Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции агрегационной способности тромбоцитов. Способ снижения агрегационной способности тромбоцитов включает индукцию агрегации тромбоцитов с помощью аденозиндифосфата. Инкубацию крови проводят с пептидом с аминокислотной последовательностью UEHLERALNSS или с пептидом с аминокислотной последовательностью UEQLERALNTS в конечной концентрации 30 мкг/мл. Изобретение обеспечивает снижение агрегационной способности тромбоцитов. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.

Появление информации о том, что эритропоэтическое действие и цитопротективные эффекты эритропоэтина реализуются через разные рецепторы (гомодимерный и гетеродимерный), привело исследователей к идее поиска коротких молекул, имитирующих спираль B эритропоэтина для получения пептидов с цито- и эндотелиопротективными свойствами. В исследовании, опубликованном Michael Brines et al. показано, что 11-членный пептид pHBSP (QEQLERALNSS (Pyr-Glu-Gln-Leu-Glu-Arg-Ala-Leu-Asn-Ser-Ser)) имитирует особенности трехмерной структуры спирали B эритропоэтина и оказывает тканезащитные эффекты без гемопоэтической активности [Brines M., Patel N.S., Villa P., Brines C., Mennini T., De Paola M., Erbayraktar Z., Erbayraktar S., Sepodes B., Thiemermann C., Ghezzi P., Yamin M., Carla C. Hand, Qiao-wen Xie, Coleman T., Cerami F. Nonerythropoietic, tissue-protective peptides derived from the tertiary structure of erythropoietin // Proc Natl Acad Sci USA. 2008. №105(31). Р. 10925-10930.].

С учетом предполагаемых областей применения дополнительным положительным свойством у подобных производных эритропоэтина является антиагрегантная активность. Путем присоединение к исходному 11-членному пептиду pHBSP (QEQLERALNSS) трипептидов с заданными свойствами RGD (Arg-Gly-Asp) и KGD (Lys-Gly-Asp) [Preclinical study of innovative peptides mimicking the tertiary structure of the α-helix B of erythropoietin / I.V. Golubev, V.V. Gureev, M.V. Korokin [et al.] // Research Results in Pharmacology. – 2020. – Vol. 6, Iss. 2. – P. 85-96. https://doi.org/10.3897/rrpharmacology.6.55385] были получены пептиды с выраженной антиагрегантной активностью с сохранением цитопротективных свойств [Ivan V. Golubev, Vladimir V. Gureev, Liliya V. Korokina, Oleg S. Gudyrev, Tatiana G. Pokrovskaia, Olga N. Pokopeiko, … Mikhail V. Korokin. (2020). The anti-aggregation activity of new 11-amino acid of erythropoietin derivate containing tripeptide motifs. http://doi.org/10.5281/zenodo.4264989]. Однако такой способ получения приводит к удлинению полипептидной цепи, а значит и размера молекулы. Это может приводить к нарушению их транспорта через тканевые барьеры. Другим путем получения пептидов с выраженной антиагрегантной активностью и сохранением цитопротективных свойств может быть модификация аминокислотного состава без изменения числа аминокислот. После проведения скрининга были отобраны полипептидные соединение с аминокислотной последовательностью EP-11-1 (UEHLERALNSS) и EP-11-3 (UEQLERALNTS) обладающие антиагрегантной активностью. У последних полипептидная цепочка содержит такое же количество аминокислотных остатков, как и у исходного пептида, что является преимуществом.

Прототипом заявленного решения является способ снижения агрегационной способности тромбоцитов с помощью производных пептида pHBSP (QEQLERALNSS) с лабораторным шифром Pα-B1 - Pα-B4 полученных путем присоединения к последнему трипептидных мотивов RGD (Arg-Gly-Asp) и KGD (Lys-Gly-Asp) с заданными свойствами [Ivan V. Golubev, Vladimir V. Gureev, Liliya V. Korokina, Oleg S. Gudyrev, Tatiana G. Pokrovskaia, Olga N. Pokopeiko, … Mikhail V. Korokin. (2020). The anti-aggregation activity of new 11-amino acid of erythropoietin derivate containing tripeptide motifs. http://doi.org/10.5281/zenodo.4264989]. В данном способе снижение агрегационной способности тромбоцитов производится полипептидами с более длинной полипептидной цепочкой по отношению к исходному пептиду, а значит результаты не удовлетворительные.

Задачей изобретения является снижение агрегационной способности тромбоцитов, включающий использование полипептидов производных pHBSP с 11-членной аминокислотной последовательностью обладающих цитопротективным действием.

Техническим результатом изобретения является способ снижения агрегационной способности тромбоцитов, включающий использование в качестве антиагрегантов полипептидными соединениями с аминокислотной последовательностью UEHLERALNSS и UEQLERALNTS.

