattggagg gggttgagca 96240

gggcccacct tgagccctca ggagcacgac cacagcagcc ctgcagggag ggattggtgg 96300

gaggagagtc ccaagtatca gggagaggag agttggtgtc ccacaggaga cctcagagcc 96360

acaaggcgag cttgttcata aatttgggac ccttagcatt tcacagttat ttgcagagcc 96420

cagaaatgga tgttactgaa gctcacagtt gcaagcatct gttaaatttt tattagattt 96480

tacttttagg gaaaactttg aaatgctata aagaagcctg tgtttaaaag ttaagacaga 96540

ggctgggggc gatggctcac gcctgtaatc tcagcacttt gggaggccaa ggcaggtgga 96600

tcatttgagg ttaggagttc gagaccagcc tggccaacat ggtgagaccc tgtctctact 96660

aaaattacaa aaaattagct gggcgtggtg gcgggcacct gtagtcccag ctactgggga 96720

ggctgaagca ggataagtgc ttgaacccag gaggcagagg ttacagtgag ccaagatcac 96780

accactgtac cctaagcctg ggcgacagag tgagactctg tctcaaaaaa taaaataaaa 96840

taaagttaag agagaaaaaa atatatccta tatcctttgt taaattccaa aacagtaggg 96900

gacaaataac tgacttgaca ggttactaca atatttcctg aaatgatgtt ttcttgaata 96960

ctggcctact agaggttcat aggtgtgttt ggattaaaaa agagttccat ggcccagtga 97020

ctgggggaaa aaaataaaag actaaagtaa gttaaacagg cttttctgct gcaggacttg 97080

tcagagcctt taatgtacta atggccattg tgaccctctg agaaggtcac agagtgggtt 97140

tcccaaactt acttgattct acctgctaac atttcctgga ggaagtttgg gaaatgccga 97200

tttagcagat tcttttgttg tgccgtggat ggtgctggtt gatgtgggca aaacaaagaa 97260

cacgtgagtc agatccgcct ggggctctta ctaaagtgca ggttcccagg tgccacttta 97320

ggcttacaga cccagttgtg gggtaagcct gggagtcttt tagcaggtga ttctgccaca 97380

tagtatagtt ggaaaacctc tgggcatact cattgctggt ccctctagaa atccaggtga 97440

caatagccaa tgagaagctc caagagaccc agttgtccat ggggtagagg gaatgtgata 97500

ttgaaaccaa agaagaaaat ctatgatcag ttttcagcag tgactgtcaa gagaaggaga 97560

agggtgagtt agcgctgatg ctggctgaca ggtcagcggg ttggtttcac caaggagtgt 97620

gatgaaggct gatgttgtct gtgggaatgt atgatggtaa ctggtttgta gctaatttgg 97680

ggaagcagtg agaattcgtg ccctttgaag accagtaagt ggcaagaaac ccaccaggcc 97740

tggctcaggg ctgggctggg cttggctcgt ctcagagcag ctggggctgg tggccaaagc 97800

caccattagt gaggggcagg ccctgggggt acaaccagca actaggggac aaagacaacc 97860

ctgccagcct ctcctattct ggaggcgtgt gaccagaaat ggagatgggt tggtcagcat 97920

aagatggcca ggaaggtgga aatcaggact gctggcaatc tagccacatg ggcaggggag 97980

ccgggtggtt ccaggcagtt tccaaggcca agagggtgag caggcacctc acagggaatc 98040

agggccaagc ctggctgcag tgtggagaca atgcacccac ccccatcctt ggatcttgca 98100

ggaggctggg tcctcactga gctaccaaca tccatggccc tgaggctttt aaaacaccca 98160

tccatggagt ggggctggtc ccagtggggt gaggctgacc ctggcagaaa cagggcagga 98220

gcctgtgggt tagggagact gcaccttcct tagatagcct ccatgccatc atgtccccgt 98280

gacagtttct gctgcgtccc ctctgcatgg tcccaccctc ggccagcctg ctgccccctc 98340

ttgccaggtt gcgctaatca gtgaccccag tgtgctgtgt tgatactaac aatgcgaggc 98400

ctagcagatt caagggaaaa gagaaccaac tgggtttcca ccagacccaa ctaaacaaac 98460

atggacctat cccagagaaa tccagcttca ccacagctgg ctttctgtga acagtgaaaa 98520

tggagtgtga caagcattct tattttatat tttatcagct cgcatggtca gtaaaagcaa 98580

agacgggact ggaagcgatg acaaaaaagc caaggtaagc tgacgatgcc acggagctct 98640

gcagctggtc aagtttacag agaagctgtg ctttatgtct gattcattct catatataat 98700

gtggggagta tttgtcacta aagtacagct gtcatttaaa gtgctttgta ttttggggca 98760

ggcttttaaa aagtccagca tttattagtt ttgatactta ccccagggaa gagcagttgg 98820

caggttcatg aagtcatgct cctaattcca gctttcttag tgtactttca gtgagaccct 98880

gacagtaaat gaaggtgtgt ttgaaaacca aacccaggac agtaaatgaa ggtgtgtttg 98940

aaaaccagcc ctaggacagt aaatgaagcc atcttctcac tgcataaact gcacccagat 99000

cttcgcccat ccttctcagt atttcacttc acccattgtt tactgtctca atgactgggg 99060

aaatgtctgg ggaaatgctc ccgtaattgc acagtggcgt ttttcctgga aaatcccacc 99120

atggctctag ataagaccta tttttcttaa aggtatctaa aatttccagc ataaattctg 99180

tctgaaacac ctgaatttta atcagtactg gagcccggag ggcatctcca gttgccacat 99240

agctctgagc attcagtggt gtgttgaggg ctgctcccgg aagtgcctgc agagtcaggg 99300

ctccccagcc tcatctagtg aggcagtgga agggcctgtg gggatttgga gagctggcct 99360

gggtctctga agtgatagtg acagctgctt gtcaatcacg gtgcacattt agtgctgggg 99420

gcagggggca gggaatacca gcctcatgca tgcatgcatt catttgttcc ttccttcatt 99480

cattcattca gtacacatgg gtacaacatc cctgccctgg agttgcccag agtctaggga 99540

ggggaaagat ctattaccct gggcctcggc cagctgggga gtgctgctgg tggagagggg 99600

ccgtgtgcag cgagggaagg aggagtcgtc aataccccca ccccagcttt gctttcttgt 99660

catcagcccc agggccccag cctgtgtccc tcctctccca ttgctacttc atctcctggg 99720

tcctccttac caagcctgac cacacagagg gccttggccg cttccatggg gaattggaaa 99780

gcaataagat agcatcccct agaagcccag tgaagtctgg gacaggaccc ttctctgagc 99840

tctgacttgc tcttggaaac acttcgaggc ttagcctccc cactttgttt cccgagagtg 99900

tgacctgttc ccctccaaac acccccttct cctccagggc catgcccacc cgtcaaaatc 99960

ccccacgggc aggacgaact gtgggtgtca gtcaccatct atcctgcatc ctggttccag 100020

ggcccccccc agccccgcct ccatagggac aggcgtgcag acacccgtcc ctggctgctt 100080

cctcttgtgg aatgggttca aaagtaagca gtgttgttta cactgacaaa ctgaaaaaaa 100140

aagaaaaaga gataacattg gaggcttggc acagtggctc atgcctgtaa tcccagcact 100200

ttgggaggct aaggtgggag gatgtcccca gcccaagagt tctagaccag cctgggcaac 100260

atagcaagac cccatctcaa aaaaaaaatt taattggcca ggcagaggtg ggaggatcac 100320

ttgaacccaa agggtggagg ctgcagtgag ccgtgatggc accactgcac tccagccagg 100380

gcaacagagg gagaccctgt ctctaaaaca aacaaacaaa caaacaaaca aaagagttaa 100440

cattggccag attaggattc accagatagt gttaatatta gtttgatttg agactttaat 100500

cagaaagcac atgtgtggtg ggggtgggtg taacctaagt caggtagaat ctttccaact 100560

tggggggggc acactcctga ttgtagccat atgagtctgt cagtgtggtg gaagaggcca 100620

tgggttaatg ggcaggtaaa aaagcacctt gcctggaatt gagtagaaag taaggccctt 100680

cagaccccgt gacacacttg gggacatttt cttgagtaac atcctaagat tcatgtacct 100740

tgatgatctc catcaactta ctcatgtgaa gcacctttaa accagtcgtc tccaaattca 100800

ggggcacagt aacatccaac aggctggaga aagaacgtac tagaacttcc attccttttt 100860

catgtcctct tctaaaagct ttgtcagggc caggcgcggt ggctcacgcc tgtaatccca 100920

gcactttggg aggccgagac gggtggatca cgaggtcagg agatcgagac catcctggct 100980

aacacagtga aaccccatct ctactaaaaa tacaaaaaaa cgagccgggc gtggtggtgg 101040

gcgcctgtag tcccagctac tcgggaggct gaggcaggag aatggcgtga acccaggagg 101100

cagagcttgc agtgagccga gattgcacca ctgcagtcca gcctgggcga cagagcgaga 101160

ctccgtctca aaaaagaaaa agaaaaagaa aaagaactgt gattggggag gacggtcact 101220

ttcctgttct tactgatcag aagggatatt aagggtacct gattcaaaca gcctggagat 101280

cactgctttc aaccattacc tgccttattt atttttagtt actgtccttt tttcagtttg 101340

tttccctcct ccatgtgctg acttttattt tgattttatt tatgtttatg tttaagacat 101400

ccacacgttc ctctgctaaa accttgaaaa ataggccttg ccttagcccc aaacacccca 101460

ctcctggtag ctcagaccct ctgatccaac cctccagccc tgctgtgtgc ccagagccac 101520

cttcctctcc taaatacgtc tcttctgtca cttcccgaac tggcagttct ggagcaaagg 101580

agatgaaact caaggtaagg aaaccacctt tgaaaagaac caggctgctc tgctgtggtt 101640

tgcaaatgtg gggtttgttt atttgttttt tagcctcaaa gacctttctt caaatgagtt 101700

ctggcataga agcaccgtgt aaaatagtta gaattctggg caaaggggaa aagagagctg 101760

ggggccatcc ctctcagcac cccacaggct ctcatagcag cagctcctaa gacacctggt 101820

gggaccttgg tttcgaaatc gctactctaa ggctgggcac ggtggctcac acctgtaatc 101880

ccagctcttt aggaggccga ggagggtgga tcacctgaga tcaggagttc gagaccagcc 101940

tggctaacat ggcaaaaccc tgtctctact aaaaatacaa aaattagccg ggcgtggtgg 102000

tatgcgtggt ggtaatcgca gctactcggg aggctgaggc acaaggattg cttgaacccc 102060

agaggcagag gttgtagtta gctccagctt gggcgacaga gcaagaccct gtcgcaaaaa 102120

ttgtttaaaa aacaaaccca aaattgctac tctcattggg ttcctttgcc cattcctgat 102180

tttggcaaga gaaatgcttc cagattgccc tgatctgggt aggacagcat cacgccatag 102240

caacactgcc ccgtgagctc actgccccct caactagctt gtggtccttg gttaatgtca 102300

gtttcttttt tgagtttgtg ttatgtctaa gggtcatctg ctgggtaacg gaacccaggg 102360

actgccctag tccctagact gtgccatgcc cgactctgcc agctttgtca gtgatgctgg 102420

tgctcgcctc ctcgggtgct cgcctggtct gagcacaccc aaggagttct tgaggcctta 102480

gggttgtttg cgagagaatg aaagaacacg acctagctct ctttagcatc cttggtcagg 102540

ttcaacactg cccccagggg cctctggtgg agccaaccac catcagccaa ataaatccat 102600

aattagagtc agaaaatgga tgtctgcata tgtgtagtgc actaatgtcc tgccgatgat 102660

tgacatggag tggagagtga cctgatcatt gctgtgagct ctgctggcct tggcacaact 102720

catgctgata actaatgcac acagttcctc tgggaggaaa tgtcctcagg gaacttggag 102780

tttgggtggg gatgtgggtt tgtgtgccca gcaagccctt gtggttgtag cagacactag 102840

tggcatctag gaggcaaagg gtcaccccag tcttagccac gttttgagtc aaggtggcgg 102900

agtggggctg gtgttgactc ttggtggcag taacttttcc caatggtgaa aaacccctct 102960

atcatgtttc atttacaggg ggctgatggt aaaacgaaga tcgccacacc gcggggagca 103020

gcccctccag gccagaaggg ccaggccaac gccaccagga ttccagcaaa aaccccgccc 103080

gctccaaaga caccacccag ctctggtaag aagaacgttc tcttgaatct tagaggaagc 103140

tgaagctctc agaggtacag ccttcatttt aggaggcctt aggccactga gaatgaataa 103200

cccctggcag ctggtcagca gcttgcagtt tactaagcac tggagtcttc attgccttct 103260

cagtcctttt gatttctgag gcaaatgttg aatccctacc tttttttttt tttttctttt 103320

gagacagagt ttcgcttttg ttatccaggc cggagtgcag tggtgtgatc tcagctcact 103380

gcatcctcca cctcccaggt tcaagcgatt ctcctacctc agcctcccta gtagctggga 103440

ttacaggcac ctgccactat gcccggctaa ttttttgtat ttttagtaga gacagggttt 103500

caccatgttg gccaggctgg tctcgaacgc ctgacctcag gtgatccacc tgcctcggcc 103560

tcccaaagtg ctgggattac aggcatgagc caccactccc agcctgaatc ctcacttttt 103620

atcaatgaag aaattgaggc tgattctgca gcatgataaa aaaaaataca gaaaaaggaa 103680

aaaaaagaaa gaaatcgagc ctctgagagt ttgcttgact gagtctaacc agctcatttt 103740

aaacccgagg aaaatgcagt cacatgacta ctaagtggca gctctcggag cctctctggc 103800

cccaagtcca gggttccata gaggcagccc cagcatggca tgttttcagt ccccaaatga 103860

gactctggag acaaatgtct ctggagacag agcagcagcc tggataagtc acaatgggtg 103920

acgtcactca gggctcaacc cctgggcagc ttaacttgct agggacgtta ggagtctgct 103980

gcaaaacctg agggtcttag ctgagcagtc acaggctggg cccgttgccc tgggctcctg 104040

tgagtaaaac ccagtcaatt ttgagtaccc agtaaggcat ccattgagtt attttgcagc 104100

caggagtgct attaagaaca gtcgcggctg ggcgtggtgg ctcatgcctg taatcccagc 104160

actttgggag gccaaggtgg gcggatcacc tgaggtcagg agttcgagac cagcttggcc 104220

aacatggcaa aaccccgtct ctaataaaaa tacaaaataa ttagctgggc gtggtggcgg 104280

gcgcctgtaa tcccagcttc tcaggagggt gaggaaggag aatcacttga acccaggagg 104340

cagaggttgc agtgagctga gatcgcacca ttgcactcca gcctggatga caaaagtgag 104400

attccttctc aaaaaaaaaa aaaaaaaaac agtcgtcctc tttggggatt agggacagcc 104460

tgcctgcctg cccgagcact tctctcttcc attgccccag tgaagtattc caggcccctg 104520

ggtttagact ctgcaccatg taggggtgtc tgacctgcac ttgctccttg gtggcacggg 104580

cagcctatgg cacttgctgc gggctgtgac caaagcctgg cctggatctt ggatcttggt 104640

gactctgctt ctccctggcc tgagggagct gcccagagcc tgcccaccac ctgctgcgtg 104700

tctttgcggt ggcatttctc gcacacatgc cgtgcagtgg cacccccaag gatggccatt 104760

cactaaggcc cattgttttt gtcttttcgc ttcgtgtttt ctggcctggt gtttttctca 104820

tatacatgtg atccagggat aattcccaga attttgacag gattttaagt agcgtttgga 104880

tcctgctgtt tttttttcac ttaacatcgg gccagttgac tcacactctg ttttttgttg 104940

ttgttttttt gagacggagt ctcactgtgt cacccaggct gaagtgcagt ggcacaatct 105000

tggcatactg caacctctgc ttcccaaatt caagcagttt tcctgcctca gcctcctgag 105060

tagctgggac tacaggcaca ggccaccacg ccctgctaat ttttgtattt ttagtaaaga 105120

cagggtttca ccattttggc cagcctagtc tcgaactcct gacctcaagt gatccgccca 105180

cctcggcctc ccaaagtgct gggattacag gggactcaca ctttgtaaca acctgaaaca 105240

acgtgatgca tttccctttg ggtcttacct gctcttcggt ggctgcctgc aggtggagag 105300

accctccccc ttgggcccct cgaccttgtt tcagaatggg gcccctgctg ggccagctgt 105360

gggtgcctgc cacgtgaagg actcattaag gccctgttta agcctgatga taataaggct 105420

ttcgtggatt tttctcttta agcgactaag caagtccaga gaagaccacc ccctgcaggg 105480

