Способ снижения уровней экспрессии генов lrnn3, grap, vamp5



Владельцы патента RU 2759806:

Поспелов Вадим Игоревич (RU)
Гордейчук Владимир Евгеньевич (RU)
Рубцов Сергей Владимирович (RU)
Барсуков Александр Павлович (RU)

Изобретение относится к области геронтологии, а именно к возможности влияния на профиль экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5, ассоциированных с биологическим старением, в плазме крови человека посредством приема экстракта амаранта, загруженного в аутологичные экзосомы, что позволит использовать данную форму экстракта в качестве защитного средства от действия определенных генетических факторов, задействованных в процессах биологического старения организма, в плазме крови человека. 1 пр., 1 табл.

 

Способ снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5.

Изобретение относится к области геронтологии, а именно к возможности влияния на профиль экспрессии определенных генов, ассоциированных с биологическим старением, в плазме крови человека посредством приема экстракта амаранта, загруженного в аутологичные экзосомы, что позволит использовать данную форму экстракта в качестве защитного средства от действия определенных генетических факторов, задействованных в процессах биологического старения организма, в плазме крови человека.

Из уровня техники известен следующий метод применения экстракта амаранта «Применение активных ингредиентов амаранта (amaranthus hypochondriacus) для приготовления средства для защиты митохондрий» [WO2008145850 А2, 27.04.2007, Франция], предполагающий использование активного ингредиента, полученного из амаранта, в составе косметической или фармацевтической субстанции как защитного фактора от механизмов старения посредством обеспечения защиты митохондрий и активации аконитазы для поверхностного использования в области кожи.

Недостатками данного метода являются форма доставки, не предполагающая высокое сродство доставляемой молекулярной субстанции к клеткам реципиента, и отсутствие эффекта на уровень экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5, ассоциированных со старением организма.

Техническим результатом заявленного способа является возможность снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5, уровни экспрессии которых возрастают с увеличением биологического возраста организма, с помощью аутологичных экзосом, загруженных экстрактом амаранта.

Вышеприведенный технический результат достигается благодаря тому, что способ включает последовательное выполнение следующих стадий: получение аутологичных экзосом; получение экстракта амаранта (или берется покупной экстракт амаранта); загрузка полученного экстракта амаранта в аутологичные экзосомы; прием полученных загруженных экзосом per os, разведенных 1:10 физиологическим раствором, из расчета 15 мл на 10 кг веса.

Аутологичные экзосомы получают из периферической венозной крови реципиента, которую забирают в пробирку с антикоагулянтом в объеме 40 мл, после чего подвергают центрифугированию в течение 20 мин при 3000 g, далее забирают супернатант и проводят центрифугирование при 100000 g в течение 90 минут. По окончании ультрацентрифугирования забирают сформировавшийся осадок, содержащий экзосомы.

Экстракт амаранта получают из зерен растения семейства амарантовых методом водной или спиртовой экстракции или используют покупной (эксперименты показали, что при использовании покупного экстракта также достигается вышеприведенный технический результат - особой разницы нет) и загружают в полученные аутогенные экзосомы методом ультразвуковой порации.

Загруженные экстрактом амаранта аутогенные экзосомы разводят 1:10 в физиологическом растворен назначают реципиенту per os в объеме 10 мл / на 10 кг.

Заявляемый способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.

Пример. «Ингибирование экспрессии генов, определяемых в крови человека, уровень экспрессии которых увеличивается с возрастанием биологического возраста, при приеме per os аутологичных экзосом, загруженных экстрактом амаранта».

Мужчина 55 лет 82 кг и женщина 43 лет и 75 кг получали аутологичные экзосомы, загруженные экстрактом амаранта, разведенные в физиологическом растворе 1:10 в объеме 82 мл и 75 мл соответственно каждый день в течение 28 дней. Уровень экспрессии генов, уровень экспрессии которых возрастает с увеличением биологического возраста организма, определяли на 1-й и на 28-й день приема аутогенных экзосом, загруженных экстрактом амаранта.

Экстракт амаранта был получен из семян растения рода амарант методом этанольной экстр акции с последующим вакуумным высушиванием. В результате из 100 г измельченных семян было получено 8 г экстракта, который затем растворили в 80 мл физиологического раствора.

Аутологичные экзосомы из 40 мл периферической венозной крови были получены следующим образом: полученную кровь подвергали центрифугированию при 3000 g в течение 20 минут с последующим забором супернатанта; затем проводили центрифугирование в режиме 2000 g в течение 20 минут при комнатной температуре с последующим забором супернатанта; далее проводили центрифугирование в режиме 10000 g в течение 30 минут при комнатной температуре с последующим забором супернатанта. Последним этапом проводили ультрацентрифугирование (центрифуга Avanti 301, ротор JA-30.50) в режиме 100000 g в течение 90 минут при +4°С с последующим забором осадка. Полученный осадок растворяли в 2 мл натрий-фосфатного буфера.