Задача достигается тем, что перед индукцией агрегации тромбоцитов с помощью аденозиндифосфата (АДФ) кровь предварительно инкубируется с исследуемыми полипептидами с аминокислотной последовательностью: UEHLERALNSS и UEQLERALNTS в конечной концентрации 30 мкг/мл.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Экспериментальное исследование проведено на базе НИИ фармакологии живых систем НИУ «БелГУ». Все эксперименты были одобрены Этическим комитетом НИУ «БелГУ». Вивисекцию проводили в соответствии с этическими принципами обращения с лабораторными животными «European Convention for the Protection of Vertebral Animals Used for Experimental and Other Scientific Purposes. CETS No. 123».

До и во время выполнения исследования животные содержались в помещениях с искусственным освещением (режим 12ч/12ч) при температуре 21-23°С, влажности 38-50% и имели свободный доступ к корму и воде.

Исследование антиагрегантной активности in vitro производных 11-членного пептида pHBSP (QEQLERALNSS): EP-11-1 (UEHLERALNSS) и EP- 11-3 (UEQLERALNTS) проведено на модели АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов при предварительной инкубации цельной крови с изучаемыми пептидами. Антиагрегантную активность определяли по методу G. Born в модификации З.А. Габбасова на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов АЛАТ-2 «Биола» с использованием реактивов производства НПО «Ренам». Кровь забирали из брюшного отдела аорты в пробирку с 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 9:1 с последующим добавлением исследуемых полипептидов в конечной концентрации 30 мкг/мл. Инкубировали 30 минут. Затем центрифугировали при 1000 оборотов 10 минут. После этого вносили 270 мкл обогащенной тромбоцитами плазмы в кювету агрегометра объемом 0,3 мл. При изучении АДФ индуцированной агрегации в пробирку добавляли 30 мкл динатриевой соли аденозин-5-дифосфорной кислоты (АДФ) в конечной концентрации 5 мкМ. Регистрацию агрегации тромбоцитов осуществляли на протяжении 5 мин. Получали кривые, отражающие падение оптической плотности плазмы. Степень агрегации тромбоцитов оценивали по величине максимальной амплитуды агрегатограммы и времени наступления максимальной светопропускной способности и времени наступления уровня 85% от максимальной светопропускной способности.

Статистическая обработка результатов исследования

Статистическую обработку проводили с использованием программной среды вычислений R. Характер распределения признаков в статистической выборке определяли с помощью критерия Шапиро-Уилка и критерия Шпигельхальтера (библиотека normtest), оценку равенства дисперсий – с помощью критерия Левене (библиотека lawstat). В зависимости от типа распределения признаков и равенства дисперсий значимость полученных результатов оценивали с применением параметрического (ANOVA) или непараметрического (критерий Краскела-Уоллиса) однофакторного дисперсионного анализа, а в качестве post-hoc анализа для выявления различий при межгрупповых сравнениях использовали непарный t-критерий Стьюдента или критерий Манна-Уитни, соответственно, с поправкой Бенджамини-Хохберга на множественную проверку гипотез. Результаты считали достоверными при p≤0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Инкубирование крови с исследуемыми пептидами: EP-11-1 или EP-11-3 приводило к ослаблению агрегационной способности тромбоцитов. Об этом свидетельствует статистически значимое уменьшение максимальной светопропускной способности плазмы с 36,9±1,79% до 31,5±0,85% и 30,4±0,62% соответственно, и отсрочивание во времени ее наступления с 123,4±3,33 с до 132,6±2,73 с и 137,5±3,80 с соответственно. Закономерная тенденция наблюдается и при анализе времени наступления 85% от максимального уровня светопропускания. У образцов EP-11-1 и EP-11-3 время его наступления больше по отношению к группе интактных животных (таблица 1).

Таким образом, на основании проведенного исследования выявлена антиагрегантная способность у образцов EP-11-1 и EP-11-3, о чем свидетельствуют удлинение времени агрегации тромбоцитов и снижение ее степени.

Таблица 1

Способ снижения агрегационной способности тромбоцитов, включающий индукцию агрегации тромбоцитов с помощью аденозиндифосфата, отличающийся тем, что инкубацию крови проводят с пептидом с аминокислотной последовательностью UEHLERALNSS или с пептидом с аминокислотной последовательностью UEQLERALNTS в конечной концентрации 30 мкг/мл.

Изобретение относится к фармацевтической композиции на основе гидрохлорида 6-амино-9-[(3R)-1-(2-бутиноил)-3-пирролидинил]-7-(4-феноксифенил)-7,9-дигидро-8H-пурин-8-она, обладающего активностью избирательного ингибитора Btk, полезной для профилактики и/или лечения связанного с Btk заболевания. Также изобретение относится к применению гидрохлорида 6-амино-9-[(3R)-1-(2-бутиноил)-3-пирролидинил]-7-(4-феноксифенил)-7,9-дигидро-8H-пурин-8-она.