cccagatctg agagaggtac tcgggagcct acttcgctgg gagcagcctc cctttgcgtg 105540

tgtggccatt cactggcttg tgtttctaga gccgggagga cccttttctg caatgcaggg 105600

ttcacacagg gttcgcagcc tgaagatgga gcagtccgaa ttctcttccc tgtgcagttt 105660

gcgcagctgt gtttgtctga tgggctttct aatcctgtgt gctctccttg acttcaggga 105720

caatggcatt acaggcatga gccaccatgc ctggctgtct ccctatgttt cagatgaaga 105780

cataggctta aggaggtcag gtgacttgcc cacgaccact ctgtaaataa gaggcatgaa 105840

aagtatttgg agccaccacc accaagccca ctggtcaccc tgggtctctg aagtcaggga 105900

ggcaggagga tgggaggtct gaggaggcag agaggctgag cctggaggcc ctggaggccg 105960

aggccccatc tgttgtttcc ttatgtggaa aataagaggc ttcgtttgtc ctattgccac 106020

agagcgtact acttcaggaa catccaagac atggaaatcc gcagggcacg gtggctcacg 106080

tctataatcc cggcactttg ggaggttgag gtgggagaat cgcttgaggc cagaagttca 106140

agaccagcct gagcaacata gtcagacccc gtctctataa aaaacattat ttttaaaaaa 106200

gacatggaag tcaaattcta aaaactggtg ctggctgggt gcggtggctc atgcctataa 106260

tcccagcact ttgggaggcc gaggcgggtg gatcacctga ggtcaggagt tcaagaccag 106320

cctggccaac atggtaaaac ctctactaaa gaaatcttta ctgaaaatac aaaaatccag 106380

tctctactaa aataagtctc tactaaaaat acaaaaatta gccaggcgtg gtgctgcaca 106440

cctgtaatat cagctactcg ggaggctgag gcaggagact cgcttgatcc catgcagcgg 106500

aggttgcagt gagccgagat cacgccattg cactccagcc tgggcatcag aataagactc 106560

cgtctcaaaa aaaaaaccac aaaaaaacaa aacaacaaca aaagaaaact agtgcttatt 106620

cgtcactggc caagctgccc attggctaca tgggtgcttc aaagagctgc ccttctccag 106680

gtctggccag caggtatgtg ttacagcaaa tgcctggggc agcggcaggg gcattgctgc 106740

gggaagcttc tggacttgca ggaaagctaa gttctcagac tgcaggggag ctaagcacac 106800

ctcggcacag ggtgaggcct gcggttctca gacttcagtc tttgtggagc ttgagaaaaa 106860

tgaggctttg caggtcccac ccctagagat tctgctctat ccactcttga aggggatcga 106920

gaaatttgca ttttgcaact cccactttcc tccttgaaag ctccggagat tctgacgcag 106980

ggttccgtgg gccacacttt ggaaaataca gacccatgag atagaatacc agactgttga 107040

agtgtaacgg gggcctggga agtgcagtaa cagaagcaag tttgagggta aaggacaccc 107100

agaggaggga gggacagcat ctgcatggag aggagaagag accccccagc agcttccagg 107160

gtgttggaag ggtgcgctag taactgctat gcatggcagg tggggaactg tacgtcaggg 107220

cacagcagca tgaagcggta tggctcgtgt ggacagctag ggacaggcag gcgtggagca 107280

ggcatcctgt tctgaaggcc aaatcccaca gaggagccag ggtgctggca ggagccctga 107340

actagccgaa cagctgaaca gctgaacatt caccctgtgg ggaaagggtc agaagcgtcc 107400

aggcttgagg gcacagctgg gtctcgtcac tgcatcaccc ttatttagga taaaggccct 107460

gaagaattgt attagaggtt ggcaaagcat atctaccacc tcctggagcc acgctggccg 107520

cagggattat aattatttcc attttcaaat taaggcctct gagctcagag aggggaagtt 107580

acttgtctga ggccacacag cttgttggag cccatctctt gacccaaaga ctgtggagcc 107640

gagttggcca cctctctggg agcgggtatt ggatggtggt tgatggtttt ccattgcttt 107700

cctgggaaag gggtgtctct gtccctaagc aaaaaggcag ggaggaagag atgcttcccc 107760

agggcagccg tctgctgtag ctgcgcttcc aacctggctt ccacctgcct aacccagtgg 107820

tgagcctggg aatggaccca cgggacaggc agcccccagg gccttttctg accccaccca 107880

ctcgagtcct ggcttcactc ccttccttcc ttcccaggtg aacctccaaa atcaggggat 107940

cgcagcggct acagcagccc cggctcccca ggcactcccg gcagccgctc ccgcaccccg 108000

tcccttccaa ccccacccac ccgggagccc aagaaggtgg cagtggtccg tactccaccc 108060

aagtcgccgt cttccgccaa gagccgcctg cagacagccc ccgtgcccat gccagacctg 108120

aagaatgtca agtccaagat cggctccact gagaacctga agcaccagcc gggaggcggg 108180

aaggtgagag tggctggctg cgcgtggagg tgtggggggc tgcgcctgga ggggtagggc 108240

tgtgcctgga agggtagggc tgcgcctgga ggtgcgcggt tgagcgtgga gtcgtgggac 108300

tgtgcatgga ggtgtggggc tccccgcacc tgagcacccc cgcataacac cccagtcccc 108360

tctggaccct cttcaaggaa gttcagttct ttattgggct ctccactaca ctgtgagtgc 108420

cctcctcagg cgagagaacg ttctggctct tctcttgccc cttcagcccc tgttaatcgg 108480

acagagatgg cagggctgtg tctccacggc cggaggctct catagtcagg gcacccacag 108540

cggttcccca cctgccttct gggcagaata cactgccacc cataggtcag catctccact 108600

cgtgggccat ctgcttaggt tgggttcctc tggattctgg ggagattggg ggttctgttt 108660

tgatcagctg attcttctgg gagcaagtgg gtgctcgcga gctctccagc ttcctaaagg 108720

tggagaagca cagacttcgg gggcctggcc tggatccctt tccccattcc tgtccctgtg 108780

cccctcgtct gggtgcgtta gggctgacat acaaagcacc acagtgaaag aacagcagta 108840

tgcctcctca ctagccaggt gtgggcgggt gggtttcttc caaggcctct ctgtggccgt 108900

gggtagccac ctctgtcctg caccgctgca gtcttccctc tgtgtgtgct cctggtagct 108960

ctgcgcatgc tcatcttctt ataagaacac catggcagct gggcgtagtg gctcacgcct 109020

ataatcccag cactttggga ggctgaggca ggcagatcac gaggtcagga gttcgagacc 109080

aacctgacca acagggtgaa acctcgtctc tactaaaaat acaaaaatac ctgggcgtgg 109140

tggtggtgcg cgcctataat cccagctact caggaggctg aggcaggaga atcgcttgaa 109200

cccaggaggc agaggttgca gtgagccgag atagtgccac tgcactccag tttgagcaac 109260

agagcgagac tctgtctcaa aacaaaataa aacaaaccaa aaaaacccac catggcttag 109320

ggcccagcct gatgacctca tttttcactt agtcacctct ctaaaggccc tgtctccaaa 109380

tagagtcaca ttctaaggta cgggggtgtt ggggaggggg gttagggctt caacatgtga 109440

atttgcgggg accacaattc agcccaggac cccgctcccg ccacccagca ctggggagct 109500

ggggaagggt gaagaggagg ctgggggtga gaaggaccac agctcactct gaggctgcag 109560

atgtgctggg ccttctgggc actgggcctc ggggagctag ggggctttct ggaaccctgg 109620

gcctgcgtgt cagcttgcct cccccacgca ggcgctctcc acaccattga agttcttatc 109680

acttgggtct gagcctgggg catttggacg gagggtggcc accagtgcac atgggcacct 109740

tgcctcaaac cctgccacct ccccccaccc aggatccccc ctgcccccga acaagcttgt 109800

gagtgcagtg tcacatccca tcgggatgga aatggacggt cgggttaaaa gggacgcatg 109860

tgtagaccct gcctctgtgc atcaggcctc ttttgagagt ccctgcgtgc caggcggtgc 109920

acagaggtgg agaagactcg gctgtgcccc agagcacctc ctctcatcga ggaaaggaca 109980

gacagtggct cccctgtggc tgtggggaca agggcagagc tccctggaac acaggaggga 110040

gggaaggaag agaacatctc agaatctccc tcctgatggc aaacgatccg ggttaaatta 110100

aggtccggcc ttttcctgct caggcatgtg gagcttgtag tggaagaggc tctctggacc 110160

ctcatccacc acagtggcct ggttagagac cttggggaaa taactcacag gtgacccagg 110220

gcctctgtcc tgtaccgcag ctgagggaaa ctgtcctgcg cttccactgg ggacaatgcg 110280

ctccctcgtc tccagacttt ccagtcctca ttcggttctc gaaagtcgcc tccagaagcc 110340

ccatcttggg accaccgtga ctttcattct ccagggtgcc tggccttggt gctgcccaag 110400

accccagagg ggccctcact ggcctttcct gccttttctc ccattgccca cccatgcacc 110460

cccatcctgc tccagcaccc agactgccat ccaggatctc ctcaagtcac ataacaagca 110520

gcacccacaa ggtgctccct tccccctagc ctgaatctgc tgctccccgt ctggggttcc 110580

ccgcccatgc acctctgggg gcccctgggt tctgccatac cctgccctgt gtcccatggt 110640

ggggaatgtc cttctctcct tatctcttcc cttcccttaa atccaagttc agttgccatc 110700

tcctccagga agtcttcctg gattcccctc tctcttctta aagcccctgt aaactctgac 110760

cacactgagc atgtgtctgc tgctccctag tctgggccat gagtgagggt ggaggccaag 110820

tctcatgcat ttttgcagcc cccacaagac tgtgcaggtg gccggccctc attgaatgcg 110880

gggttaattt aactcagcct ctgtgtgagt ggatgattca ggttgccaga gacagaaccc 110940

tcagcttagc atgggaagta gcttccctgt tgaccctgag ttcatctgag gttggcttgg 111000

aaggtgtggg caccatttgg cccagttctt acagctctga agagagcagc aggaatgggg 111060

ctgagcaggg aagacaactt tccattgaag gcccctttca gggccagaac tgtccctccc 111120

accctgcagc tgccctgcct ctgcccatga ggggtgagag tcaggcgacc tcatgccaag 111180

tgtagaaagg ggcagatggg agccccaggt tatgacgtca ccatgctggg tggaggcagc 111240

acgtccaaat ctactaaagg gttaaaggag aaagggtgac ttgacttttc ttgagatatt 111300

ttgggggacg aagtgtggaa aagtggcaga ggacacagtc acagcctccc ttaaatgcca 111360

ggaaagccta gaaaaattgt ctgaaactaa acctcagcca taacaaagac caacacatga 111420

atctccagga aaaaagaaaa agaaaaatgt catacagggt ccatgcacaa gagcctttaa 111480

aatgacccgc tgaagggtgt caggcctcct cctcctggac tggcctgaag gctccacgag 111540

cttttgctga gacctttggg tccctgtggc ctcatgtagt acccagtatg cagtaagtgc 111600

tcaataaatg tttggctaca aaagaggcaa agctggcgga gtctgaagaa tccctcaacc 111660

gtgccggaac agatgctaac accaaaggga aaagagcagg agccaagtca cgtttgggaa 111720

cctgcagagg ctgaaaactg ccgcagattg ctgcaaatca ttgggggaaa aacggaaaac 111780

gtctgttttc ccctttgtgc ttttctctgt tttcttcttt gtgcttttct ctgttttcag 111840

gatttgctac agtgaacata gattgctttg gggccccaaa tggaattatt ttgaaaggaa 111900

aatgcagata atcaggtggc cgcactggag caccagctgg gtaggggtag agattgcagg 111960

caaggaggag gagctgggtg gggtgccagg caggaagagc ccgtaggccc cgccgatctt 112020

gtgggagtcg tgggtggcag tgttccctcc agactgtaaa agggagcacc tggcgggaag 112080

agggaattct tttaaacatc attccagtgc ccgagcctcc tggacctgtt gtcatcttga 112140

ggtgggcctc ccctgggtga ctctagtgtg cagcctggct gagactcagt ggccctgggt 112200

tcttactgct gacacctacc ctcaacctca accactgcgg cctcctgtgc accctgatcc 112260

agtggctcat tttccacttt cagtcccagc tctatcccta tttgcagttt ccaagtgcct 112320

ggtcctcagt cagctcagac ccagccaggc cagcccctgg ttcccacatc ccctttgcca 112380

agctcatccc cgccctgttt ggcctgcggg agtgggagtg tgtccagaca cagagacaaa 112440

ggaccagctt ttaaaacatt ttgttggggc caggtgtggt ggctcacacc taatcccaac 112500

acctggggag gccaaggcag aaggatcact tgagtccagg agttcaagac cagcctgggc 112560

aacataggga gaccctgtct ctacaatttt ttttttaatt agctgggcct gttggcactc 112620

tcctgtagtt ccagctactc tagaggctga ggtgggagga ctgcttgagc ctgggaggtc 112680

agggctgcaa tgagccatgt tcacaccact gaacgccagc ctgggcgaga ccctgtatca 112740

aaaaagtaaa gtaaaatgaa tcctgtacgt tatattaagg tgccccaaat tgtacttaga 112800

aggatttcat agttttaaat acttttgtta tttaaaaaat taaatgactg cagcatataa 112860

attaggttct taatggaggg gaaaaagagt acaagaaaag aaataagaat ctagaaacaa 112920

agataagagc agaaataaac cagaaaacac aaccttgcac tcctaactta aaaaaaaaaa 112980

tgaagaaaac acaaccagta aaacaacata taacagcatt aagagctggc tcctggctgg 113040

gcgcggtggc gcatgcctgt aatcccaaca ctttgggagg ccgatgctgg aggatcactt 113100

gagaccagga gttcaaggtt gcagtgagct atgatcatac cactacaccc tagcctgggc 113160

aacacagtga gactgagact ctattaaaaa aaaaatgctg gttccttcct tatttcattc 113220

ctttattcat tcattcagac aacatttatg gggcacttct gagcaccagg ctctgtgcta 113280

agagcttttg cccccagggt ccaggccagg ggacaggggc aggtgagcag agaaacaggg 113340

ccagtcacag cagcaggagg aatgtaggat ggagagcttg gccaggcaag gacatgcagg 113400

gggagcagcc tgcacaagtc agcaagccag agaagacagg cagacccttg tttgggacct 113460

gttcagtggc ctttgaaagg acagccccca cccggagtgc tgggtgcagg agctgaagga 113520

ggatagtgga acactgcaac gtggagctct tcagagcaaa agcaaaataa acaactggag 113580

gcagctgggg cagcagaggg tgtgtgttca gcactaaggg gtgtgaagct tgagcgctag 113640

gagagttcac actggcagaa gagaggttgg ggcagctgca agcctctgga catcgcccga 113700

caggacagag ggtggtggac ggtggccctg aagagaggct cagttcagct ggcagtggcc 113760

gtgggagtgc tgaagcaggc aggctgtcgg catctgctgg ggacggttaa gcaggggtga 113820

gggcccagcc tcagcagccc ttcttggggg gtcgctggga aacatagagg agaactgaag 113880

aagcagggag tcccagggtc catgcagggc gagagagaag ttgctcatgt ggggcccagg 113940

ctgcaggatc aggagaactg gggaccctgt gactgccagc ggggagaagg gggtgtgcag 114000

gatcatgccc agggaagggc ccaggggccc aagcatgggg gggcctggtt ggctctgaga 114060

agatggagct aaagtcactt tctcggagga tgtccaggcc aatagttggg atgtgaagac 114120

gtgaagcagc acagagcctg gaagcccagg atggacagaa acctacctga gcagtggggc 114180

tttgaaagcc ttggggcggg gggtgcaata ttcaagatgg ccacaagatg gcaatagaat 114240

gctgtaactt tcttggttct gggccgcagc ctgggtggct gcttccttcc ctgtgtgtat 114300

tgatttgttt ctcttttttg agacagagtc ttgctgggtt gcccaggctg gagtgcagtg 114360

gtgcgatcat agctcactgc agccttgaag tcctgagctc aagagatcct tccacctcag 114420

cctcctgagt agttgggacc acaggcttgc accacagtgc ccaactaatt tcttatattt 114480

tttgtagaga tggggtttca ctgtgtcgcc caggatggtc ttgaactcct gggctcaagt 114540

gatcctcctg cctcagcctc gcaaattgct gggattacag gtgtgagcca ccatgcccga 114600

ccttctcttt ttaagggcgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gggcgcactc tcgtcttcac 114660

