Способ приготовления библиотеки днк
Владельцы патента RU 2746126:
Общество с ограниченной ответственностью "ТеснГен" (RU)
Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ приготовления библиотеки ДНК из ДНК, выделенной из биологического образца, для последующего секвенирования методами секвенирования нового поколения, в котором: (1) фрагментируют ДНК, выделенную из образца с получением смеси
фрагментов ДНК; (2) восстанавливают концевые последовательности фрагментов ДНК, полученных на стадии (1), (затупляют концы) и обогащают полученную смесь фрагментов ДНК целевыми последовательностями ДНК посредством магнитных частиц с ковалентно-присоединенными к ним олигонуклеотидными зондами, являющимися специфичными к целевым последовательностям ДНК;
(3) лигируют целевые последовательности ДНК, полученные на этапе (2), с олигонуклеотидными адаптерами, содержащими олигонуклеотидную последовательность, применяющуюся в упомянутом методе секвенирования нового поколения; (4) очищают последовательности ДНК, полученные на этапе (3), посредством упомянутых магнитных частиц, характеризующийся тем, что упомянутые магнитные частицы представляют собой магнитные частицы, к которым ковалентно присоединены олигонуклеотидные зонды, имеющие последовательности нуклеотидов SEQ ID NO: 1 - 387. Изобретение расширяет арсенал средств подготовки ДНК-библиотек для проведения секвенирования нового поколения. 10 з.п. ф-лы, 1 ил.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Изобретение относится к медицине, в особенности к молекулярно-биологической диагностике, а именно к выявлению генетически-обусловленных наследственных заболеваний.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Наследственные заболевания - это заболевания, в основе которых лежат мутации ядерной или митохондриальной ДНК.
Современная классификация выделяет:
- генные;
- хромосомные;
- митохондриальные нарушения.
Диагностика производится цитогенетическими, молекулярно-цитогенетическими и молекулярно-генетическими методами. Наиболее широкую группу наследственных заболеваний представляют генные болезни, большинство таких патологий обусловлено мутациями в генах, которые приводят нарушению функций их продуктов - белков. Несмотря на редкость отдельных нозологий, общая частота генных болезней в популяции составляет 1-2%, что делает чрезвычайно важной наличие доступной и своевременной диагностики.
Существующие методы или имеют серьезные ограничения по спектру изучаемых генетических локусов (капиллярный электрофорез), или чрезвычайно сложны, трудоемки и дороги (секвенирование нового поколения на основе зарубежных реагентов для подготовки библиотек).
На данный момент существует два наиболее распространенных способа поиска мутаций:
1) капиллярный электрофорез (секвенирование по Сэнгеру), позволяющий анализировать отдельные гены;
2) секвенирование нового поколения (NGS), позволяющее анализировать панели генов, но требующее многостадийной подготовки библиотек фрагментов ДНК для сиквенса (2-5 дней), высоких затрат на проведение анализа из-за неоптимального генного состава панелей, особых требований к квалификации персонала из-за необходимости самостоятельного биоинформационного анализа получаемых данных, типичное время проведение анализа составляет не менее 14-20 дней.
Все коммерчески доступные технологии секвенирования нового поколения (NGS - next generation sequencing) требуют приготовления ДНК-библиотек, которые состоят из целевой последовательности и служебных адаптеров, необходимых для выполнения секвенирования на приборе. Большинство адаптеров состоит из трех доменов:
1) праймеры для клональной амплификации;
2) праймеры для секвенирования;
3) уникальный индекс для идентификации образца.
В зависимости от метода секвенирования (секвенирование синтезом - Illumina Genome Analyzer, Illumina или полупроводниковое секвенирование - Life Technologies, Thermo Fisher Scientific) разработано несколько методов конструирования ДНК-библиотек, но все они являются многостадийными, времязатратными и включают следующие шаги:
1) фрагментация ДНК;
2) обогащение целевыми последовательностями;
3) восстановление концевых последовательностей;
4) добавление аденина на концевые участки ДНК;
5) лигирование адаптеров с индексами;
6) селекция по размеру фрагментов;
7) амплификация библиотеки.
При этом наиболее сложными являются шаги 2-6, которые проводятся в виде отдельных реакций, между которыми требуется обязательная неоднократная очистка реакционной смеси с помощью магнитных частиц. Все это приводит к тому, что общее время приготовления библиотек составляет не менее 24-48 часов и требует большого количества ручного труда.
Серьезным недостатком текущих протоколов подготовки ДНК-библиотек является тот факт, что применяемые методы основаны на присоединении служебных последовательностей адаптеров с помощью лигазы, но помимо того, что сама реакция лигирования обладает ограниченной эффективностью, в составе большинства ферментных смесей отсутствуют ферменты для исправления поврежденных 5'-концов целевых фрагментов ДНК, а наличие фосфатной группы на этом конце является обязательным условием для работы лигазы. Таким образом, по вышеупомянутым причинам, примерно половина присутствующих в растворе ДНК молекул не может принять участие в реакции лигирования и не попадает в библиотеку, что крайне неблагоприятно сказывается на эффективности анализа.
Был разработан ряд методик, призванных преодолеть некоторые недостатки (например, модификация процесса лигирования, не требующая отдельного фосфорилирования 5'-концов), но в силу необходимости сохранения универсальности эти методики наследуют основные принципы первоначальных подходов и не решают проблем с длительностью и сложностью лабораторных манипуляций.
Для повышения скорости анализа, его надежности и снижения себестоимости были предложены методы подготовки библиотек фрагментов ДНК заданного размера только с помощью ПЦР и стандартных методов очистки ПЦР-продуктов, но они имеют ограничения по количеству исследуемых локусов и сложных для амплификации участков генома.
Таким образом, в настоящее время сохраняется актуальность создания способа создания библиотек ДНК для последующего секвенирования и диагностики наследственных заболеваний, обладающего преимуществами перед вышеупомянутыми способами по надежности и скорости получения результатов диагностики.
КРАТКОЕ РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задача настоящего изобретения состоит в создании способа подготовки ДНК-библиотек для секвенирования последовательностей генов, аллели которых ассоциированы с наследственными заболеваниями, превосходящего вышеупомянутые способы в аспекте надежности и скорости получения результатов диагностики.
Вышеуказанная задача решена благодаря тому, что в предлагаемом способе приготовления библиотеки ДНК из ДНК, выделенной из биологического образца, для последующего секвенирования методами секвенирования нового поколения:
(1) фрагментируют ДНК выделенную из образца с получением смеси фрагментов ДНК;
(2) восстанавливают концевые последовательности фрагментов ДНК, полученных на стадии (1) (затупляют концы) и обогащают полученную смесь фрагментов ДНК целевыми последовательностями ДНК посредством магнитных частиц с ковалентно-присоединенными к ним олигонуклеотидными зондами, являющимися специфичными к целевым последовательностям ДНК;
(3) лигируют целевые последовательности ДНК, полученные на этапе (2), с олигонуклеотидными адаптерами, содержащими олигонуклеотидную последовательность (индекс), применяющуюся в упомянутом методе секвенирования нового поколения;
(4) очищают последовательности ДНК, полученные на этапе (3), посредством упомянутых магнитных частиц.
Фрагментацию ДНК на этапе (1) предпочтительно осуществляют посредством ультразвука, предпочтительно до размера фрагментов приблизительно 150 пар нуклеотидных оснований (п.н.).
Восстановление концевых последовательностей фрагментов ДНК на этапе (2) предпочтительно осуществляют посредством ДНК-полимеразы I Е.coli (фрагмент Кленова) и Т4 ДНК-полимеразы.
Упомянутые зонды предпочтительно имеют последовательности нуклеотидов SEQ ID NO: 1-388, специфичные для генов MYH7, TTN, KCNQ1, DSP и SCN5A.
Присоединение упомянутых адаптеров к концам ДНК предпочтительно осуществляют посредством лигирования первого адаптера с промежуточным адаптером, разрушения промежуточного адаптера и лигирования второго адаптера.
Для присоединения первого адаптера и второго адаптера с комплементарным ему промежуточным адаптером на другом конце фрагмента ДНК с последующим разрушением промежуточного адаптера предпочтительно используют ДНК-полимеразу I E.coli (Фрагмент Кленова), Т4 ДНК-полимеразу, урацил-ДНК-гликозилазу, ДНК-лигазу Т4 и Taq ДНК-полимеразу.
Упомянутые олигонуклеотидные адаптеры предпочтительно имеют последовательность 5Р-ACTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGAC-TAAGGCGAATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-C3, промежуточный адаптер имеет последовательность GAGAUGUGUAUAAGAGACAGddT, и второй адаптер имеет последовательность: С3-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACCTCTCTAT-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGT.
После этапа (3) или (4) предпочтительно осуществляют отбор целевых фрагментов ДНК по размеру.
После этапа (3) или (4) целевые фрагменты ДНК предпочтительно подвергают амплификации посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Амплификацию предпочтительно осуществляют посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР).
В еще одном своем аспекте изобретение относится к магнитным частицам для применения в вышеописанном способе, к которым ковалентно присоединены олигонуклеотидные зонды, имеющие последовательности нуклеотидов SEQ ID NO: 1-388.
Предпочтительно, упомянутые зонды имеют последовательности, специфичные для генов MYH7, TTN, KCNQ1, DSP и SCN5A.
Изобретение может быть использовано для генетической диагностики наследственных заболеваний посредством определения наличия патогенных мутаций с помощью секвенирования нового поколения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
На фиг. 1 приведен пример результата секвенирования экзонов 1-7 гена MYH7 в браузере IGV 2.4.1. Розовые - прямые прочтения, голубые - обратные.
ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем тексте использованы следующие сокращения: ПЦР - полимеразная цепная реакция, п.н. - пар нуклеотидов.
Секвенирование нового поколения (англ. next generation sequencing, NGS) - техника определения нуклеотидной последовательности ДНК и РНК для получения формального описания ее первичной структуры. Технология методов секвенирования нового поколения (СНП) позволяет «прочитать» единовременно сразу несколько участков генома, что является главным отличием от более ранних методов секвенирования.
