Способ внутриматочной инфузии аутологичной плазмы женщины для повышения эффективности программ вспомогательных репродуктивных технологий

Изобретение относится к медицине, а именно к области акушерства-гинекологии и вспомогательных репродуктивных технологий. В цикле переноса эмбрионов в криопротоколе при достижении толщины эндометрия 7 мм и более назначают препарат прогестерона дважды. При этом в первый и третий день приема препарата прогестерона вводят внутриматочно катетером для инсеминации в полость матки, не достигая маточного дна, приготовленную из цельной венозной крови женщины плазму, обогащенную тромбоцитами в объеме 0,8-1 мл. Способ повышает эффективность программ вспомогательных репродуктивных технологий, а именно наступление клинической беременности в криоцикле, у пациенток с неудачными попытками переноса эмбрионов в анамнезе вследствие воздействия компонентов аутоплазмы на процессы воспаления и репарации структур эндометрия. 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине, к области акушерства-гинекологии и вспомогательных репродуктивных технологий.

Предназначено для повышения эффективности программ вспомогательных репродуктивных технологий у пациенток с неудачными попытками переноса эмбрионов в анамнезе.

Распространенность бесплодия в Российской Федерации достигает 15-20 %, что считается критическим уровнем для воспроизводства населения. На долю маточного фактора в изолированном или сочетанном варианте приходится до 62% всех случаев бесплодия и до 77,5 % неэффективных попыток ЭКО (Margiola-Siarkou, C. LIF and LIF R expression in the endometrium of fertile and infertile women: A prospective observational case control study. MOLECULAR MEDICINE REPORTS 13-2016, P. 4721-4728).

Известно, что частота встречаемости патологических изменений эндометрия при бесплодии достигает 88%, при неэффективных попытках ЭКО – 77,5% (Кузнецова, И.В. Проблема тонкого эндометрия и возможные пути ее решения [Текст] / И.В.Кузнецова, Н.С. Землона, Т.Н. Рашидов, М.А. Коваленко // Эффективная фармакотерапия - 2015. - № 1. – С. 15-25).

Наличие внутриматочной патологии является независимым фактором риска бесплодия, увеличивающим его вероятность в четыре раза. Эти данные подтверждают существующее мнение о ключевой роли эндометрия в имплантации и плацентации.

Эндометрий играет ведущую роль для наступления беременности и ее поддержания, как в естественном цикле, так и в циклах вспомогательных репродуктивных технологий. В естественном менструальном цикле женщины эндометрий становится восприимчив к имплантации через шесть дней после овуляции и продолжается 4-5 дней, то есть эндометрий рецептивен («окно имплантации») на 18-24 день менструального цикла в зависимости от длительности цикла. Сложные реакции и взаимодействия между эндометрием и эмбрионом приводят к прикреплению бластоцисты к люминальному эпителию и последующей инвазии в строму (Sharkey AM, Smith SK. The endometrium as a cause of implantation failure. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 2003; 17:289-307). Синхронизация между желтым телом, эндометрием и эмбрионом является основной частью успешной имплантации.

Основную регуляторную роль в процессе имплантации играет гормональный фон, а именно содержание в организме стероидов, прогестерона, эстрогена. Эти гормоны мобилизуют модуляторы, которые поддерживают процессы имплантации эмбриона в эндометрий (Carson DD, Bagchi I, Dey SK, Enders AC, Fazleabas AT, Lessey BA, et al., Embryo implantation. Devel Biol. 2000; 223:217-37).

Особую роль в имплантации играют: эпителий эндометрия, децидуальные клетки стромы, иммунные клетки, которые производят и выделяют сигнальные молекулы, известные как факторы роста и цитокины. Их действие способствует межклеточным реакциям и прикреплению бластоцисты (Duc-Goiran P,Mignot TM, Bourgeois C, Ferre F. Embryo-maternal interactions at the implantation site: a delicate equilibrium. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 1999; 83:85-100; Dey SK, Lim H, Das SK, Reese J, Paria BC, Daikoku T, et al., Molecular cues to implantation. Endocr Rev. 2004; 25:341-73).

Несмотря на все накопленные знания о факторах, участвующих в нормальной имплантации, очень мало данных о предикторах, которые косвенно могут повлиять на процесс имплантации и способствовать наступлению беременности.

Взаимодействие между эмбрионом и маткой частично контролируется паракринно цитокинами (Diedrich K, Fauser BC, Devroey P, Griesinger G. The role of the endometrium and embryo implantation in the human. Hum Re-prod. 2009;14:365-377. doi: 10.1093/humupd/dmm011).

Цитокины, факторы роста обнаружены как в эмбрионах, так и в эндометрии (Стрижаков А.Н. Роль ангиогенных факторов роста в прогно-зировании плацентарной недостаточности. Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2009;8:4-5. [Strizhakov AN. The role of angiogenous growth factors in the prediction of placental insufficiency. Voprosy ginekologii, akusherstva i perina-tologii. 2009; 8:4-5. (In Russ.)]; Чернуха Г.Е., Сметник В.Л. Роль факторов роста в функции репродуктивной системы. Проблемы репродукции. 2011;2:8-13. [Chernukha GE, Smetnik VL. Role of growth factors in repro-ductive function. Problemy reproduktsii. 2011;2:8-13. (In Russ.)]) .

В эмбрионе и эндометрии обнаружена экспрессия LIF , она имеет важное значение в процессах развития бластоцист, дифференцировки эндометрия вплоть до имплантации эмбриона. LIF представляет собой многофункциональный белок, относящийся к семейству цитокинов интерлейкина 6, оказывает многочисленные регуляторные действия на функции клеток.