Антитромбоцитарная активность общего экстракта семян acanthus mollis и его составляющие // 2748121

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению экстракта и его компонентов для ингибирования агрегации тромбоцитов человека. Применение метанольного экстракта семян Acanthus mollis для ингибирования агрегации тромбоцитов человека, опосредованной путями арахидоновой кислоты и рецептора PAR-1, где экстракт содержит 2-O-β-D-глюкопиранозил-4-гидрокси-1,4-бензоксазин-3-он (димер) (DIBOA-Glc), изовербаскозид и вербаскозид.

Новые ингибиторы тромбина // 2745847

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к пептидным ингибиторам тромбина, и может быть использовано в медицине для профилактики или лечения заболевания, связанного с тромбозом, а также для обнаружения накопления тромбина у субъекта. Изобретение обеспечивает получение пептидов, которые способны связываться с высоким уровнем специфичности с тромбином и ингибировать его активность.

Способ профилактики тромбоза зоны реконструкции после протезирования системы воротной вены при раке поджелудочной железы // 2743938

Изобретение относится к медицине, а именно к онкохирургии. Способ профилактики тромбоза зоны реконструкции после протезирования системы воротной вены при раке поджелудочной железы включает введение нефракционированного гепарина под контролем параметров гемостаза в раннем послеоперационном периоде, причем при восстановлении энтерального питания отменяют введение нефракционированного гепарина, затем больной принимает таблетку ривароксабана в дозе 20 мг в сутки, через 4 часа после приема в плазме крови таблетированного антикоагулянта производят повторный забор крови для определения антикоагулянтной активности ривароксабана - анти-Ха в плазме.

Способ коррекции гиперкоагуляционного состояния при введении противоопухолевого препарата цисплатина // 2743848

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и коагулологии, и касается коррекции гиперкоагуляции, возникающей при введении цисплатина. Для этого после однократного введения цисплатина, с 6-х по 9-е сутки экспериментальным животным внутрижелудочно вводят экстракт клеточной культуры болиголова пятнистого в дозе 30 мг/кг.

Производное оксопиколинамида, способ его получения и его фармацевтическое применение // 2742771

Изобретение относится к соединению формулы (AI): или его фармацевтически приемлемой соли, в котором: кольцо А представляет собой 6-членный арил или 5-10-членный гетероарил, имеющий 1-3 гетероатома, выбранных из группы, состоящей из S и N в качестве атомов кольца, при этом указанный 6-членный арил возможно конденсирован с кольцом 5- или 6-членного гетероарила, имеющего 1-2 гетероатома, выбранных из группы, состоящей из S и N в качестве атомов кольца, или 3-8-членного гетероциклила, имеющего 1-2 гетероатома, выбранных из группы, состоящей из О и N в качестве атомов кольца;или представляет собой R1 представляет собой -C(O)R7; каждый R2 является идентичным или отличным, и каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода и галогена; R3 выбран из группы, состоящей из C1-6 алкокси, где С1-6 алкокси, возможно замещен одним или более чем одним дейтерием; R4 выбран из группы, состоящей из водорода, C1-6 алкила и C1-6 алкокси, где C1-6 алкил, возможно замещен одной или более чем одной группой R9; каждый R5 является идентичным или отличным, и каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, C1-6 алкила, C1-6 алкокси, оксо, галогена, C1-6 галогеналкила, циано, -C(O)R8, -C(O)OR8, -NR10R11, -C(O)NR10R11, -CH2NR10R11, -C(O)OCH(R10)R11 и -S(O)mR8, где C1-6 алкил возможно замещен одной или более чем одной группой, выбранной из группы, состоящей из галогена; R7 выбран из группы, состоящей из водорода, С1-6 алкила, C1-6 галогеналкила и 3-5-членного циклоалкила, где С1-6 алкил, возможно замещен одной или более чем одной группой, выбранной из группы, состоящей из водорода, дейтерия и 3-5-членного циклоалкила; R8 выбран из группы, состоящей из водорода, C1-6 алкила, амино и 3-5-членного циклоалкила; R9 выбран из группы, состоящей из водорода, дейтерия, C1-6 алкокси, 3-8-членного циклоалкила, 3-5-членного циклоалкилокси, 3-8-членного гетероциклила, имеющего один атом кислорода в качестве гетероатома, 6-членного арила и 5-6-членного гетероарила, имеющего 1-2 гетероатома, выбранных из группы, состоящей из О, S и N в качестве атомов кольца, где каждый 3-8-членный циклоалкил, 3-8-членный гетероциклил, 6-членный арил и 5-6-членный гетероарил возможно замещен одной или более чем одной группой, выбранной из группы, состоящей из дейтерия, галогена, C1-6 алкила, C1-6 алкокси, циано, гидрокси, 3-5-членного циклоалкила, -NHC(O)R12 и R13; R10 и R11 являются идентичными или отличными, и каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода, C1-6 алкила 3-5-членного циклоалкила, 5-членного гетероциклила, имеющего два атома кислорода в качестве гетероатомов, -C(O)OR8 и -OC(O)OR12, где каждый 5-членный гетероциклил возможно замещен одним или более чем одним C1-6 алкилом и оксо; R12 выбран из группы, состоящей из водорода, C1-6 алкила и 3-5-членного циклоалкила; R13 представляет собой 6-членный арил, где каждый 6-членный арил и гетероарил возможно замещен одной или более чем одной группой, выбранной из группы, состоящей из водорода, C1-6 алкила, и циано; n равен 0, 1, 2, 3 или 4; m равен 0, 1 или 2; и s равен 0,1, 2, 3 или 4.