Trimmomatic - программа для удаления адаптерных последовательностей и последовательностей с низким качеством прочтений.
BWA (англ. Burrows-Wheeler Aligner) - программный пакет для картирования коротких прочтений на референсные геномы (такие как, например, геном человека). Является одним из широко используемых алгоритмов выравнивания, а также рекомендуется для анализа данных производителями Illumina. BWA состоит из трех основных алгоритмов: BWA-BackTrack, BWA-SW и BWA-MEM.
BWA-MEM является последним реализованным алгоритмом пакета BWA. Он использует стратегию, в которой алгоритм выравнивания чтений выбирается автоматически в каждом конкретном случае: локальное или глобальное выравнивание. Поддерживаются парноконцевые чтения и выравнивания химерных прочтений. Алгоритм устойчив к ошибкам секвенирования и применим к широкому диапазону последовательности длиной от 70 п.о. до нескольких мегабаз. А для картирования последовательностей длиной 100 п.о. BWA-MEM показывает лучшую производительность, чем некоторые передовые алгоритмы выравнивания прочтений.
Прочтения (риды) - от англ. read - «чтение, прочтение» - отдельные фрагменты ДНК, полученные в результате работы секвенатора (секвенирования).
FastQC - программа для оценки качества данных высокопроизводительного секвенирования.
BamQC - приложение для оценки качества файлов ВАМ.
Формат ВАМ - это бинарный формат для хранения данных картирования.
Genome Analysis Toolkit (GATK) - это программный пакет, разработанный в Broad Institute для анализа большого объема данных с высокой вычислительной мощностью.
HaplotypeCaller, UnifiedGenotyper - режимы работы GATK.
SnpSift - это программа, которая служит для фильтрации вариантов в VCF-файле.
SnpEff - это программное обеспечение для аннотирования вариантов и прогнозирования их влияния на гены.
ANNOVAR - это эффективный программный инструмент, позволяющий использовать обновленную информацию для функциональной аннотации генетических вариантов, обнаруженных в различных геномах (включая геном человека hgl8, hgl9, hg38, а также мышь, червя, муху, дрожжи и многие другие.
PolyPhen2 - это инструмент, который предсказывает возможное влияние аминокислотного замещения в структуре и функции человеческого белка.
SIFT, MutationTaster, FATMM, CADD, DANN, Eigen - название алгоритмов предсказания патогенности.
Alamut Batch - инструмент для аннотирования файлов VCF с функцией предсказания сайтов сплайсинга.
ClinVar - общедоступный архив отчетов о связях между геномными вариантами и фенотипами.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4832236/
HGMD Professional - Human Gene Mutation Database, база данных мутаций в человеческом геноме, http://www.hgmd.cf.ac.uk/ac/index.php
dbSNP - база данных SNP, свободный общественный архив, содержащий данные по наследственной изменчивости различных видов, разработанный и поддерживаемый NCBI (National Center for Biotechnology Information -Национальный центр биотехнологической информации США).
Задача настоящего изобретения состоит в создании способа подготовки геномных библиотек фрагментов ДНК для секвенирования нового поколения и диагностического набора для его осуществления, позволяющего проводить генетическую диагностику наследственных заболеваний с высокой чувствительностью, надежностью, скоростью и низкой себестоимостью.
Основной методикой проведения секвенирования нового поколения является подготовка библиотек фрагментов ДНК из образца и проведение секвенирования с помощью одной из технологий - пиросеквенирование (454 Life Sciences, Roche), секвенирования синтезом (Illumina Genome Analyzer, Illumina), полупроводникового секвенирования (Life Technologies, Thermo Fisher Scientific).
Ключевой шаг в подготовке библиотек нужного размера заключается в присоединении служебных адаптерных олигонуклеотидных последовательностей к целевым фрагментам ДНК, для чего в большинстве протоколов используются дорогостоящие зарубежные ферменты, а сами протоколы представляют собой многоступенчатые многодневные процессы с высокой трудоемкостью или требованиями к автоматизации процесса.
Поставленная задача решена благодаря применению комбинирования шагов восстановления концевых участков и обогащения целевыми последовательностями, исключению шага аденилирования и модификации шага лигирования адаптеров в целях повышения эффективности генерации ДНК-библиотеки.
Это позволило сократить число манипуляций, ускорить приготовление библиотеки до нескольких часов, значительно снизить себестоимость библиотеки за счет снижения стоимости реагентов и трудозатрат, повысить надежность анализа за счет повышения качества покрытия, так как секвенированию подвергаются только целевые регионы генов, отвечающих за развитие наследственной патологии.
Первый адаптер представляет собой последовательность, комплементарную стандартному праймеру Р7 (Illumina) с индексом и выглядит следующим образом:
5Р-ACTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGACTAAGGCGAATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-С3,
где жирным выделен фрагмент, соответствующий индексу i7.
Промежуточный адаптер представляет собой последовательность, комплементарную 5'-концу первого адаптера и выглядит следующим образом:
GAGAUGUGUAUAAGAGACAGddT
Второй адаптер представляет собой последовательность, комплементарную стандартному праймеру Р5 (Illumina) с индексом и выглядит следующим образом:
С3-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACCTCTCTATTCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGT,
где жирным выделена последовательность, соответствующая индексу i7.
Двойные индексы i5 и i7 подбираются согласно документации производителя секвенатора Illumina.
Ферментативные реакции проводят в две стадии, это достигается за счет того, что:
(а) Нет необходимости в шаге аденилирования;
(б) Реакции подготовки концов ДНК к лигированию и лигирование адаптерных последовательностей объединены в один шаг.
Предлагаемые наборы могут содержать готовые смеси всех необходимых зондов на магнитных частицах, что позволяет в минимальные сроки подготовить библиотеку фрагментов ДНК для секвенирования нового поколения в отношении одного или нескольких генов, имеющих аллели, ассоциированные с наследственными заболеваниями.
Предпочтительный способ секвенирования предусматривает следующие стадии:
(1) проводят выделение ДНК из образца;
(2) проводят фрагментацию образца с помощью ультразвука на целевые фрагменты размером около 150 п.н.;
(3) проводят достройку концов с помощью ДНК-полимеразы I Е.coli (Фрагмент Кленова) и Т4 ДНК-полимеразы;
(4) проводят очистку продуктов ПЦР от неизрасходованных реагентов с одновременным обогащением целевыми последовательностями с помощью магнитных частиц с ковалентно пришитыми олигонуклеотидными зондами следующей структуры: частица-Т10-С6-3'-ХХХХХХХХХХХ-5', где ХХХХХХХХ-последовательность зонда;
(5) проводят одновременное лигирование первого адаптера, деградацию промежуточного адаптера и лигирование второго адаптера с помощью урацил-ДНК-гликозилазы, ДНК-лигазы Т4 и Taq ДНК-полимеразы;
(6) проводят очистку продуктов ПЦР от неизрасходованных реагентов и коротких фрагментов ДНК на магнитных частицах;
(7) проводят оценку концентрации получившейся библиотеки и при необходимости (в случае низкой концентрации) проводят ПЦР;
(8) проводят секвенирование полученной библиотеки на приборе MiSeq (Illumina);
(7) проводят биоинформационную обработку результатов сиквенса следующим образом:
(а) Удаление адаптеров и последовательностей с низким качеством прочтения.
(б) Картирование прочтений на референсную последовательность генома человека (GRch37/hg19) при помощи алгоритма BWA-MEM и удаление дубликатов.
(в) Проверка качества исходных данных, выравнивания, обогащения и покрытия целевых регионов с помощью Fast-QC, BAMQC и NGSrich. Ожидаемое покрытие целевых регионов - от 70х до 150х, доля целевых регионов с покрытием выше 50х - не менее 98%. Автоматизированная оценка качества покрытия целевых регионов с генерированием списка потенциально пропущенных локусов.
(г) Поиск нуклеотидных вариаций для терминальных мутаций с помощью GATK HaplotypeCaller + UnifiedGenotyper (с получением объединенного VCF-файла).
(д) Обработка консенсусного VCF-файла с помощью программы SnpSift (критерий фильтрации - глубина прочтения более 10).
(е) Аннотирование с помощью SnpEff (анализ всех транскриптов), ANNOVAR (анализ частот аллелей в ЕхАС, 1000G и ESP6500, алгоритмы проверки функциональной значимости SIFT, PolyPhen2, MutationTaster, FATMM, CADD, DANN, Eigen) и Alamut Batch (влияние на сплайсинг, базы данных dbSNP, ClinVar, HGMD Professional).
Такой способ обеспечивает высокую специфичность и точность диагностики без использования дорогостоящих методов подготовки геномных библиотек, так как все расходные материалы доступны у российских поставщиков.
Для валидации разработанной панели генов и биоинформационного подхода было проведено секвенирование нового поколения с известным результатом молекулярно-генетического тестирования для образцов четырех пациентов Р001, Р002, Р003 и Р007, с клиническим диагнозом ДКМП у каждого.
ДНК из лейкоцитов периферической крови выделяют с помощью набора QIAamp DNA Blood Mini QIAcube Kit («Qiagen», Германия) согласно инструкции компании-производителя на автоматической станции QIAcube («Qiagen», Германия). Концентрацию ДНК измеряли на спектрофотометре NanoVue Plus («GE Healthcare»). Подготовку библиотек для секвенирования осуществляли следующим образом:
1) Провели фрагментацию ДНК с помощью ультразвукового гомогенизатора Covaris М220 с целевой длинной фрагментов 150 п.н.
2) Провели достройку концов в объеме реакции 50 мкл, содержащей 1х SE-буфер для полимераз, 100 мкМ каждого трифосфата, 3 ед. Т4 ДНК полимеразы и 5 ед. ДНК полимеразы I E.coli (Фрагмент Кленова).