cttcccccag ccttgctctg tctctaccca gtcacctctg cccatctctc cgatctgttt 114720

ctctctcctt ttacccctct ttcctccctc ctcatacacc actgaccatt atagagaact 114780

gagtattcta aaaatacatt ttatttattt attttgagac agagtctcac tctgtcaccc 114840

aggctggagt gcagtggtgc aatctcggct cactgcaacc tccgcctccc aggttgaagc 114900

aactctcctg cctcagcctc cctagtagct gggattacaa gcacacacca ccatgcctag 114960

caaattttta tatttttagt agaggagggg tgtcaccatg tttgccaagc tggtctcaaa 115020

ctcctggcct caggtgatct gcctaccttg gtctcccaaa gtgctgggat tacaggtgtg 115080

agccaccacg cctgccctta aaaatacatt atatttaata gcaaagcccc agttgtcact 115140

ttaaaaagca tctatgtaga acatttatgt ggaataaata cagtgaattt gtacgtggaa 115200

tcgtttgcct ctcctcaatc agggccaggg atgcaggtga gcttgggctg agatgtcaga 115260

ccccacagta agtggggggc agagccaggc tgggaccctc ctctaggaca gctctgtaac 115320

tctgagaccc tccaggcatc ttttcctgta cctcagtgct tctgaaaaat ctgtgtgaat 115380

caaatcattt taaaggagct tgggttcatc actgtttaaa ggacagtgta aataattctg 115440

aaggtgactc taccctgtta tttgatctct tctttggcca gctgacttaa caggacatag 115500

acaggttttc ctgtgtcagt tcctaagctg atcaccttgg acttgaagag gaggcttgtg 115560

tgggcatcca gtgcccaccc cgggttaaac tcccagcaga gtattgcact gggcttgctg 115620

agcctggtga ggcaaagcac agcacagcga gcaccaggca gtgctggaga caggccaagt 115680

ctgggccagc ctgggagcca actgtgaggc acggacgggg ctgtggggct gtggggctgc 115740

aggcttgggg ccagggaggg agggctgggc tctttggaac agccttgaga gaactgaacc 115800

caaacaaaac cagatcaagg tctagtgaga gcttagggct gctttgggtg ctccaggaaa 115860

ttgattaaac caagtggaca cacaccccca gccccacctc accacagcct ctccttcagg 115920

gtcaaactct gaccacagac atttctcccc tgactaggag ttccctggat caaaattggg 115980

agcttgcaac acatcgttct ctcccttgat ggtttttgtc agtgtctatc cagagctgaa 116040

gtgtaatata tatgttactg tagctgagaa attaaatttc aggattctga tttcataatg 116100

acaaccattc ctcttttctc tcccttctgt aaatctaaga ttctataaac ggtgttgact 116160

taatgtgaca attggcagta gttcaggtct gctttgtaaa tacccttgtg tctattgtaa 116220

aatctcacaa aggcttgttg ccttttttgt ggggttagaa caagaaaaag ccacatggaa 116280

aaaaaatttc ttttttgttt ttttgtttgc ttgttttttt gagacagagt ttcactctgt 116340

cgcccaggct ggagtgcagt ggtgcgatct ccgcccactg caagctccac ctcccgggtt 116400

catgctattc tcctgtctca gcctcccaag tagctgggac tgcaggtgcc cgccaccaca 116460

cctggctaat ttttttgtat ttttagtaga gacggggttt caccgtgtta gccaggatgg 116520

tctcaatctc ctgacctcgt catctgcctg cctcggcctc ccaaagtgct gagattacag 116580

gcgtgagcca ccgtgcccgg ccagaaaaaa acatttctaa gtatgtggca gatactgaat 116640

tattgcttaa tgtcctttga ttcatttgtt taatttcttt aatggattag tacagaaaac 116700

aaagttctct tccttgaaaa actggtaagt tttctttgtc agataaggag agttaaataa 116760

cccatgacat ttcccttttt gcctcggctt ccaggaagct caaagttaaa tgtaatgatc 116820

actcttgtaa ttatcagtgt tgatgccctt cccttcttct aatgttactc tttacatttt 116880

cctgctttat tattgtgtgt gttttctaat tctaagctgt tcccactcct ttctgaaagc 116940

aggcaaatct tctaagcctt atccactgaa aagttatgaa taaaaaatga tcgtcaagcc 117000

tacaggtgct gaggctactc cagaggctga ggccagagga ccacttgagc ccaggaattt 117060

gagacctggg ctgggcagca tagcaagact ctatctccat taaaactatt tttttttatt 117120

taaaaaataa tccgcaaaga aggagtttat gtgggattcc ttaaaatcgg agggtggcat 117180

gaattgattc aaagacttgt gcagagggcg acagtgactc cttgagaagc agtgtgagaa 117240

agcctgtccc acctccttcc gcagctccag cctgggctga ggcactgtca cagtgtctcc 117300

ttgctggcag gagagaattt caacattcac caaaaagtag tattgttttt attaggttta 117360

tgaggctgta gccttgagga cagcccagga caactttgtt gtcacataga tagcctgtgg 117420

ctacaaactc tgagatctag attcttctgt ggctgcttct gacctgagaa agttgcggaa 117480

cctcagcgag cctcacatgg cctccttgtc cttaacgtgg ggacggtggg caagaaaggt 117540

gatgtggcac tagagattta tccatctcta aaggaggagt ggattgtaca ttgaaacacc 117600

agagaaggaa ttacaaagga agaatttgag tatctaaaaa tgtaggtcag gcgctcctgt 117660

gttgattgca gggctattca caatagccaa gatttggaag caacccaagt gtccatcaac 117720

agacaaatgg ataaagaaaa tgtggtgcat atacacaatg gaatactatt cagccatgaa 117780

aaagaatgag aatctgtcat ttgaaacaac atggatggaa ctggaggaca ttatgttaag 117840

tgaaataagc cagacagaag gacagacttc acatgttctc acacatttgt gggagctaaa 117900

aattaaactc atggagatag agagtagaag gatggttacc agaggctgag gagggtggag 117960

gggagcaggg agaaagtagg gatggttaat gggtacaaaa acgtagttag catgcataga 118020

tctagtattg gatagcacag cagggtgacg acagccaaca gtaatttata gtacatttaa 118080

aaacaactaa aagagtgtaa ttggactggc taacatggtg aaaccccgtc tctactaaaa 118140

atacaaaaat tagctgggca tggtggctca cgcctgtaat cccagcactt tgggaggccg 118200

aggcgggccg atcacgaggt caggagatcg agaccatcct agctaacatg gtgaaacccc 118260

gtctctacta caaatacaaa aaaaagaaaa aattagccgg gcatggtggt gggcgcctgt 118320

agtcccagct actcgggagg ctgaggcagg agaatggcgt gaacccggga ggcggagctt 118380

gcagtgagcc gagatcgcgc cactgcactc cagcctgggc gacaaggcaa gattctatct 118440

caaaaaaata aaaataaaat aaaataaaat aataaaataa aataaaataa aataaaataa 118500

ataaaataaa ataaaatgta taattggaat gtttataaca caagaaatga taaatgcttg 118560

aggtgataga taccccattc accgtgatgt gattattgca caatgtatgt ctgtatctaa 118620

atatctcatg taccccacaa gtatatacac ctactatgta cccatataaa tttaaaatta 118680

aaaaattata aaacaaaaat aaataagtaa attaaaatgt aggctggaca ccgtggttca 118740

cgcctgtaat cccagtgctt tgtgaggctg aggtgagaga atcacttgag cccaggagtt 118800

tgagaccggc ctgggtgaca tagcgagacc ccatcatcac aaagaatttt taaaaattag 118860

ctgggcgtgg tagcacatac cggtagttcc agctacttgg gagaccgagg caggaggatt 118920

gcttgagccc aggagtttaa ggctgcagtg agctacgatg gcgccactgc attccagcct 118980

gggtgacaga gtgagagctt gtctctattt taaaaataat aaaaagaata aataaaaata 119040

aattaaaatg taaatatgtg catgttagaa aaaatacacc catcagcaaa aagggggtaa 119100

aggagcgatt tcagtcataa ttggagagat gcagaataag ccagcaatgc agtttctttt 119160

attttggtca aaaaaaataa gcaaaacaat gttgtaaaca cccagtgctg gcagcaatgt 119220

ggtgaggctg gctctctcac cagggctcac agggaaaact catgcaaccc ttttagaaag 119280

ccatgtggag agttgtaccg agaggtttta gaatatttat aactttgacc cagaaattct 119340

attctaggac tctgtgttat gaaaataacc catcatatgg aaaaagctcc tttcagaaag 119400

aggttcatgg gaggctgttt gtattttttt tttctttgca tcaaatccag ctcctgcagg 119460

actgtttgta ttattgaagt acaaagtgga atcaatacaa atgttggata gcaggggaac 119520

aatattcaca aaatggaatg ggacatagta ttaaacatag tgcttctgat gaccgtagac 119580

catagacaat gcttaggata tgatatcact tcttttgttg ttttttgtat tttgagacga 119640

agtctcattc tgtcacccag gctggagttc agtggcgcca tctcagctca ctgcaacctc 119700

catctcccgg gttcaagcta ttctccttcc tcaacctccc gagtagctgg gttgcgcacc 119760

accatgcctg gctaactttt gtatttttag tacagacggg gtttcaccac gttggccagg 119820

ctgctcttga actcctgacg tcaggtgatc caccagcctt gacctcccaa agtgctagga 119880

ttacaggagc cactgtaccc agcctaggat atgatatcac ttcttagagc aagatacaaa 119940

attgcatgtg cacaataatt ctaccaagta taggtataca ggggtagtta tatataaatg 120000

agacttcaag gaaatacaac aaaatgcaat cgtgattgtg ttagggtggt aagaaaacgg 120060

tttttgcttt gatgagctct gttttttaaa atcgttatat tttctaataa aaatacatag 120120

tcttttgaag gaacataaaa gattatgaag aaatgagtta gatattgatt cctattgaag 120180

attcagacaa gtaaaattaa ggggaaaaaa aacgggatga accagaagtc aggctggagt 120240

tccaacccca gatccgacag cccaggctga tggggcctcc agggcagtgg tttccaccca 120300

gcattctcaa aagagccact gaggtctcag tgccattttc aagatttcgg aagcggcctg 120360

ggcacggctg gtccttcact gggatcacca cttggcaatt atttacacct gagacgaata 120420

aaaaccagag tgctgagatt acaggcatgg tggcttacgc ttgtaatcgg ctttgggaag 120480

ccgaggtggg ctgattgctt gagcccagga gtttcaaact atcctggaca acatagcatg 120540

acctcgtctc tacaaaaaat acaaaaaatt tgccaggtgt ggtggcatgt gcctgtggtc 120600

ccagctactt gggaggctga agtaggagaa tcccctgagc cctgggaagt cgaggctgca 120660

ctgagccgtg atggtgtcac tgcactccag cctgggtgac aaagtgagac cctatctcac 120720

aaagaaaaaa aacaaaacaa aaaacccaaa gcacactgtt tccactgttt ccagagttcc 120780

tgagaggaaa ggtcaccggg tgaggaagac gttctcactg atctggcaga gaaaatgtcc 120840

agtttttcca actccctaaa ccatggtttt ctatttcata gttcttaggc aaattggtaa 120900

aaatcatttc tcatcaaaac gctgatattt tcacacctcc ctggtgtctg cagaaagaac 120960

cttccagaaa tgcagtcgtg ggagacccat ccaggccacc cctgcttatg gaagagctga 121020

gaaaaagccc cacgggagca tttgctcagc ttccgttacg cacctagtgg cattgtgggt 121080

gggagagggc tggtgggtgg atggaaggag aaggcacagc ccccccttgc agggacagag 121140

ccctcgtaca gaagggacac cccacatttg tcttccccac aaagcggcct gtgtcctgcc 121200

tacggggtca gggcttctca aacctggctg tgtgtcagaa tcaccagggg aacttttcaa 121260

aactagagag actgaagcca gactcctaga ttctaattct aggtcagggc taggggctga 121320

gattgtaaaa atccacaggt gattctgatg cccggcaggc ttgagaacag ccgcagggag 121380

ttctctggga atgtgccggt gggtctagcc aggtgtgagt ggagatgccg gggaacttcc 121440

tattactcac tcgtcagtgt ggccgaacac atttttcact tgacctcagg ctggtgaacg 121500

ctcccctctg gggttcaggc ctcacgatgc catccttttg tgaagtgagg acctgcaatc 121560

ccagcttcgt aaagcccgct ggaaatcact cacacttctg ggatgccttc agagcagccc 121620

tctatccctt cagctcccct gggatgtgac tcaacctccc gtcactcccc agactgcctc 121680

tgccaagtcc gaaagtggag gcatccttgc gagcaagtag gcgggtccag ggtggcgcat 121740

gtcactcatc gaaagtggag gcgtccttgc gagcaagcag gcgggtccag ggtggcgtgt 121800

cactcatcct tttttctggc taccaaaggt gcagataatt aataagaagc tggatcttag 121860

caacgtccag tccaagtgtg gctcaaagga taatatcaaa cacgtcccgg gaggcggcag 121920

tgtgagtacc ttcacacgtc ccatgcgccg tgctgtggct tgaattatta ggaagtggtg 121980

tgagtgcgta cacttgcgag acactgcata gaataaatcc ttcttgggct ctcaggatct 122040

ggctgcgacc tctgggtgaa tgtagcccgg ctccccacat tcccccacac ggtccactgt 122100

tcccagaagc cccttcctca tattctagga gggggtgtcc cagcatttct gggtccccca 122160

gcctgcgcag gctgtgtgga cagaataggg cagatgacgg accctctctc cggaccctgc 122220

ctgggaagct gagaataccc atcaaagtct ccttccactc atgcccagcc ctgtccccag 122280

gagccccata gcccattgga agttgggctg aaggtggtgg cacctgagac tgggctgccg 122340

cctcctcccc cgacacctgg gcaggttgac gttgagtggc tccactgtgg acaggtgacc 122400

cgtttgttct gatgagcgga caccaaggtc ttactgtcct gctcagctgc tgctcctaca 122460

cgttcaaggc aggagccgat tcctaagcct ccagcttatg cttagcctgc gccaccctct 122520

ggcagagact ccagatgcaa agagccaaac caaagtgcga caggtccctc tgcccagcgt 122580

tgaggtgtgg cagagaaatg ctgcttttgg cccttttaga tttggctgcc tcttgccagg 122640

agtggtggct cgtgcctgta attccagcac tttgggagac taaggcggga ggttcgcttg 122700

agcccaggag ttcaagacca gcctgggcaa caatgagacc cctgtgtcta caaaaagaat 122760

taaaattagc caggtgtggt ggcacgcacc tgtagtccca gctacttggg aggctgaggt 122820

gggaggattg cctgagtccg ggaggcggaa gttgcaagga gccatgatcg cgccactgca 122880

cttcaaccta ggcaacagag tgagactttg tctcaaaaaa caatcatata ataattttaa 122940

aataaataga tttggcttcc tctaaatgtc cccggggact ccgtgcatct tctgtggagt 123000

gtctccgtga gattcgggac tcagatcctc aagtgcaact gacccacccg ataagctgag 123060

