Штамм каллусной культуры клеток растения змееголовник дланевидный (dracocephalum palmatum steph. ex willd.) под обозначением nefu dpalm-1 в условиях in vitro для получения биомассы клеток

Авторы патента:

C12N5/00 - Недифференцированные клетки человека, животных или растений, например клеточные линии; ткани; культивирование или сохранение их; питательные среды для них (размножение растений из тканевых культур A01H 4/00)

Владельцы патента RU 2759637:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Восточный федеральный университет имени М.К. Аммосова" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой штамм NEFU Dpalm-1 каллусных культур змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd.), полученный в условиях in vitro, идентифицированный и депонированный во Всероссийской коллекции культивируемых клеток высших растений (ВККК ВР) при Учреждении РАН Институт физиологии растений РАН, регистрационный номер 101. Штамм используется для получения биомассы клеток Dracocephalum palmatum Steph. и характеризуется стабильными ростовыми параметрами и отличительными признаками: среднеплотный, неоднородный, оводненный, неморфогенный, беловатый со светло-бежевым оттенком и с темными участками, кроме того, содержит паренхимные небольшие клетки округлой формы. Заявленное изобретение может быть использовано в фармацевтической промышленности для получения сырья, содержащего ценные биологически активные соединения (флавоноиды, фенольные соединения). 1 ил., 2 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к культивированию штамма каллусных культур клеток растения змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph.), и может быть использовано для получения биомассы каллусных клеток.

Штамм NEFU Dpalm-1 каллусных культур змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd.), полученный в условиях in vitro, идентифицирован и депонирован во Всероссийской коллекции культивируемых клеток высших растений (ВККК ВР) при Учреждении РАН Институт физиологии растений РАН, регистрационный номер 101.

Заявленное изобретение позволяет получить штамм каллусной культуры клеток змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd.) из первичных каллусов листового происхождения. При этом получаемый штамм каллусной культуры клеток характеризуется стабильными ростовыми параметрами и может быть использован в фармацевтической промышленности для получения сырья, содержащего ценные биологически активные соединения (флавоноиды, фенольные соединения). Кроме того, для культивирования штамма каллусной культуры клеток отсутствует сезонная зависимость.

Культура клеток высших растений может служить альтернативным способом изготовления фитосырья для медицины, ветеринарии, парфюмерии и пищевой промышленности.

В ряде случаев биомасса клеток in vitro превосходит по свойствам полученную от природного или плантационного растения. Культура клеток также оказывается незаменимой в том случае, когда необходимо произвести сырье редких, исчезающих или тропических видов лекарственных растений (см. Решетников В.Н., Спиридович Е.В., Фоменко Т.И., Носов А.М. Растительная биотехнология - способ рационального использования биосинтетического потенциала в журнале Инженерный журнал: наука и инновации, издательство МГТУ им. Н.Э. Баумана (Москва), 2014, № 5 (135), С. 21-25).

Змееголовник дланевидный используют в тибетской медицине, якутской народной медицине, настой из надземной части и цветков применяют при язвенной болезни желудка, а в Средней Азии - при сердечной недостаточности, астении, болезнях желудка и как потогонное средство.

Известно, что на основе химических и спектральных работ из частей змееголовника дланевидного было выделено 23 соединения (фенилпропаноиды, кумарины, флавоноиды и тритерпены), среди которых впервые в роду Dracocephalum было обнаружено восемь соединений: сальвианоловая кислота B, кафтаровая кислота, цихоровая кислота, умбеллиферон, эскулетин, апигенин-7-O-β-D-глюкуронопиранозид, изорхоифолин и лютеолин-4'-O-β-D-глюкопиранозид (см. Olennikov D.N., Chirikova N.K., Okhlopkova Z.M., Zulfugarov I.S. Chemical composition and antioxidant activity of Tánara Ótó (Dracocephalum palmatum Stephan), a medicinal plant used by the North-Yakutian nomads. Molecules. 2013 Nov 14; 18(11):14105-21).

Известен способ получения каллусной культуры змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum (Steph.)) в условиях in vitro (см. RU №2718253, кл. C12N 5/04, опубл. 31.03.2020).

При этом в открытых источниках технические решения в области культивирования клеток D. palmatum (Steph.) не выявлены.

Задачей настоящего изобретения является получение штамма каллусной культуры клеток змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd.) с характерными морфологическими и ростовыми качествами и отсутствием сезонной зависимости их получения.

Поставленная задача решена тем, что получен штамм каллусных культур клеток Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd. в условиях in vitro.

Анализ признаков заявленного решения свидетельствует о соответствии заявленного решения критерию «новизна», штамм каллусных культур клеток змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd.) впервые получен в условиях in vitro.