3) Провели очистку продуктов ПЦР от неизрасходованных реагентов с одновременным обогащением целевыми последовательностями с помощью магнитных частиц с ковалентно пришитыми олигонуклеотидными зондами следующей структуры: частица-Т10-С6-3'-ХХХХХХХХХХХ-5', где ХХХХХХХХ-последовательность зонда с помощью стандартной процедуры очистки на магнитных частицах.
4) Провели одновременное лигирование первого адаптера, деградацию промежуточного адаптера и лигирование второго адаптера в реакционной смеси объемом 50 мкл, содержащей 1х SE-буфер, 200 мкМ каждого трифосфата, 5 ед. урацил-ДНК-гликозилазы, 10 ед. Taq ДНК-полимеразы, 10 ед. ДНК-лигазы Т4, 200 пмоль первого адаптера, 200 пмоль промежуточного адаптера и 200 пмоль второго адаптера.
5) Провели очистку продуктов ПЦР от неизрасходованных реагентов с помощью магнитных частиц AMPure согласно инструкции производителя.
6) Проверили наличие и концентрацию фрагментов библиотек с помощью агарозного электрофореза (ожидаемые длины 240-280 п.н.)
7) Провели секвенирование на приборе MiSeq (Illumina). Общее время, затраченное на подготовку библиотек, составило 4 часа.
Полученная библиотека характеризуется высокой равномерностью покрытия, пример результата секвенирования экзонов 1-7 гена MYH7 приведен на фиг. 1.
Среднее покрытие для крови составило 570х, доля корректно картированных прочтений - 99,3%, доля целевых регионов с покрытием выше 100х - 99,7%.
Автоматизированный биоинформационный анализ проводится следующим образом:
1) Удаление адаптеров и последовательностей с низким качеством прочтения с помощью Trimmomatic.
2) Картирование прочтений на референсную последовательность генома человека (GRch37/hg19) при помощи алгоритма BWA-MEM, удаление дубликатов с помощью Picard.
3) Проверка качества исходных данных, выравнивания, обогащения и покрытия целевых регионов с помощью FastQC, BAMQC.
4) Поиск нуклеотидных вариаций для терминальных мутаций с помощью GATK HaplotypeCaller + UnifiedGenotyper (с получением объединенного VCF-файла).
5) Обработка консенсусного VCF-файлов с помощью программы SnpSift (критерий фильтрации - глубина прочтения более 10).
6) Аннотирование с помощью SnpEff (анализ всех транскриптов), ANNOVAR (анализ частот аллелей в ЕхАС, 1000G и ESP6500, алгоритмы проверки функциональной значимости SIFT, PolyPhen2, MutationTaster, FATMM, CADD, DANN, Eigen) и Alamut Batch (влияние на сплайсинг, базы данных dbSNP, ClinVar, HGMD Professional).
Общее время биоинформационной обработки составило 1 час.
Результаты секвенирования четырех образцов:
Данные секвенирования пациента Р001 -
Ген: TTN
Геномная координата: chr2:179567340
Транскрипт: NM_001267550.2
кДНК: С.30274C>Т
Аминокислота: р.His10092Tyr
Данные секвенирования пациента Р002 -
Ген: KCNQ1
Геномная координата: chr11:2610069
Транскрипт: NM_000218.2
кДНК: С.13780А
Аминокислота: p.Gly460Ser
Данные секвенирования пациента Р003 -
Ген: DSP
Геномная координата: chr6:7570791
Транскрипт: NM_004415.3
кДНК: c.1696G>A
Аминокислота: p.A1a566Thr
Данные секвенирования пациента Р007 -
Ген: SCN5A
Геномная координата: chr3:38674747
Транскрипт: NM_001099404.1
кДНК: с.52С>Т
Аминокислота: p.Arg18Trp
Все патогенные мутации были подтверждены методом капиллярного электрофореза.
Амплификацию полиморфных участков исследуемых генов проводили на амплификаторе Veriti (Life Technologies, Applied Biosystems) в 20 мкл реакционной смеси для сложных матриц KAPA2G Robust PCR Kit (Кара Biosystems), олигонуклеотидные праймеры синтезированы ЗАО «Евроген», г. Москва. Условия амплификации фрагментов ДНК: 95°С / 2 мин - 1 цикл; 94°С / 10 сек, 60°С / 30 сек, 72°С / 1 мин - 40 циклов; 72°С / 5 мин - 1 цикл.
Праймеры были подобраны с адаптерами М13 (M13-F: 5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3', M13-R: 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'). Очистку проводили при помощи щелочной алкалинфосфатазы (SAP) и Exonuclease I. Реакционная смесь: SAP - 0,05 ед; 10× SAP-буфер - 0,35 мкл; Exol - 0,5 ед; ПЦР-продукт - 10 мкл; стерильная вода - до 20 мкл. Температурно-временной профиль: 37°С - 30 мин, 80°С - 15 мин.
Очистка продукта сиквенсовой ПЦР проводилась с использованием набора BigDye Xterminator (Life Technologies, Applied Biosystems).
Автоматическое секвенирование фрагментов ДНК проводили на генетическом анализаторе (секвенаторе) ABI PRISM 3500 с помощью праймеров М13 (-20) и M13R-pUC (-40) в прямом и обратном направлении для каждого ампликона. На реакцию сиквенсовой ПЦР брали от 50 до 100 fmol матрицы ДНК, 3,2 pmol праймера и 2 мкл смеси для секвенирования "BigDye® Terminator v1.1 Cycle Sequencing Kit" (Life Technologies, Applied Biosystems, США). Реакцию ставили в 10 мкл по программе: 96°С / 20 сек - 1 цикл; 50°С / 20 сек, 60°С / 4 мин - 27 циклов.
Таким образом, процедура секвенирования с помощью предлагаемых праймеров занимает существенно меньше времени, чем секвенирование альтернативными методами и дает результат, согласующийся с результатами, полученными этими методами.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ООО "Тестген"
<120> СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БИБЛИОТЕК ДНК ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ СЕКВЕНИРОВАНИЯ
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ НАСЛЕДСТВЕННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
<130> 13391048
<160> 387
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 1
ttttttgaag aggcgcagtc tactgaagca tacctgaagg ggctccagga ctccatcagg 60
<210> 2
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2
tttttcagcc gctcatccag ctgctgcttg tcattctcca ggtccatgat gctctcctgg 60
<210> 3
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 3
ttttgggctg tggtcttccg gatatcacgg cacagaagcg ggcaggcttg ccagactgca 60
<210> 4
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 4
ttttaattct tgttccttgg ctttatcggc ggccactact accttagtta cagcagtctt 60
<210> 5
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 5
tttgtaataa agtaaggcgc ggcaggttct ccaggccctg cttgttcctc tgtgaggcta 60
<210> 6
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 6
tttggtcatc tgtctccacc atcatggtca ccatattcaa gcagatcaga aacatgatgg 60
<210> 7
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 7
tttgccatgg agggcgtggc caggagccga ggttccggga ctgggctgtc cctgggcact 60
<210> 8
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 8
tttctgcaag tggctctatg atgctaaacg ccgccaggat tccttagaat ccatgaaatt 60
<210> 9
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 9
tttctacaga gagattacag ttggtttcaa ctctgccaac tatcagcttg taaggtcctt 60
<210> 10
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 10
ttgggcaagt tcggtgaaaa agtcacacag ctgacagacc gctggcaaag gatagataaa 60
<210> 11
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 11
ttggcctcct cgagctcctc agtccgctga atggcgtccg tctcatactt ggtcctccac 60
<210> 12
<211> 19
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 12
ttgccacgtc ggccatcag 19
<210> 13
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 13
ttgcacggtg gcagcacccc cggcagcggc ggccccccca gagagggcgg ggcccacatc 60
<210> 14
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 14
ttctttggct ttagctgcgg aaattactac ctttggtaca aatgtttttt cagtttcttt 60
<210> 15
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 15
ttccagcatc ttccttagtc atgtcttcaa tgagcagcat atgagattgt ttgtctatca 60
<210> 16
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 16
ttatgaagcc aggctcactg aggaggaaac tgtctgcctg gacctggata aagtggaagc 60
<210> 17
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 17
ttaagttaag gtgagtgctg caaagctctc agccattcct gatttgtttg tagctacaca 60
<210> 18
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 18
tgttgtagtc cacgatgccg gcatagtgga tcagggagaa gtgggcttca ggcttcccct 60
<210> 19
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 19
tgttcccagt tcaaagcgaa gcttgcgagc ctggaggagc tgaagagaca ggctgagctg 60
<210> 20
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 20
tgtgtttgtc acttggctta atttccacac tcttatggaa ccattttact ggaacagtgt 60
<210> 21
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 21
tgtgtctgac tcggccacag cgatgggcac acacacgggc tctggatccc cgggggtgcc 60
<210> 22
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 22
tgtgtcgttc ttgaacttgg aaattgattt caatgccatc tttataccag tgggcatcaa 60
<210> 23
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 23
tgtgcggggg cgtttatcca catggactaa tctttccgtt gttagatctg tagttttctt 60
<210> 24
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 24
tgtcatctaa tttggtggca gcaatgataa gtctcctttt gtggccatca gactcacttc 60
<210> 25
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 25
tgtattctcc agcatcatca gcaaaagtca tagaaatcac cagcttgcat tcaccggttt 60
<210> 26
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 26
tgtagaaagt ccatttggta tctttctcca tgtttgatgc gcttgccatc tttgtaccaa 60
<210> 27
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 27
tgtaagttcc ttcatcttct ggataagctt cggcaatttc cagttgataa gtgtcttcaa 60
<210> 28
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 28
tgggccacct ccgagttggc cttggaaagg acgcgctgca gctcggcctt ggcctccgtc 60
<210> 29
<211> 46
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 29
tgggatcaga aggcggtgga catatttctc cttctgaatc tttatt 46
<210> 30
<211> 43
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 30
tggagattcc aacacagtca tgcggttttt gaatgagcag aag 43
<210> 31
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 31
tgcttcttga gttacttgtt tctgtttctt agtaatttct tcagaaattc tagtttcttg 60
<210> 32
<211> 31
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 32
tgcgttgaga gcattcagct caaagtcttt t 31
<210> 33
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 33
tgccgcagca agtacgtggg cctctggggg cggctgcgct ttgcccggaa gcccatttcc 60
<210> 34
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 34
tgcccccttc ctgctatcaa tgaactgtcc ctcagggatg gccgctgggt tcaggatgcg 60
<210> 35
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 35
tgcaggcaga agcctcgagc cagaatcttg accagagact caaaggtgta aatggcggtg 60
<210> 36
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 36
tgcactggcc tcggcctcag aggaggcagt cgctgacacc tggctccagg tcctggaatc 60
<210> 37
