Способ выявления микобактерии туберкулеза из резецированной ткани легкого



Владельцы патента RU 2759413:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр фтизиопульмонологии и инфекционных заболеваний" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ФПИ" Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для лабораторной диагностики туберкулеза. Сущность способа выявления микобактерий туберкулеза из резецированной ткани легкого: обрабатывают исследуемый материал от сопутствующей микрофлоры путем помещения исследуемого материала на 45 мин в 0,9%-й озонированный раствор NaCl, нагретый до температуры 21°С, который непрерывно насыщают озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 10000 мкг/л/мин; после обработки материала его центрифугируют при скорости 3000 об/мин в течение 15-20 мин; надосадочную жидкость сливают, осадок засевают поровну в пробирки с питательными средами. Заявляемый способ позволяет повысить точность лабораторной диагностики при выявлении микобактерий туберкулеза при одновременном сокращении времени лабораторных исследований за счет сохранения жизнеспособности и снижения количественных потерь микобактерий в исследуемом материале. 1 пр.

 

Изобретение относится медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для лабораторной диагностики туберкулеза.

Большинство проб клинического материала, поступающего в микробиологическую лабораторию для культурального исследования на туберкулез, в различной степени загрязнены быстрорастущими бактериями, бурный рост которых на богатых питательных средах мешает развитию микобактерий и затрудняет их выделение. Поэтому перед посевом на питательную среду диагностический материал подвергают специальной обработке, обеспечивающей деконтаминацию (обеззараживание), то есть гибель сопутствующей микрофлоры. Все препараты, используемые в настоящее время для деконтаминации диагностического материала, обладают более или менее выраженной токсичностью в отношении микобактерий. Чтобы обеспечить выживание достаточной части микобактериальной популяции, необходимо использовать щадящие методы обработки, позволяющие, с одной стороны, подавить быстрорастущую Gr+/-микрофлору, грибы рода Candida, а с другой - максимально сохранить жизнеспособность присутствующих в материале микобактерий [Приказ МЗ РФ №109 от 21 марта 2003 года «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской федерации». Приложение 11 «Инструкция по унифицированным методам микробиологических исследований при выявлении, диагностике и лечении туберкулеза» IV. Культуральные методы исследования микобактерий комплекса М. Tuberkulosis 257-258].

Известен способ выявления микобактерий туберкулеза из мокроты, получаемой от больных, включающий гомогенизацию исследуемого материала путем встряхивания его с равным количеством 10%-ного раствора трехзамещенного фосфорнокислого натрия с амплитудой 0,5-2,5 мм и частотой 40-60 Гц в течение 10-20 мин, инкубацию исследуемого материала в течение 18-20 ч, выделение осадка, нейтрализацию его карбоновой кислотой до достижения 6,8>рН>7,0 с последующим повторным выделением осадка и его посев на питательную среду (патент RU 2069698, 3.07.09.1993, оп. 27.11.1996).

Нейтрализация осадка карбоновой кислотой является более щадящей обработкой по сравнению с нейтрализацией более сильными кислотами. Однако она приводит лишь к изменению рН исследуемого материала и тем самым сохраняет жизнеспособность микобактерий. Высокая концентрация фосфорнокислого натрия трехзамещенного обусловлена видом исходного материала - мокротой, являющейся по своей структуре раствором, снижающим при гомогенизации его концентрацию.

Наиболее близким аналогом, принятым за прототип, является способ выявления микобактерий туберкулеза из резецированной ткани легкого, при котором обрабатывают исследуемый материал от посторонней микрофлоры раствором тринатрий фосфата, который берут в концентрации 4-4,7%. Получают осадок, нейтрализуют его кислотой и делают посев на питательную среду. В качестве кислоты берут раствор аминоуксусной кислоты в концентрации 0,8±0,2%. При этом раствор тринатрий фосфата и кислоту берут в соотношении 1:1 (патент RU 2415944, з. 11.06.2009, оп. 10.04.2011).

Недостатком способа является длительность процесса деконтаминации биологического материала, низкая выживаемость микобактерий туберкулеза, токсичность используемых реагентов.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является повышение точности микробиологической диагностики, сокращение сроков лабораторных исследований и снижение затрат.