gcttcatcat cccctggccg gtctatgtcg actgggcacc cgaggctcct ctcccaccag 123120

ctctcttggt cagctgaaag caaactgtta acaccctggg gagctggacg tatgagaccc 123180

ttggggtggg aggcgttgat ttttgagagc aatcacctgg ccctggctgg cagtaccggg 123240

acactgctgt ggctccgggg tgggctgtct ccagaaaatg cctggcctga ggcagccacc 123300

cgcatccagc ccagagggtt tattcttgca atgtgctgct gcttcctgcc ctgagcacct 123360

ggatcccggc ttctgccctg aggccccttg agtcccacag gtagcaagcg cttgccctgc 123420

ggctgctgca tggggctaac taacgcttcc tcaccagtgt ctgctaagtg tctcctctgt 123480

ctcccacgcc ctgctctcct gtccccccag tttgtctgct gtgaggggac agaagaggtg 123540

tgtgccgccc ccacccctgc ccgggccctt gttcctggga ttgctgtttt cagctgtttg 123600

agctttgatc ctggttctct ggcttcctca aagtgagctc ggccagagga ggaaggccat 123660

gtgctttctg gttgaagtca agtctggtgc cctggtggag gctgtgctgc tgaggcggag 123720

ctggggagag agtgcacacg ggctgcgtgg ccaacccctc tgggtagctg atgcccaaag 123780

acgctgcagt gcccaggaca tctgggacct ccctggggcc cgcccgtgtg tcccgcgctg 123840

tgttcatctg cgggctagcc tgtgacccgc gctgtgctcg tctgcgggct agcctgtgtc 123900

ccgcgctctg cttgtctgcg gtctagcctg tgacctggca gagagccacc agatgtcccg 123960

ggctgagcac tgccctctga gcaccttcac aggaagccct tctcctggtg agaagagatg 124020

ccagcccctg gcatctgggg gcactggatc cctggcctga gccctagcct ctccccagcc 124080

tgggggcccc ttcccagcag gctggccctg ctccttctct acctgggacc cttctgcctc 124140

ctggctggac cctggaagct ctgcagggcc tgctgtcccc ctccctgccc tccaggtatc 124200

ctgaccaccg gccctggctc ccactgccat ccactcctct cctttctggc cgttccctgg 124260

tccctgtccc agcccccctc cccctctcac gagttacctc acccaggcca gagggaagag 124320

ggaaggaggc cctggtcata ccagcacgtc ctcccacctc cctcggccct ggtccacccc 124380

ctcagtgctg gcctcagagc acagctctct ccaagccagg ccgcgcgcca tccatcctcc 124440

ctgtccccca acgtccttgc cacagatcat gtccgccctg acacacatgg gtctcagcca 124500

tctctgcccc agttaactcc ccatccataa agagcacatg ccagctgaca ccaaaataat 124560

tcgggatggt tccagtttag acctaagtgg aaggagaaac caccacctgc cctgcacctt 124620

gttttttggt gaccttgata aaccatcttc agccatgaag ccagctgtct cccaggaagc 124680

tccagggcgg tgcttcctcg ggagctgact gataggtggg aggtggctgc ccccttgcac 124740

cctcaggtga ccccacacaa ggccactgct ggaggccctg gggactccag gaatgtcaat 124800

cagtgacctg ccccccaggc cccacacagc catggctgca tagaggcctg cctccaaggg 124860

acctgtctgt ctgccactgt ggagtcccta cagcgtgccc cccacagggg agctggttct 124920

ttgactgaga tcagctggca gctcagggtc atcattccca gagggagcgg tgccctggag 124980

gccacaggcc tcctcatgtg tgtctgcgtc cgctcgagct tactgagaca ctaaatctgt 125040

tggtttctgc tgtgccacct acccaccctg ttggtgttgc tttgttccta ttgctaaaga 125100

caggaatgtc caggacactg agtgtgcagg tgcctgctgg ttctcacgtc cgagctgctg 125160

aactccgctg ggtcctgctt actgatggtc tttgctctag tgctttccag ggtccgtgga 125220

agcttttcct ggaataaagc ccacgcatcg accctcacag cgcctcccct ctttgaggcc 125280

cagcagatac cccactcctg cctttccagc aagatttttc agatgctgtg catactcatc 125340

atattgatca cttttttctt catgcctgat tgtgatctgt caatttcatg tcaggaaagg 125400

gagtgacatt tttacactta agcgtttgct gagcaaatgt ctgggtcttg cacaatgaca 125460

atgggtccct gtttttccca gaggctcttt tgttctgcag ggattgaaga cactccagtc 125520

ccacagtccc cagctcccct ggggcagggt tggcagaatt tcgacaacac atttttccac 125580

cctgactagg atgtgctcct catggcagct gggaaccact gtccaataag ggcctgggct 125640

tacacagctg cttctcattg agttacaccc ttaataaaat aatcccattt tatccttttt 125700

gtctctctgt cttcctctct ctctgccttt cctcttctct ctcctcctct ctcatctcca 125760

ggtgcaaata gtctacaaac cagttgacct gagcaaggtg acctccaagt gtggctcatt 125820

aggcaacatc catcataaac caggtagccc tgtggaaggt gagggttggg acgggagggt 125880

gcagggggtg gaggagtcct ggtgaggctg gaactgctcc agacttcaga aggggctgga 125940

aaggatattt taggtagacc tacatcaagg aaagtgttga gtgtgaaact tgcgggagcc 126000

caggaggcgt ggtggctcca gctcgctcct gcccaggcca tgctgcccaa gacaaggtga 126060

ggcgggagtg aagtgaaata aggcaggcac agaaagaaag cacatattct cggccgggcg 126120

ctgtggctca cgcctgtaat tccagcactt tgggaggcca aggtgggtgg atcatgaggt 126180

caggagattg agaccatcct ggctaacaca gtgaaacccc gtctctacta aaaatacaaa 126240

aaattagccg ggcgtggtgg tgggcgcctg tagtcccagc tactccggag gctgaggcag 126300

gaaaatggcg tgaacccgga aggcggagct tgcagtgagc ggagtgagca gagatcgcgc 126360

cactgcactc cagcctgggc gacagagcga gactccgtct caaaaaaaaa aagcacatgt 126420

tctcgcttct ttgtgggatc caggagatag agaatagaag gatggttacc agaggctggg 126480

aagggtagtg aggggatggt ggggggatgg tcaatgggta caaaaaaaat agaataagac 126540

ctagtatttg atagtgcaac agggtgacta tagtcaataa taatttaatt gtacatttaa 126600

aaataactaa aagatagccg ggtgcagtgg cttacgtctg taatcccagt actttgggag 126660

gctgaggtgg gcgtttgaga ccagcctggc caacatggtg aaaccccatc tctactaaaa 126720

atacaaaaat tagccaggca tggtggcggg cgcctgtaat cccagctact cgggaggctg 126780

aggcaggaga atcacttgaa cctgggaggc agaggttgca gtgagccgag atcttgccac 126840

tgcactccag cctgggtgac agtgaaactc cgtctcaaaa ataaaaataa aaatacagct 126900

gggcacggtg gctcacgcct gtaatcccag cactttggga ggccgaggcg agcggatcac 126960

aaggtcagga gatatagacc atcctggcta acacggtgaa acccggtctc tactaaaaat 127020

acaaaaaatt agccaggcgt ggtggcaggt gcctatagtc ccagctactc acaaggctga 127080

ggcaggagaa tggcatgaac ctgggaggcg gagcttgcag tgagccgaga ttgtgccact 127140

gcactccagc ctgggcgaga gagtgagact ccgtctcaaa acaaaaacaa aaacaaaaac 127200

aaaaacaaac acacaacaaa aacctaaaag aatataaatg gattgtttgt aacacaaagg 127260

acaaatgttt gaggggatgg ataccccatt ttccatgatg tgattattat acattgtgtg 127320

tctgtatcaa aacatctcat gagccccata aatatataca cctaactatg tacccacaaa 127380

aattaaaaaa atatattttt taaggtgaag agggaggcga gatgctggcc ttaaccccta 127440

acccgttgtt ctccctgcaa gctgtccaca gggcctctca gactcgaggt tcagctatat 127500

ggatgcatga gcttggtccc cagccaacat gggagacact tcaccatcgg cagcagctac 127560

agcacaggaa ccctgggtca ctgccatgtc ccctctgtga ctttgtttaa acagaaaatg 127620

atgctctggg ccggctgtgg tggcccacac ctataatccc agcaccttgg gaggcggggg 127680

tgggcagatt gcctgaggtc aggagttgga gatcagcctg gccgacatgg cgaaacccca 127740

tgtctactaa aaatacaaaa actagccagg catggtggca catgcctgta atcccagcta 127800

cttgggaggc tgaagcagga gaatcacttg aacccaggag gcagaggctg agtgagccaa 127860

gatcgtgcca atgcactcca gcttgggtga gggagtgaga ctccgtctca aaaaaaaaaa 127920

aaaagaaaga aaaagaaaag aaagtgatcc tactggaacc atgcttactc ccctccccac 127980

ctcacactgt gtagaaatta gtgctgtcgg ccaggcgcgg tggctcatgc ctgtaatcgc 128040

agcactttgg gaggccaagg caggcggatc acgaggtcag gagatcaaga ccatcctggc 128100

taacacagtg aaaccctgtc tctactaaaa atacaaaaaa ttagccgggc atggtggcag 128160

gcacctgtag tcccaactac ttgggaggct gaggcaggag aatggcatga acctgggagg 128220

cggagcttgc agtgagccaa gatcgcgcca ctgcatacca gcctaggtga cagagtgaga 128280

ctcagcaaaa aaagaaagaa agaaagaaag aaatcagtgc tgtctatact tctttctgca 128340

gtgatggaaa tattctgtat ctgtgctgtc cagtatagta gccactagct acatgtggca 128400

cttgaaacat ggctggtaca gttgaggaag agtggctgcc atatcggacg acacagctat 128460

agattctgtc accccacccc gagagtccag agcggggact tctgccttag gccctattca 128520

gggctgattt ttacttgaac ccttactgtg ggaagagaag gccatgagaa gttcagtcta 128580

gaatgtgact ccttattttc tggctccctt ggacactttg tgggatttag tctccctgtg 128640

gaaagtattc cacaagtggt gccaccaccc cagctgtgag agcagctggg agctgctttt 128700

gtcatctttc cctggaaagt cctgtgggct gtctcttcct catgccttgt cccatgcttg 128760

ggcatggtgt caagcgtcag gagggagaaa gggtccttat ttatttattt agagagggac 128820

ccttcttctg ttcccaggct ggagtgcagt ggtgcgatct cggctcactg caacctccgc 128880

ctcctgggtt caagtgattc tcctgcctca gcctcctgag tagctgagat tacaggcaca 128940

tgccaacatg cctggctaat tttttttttt tttttttttt tttttttttg agatggagtt 129000

gtactctcat tgcccaggct ggaatgtaat ggcacaatct cggctcactg caacctccac 129060

ctcctggatt caagcaattc tcctgtctca gcttcccaag tagctgggat tacaggtgcc 129120

cgccaccatg ctcaactaat ttttgtattt tttttttagt agagacgagg tttcaccatg 129180

ttggtcagac tggtctcaaa ctcctgacct caggtgatcc acctgcctcg gcctcccaaa 129240

gtgctaggat tacaggcatg agccaccacg cccggcctga aagggttctt atttagtgtg 129300

cattttgaca ttcaatttaa ttccaaggtc ttgtggggtc atggtttaca ggatgttgat 129360

atagaaaaga cttcacttaa tgggccgggc gcagtggctc atgcctgtaa tcccagcact 129420

ttgggaggcc gaggcaggca gatcaggagg tcaggagatt gagaccatcc tggctaacac 129480

agtgaaaccc catctctact gaaaatacaa aaaattagct gggcgtggtg gcaggcacct 129540

gtagtcccag ccactcggtt ggctgaggca ggagaatggc atgaacccgg gaggcggagc 129600

ttgcagtgag cagagaccat gccactgcac tccagcctgg gcgacagagc aagactctgt 129660

ctcaagaaaa aaaaaaaaaa aacagacttt acttactgga agccaaccaa tgtatattta 129720

gagtaatttt tcctgggctg agctgtcatt tacttttgca gtatctcaag aagaagagtt 129780

tacagtgtaa atatttgatg cacactttga ttatatagat gaagcaaact attttcaaga 129840

gctttgcaag gacttacttg tatccaaaca ccattctaaa ggagtcttac ctacttctaa 129900

aggctggtct ctacttggaa ccacttgctt ggccctggtt caagtcctgc tgcaaacctg 129960

gaagtcctgt cattgtcttc ttccctccag agcagtggca cccaatctaa tttttgctgt 130020

gccccagcag cccctggcac tttgccctgt agactgcaga cctcatgtaa tgtatgttaa 130080

gtccacagaa ccacagaaga tgatggcaag atgctcttgt gtgtgttgtg ttctaggagg 130140

tggccaggtg gaagtaaaat ctgagaagct tgacttcaag gacagagtcc agtcgaagat 130200

tgggtccctg gacaatatca cccacgtccc tggcggagga aataaaaagg taaagggggt 130260

agggtgggtt ggatgctgcc cttgggtata tgggcattaa tcaagttgag tggacaaagg 130320

ctggtccagt tcccagagga ggaaaacaga ggcttctgtg ttgactggct ggatgtgggc 130380

cctcagcagc atccagtggg tctccactgc ctgtctcaat cacctggagc tttagcacgt 130440

ttcacacctg ggccccaacc tggagaggct gaccaatggg tctcaggggc agctcggttg 130500

ctggagtttt tgtttttatt tatttttatg tatttaaggc agggtctctg tattagtcca 130560

ttctcacact gctaataaag acatacccaa gactgggtaa tttataaagg aaagaggttt 130620

aatggactca cagttccaca tggctgggga ggcctcaaaa tcatggcgga aggcaaagga 130680

gaagcaaagg catttcttac atggcgacag gcaagagagc gtgtgcaggg gaactcccat 130740

ttataaaacc atcagacctc atgagattta ttcactatca tgagaacagc atgggaaaga 130800

cccgccccca tgattcagtt acctcccact gggtccctcc catgacacat ggaattatgg 130860

gagctacaat tcaagatgag atttgggtgg ggacacagcc aaaccatatc agtctccctc 130920

tgtcatccag gctggagtgc actggcatga tctcggctca ctgcagcctc tacctccctg 130980

ggtcaggtga tcttcccacc tcagcctccc aggtagctgg aactacaggt acctgccact 131040

atgcctggct aaatattttg tatttcctgt ggagacgagg ttttgccacg ttgcccaggc 131100

tggtcttgaa ctcctgaggt caagcaatat gcccacctcg gcctcccaag gtgctgggat 131160

tacaggtgtg agccacagtg ctcggcctaa gtcactgcag tttttaaagc tcccaggtga 131220

ttcttcagtg cagtcaaaag tgagaactgg ctgggtgcgg tggctcatgc ctgtaatccc 131280

agcaccttgg gaggcgaagg tgggcagatg gcttgaggtc aggagttcaa gaccagcctg 131340

gccaacatgg taaaacccca tctctactaa aaatacaaaa gttagctggg tgtggtggtg 131400