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 37
tgatgttgtt agtcagtggt aggtgtttgc catccctcaa ccattcgcct ttggaatctg 60
<210> 38
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 38
tgatgctggc agagtcctca gcagtcacat ctcttatgac caattcacaa acattgtctt 60
<210> 39
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 39
tgatattgcg tggcttctgg aagttggcgg atttgcccag gtggttgtca aacagcttgg 60
<210> 40
<211> 55
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 40
tgagttcacc aaacatgtca ccagtgaatg tttggggtgg atgaggcagc aaagg 55
<210> 41
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 41
tgacttgatg gggcccatct cggcaaagcc cagggtgttg gccaccaggc tgaccagaga 60
<210> 42
<211> 55
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 42
tgacgtcaaa ggcctgcttg gtcacaatgt cgaatatgaa gccctggtac ttgtt 55
<210> 43
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 43
tgacaaatgg ttctgaagtt tcacattcaa aggttgccat agtgtctttt tccttagcaa 60
<210> 44
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 44
tgaacttttc actcatctca atttccacac cattcttcag ccacatggaa gggacattga 60
<210> 45
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 45
tctctcttct gtcctgatct gagtagaggt tgtcagcgtt gtctctctca tctcagcctc 60
<210> 46
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 46
tctccacgtg cagtctggca ctggctccaa gccttccaag cctgaagcca taaacagact 60
<210> 47
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 47
tctccacaaa cagttttgct ttgcattcca attgcccgac cacagctgtg tattccccag 60
<210> 48
<211> 54
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 48
tctatattca atttctttaa taagtctctc ttcaaaggaa gaaatatgga attc 54
<210> 49
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 49
tctataattc ttgattcttg aatcaaatcc tgattcaaca gcttcagatt cagaaatgtc 60
<210> 50
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 50
tcggaaaact gtaataagaa caaattcctg gatcagaacc tgcagaaata ccaggcagag 60
<210> 51
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 51
tcgccgagga cctggacctg gaaggggaga ctctgctgac acccatcacc cacatctcac 60
<210> 52
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 52
tcgacatact tggtccaggg tggagggtcg tgctgggcca tgaacacgca gttggtgagg 60
<210> 53
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 53
tcctcttctt gccccggtag gcagccacca cctcaggagt gtacaccggc agccacttgt 60
<210> 54
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 54
tcctcctcgt actgctcccg cagcaggtcg cagtcatgcc gggccgactg cagtgcgtgg 60
<210> 55
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 55
tccattcccc agaatcactg ggtgtggcag ggacaataat tagtgattga gtaccatctt 60
<210> 56
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 56
tccagggaga tcatgtggat caatgactgc gaggaggagg agctgctgta cgactggagc 60
<210> 57
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 57
tccaacttta ggttcttgaa caaatgcagt cacttgtgtc tgataaagca tttcttgctg 60
<210> 58
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 58
tcacacgatg gactcacggt ccctgtccgg agaagggggg aagtcggcga gatcttcact 60
<210> 59
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 59
tcaaaccggc acgatgtcca ggcaccagaa ccagaacacc atccaggagc tgctgcagaa 60
<210> 60
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 60
tattgtttct tgttctttgg ctttagcagt agcaactgct attgtagaca aggcagtttt 60
<210> 61
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 61
tatatttgcc attggattta agctccacat cattatgata ccattttcct tctatatttt 60
<210> 62
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 62
tatatttaga actgggcttg atttccttgt ccttaaaatt ccacaggaca tcaattccag 60
<210> 63
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 63
tatagactgc cgcatcctct gggaaggctt caattagcaa aagcgtgtat tcttgcccat 60
<210> 64
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 64
tatagacaga gacacgccca ctggtggaga ggccaagggc tggaatggtg aaagagtaat 60
<210> 65
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 65
tagggtgtgt aagctcgaca gtgaaaacag catcctgtgt ttctgtcact gtgaggttct 60
<210> 66
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 66
tactaaatct tgttctttga ctttgggtgt ggcaactatg actttaggta caactgtttt 60
<210> 67
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 67
tacgtgacgg gcccgggagg cgttgacatg cttgttccct ctgtggggct gatcatccct 60
<210> 68
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 68
tacctggctg agaaggacgc ggtgaacgag tcaggccgcg tggagttcgg cagctacgca 60
<210> 69
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 69
tacagcgctg atcactggtt ctctcactct ggccatatca acggcagcaa caacagtcgc 60
<210> 70
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 70
taaggaagag cccaacactg ctggaagtga gcatgcccca tttcatgaga accaacagct 60
<210> 71
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 71
taaatcgccc gctgtcttcc gcaaatgctt cgcgaatcat aagacgagca attccactct 60
<210> 72
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 72
taaaggagat ctgcacgccg ggcagagtgg aagtggaaat cacctggcca tccctaaacc 60
<210> 73
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 73
gtttcatctt taatttacag gttgtctttt tcccgtcgat gacaaagctg tattctccct 60
<210> 74
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 74
gttgttgcgc cgctccacga tggcgatgtt ctccttcagg tcgtcgttgg cacggactgc 60
<210> 75
<211> 33
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 75
gttggcctgg atgatctggt cctccagggt gcc 33
<210> 76
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 76
gttgcgcttc tgctcggcct ccagctcatt ctccagctcc cgcacccgcg cttccagctt 60
<210> 77
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 77
gttcaccagg tagaaggacc ccaggaagat gacaagcatg aagaagatca tgtagatctt 60
<210> 78
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 78
gttatgggac ctggagaaac aaatcaagca attgaggaat tatcgtgata actatcaggc 60
<210> 79
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 79
gtgtagattc cttcatcttc tggaagaaca acaggtatac gcagactagc tctgccatct 60
<210> 80
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 80
gtggctgtag tcagaccccc gcacctggag gttatcgctg gtggctctag tgacactgtc 60
<210> 81
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 81
gtggctgagc tggatctcca tctcattgag gtctccttcc atcttcttct tcaccctcag 60
<210> 82
<211> 28
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 82
gtgatcagga tggactggtt ttctctgt 28
<210> 83
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 83
gtgacgcagc tggaccagag gctggcactc atcaccgaca tgcttcacca gctgctctcc 60
<210> 84
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 84
gtctctcaag ttgtgactca tctgtctcct ccagcctacg tccaggggac attcttgcag 60
<210> 85
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 85
gtctacgatg aggaagtcga gccagcacca ggcattggtg aagtacttct tgaagccgta 60
<210> 86
<211> 54
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 86
gtcgagggca atgatcttga aggtcatctc tgctgtgaaa atccctgtga agac 54
<210> 87
<211> 22
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 87
gtcgacggct atgacagttc tg 22
<210> 88
<211> 35
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 88
gtccaccgca cagcagggac agcgccggac acagc 35
<210> 89
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 89
gtccaccatc aagtcctcga tctcattctg tagccggtgc ttggtcttct ccagcgagga 60
<210> 90
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 90
gtcagcttca ggtcgccctc cagcttccgc ttcgctcgct ccaggtccat gcgcaccttc 60
<210> 91
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 91
gtcagcgaag gggaactgtg gcaagggtgt gggctctgcc cttactctag tctcactggg 60
<210> 92
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 92
gtcacagtca ccaccatcgg ctatggggac aaggtgcccc agacgtgggt cgggaagacc 60
<210> 93
<211> 59
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 93
gtagcgctgg gcgagacggt tccagcatgg tggacacttg tggcgagact cctctaact 59
<210> 94
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 94
gtagatcatc caggagccgt agcgatcctt gaggttgtag agcaccgcgg gctcatgcag 60
<210> 95
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 95
gtagagcttc atccagggcc aattcttgac ccccatgaag gcccgaatgt tccactggat 60
<210> 96
<211> 45
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 96
gtacttcttc tgctcctctg tcatgaagat gtcctggccc cctaa 45
<210> 97
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 97
gtacacggtc atcaggcttg atttgttcat catttaagta ccacttaaca gaagtcacat 60
<210> 98
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 98
gtaaagaaaa aaaagttcaa gctggacaaa gacaatgggg tgactcctgg agagaagatg 60
<210> 99
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 99
ggttggcaac ttcacattca aacacagctt cctgggattc agctacggtc tgatctgtga 60
<210> 100
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 100
ggtctccagg gtggcattga tgcgcgtcac catccagttg aacatcctct catacactgc 60
<210> 101
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 101
ggtcctcctt ggttacatcc ttgaccgtga ggttctgacg tccacgacga gatgtaattg 60
<210> 102
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 102
ggtccggcgc aggggccagg gcaccagcag tgatgtgtgg tggctctcgc tctcccccgc 60
<210> 103
<211> 57
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 103
ggtcagcttg gcaatgatct catccagccc agccatctcc tctgtcaggt ttttcac 57
<210> 104
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 104
gggttggggt tacccgtagc tctgactttc atttcaagtc gggaaccttc ctttatattg 60
<210> 105
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 105
gggtgactgt cagggtggca ctgacttggt cattgccaca gacaaatgtg tattctgccg 60
<210> 106
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 106
gggcatccgc ttcctgcaga tcctgaggat gctacacgtc gaccgccagg gaggcacctg 60
<210> 107
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 107
gggattcttg gctcggggtt tgccctgaag gtgcagcaga agcagaggca gaagcacttc 60
<210> 108
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 108
gggaggctca gctacctttg cggcggaaat gcgttcctta tatccgtact ccaaagtggt 60
<210> 109
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 109
gggacatccg tgcaggagac atccttgcag gtgacatccg tgcaggagac atgcgtatag 60
<210> 110
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 110
ggcttgttct ttttcatact ctttttcata ctcagagtat acaaatccag gtgctgtttc 60
<210> 111
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 111
ggctccacat acaatttccc tgagcaaatt gcatttcctt taatattgct ggcaaatgca 60
<210> 112