Совокупность существенных признаков обеспечивает решение заявленной технической задачи, включая оптимизацию питательной среды, стабилизацию ростовых параметров и морфологических характеристик.

Штамм NEFU Dpalm-1 каллусной культуры клеток змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd) идентифицирован и депонирован во Всероссийской коллекции культивируемых клеток высших растений (ВККК ВР) при Учреждении РАН Институт физиологии растений РАН, 127276, Москва, ул. Ботаническая, 35, регистрационный номер 101.

Предлагаемое изобретение состоит в том, что за основу взяты 30-дневные первичные каллусы листового происхождения, индуцированные из асептических проростков in vitro, полученных из семян северо-восточной популяции (Оймяконский район Республики Саха (Якутия) («Полюс Холода»)) змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd.).

Заявленное решение иллюстрируется чертежом, где на фигуре показана графическая схема динамики роста каллусной культуры клеток D.palmatum при выращивании в стеклянных чашках Петри диаметром 90 мм (см. фигуру).

Для получения первичного каллуса в качестве экспланта были использованы листья, полученные из стерильных проростков растения. Листовые экспланты, полученные из проростков, помещают в питательную среду Мурасиге-Скуга (МС) c кинетином в концентрации 1 мг/л, 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой (2,4-Д) в концентрации 1 мг/л на стеклянные чашки Петри. При этом культивирование растений проводят в темноте, при температуре 26±1°С, влажности помещения 70±5%, цикл субкультивирования составляет 4 недели. Через 4 недели культивирования первичные каллусные культуры пересаживают на другую питательную среду. Состав питательной среды представлен в таблице 1.

Таким образом, получен штамм каллусной культуры клеток змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd.) из первичных каллусов листового происхождения. В процессе культивирования определены ростовые и морфологические характеристики. Полученные данные позволяют отнести штамм к хорошо растущим каллусным культурам клеток высших растений (см. кривую роста на фигуре и параметры роста в таблице 2).

Культивирование проводили в темноте, при 26±1°С, влажности помещения 70±5%, в стеклянных чашках Петри с диаметром 90 мм. При этом цикл субкультивирования составлял 30 суток. При пересеве каллусной культуры использовали ¼ полученной биомассы.

Штамм каллусной культуры клеток змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd.) обладает следующими признаками: среднеплотный, неоднородный, оводненный, неморфогенный, беловатый каллус со светло бежевым оттенком и с темными участками. Содержит паренхимные небольшие клетки округлой формы.

Таким образом, заявленное решение позволяет получить штамм каллусной культуры клеток из первичных каллусов листового происхождения. При этом штамм каллусной культуры клеток змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd.) характеризуется стабильными ростовыми параметрами с отсутствием сезонной зависимости при культивировании.

Таблица 1

Состав питательной среды

Компоненты	Содержание, в мг/л
NH₄NO₃	33000
KNO₃	38000
CaCl₂x2H₂O	8800
MgSO₄x7H₂O	7400
KH₂PO₄	3400
KI	166
H₃BO₃	1240
MnSO₄x4H₂O	4460
ZnSO₄x7H₂O	1720
Na₂MoO₄x2H₂O	50
CuSO₄x5H₂O	5
CoCl₂x6H₂O	5
FeSO₄x7H₂O	5560
Na-ЭДТА	7460
Мезоинозит	100
Гидролизат казеина	500
Тиамин	100
Пиридоксин	100
Никотиновая кислота	100
Сахароза	30000
2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота	1
6-бензиламинопурин	1
1-нафтилуксусная кислота	1
Вода	1000 мл
Агар	12000

Таблица 2

Ростовые характеристики каллусных культур змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd.)

Показатель	I (индекс скорости роста)	μ, сут (удельная скорость роста)	М мах (увеличение веса) в г
Сырая биомасса	11,91	0,15	5,11
Сухая биомасса	20,10	0,01	0,37

Штамм каллусных культур клеток змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph. ex Willd.), регистрационный номер ВККК ВР 101, для получения биомассы клеток.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ увеличения экспрессии рекомбинантного белка в культуре клеток млекопитающего, включающий культивирование клеток, экспрессирующих рекомбинантный белок, в безбелковой среде, не содержащей олигопептиды, дополненной по меньшей мере 2 мг/л путресцина.2HCl и содержащей аминокислоты, витамины, органические и неорганические соли и источники углеводов.

Способы культивирования клеток // 2758674

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к применению ограниченного количества цистеина и триптофана в качестве добавки к среде для культивирования клеток во время продуцирования рекомбинантных белков и, в частности, антител. Белки и антитела, получаемые в таких контролируемых условиях, имеют пониженную гетерогенность, в частности пониженную гетерогенность заряженных вариантов.