cgtgcctgta atcccagcta cttgggaggc tgaggcatga gaattgcttg aacccagggg 131460

acagaggttg tagtgagccg agatcgtgcc actgcactcc agcctgggca acagagtgag 131520

attccatctc acaaaaaaaa aaaaaaaagc gagaaccact gtcctaggcc ctgatgtttg 131580

caggcaacta aaaaaggaag tggacatccc cagtcagctg tggcgcacca agaacaagtc 131640

atgggaacat aacctaattt tctaaatggg ttactaggca cttagagcaa aacaatgatg 131700

ccgaaatcct gatttcagca aagcctctgc ctgcctgtct tggaagtatc cacatgaggc 131760

tgctggggcc ttggtgtccc cagcagtttc tagtctctag gtcttgctgt gggtgtctgt 131820

gcagtgaggg tgtgtgtggc gctgggtgag ctctgtctag gcctggcaca ggatgcggtc 131880

tggtagctgc tgcttctctt ctgcagaagc gcagccaagc accctctggg gtttcaggcc 131940

cacacccagc ctgaagttct gggagtggct cactttccaa ccttcagggt ctcccagcag 132000

ctgactgggg agtggtggag ggaaaaggga ttgtattagt ccgttttcac gccgctgatg 132060

aagacatacc cgatactggg cagtctaaaa gatagaggtc tgatggactc acagttccac 132120

gtgactgggg aggcctgaca atcatggtgg aaggtgaaag gcttgtctca cacggtggca 132180

gacaagagaa aagagcttgt gcaggggaac tcccctttat aaaaccatca gatctcggga 132240

gacttattca ctatcatgag aacagcacgg gaaagaccct cctctatgat tcaattacct 132300

cccaccaggt ccctcccaca acatgtagga attgtgggaa ctacaattca agatgacatt 132360

tgggtgggga cacagccaaa ccatatcagg gcgtcccaga aagggtatag ggtctgagac 132420

ccaagtcagc atgagaaagt atgcttctca tggtggccca gttgggtgga agtggcagcc 132480

gggccgtctt tccaccaggc cactcaagta gcagctgaga gacccctgcc ctggccagtc 132540

cccgccctcc cctcttgcca ctgcctctgg ttctgaacag atgggcaccc tcatcttgta 132600

tttgtgatta atgtctaaca atgtagtttt gtgagaaggg tttgctgata cagccttgct 132660

gcagatgctg cgaactgtgg cctggggcag accttacctc cagacacgcc ctgaggcagg 132720

ggagggcact ggcccgtagc tggccgagag ctctcgggtt gcgcgacagg gatacttttc 132780

agcggctggg tcgctatcca aagtgagaaa acgaggaggg accaggaggc tgtccgcctc 132840

aagagatgtg ggggccaggt ccagttatct ggggaagcag taagcttctc tgctgtttct 132900

aaccccaggc ctcccctggt ctaaggcagg gcctcccagc ctcggggcac tttaaagata 132960

tctgggcctg gccccatccc cacagtctga ctgagtgggt ctggataggg cctgagcatt 133020

ggtgatttcc tgggtgaaag gaggcccctc acagtctctg gaagcttctc tgtgttagga 133080

aaagctctgg gcttgactct gctttgaaag tcaagatccg caaatcctct cagcctcagt 133140

ttctccttca gcaagatgaa atggaaatgc tgtacctacg tcccggggtg gttgtgagac 133200

ccaaaaaaga caatgttctg gaaggttcct ggtgcgttgc agtcctctaa gaacctgagt 133260

tagagccacg ctgagtctca gcttcttggc tccttctgtt tcaaactcgt ccatgtgata 133320

gctcaggaag ggtaggcagg gccctgcccc ctactcagaa aacaccatcc tggtcctggg 133380

gatccccgca gcattagtcc cctgttttcc cagtgtattg agaaaaattg ctaacaagca 133440

gtggggcaca ccaccagcct cctgggttcc tttcagtttg gggatttttg gacattccca 133500

ggaatgtctt aaaaaacact tcaaaaaaca ttaacataaa tatttttatc aaagcctgta 133560

ttaaatggtc tttcaagaaa atacagtaac aggtcaggca tggtggctca tgcctgtaac 133620

cccagcactt tgggaggcca aggcaggcag atcacctgaa atcaggagtt caagaccaac 133680

ctggccaaca cagccaaatc ccatctctac aaaaaataca aaaattagct gggtgtggtg 133740

gcacacacct gtagtcccag ctacttggga ggccgaggca ggagaattgc ttgatcccgg 133800

aggcggaggt tgcagtgagc tgagatcgtg ccactgcact ccagcgtggg tgacaaggtg 133860

aatctttgtc tcaaaaaaaa aaaaaaaaaa aagataaaat acagtataca gtaatagaga 133920

acaatccttt tttcaaagta gtgaccccaa atgaacaaaa tatgcatcta gcttaaatgc 133980

gaacctggtt ttctctacgc ccattcaagc ccctgcaata ggggcccttc accccgcatc 134040

catggactcc taaaattata tggaaaatgg ctgtgtgtga gtgtggatgg acatgtgcac 134100

acatattttt ggctttacca gatgctcaaa gagcctagga cccaaaaagg gctgagaatg 134160

accgtgtcgg ccacttcagg gtcatcagga attgctgtgc actgctcact tctccagtga 134220

acactttctg cttctgtgtt tcctggtatc ctttgggact cctggctagg tcatgtgttt 134280

ctctactttc aaaagggctt cagccaggca cgatggcatg agcctgtagt cccagttgct 134340

ctggaggtta aggtgggaag attgcttgag cccaggaatt tgaggccagc ctgggcaagt 134400

agataggtag atgattgata gatagataga tagataaata gatggataga taagtcgcta 134460

gacagtcatc catccaccca tccacacata aaaaggcctt tgtcatgtca tgttttgtgg 134520

cccacctgcc agtgttgccc acagttgctg cccctccaaa ctcatcagtc actggcaaac 134580

aggaggaatg tgtggctcat gtctgggcat cagtggctgt gggagacatc cttgatcttc 134640

tccagcttct ccttccacat tttcctttgc aatctggcaa tatctattaa aataaaatgt 134700

gcatgccttt tgacctaaga gcttcacttc taggacccac ttacacgtgt gtgacatgat 134760

gttcatacgg gtttatttat ctgaggttgt tcatacacac cattgcctgt aatcactaaa 134820

ggcgggagca gcctacacat ccatccacag aggagtagat gccttttggt acatccgtgg 134880

cgacggaata ctaagcagcc tgtgtatcta tacactcaca cgtgtttgtt tatgtgtgga 134940

atatctctgg agggtacaca agaaacttaa aatgatcact gtctctgggg agggtacctg 135000

ggtgcctggg aggcaggtca gggaaggagt gggcacaggt attaccaatt ggaagacaat 135060

aaaaacaaca gctcctggcc aggcgcagtg gctcacgcct gtaatggcag cactctgaga 135120

ggctgaggcg ggcagattgc ttgcgtccag gagttcaaga ccagcctggg caacatagca 135180

aaaccccgtt tctattaaaa atacaaaaaa ttagccaggt gtggtggcat gcacctgtaa 135240

tcccagctac tcgggaggct gaggtgggag aatcacctga gcctgggagg tcaaggctgc 135300

agtgaggtga gattgtgcca ccgcactcta gcctgggcga tagagcaaga ccctgtctca 135360

aaaacaaaca aaaaacagtc cctggcactc tgggccaggc ctggcagggc agttggcagg 135420

gctggtcttt ctctggcact tcatctcacc ctccctccct tcctcttctt gcagattgaa 135480

acccacaagc tgaccttccg cgagaacgcc aaagccaaga cagaccacgg ggcggagatc 135540

gtgtacaagt cgccagtggt gtctggggac acgtctccac ggcatctcag caatgtctcc 135600

tccaccggca gcatcgacat ggtagactcg ccccagctcg ccacgctagc tgacgaggtg 135660

tctgcctccc tggccaagca gggtttgtga tcaggcccct ggggcggtca ataattgtgg 135720

agaggagaga atgagagagt gtggaaaaaa aaagaataat gacccggccc ccgccctctg 135780

cccccagctg ctcctcgcag ttcggttaat tggttaatca cttaacctgc ttttgtcact 135840

cggctttggc tcgggacttc aaaatcagtg atgggagtaa gagcaaattt catctttcca 135900

aattgatggg tgggctagta ataaaatatt taaaaaaaaa cattcaaaaa catggccaca 135960

tccaacattt cctcaggcaa ttccttttga ttcttttttc ttccccctcc atgtagaaga 136020

gggagaagga gaggctctga aagctgcttc tgggggattt caagggactg ggggtgccaa 136080

ccacctctgg ccctgttgtg ggggtgtcac agaggcagtg gcagcaacaa aggatttgaa 136140

acttggtgtg ttcgtggagc cacaggcaga cgatgtcaac cttgtgtgag tgtgacgggg 136200

gttggggtgg ggcgggaggc cacgggggag gccgaggcag gggctgggca gaggggagag 136260

gaagcacaag aagtgggagt gggagaggaa gccacgtgct ggagagtaga catccccctc 136320

cttgccgctg ggagagccaa ggcctatgcc acctgcagcg tctgagcggc cgcctgtcct 136380

tggtggccgg gggtgggggc ctgctgtggg tcagtgtgcc accctctgca gggcagcctg 136440

tgggagaagg gacagcgggt aaaaagagaa ggcaagctgg caggagggtg gcacttcgtg 136500

gatgacctcc ttagaaaaga ctgaccttga tgtcttgaga gcgctggcct cttcctccct 136560

ccctgcaggg tagggggcct gagttgaggg gcttccctct gctccacaga aaccctgttt 136620

tattgagttc tgaaggttgg aactgctgcc atgattttgg ccactttgca gacctgggac 136680

tttagggcta accagttctc tttgtaagga cttgtgcctc ttgggagacg tccacccgtt 136740

tccaagcctg ggccactggc atctctggag tgtgtggggg tctgggaggc aggtcccgag 136800

ccccctgtcc ttcccacggc cactgcagtc accccgtctg cgccgctgtg ctgttgtctg 136860

ccgtgagagc ccaatcactg cctatacccc tcatcacacg tcacaatgtc ccgaattccc 136920

agcctcacca ccccttctca gtaatgaccc tggttggttg caggaggtac ctactccata 136980

ctgagggtga aattaaggga aggcaaagtc caggcacaag agtgggaccc cagcctctca 137040

ctctcagttc cactcatcca actgggaccc tcaccacgaa tctcatgatc tgattcggtt 137100

ccctgtctcc tcctcccgtc acagatgtga gccagggcac tgctcagctg tgaccctagg 137160

tgtttctgcc ttgttgacat ggagagagcc ctttcccctg agaaggcctg gccccttcct 137220

gtgctgagcc cacagcagca ggctgggtgt cttggttgtc agtggtggca ccaggatgga 137280

agggcaaggc acccagggca ggcccacagt cccgctgtcc cccacttgca ccctagcttg 137340

tagctgccaa cctcccagac agcccagccc gctgctcagc tccacatgca tagtatcagc 137400

cctccacacc cgacaaaggg gaacacaccc ccttggaaat ggttcttttc ccccagtccc 137460

agctggaagc catgctgtct gttctgctgg agcagctgaa catatacata gatgttgccc 137520

tgccctcccc atctgcaccc tgttgagttg tagttggatt tgtctgttta tgcttggatt 137580

caccagagtg actatgatag tgaaaagaaa aaaaaaaaaa aaaaaggacg catgtatctt 137640

gaaatgcttg taaagaggtt tctaacccac cctcacgagg tgtctctcac ccccacactg 137700

ggactcgtgt ggcctgtgtg gtgccaccct gctggggcct cccaagtttt gaaaggcttt 137760

cctcagcacc tgggacccaa cagagaccag cttctagcag ctaaggaggc cgttcagctg 137820

tgacgaaggc ctgaagcaca ggattaggac tgaagcgatg atgtcccctt ccctacttcc 137880

ccttggggct ccctgtgtca gggcacagac taggtcttgt ggctggtctg gcttgcggcg 137940

cgaggatggt tctctctggt catagcccga agtctcatgg cagtcccaaa ggaggcttac 138000

aactcctgca tcacaagaaa aaggaagcca ctgccagctg gggggatctg cagctcccag 138060

aagctccgtg agcctcagcc acccctcaga ctgggttcct ctccaagctc gccctctgga 138120

ggggcagcgc agcctcccac caagggccct gcgaccacag cagggattgg gatgaattgc 138180

ctgtcctgga tctgctctag aggcccaagc tgcctgcctg aggaaggatg acttgacaag 138240

tcaggagaca ctgttcccaa agccttgacc agagcacctc agcccgctga ccttgcacaa 138300

actccatctg ctgccatgag aaaagggaag ccgcctttgc aaaacattgc tgcctaaaga 138360

aactcagcag cctcaggccc aattctgcca cttctggttt gggtacagtt aaaggcaacc 138420

ctgagggact tggcagtaga aatccagggc ctcccctggg gctggcagct tcgtgtgcag 138480

ctagagcttt acctgaaagg aagtctctgg gcccagaact ctccaccaag agcctccctg 138540

ccgttcgctg agtcccagca attctcctaa gttgaaggga tctgagaagg agaaggaaat 138600

gtggggtaga tttggtggtg gttagagata tgcccccctc attactgcca acagtttcgg 138660

ctgcatttct tcacgcacct cggttcctct tcctgaagtt cttgtgccct gctcttcagc 138720

accatgggcc ttcttatacg gaaggctctg ggatctcccc cttgtggggc aggctcttgg 138780

ggccagccta agatcatggt ttagggtgat cagtgctggc agataaattg aaaaggcacg 138840

ctggcttgtg atcttaaatg aggacaatcc ccccagggct gggcactcct cccctcccct 138900

cacttctccc acctgcagag ccagtgtcct tgggtgggct agataggata tactgtatgc 138960

cggctccttc aagctgctga ctcactttat caatagttcc atttaaattg acttcagtgg 139020

tgagactgta tcctgtttgc tattgcttgt tgtgctatgg ggggaggggg gaggaatgtg 139080

taagatagtt aacatgggca aagggagatc ttggggtgca gcacttaaac tgcctcgtaa 139140

cccttttcat gatttcaacc acatttgcta gagggaggga gcagccacgg agttagaggc 139200

ccttggggtt tctcttttcc actgacaggc tttcccaggc agctggctag ttcattccct 139260

ccccagccag gtgcaggcgt aggaatatgg acatctggtt gctttggcct gctgccctct 139320

ttcaggggtc ctaagcccac aatcatgcct ccctaagacc ttggcatcct tccctctaag 139380

ccgttggcac ctctgtgcca cctctcacac tggctccaga cacacagcct gtgcttttgg 139440

agctgagatc actcgcttca ccctcctcat ctttgttctc caagtaaagc cacgaggtcg 139500

gggcgagggc agaggtgatc acctgcgtgt cccatctaca gacctgcagc ttcataaaac 139560

ttctgatttc tcttcagctt tgaaaagggt taccctgggc actggcctag agcctcacct 139620

cctaatagac ttagccccat gagtttgcca tgttgagcag gactatttct ggcacttgca 139680

agtcccatga tttcttcggt aattctgagg gtggggggag ggacatgaaa tcatcttagc 139740

ttagctttct gtctgtgaat gtctatatag tgtattgtgt gttttaacaa atgatttaca 139800