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 112
ggcgatgggg actgctgccg agccagctgt gctttggcag caatagacgg tggtgttggg 60
<210> 113
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 113
ggcctcgttg cggctgcgtg tctctgcgtc cagggaggtc tgcagcgagt ccaccacccg 60
<210> 114
<211> 29
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 114
ggccagccct gtgatgctta ccagaaaag 29
<210> 115
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 115
ggccacccac ttgagcagca tctccagcac gaagacatat gtgaacatct tgtcggcata 60
<210> 116
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 116
ggcagcaccc gcagcaccac tgatggtcac ttgctcctgg acaccgtatc tcccttccca 60
<210> 117
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 117
ggcacttgtc agttgatttg atttccacac cattctttaa ccatttgtaa gagatgcctt 60
<210> 118
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 118
ggagctcagc ggtgttggtc atgtctgctg tgctgccctc ggagcaactg tcctctgggg 60
<210> 119
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 119
ggagaagttc tcactcatca cgtaggcgat gaggccctct cgctcagggg catcctcttc 60
<210> 120
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 120
ggaaggttat ctggaagtca atggaacttt cgatttggta gtcttccctg taccatgtca 60
<210> 121
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 121
gcttcttcag ctccaagagc aaatgcgagc cctttataaa gccatcagtg tccctcgagt 60
<210> 122
<211> 47
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 122
gctggaccag tccattggga agccctcact gttcatctcc gtctcag 47
<210> 123
<211> 31
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 123
gctgcgtaaa cgtcggtgct tgagttgtca t 31
<210> 124
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 124
gctgcgggaa caccatcggg ccaccattaa ggtcattcga cgcatgcagt actttgtggc 60
<210> 125
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 125
gctcttctcc ttctccagct tctgcttcac ccgctgcagg ttgtcgatct gctcgcccag 60
<210> 126
<211> 46
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 126
gctccgactg cgactcctca tacttctgct tccactcggc caggat 46
<210> 127
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 127
gctcacccct acttcctttt tcacctcaac gccagcttca ctcttgtaag tatctggtgt 60
<210> 128
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 128
gctaaggatg acgatgatgc tgtcgaagat gttccagccc tgttggaagt agtagtaggg 60
<210> 129
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 129
gcggcaccat ctatgaccat ctcaactgtt gcaattgatc tggcatcaaa gtgggcttca 60
<210> 130
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 130
gcggagggcg gcccggcggg cggcgcgctc tacgcgccca tcgcgcccgg cgccccaggt 60
<210> 131
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 131
gcggagatgg acatggtggc ctggggtgtg gacctggcct cagtggagca gcacattaac 60
<210> 132
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 132
gcgcatcagc cccagcatag ttggcaaaca gggtgctgag cagcttgagg gaagacttct 60
<210> 133
<211> 59
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 133
gcctcgggtc agctgggaga tcagtgcctc cttctcatcc agctgccggg acagctcac 59
<210> 134
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 134
gcctatatgg acactctgca gacgcagtgg agttggattc ttcagatcac caagtgcatt 60
<210> 135
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 135
gcccaggcca atgaccaaat ggaaatcctc gacagcttga tcagagagat gcggcagatg 60
<210> 136
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 136
gccatgataa tcacactaaa gtccagccag ttccatgggt cccgaaggaa agtgaacgcg 60
<210> 137
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 137
gccactttcc tcaacagtga accttcttcc ttggactaat tttccatctt tgtaccagta 60
<210> 138
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 138
gccaacttca gaggttctga aaagtactgc tatttacaga atgaagtatt tggactattt 60
<210> 139
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 139
gcatctaata ggattcagga atcaaagaat cagtgtactc aggtggtaca ggaaagagag 60
<210> 140
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 140
gcacttggca ttaacagcct ccacggcctc ctcagcttcc tgcagccgct gggccagctt 60
<210> 141
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 141
gattgagcag tactacgaag ccatcttggc tctgtggaac cagctctaca tcaacatgaa 60
<210> 142
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 142
gattatgagc tccagctggc ctcatacacc tcaggactgg aaactctgct gaacatacct 60
<210> 143
<211> 36
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 143
gatgttcatc tgaaagaaaa tgctgcctac tttcag 36
<210> 144
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 144
gatgtccctt ttgagctctg agcactcatc ttccagcttg cgcttcttgg cagtgagctc 60
<210> 145
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 145
gatgggaagt cggctaagca aaatctagac aagtgctacg gccaaataaa agaactcaat 60
<210> 146
<211> 21
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 146
gatgcgctgt ggtggggggt g 21
<210> 147
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 147
gatgccctcc ttcttgtact cctcctgctc cagcacaaac atgtggtggt tgaagaactg 60
<210> 148
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 148
gatgagctga atcgtgcaaa atcaactcta gaggcagaaa ccagggtgaa acagcgcctg 60
<210> 149
<211> 44
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 149
gatgaatgca taatcgtagg ggttgttggt gatcagcagc atgt 44
<210> 150
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 150
gatcttgact ttggcttcgg aggaatcctg ggaggtgttt tatgtggcag ctgttgccca 60
<210> 151
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 151
gatacaagcc cacgacagtc tcattgagag gatccttgtt cttctgcagc cagccaatga 60
<210> 152
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 152
gagtgtgaga aacagcaaat tcagaatgac ctgaatcagt ggaagactca atattcccgc 60
<210> 153
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 153
gagtgaacca gaatcttcac agccgctctc cggatggggt ggaagggact gaggacatac 60
<210> 154
<211> 37
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 154
gaggctcctg ggctccgtgg tcttcatcca ccgccag 37
<210> 155
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 155
gaggaaggca tgaaagaagt ccatcatgtg ccagcgaggc agcaggcctg agtcgctgtc 60
<210> 156
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 156
gagctgataa ccaccctgta catcggcttc ctgggcctca tcttctcctc gtactttgtg 60
<210> 157
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 157
gagcctggtg tcctggcact actgcatgat tgacatagag aagatcaggg ccatgacaat 60
<210> 158
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 158
gagatcgtgc tggtggtgtt cttcgggacg gagtacgtgg tccgcctctg gtccgccggc 60
<210> 159
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 159
gactgtttct agttttgtgg actttgcagt ggcaactacc accatggatg cagcagttat 60
<210> 160
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 160
gaccaccaac ttcactccct gcttgatgga catccacagc gggcagcact cccagatcag 60
<210> 161
<211> 45
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 161
gaccaacttg tcctcaatca gcatccagct tcagacaaaa ttgag 45
<210> 162
<211> 42
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 162
gacaagaaca ccaacatcgc tcagaaacag gaggccttct cc 42
<210> 163
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 163
gacaaactcc tgtttgtcat caggcacgaa gacatccttc ttgaggtcaa aaggcctggt 60
<210> 164
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 164
gaattgaagt atggagatgg aatacaactg actcggagtc gagaattgga tgagtgtttt 60
<210> 165
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 165
gaaggtcagc atggccatgt cctcgatttt gtcgaacttg ggtgggttct gctgcatcac 60
<210> 166
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 166
gaagcggggt gatgatggca ggtggataaa caggcatttc ctgatcagga gacacaactt 60
<210> 167
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 167
gaagcgggag gagttgtcgt tccggacggt cttggcattg ccaaaggcct ccagagcagg 60
<210> 168
<211> 24
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 168
gaactttgcg ccaattcaat taag 24
<210> 169
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 169
gaaagaccca aagatgatga aaatgacaaa atagatgtac atgtagaggt tgtattccca 60
<210> 170
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 170
gaaacttcac attcaaacat ggctcgcttc ttctccagta ccttaatgtc cttaatgtgt 60
<210> 171
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 171
ctttttcttc tgttggttga agttgtcaat gatgacacca ataaagaggt tcagggtgaa 60
<210> 172
<211> 26
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 172
ctttttagca ggtacttctt cttcac 26
<210> 173
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 173
cttttcataa cttaggtgca tttgatcttg ttgtgtggta gtttcttctt gagctcccgg 60
<210> 174
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 174
cttttcaatt cgggtttgtc ttgattctga gatctgagca gtcgaaacaa ttgtctttgt 60
<210> 175
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 175
ctttggtaat ggatatccag acatcttgca atgaaaagtg acacccatcc cctcaagaat 60
<210> 176
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 176
ctttccatgg gtaacttgga tttgttcttg tctagtagcc atagtttctc tagttctcag 60
<210> 177
<211> 57
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 177
ctttcatttc catctcaatc tcttgttcaa tcctctcatg caaaattgat tcaggag 57
<210> 178
<211> 39
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 178
ctttcagctg gaaaataact ctggattttt ccagaagat 39
<210> 179
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 179
ctttcacgag aagctcagca gtactagtcg cttgtccaga tccattggtg gctttcaggg 60
<210> 180
<211> 45
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 180
ctttaatgac tactttatgg gtatagtcat tgacaatttg ctggc 45
<210> 181
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 181
cttgttctct gttgcgtgtt tctccttctc cactttggcc agtgtcagct ccagatcatc 60
<210> 182
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 182
cttgtgaaat ttggaaatca agggagctct ggatttcggc tccatcccgg tagaacttca 60
<210> 183
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 183
cttgtcgaag ttcctctgct tcttgtccag ggctgcagca gcagcattgg agcgctctac 60
<210> 184
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 184
cttggtgtgg ccaaacttgt actggttgtg atcaatgtcc agggagctga gcagcttctc 60
<210> 185
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 185
cttggcttcg cgtccgtgca gtacttcaaa gcgctcttca cggacggtgg tgccagtgat 60
<210> 186
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 186
cttggccttg atgatctgct ccatgttgga ggtgacgtca tccagctcca gcttgaactc 60
<210> 187
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 187