Способ профилактики гиперкоагуляции у животных при стрессе // 2741948

Изобретение относится к медицине и фармакологии. Способ защиты организма от гиперкоагуляции при стрессе у животных путем введения животным комплекса гепарина с аргинином перорально в течение 4-5 суток до стресса из расчета 2,5-3,0 мл на 1 кг массы тела животного.

Антитела к фактору xi и способы их применения // 2739946

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены моноклональное антитело и его антигенсвязывающий фрагмент, которые связывают человеческий фактор XI.

Соединение, имеющее действие ингибирования агрегации тромбоцитов, и его соль, и содержащая такие соединения композиция для предупреждения или лечения тромботических заболеваний // 2739915

Изобретение относится к соединению, представленному приведенными далее формулами (I) или (II), или его фармацевтически приемлемой соли или стереоизомеру, которые обладают свойством ингибирования агрегации тромбоцитов. В формулах (I) и (II) R1 представляет собой гидрокси или C1-C10-алкокси, X представляет собой N или O, R2 представляет собой -(CH2)p-(5-12-членный гетероцикл)-(CH2)p-C6-C12-арил, 5-12-членный гетероцикл, -(CH2)p-NHC(=O)-C6-C12-арил, -CHR4R5, 5-12-членный гетероарил, C6-C12-арил, -C6-C12-арил-O-(5-12-членный гетероарил) или -(CH2)p-(5-12-членный гетероарил), причем p равен целому числу от 1 до 10, R4 и R5 представляют собой, каждый независимо, C1-C6-алкоксикарбонил или -CH2-(5-12-членный гетероарил), указанные гетероцикл и гетероарил могут содержать от 1 до 3 гетероатомов, выбранных из N, O и S, указанный арил замещен 1-4 заместителями, выбранными из группы, состоящей из нитро, нитрила и гидрокси-C1-C6-алкила, указанный гетероцикл замещен 1-4 заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена и оксо, указанный гетероарил замещен 1-4 заместителями, выбранными из группы, состоящей из оксо, аминокарбонила, C1-C6-алкила, C1-C6-алкиламинокарбонила, гидрокси и гидрокси-C1-C6-алкила, при условии, что когда R2 представляет собой -(CH2)p-(5-12-членный гетероарил), то гетероарил не является пиразином, индолом или пиридином, и когда R2 представляет собой 5-12-членный гетероарил, то гетероарил не является бензотиазолом, R3 представляет собой водород, когда X представляет собой O, R3 не существует, когда X представляет собой N, X, взятый вместе с R2 и R3, может образовывать 6-членный гетероцикл, содержащий 1-3 гетероатома, выбранных из N, причем указанный гетероцикл может быть замещен C6-C12-арилом или -O-CHR6R7, причем R6 и R7 представляют собой, каждый независимо, C6-C12-арил или 6-10-членный гетероарил, содержащий 1-3 гетероатома, выбранных из O, N и S, которые оба являются незамещенными или замещены галогеном.

Способ профилактики хронической молибденовой коагулопатии // 2739690

Изобретение относится к экспериментальной медицине, экологии и токсикологии и может быть использовано для экспериментальной разработки методов профилактики и патогенетической коррекции проявлений хронической молибденовой коагулопатии у экспериментальных животных при длительном воздействии парамолибдата аммония.

Способ коррекции нарушений микроциркуляции в почке пептидом, имитирующим альфа-спираль в эритропоэтина, при ишемически-реперфузионном повреждении // 2751413

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и урологии, и может быть использовано для коррекции нарушений микроциркуляции в почке. Способ коррекции нарушения микроциркуляции в почке включает воспроизведение модели ишемически-реперфузионных повреждений почек путем наложения лабораторным крысам атравматичных сосудистых зажимов на левую почечную ножку на 40 минут.