ctgactgttg ctgtaaaagt gaatttggaa ataaagttat tactctgatt aaataaggtc 139860

tccattcatg gattccaagg acaagaaagt catatagaat gtctattttt taagttcttt 139920

cccacgcacc cttagataat ttagctcaga acaggaaatg atagtattaa taaaagctgg 139980

acatcaggat taacagctct ctctggggcc ctgaaggtga gagttctcag acttgctcat 140040

ttgcagttgc ttctttgtga tgctggcaaa ccatcctagt cccattcaaa gggcaataca 140100

aagccttgtg gctgacctca cgatgcagca ctcagtttgc aagaccggca ccagtgtatg 140160

caaacctgag aaggttgggg atgaggatat gggatctttc atccctggaa atttagtcca 140220

gaggcctggg gctggagcag aacaccaagc caatcagctt aatgaatggc ttagattcct 140280

gctaggtttg cagagctgcc ttctttcctt tggtacctta ttatagattg aggagtattt 140340

ctgctaaacc aagataggga taaccagata gcatcttcat agcaatgcca caaaggaaaa 140400

caaaaacaaa acagtaatcc atcatattat tccttagtaa ctatgccaag gtcatgatac 140460

tgaatcctta gattgtttca aaatactact tttctttgct cttcctgatg tgtttgccac 140520

cgcaggcaga tgtttaagta aaacagattt taactgcagc tacaaaagca gcaacaggcc 140580

agcaaaagag aagtgctatc tcagagagca tggctttcag agccacaaga gacagcctca 140640

ctggctgttt cagcttgact gccatgcaaa gaagagagca gagggagaac cagccccacc 140700

cacttattca tcttgtacaa aaaaaaagca cctaccagcc taggctacat agtgagacac 140760

tatctccaca aaaaacccac gaaaactagc tgggtatggt ggcacatgcc tacagtccca 140820

gctactggta aggctgtggt gggaggatct cttgaggcca ggaaggagat ccaggctgca 140880

gtgagccaag attgcaccac tgcactccag tctggacaat cgagcaagat cccatctcaa 140940

acaataaaaa aaaaaagcgt gtaacctcct cagaagaaag atgttataat ctcaggcagc 141000

a 141001

<210> 2

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 2

cactgagaac ctgaagcacc 20

<210> 3

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 3

ggactggacg ttgctaagat c 21

<210> 4

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Зонд

<400> 4

ttaattatct gcaccttccc gcctcc 26

<210> 5

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 5

ggataatatc aaacacgtcc cg 22

<210> 6

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 6

tgcctaatga gccacacttg 20

<210> 7

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Зонд

<400> 7

gtctacaaac cagttgacct gagc 24

<210> 8

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 8

cccgcctact tgctcgca 18

<210> 9

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 9

tggacccgcc tacttgct 18

<210> 10

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 10

accctggacc cgcctact 18

<210> 11

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 11

catgcgccac cctggacc 18

<210> 12

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 12

gtgacatgcg ccaccctg 18

<210> 13

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 13

atgagtgaca tgcgccac 18

<210> 14

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 14

ttcgatgagt gacatgcg 18

<210> 15

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 15

cactttcgat gagtgaca 18

<210> 16

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 16

cctccacttt cgatgagt 18

<210> 17

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 17

gacgcctcca ctttcgat 18

<210> 18

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 18

caaggacgcc tccacttt 18

<210> 19

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 19

ctcgcaagga cgcctcca 18

<210> 20

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 20

cttgctcgca aggacgcc 18

<210> 21

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 21

cctgcttgct cgcaagga 18

<210> 22

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 22

cccgcctgct tgctcgca 18

<210> 23

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 23

tggacccgcc tgcttgct 18

<210> 24

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 24

accctggacc cgcctgct 18

<210> 25

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 25

cgccaccctg gacccgcc 18

<210> 26

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 26

gacacgccac cctggacc 18

<210> 27

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 27

gagtgacacg ccaccctg 18

<210> 28

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 28

ggatgagtga cacgccac 18

<210> 29

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 29

aaaaggatga gtgacacg 18

<210> 30

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 30

agaaaaaagg atgagtga 18

<210> 31

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 31

agccagaaaa aaggatga 18

<210> 32

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 32

tggtagccag aaaaaagg 18

<210> 33

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 33

ttatcctttg agccacac 18

<210> 34

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 34

gatattatcc tttgagcc 18

<210> 35

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 35

gtttgatatt atcctttg 18

<210> 36

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 36

acgtgtttga tattatcc 18

<210> 37

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 37

cgggacgtgt ttgatatt 18

<210> 38

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 38

ctcccgggac gtgtttga 18

<210> 39

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 39

ccgcctcccg ggacgtgt 18

<210> 40

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 40

actgccgcct cccgggac 18

<210> 41

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 41

tcacactgcc gcctcccg 18

<210> 42

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 42

gtactcacac tgccgcct 18

<210> 43

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 43

gaaggtactc acactgcc 18

<210> 44

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 44

gtgtgaaggt actcacac 18

<210> 45

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 45

ggacgtgtga aggtactc 18

<210> 46

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 46

catgggacgt gtgaaggt 18

<210> 47

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 47

ggcgcatggg acgtgtga 18

<210> 48

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 48

gcacggcgca tgggacgt 18

<210> 49

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 49

cacagcacgg cgcatggg 18

<210> 50

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 50

aagccacagc acggcgca 18

<210> 51

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 51

attcaagcca cagcacgg 18

<210> 52

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 52

aataattcaa gccacagc 18

<210> 53

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 53

tcctaataat tcaagcca 18

<210> 54

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 54

cacttcctaa taattcaa 18

<210> 55

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 55

acaccacttc ctaataat 18

<210> 56

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 56

actcacacca cttcctaa 18

<210> 57

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 57

gtgtacgcac tcacacca 18

<210> 58

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 58

gcaagtgtac gcactcac 18

<210> 59

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 59

tctcgcaagt gtacgcac 18

<210> 60

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 60

agtgtctcgc aagtgtac 18

<210> 61

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 61

atgcagtgtc tcgcaagt 18

<210> 62

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 62

ttctatgcag tgtctcgc 18

<210> 63

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 63

tttattctat gcagtgtc 18

<210> 64

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 64

aggatttatt ctatgcag 18

<210> 65

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 65

aagaaggatt tattctat 18

<210> 66

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 66

gcccaagaag gatttatt 18

<210> 67

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 67

gagagcccaa gaaggatt 18

<210> 68

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 68

tcctgagagc ccaagaag 18

<210> 69

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 69

cagatcctga gagcccaa 18

<210> 70

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 70

cctttggtag ccagaaaa 18

<210> 71

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 71

tgcacctttg gtagccag 18

<210> 72

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 72

taattatctg cacctttg 18

<210> 73

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 73

ttcttaatta tctgcacc 18

<210> 74

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 74

cttcttctta attatctg 18

<210> 75

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 75

ccagcttctt cttaatta 18

<210> 76

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 76

agatccagct tcttctta 18

<210> 77

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 77

gctaagatcc agcttctt 18

<210> 78

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 78

cgttgctaag atccagct 18

<210> 79

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 79

tggacgttgc taagatcc 18

<210> 80

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 80

ggactggacg ttgctaag 18

<210> 81

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 81

acttggactg gacgttgc 18

<210> 82

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 82

ccacacttgg actggacg 18

<210> 83

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 83

tgagccacac ttggactg 18

<210> 84

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 84

aaaaaggatg agtgacac 18

<210> 85

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 85

aaaaaaggat gagtgaca 18

<210> 86

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 86

gaaaaaagga tgagtgac 18

<210> 87

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 87

cagaaaaaag gatgagtg 18

<210> 88

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 88

ccagaaaaaa ggatgagt 18

<210> 89

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 89

gccagaaaaa aggatgag 18

<210> 90

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 90

tagccagaaa aaaggatg 18

<210> 91

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 91

gtagccagaa aaaaggat 18

<210> 92

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 92

ggtagccaga aaaaagga 18

<210> 93

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 93

ttggtagcca gaaaaaag 18

<210> 94

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 94

tttggtagcc agaaaaaa 18

<210> 95

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 95

ctttggtagc cagaaaaa 18

<210> 96

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 96

acctttggta gccagaaa 18

<210> 97

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 97

cacctttggt agccagaa 18