cttggacaag taagaatgcg tgactggagg tttctccagc tatgttgatg gcttttacca 60
<210> 188
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 188
cttgcccggg ctctggtcct tcttgctgcg gtccccaatg gctgcaataa cagcaaagta 60
<210> 189
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 189
cttgccatac tcggtctcgg cagtgacttt gccaccctct cgagacacga tcttggcctt 60
<210> 190
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 190
cttgaaccag taattcagca gtcgaagtag ctcttccaac gctattggtg gcatttactg 60
<210> 191
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 191
cttcttcaag caaggaagca gatgcagaag tttctccatg cttattgcga acaacaatag 60
<210> 192
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 192
cttctcgatg aggtcaatgc aggcctgcag gtccatgcca aagtcaatga atgtccactc 60
<210> 193
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 193
cttctcctga gttatttgca cttgttctct tttggtagta atgccttctc tacctcttga 60
<210> 194
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 194
cttctccagc tcatggatag tctttccgct ggaacccaac tgctcagtca agtcggagat 60
<210> 195
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 195
cttcgtgcca atgtcacggc tcttggcccg cagcttgttg acctgggact cggcgatgtc 60
<210> 196
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 196
cttcctcatc gtcctggtct gcctcatctt cagcgtgctg tccaccatcg agcagtatgc 60
<210> 197
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 197
cttccagtgc gctggtgagg acgctgactg cgctgagggc ccgctgccgt gctcctggct 60
<210> 198
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 198
cttccagact caggttggct gtgcttgata cttggcctac agcattacta gcaacaaacg 60
<210> 199
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 199
cttccactga gagtgaagct gatgttgtgg caacaccata gtcattcttg gcttcacagg 60
<210> 200
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 200
cttccacata aagtgtggct gttgatgttg cttttccagc cacaaaggtg tagtcagcag 60
<210> 201
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 201
cttccacagt taaaatcact gaaattgaag atctgcctgc cctgttttgg gcaaccacag 60
<210> 202
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 202
cttcatggag gccatctcct tctctctttc tgcactcttc agcagcggct tgatcttgaa 60
<210> 203
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 203
cttcagtgcc gtctggctcc gcctgctcct cccgctgctt cagcttgaac ttcatgtttc 60
<210> 204
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 204
cttcagtgaa gcagtcctct gggtccttga catcctggcc gaggtcaggg atctgctcca 60
<210> 205
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 205
cttcacagta ggagccttca ccgatttggt gatcttctga gcagaagatg tggctgacaa 60
<210> 206
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 206
cttcaacttt gagtttggca gatgttttgg aggtggccac cttgtaggta tattctccaa 60
<210> 207
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 207
cttcaacaat aagtttagca gtcgttttga cattttcatc ttccacaagt acacagctgt 60
<210> 208
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 208
cttcaacaag ctctggaggc tcttgacttg cttctgggcc tcggcggcca tgcggttggc 60
<210> 209
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 209
cttatgcaca gtaagggcac tgctccaggc tattctccaa acagaagaca tgttaaaggt 60
<210> 210
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 210
cttaacctcc tcctccagct gcctcttgag gtcctccagc tgctgggtgt aggtgagctt 60
<210> 211
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 211
ctgttcttga gcaggttgga tgtgcacagc agtcgtggtt gtcctctgag cagtctgctc 60
<210> 212
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 212
ctgttccaga aacccggcat tgaaaacggg ctggctgccc ttcagaagtg acagtgtcct 60
<210> 213
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 213
ctgtgatgat atgtgcattc ccttttgatc agtagttttg atatgagtct cagaaggagc 60
<210> 214
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 214
ctgtgaagat ggccacaaag agcaggttga tcttggccaa gatgttgatt ttctcaggac 60
<210> 215
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 215
ctgtctgtga tctgcagttc ctggtcatct ttcatccact gtacagtgat gtcaggttca 60
<210> 216
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 216
ctgtcgggga tgggtatcca gagatgtggc actccaaggt gacagattca ccttctatga 60
<210> 217
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 217
ctgtcagcat gtactgatag gcgttgtcgg agatggagaa gatgtggggc ggggcctcgc 60
<210> 218
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 218
ctgtatccag tggttagagg aacaccagat tttttccagt atacatgggg ctttgggttg 60
<210> 219
<211> 24
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 219
ctggtcctcc ttcacggtca ctgt 24
<210> 220
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 220
ctggtaggtg agctccttga tgcgccgctc gctcttcctc atgcccttca ccgactctgc 60
<210> 221
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 221
ctggggatac aatgcactct aattctcctg aatatgattc tggaacttct atgtcctgaa 60
<210> 222
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 222
ctgggataac tgaaatagtt tttagagctc tcaggactct gaaagttcga agagccgaca 60
<210> 223
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 223
ctgggaatgc agcagctgca cccgctcact agtctcaatc agctcctgct ccgccagctt 60
<210> 224
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 224
ctggcctggt tgctcgcctt cctcaaaccg tgtttccttg cgggtgggag gcaccttctc 60
<210> 225
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 225
ctggattact ctaggcttga ctgctttagg gacaacgtgg ggttctgagg ctggacgttg 60
<210> 226
<211> 49
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 226
ctggatgacc ctcttggtgt tgactgtctt ccctgctccg gattctccg 49
<210> 227
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 227
ctggagactt tgtctcatta gggatgatac aacgtacaaa gtggggatgg gtggagcgca 60
<210> 228
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 228
ctgcttgctg gactcctcct ccgtgcccag gctgttctcc tcatcttctt cttggtcatc 60
<210> 229
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 229
ctgctggaca ttctgcccct tggtgacgta ctcattgccc actttcaccc gagggtggca 60
<210> 230
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 230
ctgctgatag aggcgctccc agcagtcctg cgtcatcagg cggaagagtg caagaaaggc 60
<210> 231
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 231
ctgctgagca taggattctt caagatgccc aggctctctg ggctctctga ctcgggcctg 60
<210> 232
<211> 43
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 232
ctgctccgac tgcttgatgc gagcagagct catcgtgcag cct 43
<210> 233
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 233
ctgctcatga gttacgtgca tctgctcttg ctttgtggta attacttctt tggttcttga 60
<210> 234
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 234
ctgcgcttct agccgctcct tctctgactt gcgcaggtag ggggcggcag ccccaaagac 60
<210> 235
<211> 57
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 235
ctgcccacct acgagcagct gaccgtgccc aggaggggcc ccgatgaggg gtcctga 57
<210> 236
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 236
ctgccacagt aagttttcca gatgtcatat tttctcccgc gtaaaatgtg tattttcctt 60
<210> 237
<211> 51
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 237
ctgcagcttc tcgttggtga agttgatgca gagctgctca aagctgttga a 51
<210> 238
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 238
ctgcagctgc ttcttgccgc ccttgagggc gatctgctcg gcttcgtcca gccggtgctg 60
<210> 239
<211> 36
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 239
ctgcagccgc agcaggtttt tcctgtcctc ctccgt 36
<210> 240
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 240
ctgattttgg gatatttatg aggcacaatg atgtcactgt ttttcaacca tacaatgtca 60
<210> 241
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 241
ctgattctgc tcactggctc tagtgtggga atgtaagtcg gagctccaag tggtgcagca 60
<210> 242
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 242
ctgatcttct acataagttc tgaccactac agtatctttg gccattttct tcctaattaa 60
<210> 243
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 243
ctgaccggag atggggtcgg tgcccgcacg tgtctgaccg gggaagggga gtgtcttatg 60
<210> 244
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 244
ctgaatcttg tttttgatca gctgatcaca gcgctcctca gcatctgcca ggttgtcttg 60
<210> 245
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 245
ctgaagctcc ttgagcttct tctgcagctg gctgccgagg gcctgttcat cctcaatcct 60
<210> 246
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 246
ctgaacctcc tttttaatac ttcggatgcg aacatctctg ccttctacaa agagttttgc 60
<210> 247
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 247
ctgaaaacaa tgcggcagga agattacatg aagacgatag ccgaccttga gttacattac 60
<210> 248
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 248
ctgaaaaata ccaagatcga agttttggaa gaggagctca gactggcccg agatgccaac 60
<210> 249
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 249
ctctttagca ccagtggcaa cagcctctgc tgcgtagcta gcactggccg acacactggc 60
<210> 250
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 250
ctctgggtcg cctgccccca gtaatgagac caccccattg cagtccacag tgctgttctt 60
<210> 251
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 251
ctctgccgga agtccccgta gaggatgcgg ttggggaagc ctttcctgca gatgcggatg 60
<210> 252
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 252
ctcgtgttct ttcttgagca tttccatggc ctcctggaag cgcttttcct tctcctcggt 60
<210> 253
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 253
ctcggcctga aggtcatcca gagcctgttg gtgggcctct tgcagagctt tcttctcctt 60
<210> 254
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 254
ctcggcctcc tccagggctg actgcagctc catcttctcg gcctccagct gctttcggac 60
<210> 255
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 255
ctcggccacg ctgtcggcgt gcttcttgcg cagggccgcg gcagtggcct cgtgctgcag 60
<210> 256
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 256
ctcatatcca tgttctgtct taggaacaga aatttttgaa acagtaaagt gagggctagc 60
<210> 257
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 257
ctcagcgatg gtggcttggt tttgctcctc ataggccatt gcgaccacgg ccaggatcag 60
<210> 258
<211> 33
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 258
ctcagagctc tctgtgacta caaacaagat cag 33
<210> 259
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 259
ctcaccgcac cctggggcct ggggttccgc tttccactgc tgccgccagt cggcctgaga 60
<210> 260
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 260
ctcacagtcc cccatatcac gtgcgacccc ccagaagagc ggcggctgga ccacttctct 60
<210> 261
<211> 54
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 261