Техническим результатом является повышение жизнеспособности и снижение количественных потерь микобактерий в исследуемом материале при лабораторной диагностике туберкулеза.

Для решения поставленной задачи в способе выявления микобактерий туберкулеза из резецированной ткани легкого, включающем обработку исследуемого материала от посторонней микрофлоры, согласно изобретению обработку исследуемого материала от сопутствующей микрофлоры производят путем помещения исследуемого материала на 45 минут в 0,9%-й озонированный раствор NaCl, нагретый до температуры 21°С, который непрерывно насыщают озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 10000 мкг/л/мин, после обработки материала его центрифугируют при скорости 3000 об/мин в течение 15-20 мин, надосадочную жидкость сливают, осадок засевают поровну в пробирки с питательными средами.

Выбранная методика обработки исследуемого материала обусловлена следующими факторами. Для эффективного абациллирования, вызванного Gr+/- микрофлорой, грибами рода Candida, раствором хлорида натрия, насыщенного озоно-кислородной смесью, требуется обработка раневой полости в течение не менее 45 минут.Автором произведены измерения окислительно-восстановительного потенциала, который является главным показателем активности раствора, в результате которых выявлено: необходимый уровень окислительно - восстановительного потенциала озонированного физиологического раствора хлорида натрия - не ниже 600 мВ - сохраняется при температуре 21°С не более 1 минуты после прекращения насыщения озоно-кислородной смесью.

В связи с этим, обеспечение непрерывного насыщения раствора хлорида натрия озоно-кислородной смесью позволяет поддерживать требуемую концентрацию раствора в течение всего времени обработки исследуемого материала, что обеспечивает достоверный бактерицидный эффект, вызывает гибель Gr+/- микрофлоры и грибов рода Candida.

Использование озоно-кислородной смеси позволяет подавить быстрорастущую Gr+/- микрофлору, грибы рода Candida, максимально сохранив жизнеспособность присутствующих в материале микобактерий туберкулеза.

Способ осуществляют следующим образом.

В качестве исследуемого материала используют резецированную ткань легкого. Резецированный материал гомогенизируют и растирают со стеклянными бусами или битым стеклом. Производят обработку исследуемого материала от сопутствующей микрофлоры. Для этого исследуемый материал помещают на 45 минут в объем 0,9% озонированного раствора NaCl, нагретого до температуры 21°С, который непрерывно насыщают озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 10000 мкг/л/мин.

После материал центрифугируют при скорости 3000 об/мин в течение 15-20 мин, надосадочную жидкость сливают, осадок засевают поровну в пробирки с питательными средами (например, со средами Левенштейна-Иенсена и "Новая").

Заявляемый способ позволяет повысить точность лабораторной диагностики при выявлении микобактерий туберкулеза при одновременном сокращении времени лабораторных исследований за счет сохранения жизнеспособности и снижения количественных потерь микобактерий в исследуемом материале.

Клинический пример.

Больной П. 38 лет. Поступил на лечение с диагнозом инфильтративный туберкулез в\доли правого легкого. Выполнено хирургическое лечение -торакотомия слева, резекция в\доли правого легкого. Резецированный материал гомогенизирован в условиях лаборатории. Произведена обработка исследуемого материала от сопутствующей микрофлоры. Исследуемый материал помещен на 45 минут в объем 0,9% озонированного раствора NaCl, нагретого до температуры 21°С, который непрерывно насыщают озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 10000 мкг/л/мин.

После материал центрифугирован при скорости 3000 об/мин в течение 20 мин, надосадочная жидкость слита, осадок засеян поровну в три пробирки с питательными средами "Новая". Получен рост микобактерий туберкулеза: в первой пробирке на 19-е сутки, во второй пробирке на 21-е сутки, в третьей пробирке на 20-е сутки. Признаков роста неспецифической микрофлоры не выявлено.