<210> 98

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 98

gcacctttgg tagccaga 18

<210> 99

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 99

ctgcaccttt ggtagcca 18

<210> 100

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 100

tctgcacctt tggtagcc 18

<210> 101

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 101

atctgcacct ttggtagc 18

<210> 102

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 102

tatctgcacc tttggtag 18

<210> 103

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 103

ttatctgcac ctttggta 18

<210> 104

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 104

attatctgca cctttggt 18

<210> 105

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 105

aattatctgc acctttgg 18

<210> 106

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 106

ttaattatct gcaccttt 18

<210> 107

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 107

attaattatc tgcacctt 18

<210> 108

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 108

tattaattat ctgcacct 18

<210> 109

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 109

ttattaatta tctgcacc 18

<210> 110

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 110

cttattaatt atctgcac 18

<210> 111

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 111

tcttattaat tatctgca 18

<210> 112

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 112

ttcttattaa ttatctgc 18

<210> 113

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 113

cttcttatta attatctg 18

<210> 114

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 114

gcttcttatt aattatct 18

<210> 115

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 115

agcttcttat taattatc 18

<210> 116

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 116

cagcttctta ttaattat 18

<210> 117

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 117

ccagcttctt attaatta 18

<210> 118

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 118

tccagcttct tattaatt 18

<210> 119

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 119

atccagcttc ttattaat 18

<210> 120

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 120

gatccagctt cttattaa 18

<210> 121

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 121

agatccagct tcttatta 18

<210> 122

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 122

aagatccagc ttcttatt 18

<210> 123

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 123

taagatccag cttcttat 18

<210> 124

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 124

ctaagatcca gcttctta 18

<210> 125

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 125

tgctaagatc cagcttct 18

<210> 126

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 126

ttgctaagat ccagcttc 18

<210> 127

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 127

gttgctaaga tccagctt 18

<210> 128

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 128

acgttgctaa gatccagc 18

<210> 129

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 129

gacgttgcta agatccag 18

<210> 130

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 130

ggacgttgct aagatcca 18

<210> 131

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 131

ctggacgttg ctaagatc 18

<210> 132

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 132

actggacgtt gctaagat 18

<210> 133

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 133

gactggacgt tgctaaga 18

<210> 134

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 134

tggactggac gttgctaa 18

<210> 135

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 135

ttggactgga cgttgcta 18

<210> 136

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 136

cttggactgg acgttgct 18

<210> 137

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 137

cacttggact ggacgttg 18

<210> 138

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 138

acacttggac tggacgtt 18

<210> 139

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 139

cacacttgga ctggacgt 18

<210> 140

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 140

gccacacttg gactggac 18

<210> 141

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 141

agccacactt ggactgga 18

<210> 142

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 142

gagccacact tggactgg 18

<210> 143

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 143

ttgagccaca cttggact 18

<210> 144

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 144

tttgagccac acttggac 18

<210> 145

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 145

ctttgagcca cacttgga 18

<210> 146

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 146

cctttgagcc acacttgg 18

<210> 147

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 147

tcctttgagc cacacttg 18

<210> 148

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 148

atcctttgag ccacactt 18

<210> 149

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 149

tatcctttga gccacact 18

<210> 150

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 150

attatccttt gagccaca 18

<210> 151

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 151

tattatcctt tgagccac 18

<210> 152

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 152

atattatcct ttgagcca 18

<210> 153

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 153

tgatattatc ctttgagc 18

<210> 154

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 154

ttgatattat cctttgag 18

<210> 155

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 155

tttgatatta tcctttga 18

<210> 156

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 156

tgtttgatat tatccttt 18

<210> 157

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 157

gtgtttgata ttatcctt 18

<210> 158

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 158

cgtgtttgat attatcct 18

<210> 159

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 159

gacgtgtttg atattatc 18

<210> 160

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 160

ggacgtgttt gatattat 18

<210> 161

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 161

gggacgtgtt tgatatta 18

<210> 162

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 162

ccgggacgtg tttgatat 18

<210> 163

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 163

cccgggacgt gtttgata 18

<210> 164

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 164

tcccgggacg tgtttgat 18

<210> 165

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 165

cactgccgcc tcccggga 18

<210> 166

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 166

acactgccgc ctcccggg 18

<210> 167

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 167

cacactgccg cctcccgg 18

<210> 168

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 168

ctcacactgc cgcctccc 18

<210> 169

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 169

actcacactg ccgcctcc 18

<210> 170

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 170

tactcacact gccgcctc 18

<210> 171

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 171

ggtactcaca ctgccgcc 18

<210> 172

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 172

aggtactcac actgccgc 18

<210> 173

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 173

aaggtactca cactgccg 18

<210> 174

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 174

tgaaggtact cacactgc 18

<210> 175

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 175

gtgaaggtac tcacactg 18

<210> 176

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 176

tgtgaaggta ctcacact 18

<210> 177

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 177

cgtgtgaagg tactcaca 18

<210> 178

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 178

acgtgtgaag gtactcac 18

<210> 179

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 179

gacgtgtgaa ggtactca 18

<210> 180

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 180

gggacgtgtg aaggtact 18

<210> 181

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 181

tgggacgtgt gaaggtac 18

<210> 182

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 182

atgggacgtg tgaaggta 18

<210> 183

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 183

gcatgggacg tgtgaagg 18

<210> 184

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 184

cgcatgggac gtgtgaag 18

<210> 185

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 185

gcgcatggga cgtgtgaa 18

<210> 186

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 186

cggcgcatgg gacgtgtg 18

<210> 187

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 187

acggcgcatg ggacgtgt 18

<210> 188

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 188

cacggcgcat gggacgtg 18

<210> 189

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 189

agcacggcgc atgggacg 18

<210> 190

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 190

cagcacggcg catgggac 18

<210> 191

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 191

acagcacggc gcatggga 18

<210> 192

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 192

atcctgagag cccaagaa 18

<210> 193

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 193

gatcctgaga gcccaaga 18

<210> 194

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 194

agatcctgag agcccaag 18

<210> 195

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 195

ccagatcctg agagccca 18

<210> 196

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 196

gccagatcct gagagccc 18

<210> 197

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 197

agccagatcc tgagagcc 18

<210> 198

<211> 21

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 198

ugaagguacu cacacugccg c 21

<210> 199

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 199

uaucugcacc uuugguag 18

<210> 200

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 200

tcttattaat tatctgcacc 20

<210> 201

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 201

acgcactcac accacttc 18

<210> 202

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 202

cgcctacttg ctcgcaag 18

<210> 203

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 203

gacccgccta cttgctcg 18

<210> 204

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 204

gacccgcctg cttgctcg 18

<210> 205

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 205

cctggacccg cctgcttg 18

<210> 206

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 206

cgccuacuug cucgcaag 18

<210> 207

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (17)..(17)