ctcaagcaga accttgatgg tcttccgctc ctctaggtag atgtcctcga aggc 54
<210> 262
<211> 18
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 262
ctactcctca ttcaagcc 18
<210> 263
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 263
ctacgttcca gcagcttttt gtactccatt ctggcgagca cacctcggga ctgggcctgg 60
<210> 264
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 264
cgtttctctt ctgtagtaaa tttctcagtc acggctgtgg tttccttttc aaattcttct 60
<210> 265
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 265
cgttcttgag tttgaagagc tctgtgctga gggagcgagc ctccttctgc gaggactcca 60
<210> 266
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 266
cgtgtctggc gggtgctcta gcatcacagg gcggaggagg tggcttcctg gggatgtggc 60
<210> 267
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 267
cgtggcctcc tccaggtccc gccgcatctt ctggaactcg gcctcgcgct tcttgttcat 60
<210> 268
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 268
cgtctgaagc atgagttcgg ttaatgacta gtcgctgttt agtacctttc acaatggcct 60
<210> 269
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 269
cgtctctggg ggtggcgggg agtagggggt ggcaatgcag ctgggcagct ggccctgggc 60
<210> 270
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 270
cgggccagta ccagtagatc cggtcagacc gttcaatttt gacaccattt ttgtaccatt 60
<210> 271
<211> 39
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 271
cggaggggcc tctgggccac cggacacagg ctgggattc 39
<210> 272
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 272
cggaaggccc cccggagcca cactctgctg tcacccagcc ccaaacccaa gaagtctgtg 60
<210> 273
<211> 51
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 273
cgcgagaaat ctgctatcta ccagttggag gaggagtatg aaaacctgct g 51
<210> 274
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 274
cgcctgcact tggagctgca ggtcattctt ctcctgcagc agggacacca tcttctcctc 60
<210> 275
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 275
cgcctcctcg gcctggcgct tgtaggcctt gacctttagc tgcagcttgt ctaccaggtc 60
<210> 276
<211> 31
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 276
cgccctggcc acggggactc tcttctggat g 31
<210> 277
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 277
cgcccgctcc tctgcctcat ccagctcgtg ctgcaccttg cggaacttgg acaggttggt 60
<210> 278
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 278
cgagaccaaa gttggtggag taacaggaat ttcaacaggt gctggtactc ttgctgtttc 60
<210> 279
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 279
cctgtgcaga gctgacacag tctgaaagga cgagcctttc ttggccttgc ctttgccctt 60
<210> 280
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 280
cctgcaggtt tttgttctcc cgcttgaagg tctccagatg ttccagggac tcctcatagg 60
<210> 281
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 281
cctgcacagc cagatagcag gatgtgctga cggttccagc ctcatttaca gcactgcaag 60
<210> 282
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 282
cctcgaagcc atctacacac ggagcctggg aggtcagcat ctggggcccg cctggctcct 60
<210> 283
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 283
cctccgcctt gctccggtgc tcattcatct ggtcttccaa ggtccggcac atcttctcca 60
<210> 284
<211> 35
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 284
cctccgaacc cactggccgt ggacctctct tgcaa 35
<210> 285
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 285
cctcatgccc tcaaatcgtg acagagctct cagaggacgg agtgcacgca gcgtccgcag 60
<210> 286
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 286
cctcagctcc gagtagttct tgccaaagag ctgcatgccc accacagcaa agatgaacac 60
<210> 287
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 287
cctatactct ccttcatcac tctttactaa gcttgttata aacaggttat ggaaccctgt 60
<210> 288
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 288
ccgggaccgc tctgtctgct ccaccacggc acgcaactcc tccagctcag cctgcagcag 60
<210> 289
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 289
ccgccaactt ggcatccaaa caccacgctc ccaccttcca ccagtttctg gaccactggt 60
<210> 290
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 290
ccgcagggcc agctccaagg gtggtggagg ctacacttgt cagagtggct ctggctggga 60
<210> 291
<211> 58
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 291
ccctccagca caccattgca gcgcagctgg tgcatgacca gggggttgtc catcaccc 58
<210> 292
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 292
cccgcgcccc ctgcgtcccc ggccgcgccc gccgcgcccc cagttgcctc cgaccttggc 60
<210> 293
<211> 54
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 293
ccccctggag tccacagctg catacataat gtccatccag cctttaaatg ttgc 54
<210> 294
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 294
ccaggcgccc ggcggggcag cgcgggcctg gccaagaagt gccccttctc gctggagctg 60
<210> 295
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 295
ccaggcaaag gaatcgaagc tggtgtagcc gtggtcgggg ttctcgcctg cctttaggca 60
<210> 296
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 296
ccagcgtcag agctgttccc acacagtaac acatcagagg tgccgttctt gagcaggtaa 60
<210> 297
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 297
ccagcagctc aggctttttg ttagacagga tttggtagaa aatgtgataa tctctctctg 60
<210> 298
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 298
ccacaggtgt agggattcca gtcactctca cttggagtct cacttggctt ccttgtctca 60
<210> 299
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 299
cattgctctg ggaccatctt ctgagtcaga cttggggagc ctgtcctccc cacactcctc 60
<210> 300
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 300
cattgacata gagagtgaca gaactcctgt tccttcctgc cacaaaggtg tattctcctg 60
<210> 301
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 301
cattctcggt ttgcaacttg gcccgctggc tggtgaggtc gttgacagaa cgctgggtct 60
<210> 302
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 302
catgggaaac actaacttca aaggcaacag tggcattttc caaggctgtc acatcctttg 60
<210> 303
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 303
catgaagagt gtgttgagta cgatgcacat agtgatggtg aggtcagtaa acgggtccat 60
<210> 304
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 304
catgaagaaa tttgcacttg aagccagtgg aaagcagctg ctcttccttg taccaggaaa 60
<210> 305
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 305
catctgaggg ggagatgttc tgcagcatca gcttgtggac tttcctttct gagaccagtc 60
<210> 306
<211> 52
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 306
catcgtcttc attgacctca aattcaacaa cagcacgctg tttctcaatg ac 52
<210> 307
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 307
catcgctctg tctggtctca gagataaaca ttcggtggat tcttctttcc actacatatt 60
<210> 308
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 308
catccccaaa gtgaacattc ctgatgttca gtgagtgtgt gagctttttg gttctcatct 60
<210> 309
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 309
catccacgat ggcacagttt ttaatcctca gagagtaaat tgttcctttg acagagatag 60
<210> 310
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 310
catcatgaaa ccagaacgtc tctggcatag gtctaccaac aacctttaag tcaaatctgg 60
<210> 311
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 311
catcatcttt catcatattt agaactgtca atttatatat ttttccatgt gcttcaattt 60
<210> 312
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 312
catagttcac tgtcacctca aaagtaatag tgtctttttc ttcagcgttg atgtctttca 60
<210> 313
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 313
catacttttc attggattcc agcacaactc catttttgat ccactggaca cctttgacat 60
<210> 314
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 314
cagtttgccc ttctaaacat ttgaaagaaa caggttttaa cacaaagact ggtttatata 60
<210> 315
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 315
caggtttccg acctgcagca tctcctcgaa ttcacttgtc atgttgtagt gctccagcgc 60
<210> 316
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 316
caggtggttg cgcttggcct gttccatctc ctcgtccttc tctgccagct tccgctcgat 60
<210> 317
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 317
caggtcctta atggtctgtt ccatgttctt cttcatgcgc tccaggtggg cgctggtgtc 60
<210> 318
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 318
caggggccgt gggatgggct tctggggctt cttggagccc agcttcttca tggcattgta 60
<210> 319
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 319
cagggactga caccttacat tcaagcacag ccttggtgcc ttcaatcaca ttaacatctt 60
<210> 320
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 320
caggcggaag gagcgcagca ccgacaagtt gctcatgcgg gacaggccca gctccatgag 60
<210> 321
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 321
cagctccttg cggcgagcct cggacttctc tagcgcctct ttgaggcgtg tgaactcctc 60
<210> 322
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 322
cagcgctcca ctgctgagta ggatcatgaa gatgatgaat gtctcgaacc agctgtgctc 60
<210> 323
<211> 59
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 323
cagccccttg agcaggtcgg ctgagttcag ccccatgagg taggcagact tgtcagcct 59
<210> 324
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 324
cagaaagccc agcagatcca ctctcagact tcacagcagt atccacttta tgatctggac 60
<210> 325
<211> 47
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 325
cagaaactgg aaaatatcaa tggtgttaca gatggctact taaatag 47
<210> 326
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 326
cactttccaa ggagacttta acttcaagct gaacaatgtc accctcacag actttttggt 60
<210> 327
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 327
cacttcagtc tggagctggg acaggtcagc atccatcttc ttcttctggt tgatgaggct 60
<210> 328
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 328
cactaatgtg agcctcaaag gttgcggtac taccctccag taccacaacg ctttgtaacg 60
<210> 329
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 329
cacgatgtgg tagcaggtct tgcgcaaccg ccaccagacc ttccctgggg cctgtgtggt 60
<210> 330
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 330
cacctccatg cagtcccaca tggtctcgat ccactctcca cagaggatgc ggaagatgat 60
<210> 331
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 331
cacattcggg gtctggtttc cccacgactc tgacccggaa gtgtgcatca gatccttggc 60
<210> 332
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 332
cacaaggttg ccaatgacca taacaagcaa gaagaccagc aggcataatg actgccccga 60
<210> 333
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 333
caatgtgaac cctgtcactg ggctgcactt cttggccgtc tttcatccag acgccttcca 60
<210> 334
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 334
caagcgcgga agccttacga tgtgcgggac gtcattgagc agtactcgca gggccacctc 60
<210> 335
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 335