8 г экстракта амаранта, растворенные в 80 мл натрий-фосфатного буфера, были загружены в полученные экзосомы методом ультразвуковой порации (сонопоратор QsonicaSonicatorQ700 (Fisher Scientific, Hampton, NH, USA)) в следующем режиме: 500 V, 2 kHz, 20% power, 6 циклов 4 с пульс / 2 с пауза, затем охлаждение на льду в течение 2 минут и повторение цикла.

Для оценки уровня экспрессии генов, уровень экспрессии которых повышается при увеличении биологического возраста, проводили выделение тотальной РНК из клеток периферической венозной крови (5 мл крови, собрана в вакуумную пробирку с антикоагулянтом) на наборах RNeasy Mini Kit (Qiagen, Германия) с последующей очисткой мРНК на наборах Oligotex mRNA Mini Kit (Qiagen, Германия), кДНК синтезировалась с помощью набора QuantiTect Reverse Transcription Kit (Qiagen, Германия). Далее проводили постановку ПЦР в реальном времени со специфическими праймерами для генов LRNN3, GRAP, VAMP5, уровень экспрессии которых возрастает при увеличении биологического возраста. Для оценки изменения уровней экспрессии генов использовали гены домашнего хозяйства TUBA 1А, А СРВ, GAPDH, В2М, уровень экспрессии которых в различных клетках относительно стабилен в течение времени.

Полученные изменения уровней экспрессии генов, повышение уровня экспрессии которых ассоциировано с увеличением биологического возраста, на фоне приема экстракта амаранта в аутологичных экзосомах отражены в таблице.

На фоне приема экстракта амаранта, загруженного в аутологичные экзосомы, снизился уровень экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5, экспрессия которых повышается с увеличением биологического возраста, снизилась у мужчины и женщины для гена LRNN3 с 23,1 до 20, 1 и с 20,6 до 18,0 соответственно; для гена GRAP с 13,3 до 10,9 и с 17,2 до 14,7; для гена VAMP5 с 4,9 до 3,2 и с 5,8 до 4,1.

Способ снижения уровней экспрессии генов LRNN3, GRAP, VAMP5, при котором получают аутологичные экзосомы из периферической венозной крови реципиента, а именно 40 мл периферической венозной крови центрифугируют при комнатной температуре в режиме 3000g в течение 20 минут, далее отобранный супернатант центрифугируют при комнатной температуре в режиме 2000g в течение 20 минут, затем отобранный супернатант центрифугируют при комнатной температуре в режиме 10000g в течение 30 минут, после чего проводят ультрацентрифугирование в режиме 100000g в течение 90 минут при +4°С с последующим забором осадка, который растворяют в 2 мл натрий-фосфатного буфера, далее 8 г экстракта амаранта растворяют в 80 мл натрий-фосфатного буфера и загружают в полученные экзосомы методом ультразвуковой порации с помощью сонопоратора Q700 в следующем режиме: 500 V, 2 kHz, 20% power, 6 циклов 4 с пульс/2 с пауза, затем охлаждение на льду в течение 2 минут и повторение цикла, затем полученные аутологичные экзосомы, загруженные экстрактом амаранта, разводят в физиологическом растворе 1:10 и вводят в реципиента per os в количестве 15 мл на 10 кг его веса раз в день в течение 28 дней.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины. Предложено применение пегилированной формы аналога глюкагоноподобного пептида 1 ГПП 1(7-37) в качестве средства для стимуляции регенерации эндотелия легких при сочетании метаболического синдрома и хронической обструктивной болезни легких у особей женского пола.

Изобретение относится к 4-(ароил)-3-гидрокси-1-(2-гидроксифенил)-5-(фенилтио)-1,5-дигидро-2H-пиррол-2-онам, обладающим противомикробной активностью. Технический результат заключается в получении новых соединений, обладающих противомикробной активностью, которые могут быть использованы в фармакологии в качестве потенциальных лекарственных средств с противомикробными свойствами.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан модулирующий полинуклеотид для снижения или ингибирования экспрессии гена в клетке, где указанный модулирующий полинуклеотид содержит: (a) стебель и петлю, которые образуют структуру «стебель-петля», (b) первую фланкирующую область, расположенную в направлении 5' от указанной сопровождающей цепи, где указанная первая фланкирующая область содержит 5'-концевую фланкирующую последовательность и 5'-концевую спейсерную последовательность, где первая фланкирующая область содержит нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO:5, и (c) вторую фланкирующую область, расположенную в направлении 3' от указанной направляющей цепи, где указанная вторая фланкирующая область содержит 3'-концевую спейсерную последовательность и 3'-концевую фланкирующую область, где указанная вторая фланкирующая область содержит нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO:21.

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к фармацевтической композиции и её применению. Фармацевтическая композиция для лечения патологического состояния, связанного с диабетом, включает: производное инсулина, представляющего собой человеческий инсулин A14E, B16H, B25H, B29K((Nεэйкозандиоил-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)этокси]ацетиламино}этокси)этокси]ацетил)), desB30; глицерин; фенол; м-крезол; ионы цинка; хлорид натрия, взятые в определенном количестве и имеющая значение pH 7,4.