Способ выявления микобактерий туберкулеза из резецированной ткани легкого, включающий обработку исследуемого материала от сопутствующей микрофлоры, отличающийся тем, что обработку исследуемого материала от сопутствующей микрофлоры производят путем помещения исследуемого материала на 45 мин в 0,9%-й озонированный раствор NaCl, нагретый до температуры 21°С, который непрерывно насыщают озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 10000 мкг/л/мин, после обработки материала его центрифугируют при скорости 3000 об/мин в течение 15-20 мин, надосадочную жидкость сливают, осадок засевают поровну в пробирки с питательными средами.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, в частности, к гастроэнтерологии и педиатрии. Для диагностики аутоиммунного гастрита у детей с целиакией оценивают в баллах диагностически значимые гистологические признаки в фундальном и антральном отделах желудка и клинико-анамнестические данные.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и эндокринологии, и может быть использовано для прогнозирования неблагоприятных исходов беременности у женщин с сахарным диабетом (СД) 1 типа во второй половине беременности. Осуществляют оценку факторов риска по развитию неблагоприятных исходов беременности: длительность СД более 10 лет, возраст дебюта СД менее 13 лет, наличие микроальбуминурии и/или протеинурии, наличие хронической болезни почек, наличие препролиферативной или пролиферативной ретинопатии.
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано в неврологии, хирургии, анестезиологии-реаниматологии и смежных медицинских специальностях. Способ оценки риска развития бактериального менингита у пациентов в критическом состоянии включает цитологическое, биохимическое и микробиологическое исследования состава спинномозговой жидкости (СМЖ).

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, может быть использовано при ведении пациентов после трансплантации для диагностики острого отторжения трансплантированного сердца. Для диагностики острого отторжения трансплантата у реципиентов сердца в плазме венозной крови определяют уровень экспрессии микроРНК-27 и при уровне ниже -5,07 относительных единиц диагностируют наличие острого отторжения трансплантата.

Изобретение относится к различным областям народного хозяйства (медицине, химической и фармацевтической промышленности), где есть потребность в измерении массовой концентрации метиловых эфиров жирных кислот (МЭЖК) в биологических средах, в том числе животных и растительных тканях методом газожидкостной хроматографии.

Изобретение относится к различным областям народного хозяйства (медицине, химической и фармацевтической промышленности), где есть потребность в измерении массовой концентрации метиловых эфиров жирных кислот (МЭЖК) в биологических средах, в том числе животных и растительных тканях методом газожидкостной хроматографии.

Изобретение относится к области животноводства, ветеринарии и экологии и предназначено для определения концентрации кадмия в мышечной ткани крупного рогатого скота. Способ определения концентрации кадмия в мышечной ткани крупного рогатого скота включает анализ субстрата в виде сыворотки крови.

Изобретение относится к области медицины, в частности к детской оториноларингологии, аллергологии, клинической фармакологии, и может быть предназначено для диагностики хронического экссудативного среднего отита аллергического генеза. У детей в возрасте от 2 до 12 лет включительно с воспалительной патологией среднего уха при индексе аллергизации от 1,6 до 3,7 включительно диагностируют хронический экссудативный средний отит аллергической этиологии.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкогематологии, и предназначено для прогнозирования развития рецидива диффузной В-крупноклеточной лимфомы. В периферической крови больных на этапах обследования после или до очередного курса противоопухолевой терапии проводят общий анализ крови, определяют содержание элементов красной и белой крови, рассчитывают соотношение нейтрофилов к лимфоцитам (N/L).

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии, ангиологии, кардиохирургии, терапии, реабилитологии. До имплантации кардиовертера-дефибриллятора у пациента определяют галектин-3 в сыворотке крови посредством иммуноферментного метода.

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, геронтологии и гериатрии, и предназначено для прогнозирования ухудшения состояния пожилого больного с инфарктом миокарда и синдромом старческой астении. Определяют содержание эндотелина-1 и десквамированных эндотелиоцитов в крови. Состояние больного определяют на основе регрессионной модели эндотелиальной дисфункции. При значениях регрессионной модели эндотелиальной дисфункции, равных 25,72-33,84, прогнозируют ухудшение состояния пожилого больного с инфарктом миокарда и синдромом старческой астении. Изобретение обеспечивает разработку способа прогнозирования ухудшения состояния пожилого больного с инфарктом миокарда и синдромом старческой астении на основе регрессионного метода по показателям эндотелиальной дисфункции – эндотелина-1 и десквамированных эндотелиоцитов. 1 табл., 3 пр.
Наркология
Наверх