caagagttca tcagaaatag ccaaggctca gagatgtttg gagatgatga caagcggaaa 60
<210> 336
<211> 16
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 336
caagaagaaa ttccag 16
<210> 337
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 337
caaagtgcat gatggcgcct gtcagcttat acatggagtt tttctcctct gaagtgaagc 60
<210> 338
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 338
caaaggggac atctccaagg agctacggga cacggtatcc acacccctga tggtgagggc 60
<210> 339
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 339
attgagtcat tctaaagaac cgagatggct tgattttctt gtctttgctg taccacgaca 60
<210> 340
<211> 30
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 340
atggtgcaca tgatgagcat gttgaagagc 30
<210> 341
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 341
atggccgcgg cctcctcccc gcccagggcc gagaggaagc gctggggttg gggccgcctg 60
<210> 342
<211> 51
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 342
atcgcctcct gcttctctgt ctttgccatc tccttctttg cgctcccagc g 51
<210> 343
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 343
atcgaagatc tcgaagccag cgatgtccag gactcctatg aagtactggc gtggctgctt 60
<210> 344
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 344
atccgtgatg gccttcttgg ccttctcctc agcattcctg cactcctgca ctgcctcctc 60
<210> 345
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 345
atcatccact tgctgctcca gcttgacttt ggccttagtc agggtgttga ccttgtcctc 60
<210> 346
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 346
atcagtggcc atgagctcct cagcgtcatc aatggaggcc acggtggtct ctccttggga 60
<210> 347
<211> 48
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 347
atcaagagga ccatgattca gtccccttct ggggtgattc tgcaagag 48
<210> 348
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 348
ataggagggt gggaaggaag tggaggagat ggaggagctg gagggtgggc caaggggtcg 60
<210> 349
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 349
atacgcgtga tgatgcggct cagcctctcg tccctcattt cctccagcag ccccagcagc 60
<210> 350
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 350
atacgcatga gtcaactgga agttaaagaa aaagagctca ataagctgaa acaagaaagt 60
<210> 351
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 351
atacagtctc agttcaccga tgcccagaag cattaccaga ccctggtcat tcagctccct 60
<210> 352
<211> 28
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 352
agttggtcat cagcttgttc agattttc 28
<210> 353
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 353
agttgacacg ttgcctcctg ccaccactgt gtacttccca gcatcagaca tccgggtgga 60
<210> 354
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 354
agttcctgaa gacatccgtt ttctcctctt gcttcttctc tcatggctgt ttactggggc 60
<210> 355
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 355
agtgtgcaga atgattcaca agcaattgct gaggttctca accagcttaa agatatgctt 60
<210> 356
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 356
agtgggacag ctcaacctca aacaccacat tttgagtttc tgtacaggta aggtcacgaa 60
<210> 357
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 357
agtgggacac ctcacactca aaagaggcag ttttggtctc aggcacctcg atatttttca 60
<210> 358
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 358
agtgcatcct gtatttatct ccctcatgaa cctccatacc atctttatac catttcactt 60
<210> 359
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 359
agtcctctgt gctggtgttc atgatgatca gctgatggag ttttccctgc acaactatct 60
<210> 360
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 360
aggtctctat gtctgcagat gccaactttc ctgttgcccc aaaatgaatt cgaatgaatt 60
<210> 361
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 361
agccttctgg tgaaaatcaa agtcctggag caagacaagg caaggctgca gaggctggag 60
<210> 362
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 362
agccaccggg gcatccacaa ctccatcggc gactatcgct ggcagctgga caaaatcaaa 60
<210> 363
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 363
agcattcatc tcctcctcat cctccagcct ctcgttcatc tccttcacct tggcctccag 60
<210> 364
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 364
agatgaggag gccacgtagc cctcttgctt ccaaggggga ggcacttcag gacctgtggc 60
<210> 365
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 365
acctcatcgt ggtcgtggcc tccatggtgg tcctctgcgt gggctccaag gggcaggtgt 60
<210> 366
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 366
accgcatgga ggtgctatgc tgccgagaac cccgactcct ccacctggaa gatctacatc 60
<210> 367
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 367
acccagccct gcggcagtgg cggctccgtc gaccctgagc tcttcctgcc cagcaacacc 60
<210> 368
<211> 49
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 368
acatttttca gtttttctac aaacatcggt tttacctgat gttccacag 49
<210> 369
<211> 32
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 369
aattgcctag ttttatattt tctgatacat ac 32
<210> 370
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 370
aatcttcagc atcagacgta tcaatggtca gtatggagag gaagtgaacc tttctgtcag 60
<210> 371
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 371
aatatcgtcc actgttggct ttagtcacgg cggggatcgt cagtttagcg cggccatcgc 60
<210> 372
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 372
aataggtccc tgagtcctca gggtatgctt ctgcaatcag taagctgtag aggtcgcctt 60
<210> 373
<211> 37
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 373
aagggttgac ggtgacacag aagaggcccg agtaggt 37
<210> 374
<211> 59
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 374
aaggcgttgg tggcactgaa ccggaagatg gtcttgcctt tattcagtac gatgaaagt 59
<210> 375
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 375
aagaagtacc cctgcgacaa gaacatgccc ctgcagcacc tgctggaaca gatcaaggag 60
<210> 376
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 376
aagaagattg tacagctgaa gcctcgtaac ccagactaca gaagcaataa acccattatt 60
<210> 377
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 377
aacttgcaca gtgaaatatc tggcaaacga gacaaatcag aggaagtaca aaaaattgct 60
<210> 378
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 378
aactgccatc ttttcttctc catcttcttc aagaagttct tctaatgtag tctttattat 60
<210> 379
<211> 35
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 379
aacctcatgg tgcgcatcaa ggagctgcag aggag 35
<210> 380
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 380
aaccgtgggt cttggagagc cacgaactaa gcactgaaaa tatgctgctg tacctattgg 60
<210> 381
<211> 36
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 381
aaccggcaga tcccggcggc agcctcactc attcag 36
<210> 382
<211> 33
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 382
aacagctgca cttttgtcag catcttgttt cac 33
<210> 383
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 383
aaagcgtcct ttgagaggat ggatcacctg cgacagctgc agaacatcat tcaggccacg 60
<210> 384
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 384
aaagaacgag agaaaatcct tgaatacaag cgtcaggtgc agaacttggt aaacaagtct 60
<210> 385
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 385
aaaatcgtgc ataaggggga tgagtgtatc ctgaaggaca acaacgagcg cagcaagtgg 60
<210> 386
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 386
aaaataaaaa atgacttgaa cttgaagaag tcgttgttgg ccactatgaa gacagaacta 60
<210> 387
<211> 60
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 387
aaaagagcaa ggatcgcggc agcaacacga tcggcgcccg cctgaaccga gtagaagaca 60
<---
1. Способ приготовления библиотеки ДНК из ДНК, выделенной из биологического образца, для последующего секвенирования методами секвенирования нового поколения, в котором:
(1) фрагментируют ДНК, выделенную из образца с получением смеси фрагментов ДНК;
(2) восстанавливают концевые последовательности фрагментов ДНК, полученных на стадии (1), (затупляют концы) и обогащают полученную смесь фрагментов ДНК целевыми последовательностями ДНК посредством магнитных частиц с ковалентно-присоединенными к ним олигонуклеотидными зондами, являющимися специфичными к целевым последовательностям ДНК;
(3) лигируют целевые последовательности ДНК, полученные на этапе (2), с олигонуклеотидными адаптерами, содержащими олигонуклеотидную последовательность, применяющуюся в упомянутом методе секвенирования нового поколения;
(4) очищают последовательности ДНК, полученные на этапе (3), посредством упомянутых магнитных частиц,
характеризующийся тем, что упомянутые магнитные частицы представляют собой магнитные частицы, к которым ковалентно присоединены олигонуклеотидные зонды, имеющие последовательности нуклеотидов SEQ ID NO: 1 – 387.
2. Способ по п.1, в котором фрагментацию ДНК на этапе (1) осуществляют посредством ультразвука.
3. Способ по п.1, в котором фрагментацию ДНК на этапе (1) осуществляют до размера фрагментов приблизительно 150 пар нуклеотидных оснований (п.н.).
4. Способ по п. 1, в котором восстановление концевых последовательностей фрагментов ДНК на этапе (2) осуществляют посредством ДНК-полимеразы I E. coli (фрагмент Кленова) и T4 ДНК-полимеразы.
5. Способ по п. 1, в котором упомянутые зонды имеют последовательности нуклеотидов SEQ ID NO: 1 – 387.
6. Способ по п. 1, в котором присоединение упомянутых адаптеров к концам ДНК осуществляют посредством лигирования первого адаптера с промежуточным адаптером, разрушения промежуточного адаптера и лигирования второго адаптера.
7. Способ по п. 6, в котором для присоединения первого адаптера и второго адаптера с комплементарным ему промежуточным адаптером на другом конце фрагмента ДНК с последующим разрушением промежуточного адаптера используют ДНК-полимеразу I E.coli (Фрагмент Кленова), T4 ДНК-полимеразу, урацил-ДНК-гликозилазу, ДНК-лигазу T4 и Taq ДНК-полимеразу.
8. Способ по п. 1, в котором упомянутые олигонуклеотидные адаптеры имеют последовательность 5P- ACTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGACTAAGGCGAATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-C3, промежуточный адаптер имеет последовательность GAGAUGUGUAUAAGAGACAGddT, и второй адаптер имеет последовательность: C3- AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACCTCTCTATTCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGT.
9. Способ по п. 1 в котором после этапа (3) или (4) осуществляют отбор целевых фрагментов ДНК по размеру.
10. Способ по п. 1, в котором после этапа (3) или (4) целевые фрагменты ДНК подвергают амплификации посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР).
11. Способ по п.10, в котором амплификацию осуществляют посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР).