Изобретение относится к применению (3S)-4-{4-[3-(3-метилпиперидин-1-ил)пропокси]фенил}пиридин 1-оксида или его фармацевтически приемлемой соли и/или сольвата указанного соединения (A) или его соли для лечения и/или предотвращения у людей заболеваний, выбранных из следующих: болезнь Альцгеймера; нарушение внимания; инсомния и нарушение запоминания; когнитивные расстройства в психиатрических патологиях; когнитивные расстройства, расстройства настроения и концентрации, в особенности у пожилых пациентов; депрессивные или астенические состояния; болезнь Паркинсона; синдром обструктивного апноэ во сне; деменция с тельцами Леви; сосудистая деменция; головокружение; укачивание; ожирение; диабет и метаболический синдром; нарушения сна; стресс; психотропные нарушения; эпилепсия; депрессия; нарколепсия с катаплексией или без неё; нарушения гипоталамо-гипофизной секреции, мозгового кровообращения и/или в иммунной системе; избыточная дневная сонливость, такая как избыточная дневная сонливость и усталость, связанная с болезнью Паркинсона, синдромом обструктивного апноэ во сне или деменцией; и/или для облегчения работы по ночам или для адаптации к смене часового пояса у здоровых людей; злоупотребление веществами, в частности злоупотребление алкоголем; предотвращение синдрома отмены при злоупотреблении веществами; нарушения внимания; постинсультные усталость, расстройства настроения, концентрации и когнитивные расстройства; когнитивные нарушения при аутизме; хроническая боль и хроническая усталость; нарушения внимания и концентрации при СДВГ (синдром дефицита внимания и гиперактивности) у взрослых или после инсульта, где указанное применение включает введение соединения (A) или его фармацевтически приемлемых солей, и/или сольватов указанных солей или указанного соединения (A), взрослому человеку, с дозировкой свободного основания между 20 и 50 мкг в сутки (в пересчете на соединение (A) в форме свободного основания).

Настоящее изобретение относится к соединениям, которые модулируют функцию родственного ретиноидным рецепторам орфанного рецептора RORc (RORy), а именно к конкретным соединениям, как они представлены в формуле изобретения. Также предложены фармацевтическая композиция и применение соединений для приготовления лекарственного средства и лечения или профилактики заболевания, опосредованного рецептором RORc.

Представленная группа изобретений относится к области медицины и фармацевтики, а именно, к применению соединения, представленного формулой I или его фармацевтически приемлемой соли в эффективном количестве для предупреждения или лечения волчанки: где A представляет собой , каждый из Xa и Xb независимо представляет собой CH, каждый из L1 и L2 независимо представляет собой водород или галоген, Q представляет собой C(=O), Y выбран из следующей группы: , M представляет собой C, N или O, где в этом случае, когда M представляет собой C, l и m равны 1; когда M представляет собой N, l равен 1 и m равен 0; и когда M представляет собой O, l и m равны 0, каждый из Ra1 и Ra2 независимо представляет собой водород; -C1-4 алкил с прямой или разветвленной цепью; или галоген; n представляет собой целое число, равное 0, 1 или 2, Rb представляет собой водород; Z выбран из следующей группы: , каждый из Pa и Pb независимо представляет собой водород; -C1-4 алкил с прямой или разветвленной цепью, где он является незамещенным или по меньшей мере один атом водорода замещен галогеном; галоген; или -CF3.

Группа изобретений относится к области фармацевтики, а именно к дезинтоксикационному гуминовому средству и его применению в качестве профилактического и лечебного средства при отравлениях и интоксикации организма. Дезинтоксикационное гуминовое средство получают из леонардита, лигнина, угля, торфа, сапропели методом ультразвукового диспергирования предварительно измельченного сырья в смеси с водой при определенной температуре и определенном давлении, после которого раствор охлаждают до комнатной температуры и разбавляют водой до содержания гуминовых веществ, составляющего от 1 до 20 мас.

Изобретение относится к соединениям индола формулы (I), в которой значения A, L, T, R3-R5 раскрыты в формуле изобретения, и его фармацевтически приемлемым солям. Соединения могут использоваться в качестве ингибитора CRTH2.

Изобретение относится к медицине, в частности к токсикологии и профпатологии, и касается снижения цитотоксического действия кристаллического диоксида кремния. Для этого лицам, относящимся к группе риска указанного действия, вводят препарат «Лимфомиозот» по 15 капель в 100 мл воды 3 раза в сутки курсом 14 дней, 4 раза в год.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к композиции для лечения врожденного амавроза Лебера, связанного с глубокой интронной мутацией в гене CEP290 индивидуума на основе системы CRISPR-Cas, где Cas-белок расщепляет кассету экспрессии Cas, тем самым снижая экспрессию Cas-белка, а также к способу лечения врожденного амавроза Лебера с ее использованием.
Наркология
Наверх