<223> основания в этих положениях представляют собой ДНК

<400> 207

ccuggacccg ccugcutg 18

<210> 208

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> основания в этих положениях представляют собой ДНК

<400> 208

tgauauuauc cuuugagc 18

<210> 209

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(2)

<223> основания в этих положениях представляют собой ДНК

<400> 209

ttgauauuau ccuuugag 18

<210> 210

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(2)

<223> основания в этих положениях представляют собой ДНК

<400> 210

ttugauauua uccuuuga 18

<210> 211

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 211

cacuuccuaa uaauucaa 18

<210> 212

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (18)..(18)

<223> основания в этих положениях представляют собой ДНК

<400> 212

acaccacuuc cuaauaat 18

<210> 213

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 213

acucacacca cuuccuaa 18

<210> 214

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 214

cccgccuacu ugcucgca 18

<210> 215

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 215

gacccgccua cuugcucg 18

<210> 216

<211> 18

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 216

gacccgccug cuugcucg 18

<210> 217

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> основания в этих положениях представляют собой ДНК

<220>

<221> misc_feature

<222> (18)..(18)

<223> основания в этих положениях представляют собой ДНК

<400> 217

tggacccgcc ugcuugct 18

<210> 218

<211> 20

<212> РНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 218

ucuuauuaau uaucugcacc 20

<210> 219

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 219

cactgagaac ctgaagcacc 20

<210> 220

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 220

gttgctaaga tccagcttct t 21

<210> 221

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Зонд

<400> 221

ttaattatct gcaccttccc gcctcc 26

<210> 222

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 222

aatatcaaac acgtcccggg ag 22

<210> 223

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 223

tgcctaatga gccacacttg 20

<210> 224

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Зонд

<400> 224

gtctacaaac cagttgacct gagc 24

<210> 225

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 225

aagattgggt ccctggacaa t 21

<210> 226

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 226

agcttgtggg tttcaatctt tttatt 26

<210> 227

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Зонд

<400> 227

cacccacgtc cctggcgga 19

<210> 228

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 228

ggcaaattca acggcacagt 20

<210> 229

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 229

gggtctcgct cctggaagat 20

<210> 230

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Зонд

<400> 230

aaggccgaga atgggaagct tgtcatc 27

<210> 231

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 231

ccagcttctt attaattatc 20

<210> 232

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 232

taagatccag cttcttatta 20

<---

1. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 15-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность азотистых оснований, содержащую область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных азотистых оснований, комплементарных части равной длины азотистых оснований 121708-122044 SEQ ID NO: 1, при этом модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 10 смежных модифицированных нуклеозидов, содержащих модифицированный сахарный фрагмент, при этом модифицированный сахарный фрагмент представляет собой 2'-O(СН₂)₂OСН₃ (2'-МОЕ), при этом последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 90% комплементарна области равной длины SEQ ID NO: 1, измеренной по всей длине модифицированного олигонуклеотида, и при этом соединение способно снижать экспрессию РНК или белка 4R изоформы Tau.

2. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 15-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность азотистых оснований, содержащую область комплементарности, которая содержит по меньшей мере 15 смежных азотистых оснований, комплементарных части равной длины азотистых оснований 121873-121898 SEQ ID NO: 1, при этом каждый нуклеозид модифицированного олигонуклеотида содержит 2'-замещенный сахарный фрагмент, при этом последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 90% комплементарна области равной длины SEQ ID NO: 1, измеренной по всей длине модифицированного олигонуклеотида, и при этом соединение способно снижать экспрессию РНК или белка 4R изоформы Tau.

3. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида на 100% комплементарна области равной длины SEQ ID NO: 1, измеренной по всей длине модифицированного олигонуклеотида.

4. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 16-22 связанных нуклеозидов.

5. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что каждый нуклеозид модифицированного олигонуклеотида содержит модифицированный сахарный фрагмент.

6. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что каждый модифицированный сахарный фрагмент представляет собой 2'-замещенный сахарный фрагмент, необязательно при этом 2'-замещенный сахарный фрагмент представляет собой 2'-МОЕ.

7. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный сахарный фрагмент выбран из: 2'-ОСН3(2'-ОМе) и 2'-F.

8. Соединение по п. 5, отличающееся тем, что каждый модифицированный сахарный фрагмент представляет собой 2'-замещенный сахарный фрагмент, необязательно при этом 2'-замещенный сахарный фрагмент представляет собой 2'-МОЕ.

9. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный сахарный фрагмент представляет собой бициклический сахарный фрагмент.

10. Соединение по п. 9, отличающееся тем, что бициклический сахарный фрагмент представляет собой закрытую нуклеиновую кислоту (LNA) или стерически затрудненный этил сЕt.

11. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный сахарный фрагмент представляет собой заменитель сахара.

12. Соединение по п. 11, отличающееся тем, что заменитель сахара представляет собой морфолино.

13. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида на 100% комплементарна области равной длины SEQ ID NO: 1, измеренной по всей длине модифицированного олигонуклеотида.

14. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 16-22 связанных нуклеозидов.

15. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что по меньшей мере один 2'-замещенный сахарный фрагмент выбран из: 2'-МОЕ, 2'-ОСН₃(2'-ОМе) и 2'-F.

16. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что каждый 2'-замещенный сахарный фрагмент представляет собой 2'-МОЕ.

17. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 15-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность азотистых оснований, содержащую по меньшей мере 15 смежных азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 140, 8-139 и 141-200, при этом модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 10 смежных модифицированных нуклеозидов, содержащих модифицированный сахарный фрагмент, при этом модифицированный сахарный фрагмент представляет собой 2'-МОЕ, при этом последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 90% комплементарна области равной длины SEQ ID NO: 1, измеренной по всей длине модифицированного олигонуклеотида, и при этом соединение способно снижать экспрессию РНК или белка 4R изоформы Tau.

18. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида на 100% комплементарна области равной длины SEQ ID NO: 1, измеренной по всей длине модифицированного олигонуклеотида.

19. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 16-22 связанных нуклеозидов.

20. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что каждый нуклеозид модифицированного олигонуклеотида содержит модифицированнный сахарный фрагмент.

21. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что каждый модифицированный сахарный фрагмент представляет собой 2'-замещенный сахарный фрагмент, необязательно при этом 2'-замещенный сахарный фрагмент представляет собой 2'-МОЕ.

22. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный сахарный фрагмент выбран из: 2'-ОМе и 2'-F.

23. Соединение по п. 20, отличающееся тем, что каждый модифицированный сахарный фрагмент представляет собой 2'-замещенный сахарный фрагмент, необязательно при этом 2'-замещенный сахарный фрагмент представляет собой 2'-МОЕ.

24. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный сахарный фрагмент представляет собой бициклический сахарный фрагмент.

25. Соединение по п. 24, отличающееся тем, что бициклический сахарный фрагмент представляет собой закрытую нуклеиновую кислоту (LNA) или стерически затрудненный этил cEt.

26. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный сахарный фрагмент представляет собой заменитель сахара.

27. Соединение по п. 26, отличающееся тем, что заменитель сахара представляет собой морфолино.

28. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что по меньшей мере одно азотистое основание модифицированного олигонуклеотида представляет собой модифицированное азотистое основание.

29. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что все цитозины представляют собой 5-метилцитозин.

30. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что по меньшей мере одно азотистое основание модифицированного олигонуклеотида представляет собой модифицированное азотистое основание.

31. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что все цитозины представляют собой 5-метилцитозин.

32. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что по меньшей мере одно азотистое основание модифицированного олигонуклеотида представляет собой модифицированное азотистое основание.

33. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что все цитозины представляют собой 5-метилцитозин.

34. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что соединение имеет мотив межнуклеозидной связи N_SN_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_SN, где каждый N представляет собой нуклеозид, каждый S представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь и каждый О представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

35. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что соединение имеет мотив межнуклеозидной связи N_SN_ON_ON_ON_SN_SN_SN_SN_SN_SN_SN_SN_ON_ON_ON_SN_SN, где каждый N представляет собой нуклеозид, каждый S представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь и каждый О представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

36. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь.

37. Соединение по п. 36, отличающееся тем, что модифицированная межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.

38. Соединение по п. 37, отличающееся тем, что каждая оставшаяся межнуклеозидная связь представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

39. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь.

40. Соединение по п. 39, отличающееся тем, что каждая модифицированная межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.

41. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что соединение имеет мотив межнуклеозидной связи N_SN_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_SN, где каждый N представляет собой нуклеозид, каждый S представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь и каждый О представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

42. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что соединение имеет мотив межнуклеозидной связи N_SN_ON_ON_ON_SN_SN_SN_SN_SN_SN_SN_SN_ON_ON_ON_SN_SN, где каждый N представляет собой нуклеозид, каждый S представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь и каждый О представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

43. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь.

44. Соединение по п. 43, отличающееся тем, что модифицированная межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.

45. Соединение по п. 44, отличающееся тем, что каждая оставшаяся межнуклеозидная связь представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

46. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь.

47. Соединение по п. 46, отличающееся тем, что каждая модифицированная межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.

48. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что соединение имеет мотив межнуклеозидной связи N_SN_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_ON_SN_SN, где каждый N представляет собой нуклеозид, каждый S представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь и каждый О представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

49. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что соединение имеет мотив межнуклеозидной связи N_SN_ON_ON_ON_SN_SN_SN_SN_SN_SN_SN_SN_ON_ON_ON_SN_SN, где каждый N представляет собой нуклеозид, каждый S представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь и каждый О представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

50. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь.

51. Соединение по п. 50, отличающееся тем, что модифицированная межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.

52. Соединение по п. 51, отличающееся тем, что каждая оставшаяся межнуклеозидная связь представляет собой фосфодиэфирную межнуклеозидную связь.

53. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь.

54. Соединение по п. 53, отличающееся тем, что каждая модифицированная межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.

55. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 18 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 140, при этом каждый нуклеозид модифицированного олигонуклеотида содержит 2'-замещенный сахарный фрагмент и каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь или фосфодиэфирную межнуклеозидную связь и при этом указанный олигонуклеотид способен снижать экспрессию РНК или белка 4R изоформы Tau.

56. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 55, отличающийся тем, что 2'-заместитель по меньшей мере одного 2'-замещенного сахарного фрагмента представляет собой 2'-МОЕ.

57. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 55, отличающийся тем, что 2'-заместитель по меньшей мере одного 2'-замещенного сахарного фрагмента представляет собой 2'-ОМе.

58. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 55, отличающийся тем, что каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.

59. Соединение по п. 1, содержащее по меньшей мере один конъюгат.

60. Соединение по п. 2, содержащее по меньшей мере один конъюгат.

61. Соединение по п. 17, содержащее по меньшей мере один конъюгат.

62. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что соединение снижает экспрессию белка Tau, содержащего аминокислотную последовательность, кодируемую 10 экзоном мРНК.

63. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что соединение снижает экспрессию белка Tau, содержащего аминокислотную последовательность, кодируемую 10 экзоном мРНК.

64. Соединение по п. 17, отличающееся тем, что это соединение снижает экспрессию белка Tau, содержащего аминокислотную последовательность, кодируемую 10 экзоном мРНК.

65. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп. 1-64 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель для предупреждения, лечения и облегчения заболеваний, расстройств и патологических состояний, связанных с Tau.

66. Способ модулирования сплайсинга транскрипта Tau в клетке in vitro для снижения экспрессии 4R изоформы Tau, включающий приведение клетки в контакт с соединением по любому из пп. 1-64 или фармацевтической композицией по п. 65.

67. Применение соединения по любому из пп. 1-64 или фармацевтической композиции по п. 65 для изготовления лекарственного средства для модулирования сплайсинга транскрипта Tau в клетке для снижения экспрессии 4R изоформы Tau, включающего приведение клетки в контакт с указанным лекарственным средством, при этом указанная клетка является клеткой в животном.

68. Способ снижения экспрессии 4R изоформы белка Tau в клетке in vitro, включающий приведение клетки в контакт с соединением по любому из пп. 1-64 или фармацевтической композицией по п. 65.

69. Применение соединения по любому из пп. 1-64 или фармацевтической композиции по п. 65 для изготовления лекарственного средства для модулирования экспрессии белка Tau в клетке для снижения экспрессии 4R изоформы белка Tau, включающего приведение клетки в контакт с указанным лекарственным средством, при этом указанная клетка является клеткой в животном.

70. Применение соединения по любому из пп. 1-64 или фармацевтической композиции по п. 65 для изготовления лекарственного средства для снижения или облегчения одного или более симптомов, связанных с расстройством, ассоциированным с Tau.

71. Применение по п. 70, отличающееся тем, что введение лекарственного средства осуществляют посредством инъекции.

72. Применение по п. 71, отличающееся тем, что введение является системным.

73. Применение по п. 72, отличающееся тем, что введение осуществляют в ЦНС.