Способы получения цитокапсул и цитокапсулярных трубок // 2758487

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению цитокапсул и цитокапсулярных трубок in vitro и композиции для исследования миграции клеток. Способ включает имплантацию суспензии отдельных клеток на поверхности 3D матрикса и инкубирование клеток суспензии отдельных клеток, имплантированных на поверхности 3D матрикса, при 37°С.

Индуктор иммунитета // 2758112

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены композиции, имеющие индуцирующую иммунитет активность против белка PDS5A у пациентов-носителей HLA-A0201, а также полипептид, обладающий индуцирующей иммунитет активностью против белка PDS5A у пациентов-носителей HLA-A0201.

Анализ плюрипотентных стволовых клеток // 2758006

Настоящее изобретение относится к области клеточной биологии и медицины, в частности к способу выявления остаточных, недифференцированных индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSC) в культуре клеток, дифференцировавшихся из iPSC. Для осуществления способа согласно изобретению сначала культивируют указанные клетки на субстрате, покрытом ламинином-521 и Е-кадгерином, в среде, содержащей ингибитор Rho-ассоциированной протеинкиназы, содержащей суперспираль (ROCK).

Способы и композиции для трансплантации стволовых клеток // 2757818

Настоящее раскрытие относится к области биотехнологии и иммунологи и раскрывает способ получения расширенной популяции HSPC и эндотелиальных клеток (EC), пригодных для трансплантации HSPC. Для осуществления способа проводят контактирование CD34+ HSPC с E4ORF1+ эндотелиальными клетками пупочной вены человека (E4ORF1+ HUVEC) в биореакторе в исходном соотношении EC/HSPC.

Штамм каллусной культуры клеток растения полынь якутская (artemisia jacutica drobow) под обозначением nefu-ajac-1 в условиях in vitro для получения биомассы клеток // 2757734

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой штамм NEFU-Ajac-1 каллусной культуры полыни якутской (Artemisia jacutica Drobow), полученный в условиях in vitro, идентифицирован и депонирован во Всероссийской коллекции культивируемых клеток высших растений (ВККК ВР) при Учреждении РАН Институт физиологии растений РАН, регистрационный номер 100.

Генетическая кассета, содержащая кодон-оптимизированные нуклеотидные последовательности генов trail, pten и ifnβ-1, и фармацевтическая композиция для лечения онкологических заболеваний // 2757502

Изобретения относятся к области биотехнологии, конкретно к генотерапевтическим лекарственным препаратам на основе белков с противоопухолевым и иммуномодулирующим эффектами, и могут быть использованы для лечения онкологических заболеваний человека. Предложена генетическая кассета, содержащая кодон-оптимизированные нуклеотидные последовательности генов TRAIL, PTEN и IFNβ-1, представленные SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 и SEQ ID NO:3 соответственно, разделенные нуклеотидной последовательностью из ряда P2А, или E2А, или F2А, или T2А пептида, для экспрессии генов, кодирующих белки TRAIL, PTEN и IFNβ-1, с возможностью использования в лентивирусном эукариотическом экспрессионном векторе.

Nk-клеточная линия, экспрессирующая psma-специфический химерный антигенный рецептор и секретирующая блокатор взаимодействия cd47/sirpa // 2757353

Изобретение относится к биотехнологии. Заявлена модифицированная NK-клетка для иммунотерапии PSMA-позитивной опухоли, содержащая: а) химерный антигенный рецептор (CAR) на поверхности клетки, содержащий антигенсвязывающий домен, который связывается с опухолеассоциированным маркером PSMA, шарнирный домен, трансмембранный домен и домен внутриклеточной сигнализации, который способен активировать NK-клетку; и б) нуклеиновую кислоту, кодирующую блокатор взаимодействия CD47/SIRPa размером более 40 кДа.

Введение сконструированных т-клеток для лечения рака центральной нервной системы // 2757308

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к Т-клеткам, экспрессирующим химерный антигенный рецептор, связывающийся с антигеном опухолевых клеток, и может быть использовано в медицине. Т-клетки могут быть использованы в способе лечения пациента, у которого диагностирована злокачественная опухоль центральной нервной системы, включающем внутрижелудочковое введение Т-клеток, что обеспечивает эффективную иммунотерапию опухоли ЦНС.

Новые минимальные utr-последовательности // 2759737

Изобретение относится к области биохимии, в частности к молекуле ДНК. Также раскрыты вектор экспрессии, содержащий указанную ДНК, клетка-хозяин, содержащая указанный вектор, композиция и набор, содержащие указанную молекулу ДНК. Раскрыто применение указанной молекулы ДНК. Изобретение позволяет эффективно увеличивать экспрессию терапевтических генов. 11 н. и 5 з.п. ф-лы, 1 табл., 28 ил., 1 пр.