На поверхности клеток LIF связывается со своими индивидуальными рецепторами (Leukemia inhibitory factor receptor – LIFR). Связывание LIF с LIFR приводит к гетеродимеризации GP130 (гликопротеин-130) и формированию высокоаффинного рецепторного комплекса, активирующего многие сигнальные пути. Эффекты LIF определяются концентрацией GP130. Стоит отметить, что процесс взаимодействия эмбриона и эндометрия двусторонний: эмбрион продуцирует LIF, а в эндометрии после имплантации возрастает функциональная активность LIFR и экспрессируется GP130. Когда эмбрион проникает в эпителий и достигает стромы эндометрия, он начинает синтезировать несколько видов цитокинов, таких как IL-1, TNF и TGF-β, которые индуцируют дальнейшую секрецию LIF стромальными клетками. В эндометрии LIF выполняет несколько функций: контролирует количество и соотношение иммунных клеток во время имплантации; влияет на взаимодействия лейкоцитов децидуальной оболочки и внедряющегося трофобласта посредством LIFR. В дальнейшем эмбрион продуцирует LIF самостоятельно и тем самым регулирует рецептивность эндометрия (Diedrich K, Fauser BC, Devroey P, Griesinger G. The role of the endometrium and embryo implantation in the human. Hum Re-prod. 2009;1 4:365-377).

Ряд авторов указывает на наличие экспрессии генов иммуногистохимических маркеров в период «окна имплантации», в середине лютеиновой фазы цикла таких как: CD34 (маркер клеток эндотелия сосудов, который позволяет оценить уровень ангиогенеза), VEGF (сосудистый эндотелиальный фактор роста) (Дюжева Е.В., Калинина Е.А., Кузьмичев Л.Н., Коган Е.А. Иммуногистохимическое исследование эндометрия в про-граммах ВРТ. Акушерство и гинекология. 2009;6:98-104 [Dyuzheva EV, Kalinina EA, Kuz’michev LN, Kogan EA. Im-munohistochemical study of the endometrium in assisted repro-duction programs. Akusherstvo i ginekologiya. 2009;6:98-104. (In Russ.)).

Есть данные о том, что увеличение продукции HIF (Гипоксия-индуцибельный фактор, важный медиатор васкуляризации плаценты и дифференциации трофобласта) в эндометрии приводит к снижению его рецептивности. Маркер Ki-67 – это ДНК-связывающий ядерный белок, экспрессирующийся в пролиферирующих клетках, который предотвращает разрушение хромосом во время деления. Повышение экспрессии Ki-67 можно рассматривать в качестве неблагоприятного маркера для имплантации (риск гиперплазии и нарушение рецептивности эндометрия) (Bentin-Ley U, Sjögren A, Nilsson L, Hamberger L, Larsen JF, Horn T. Presence of uterine pinopodes at the embryo-endometri-al interface during human implantation in vitro. Hum Reprod. 2009;14:515-520. doi: 10.1093/humrep/14.2.515; Брагина Е.Е. Морфологические маркеры рецептивности эн-дометрия. Проблемы репродукции. 2013;4:17-24 [Bragina EE. Morphological markers of endometrial receptivity. Problemy re-produktsii. 2013;4:17-24 (In Russ.)]).

Плазма, полученная из венозной крови, содержит растворимые факторы тромбоцитов: трансформирующий ростовой фактор — (TGF-β1 и TGF-β2), тромбоцитарные ростовые факторы (PDGF-AA, PDGF-BB, PDGF-AB), инсулиноподобный фактор роста 1 (IGF-I), эпидермальный фактор роста (EGF), фактор роста фибробластов (FGF), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) (Marini M.G., Perrini C., Esposti P., Corradetti B., Bizzaro D., Riccaboni P. et al., Effects of platelet-rich plasma in a model of bovine endometrial inflammation in vitro // Reprod Biol Endocrinol. 2016. No 14. Р. 58-75).

Метод коррекции рецептивности эндометрия плазмой, обогащённой тромбоцитами (platelet rich plasmа - PRP) основан на терапевтически-регенеративной функции тромбоцитов и активных компонентов: цитокинов и факторов роста, которые высвобождаются при активации тромбоцитов. Однако на данный момент нет унифицированного алгоритма изготовления плазмы, обогащенной тромбоцитами.

В клинических наблюдениях показано, что PRP оказывает лечебное действие на эндометрий женщин и восстанавливает его нормальную гистологическую структуру и функцию: десять пациенток, имевших в анамнезе отмену переноса эмбрионов по причине «тонкого» эндометрия (менее 7 мм), несмотря на заместительную гормональную терапию (ЗГТ), были набраны в исследование, проведенное в Иранском центре ЭКО, с сентября 2015 года по май 2016 года (Zadehmodarres S., Salehpour S., Saharkhiz N., Nazari L. Treatment of thin endometrium with autologous platelet-rich plasma: a pilot study // JBRA Assisted Reproduction. 2017. No 21. Р. 54-56).

Всем пациенткам проводилась заместительная гормональная терапия (ЗГТ) для подготовки эндометрия: эстрадиол валерат 6 мг/сут начинали на 2-й или 3-й день менструального цикла и увеличивали до 8 мг/сут на 9-10-й день из-за неадекватного роста эндометрия (< 7 мм). Внутриматочная инфузия плазмы, обогащенной тромбоцитами (PRP) была выполнена на 11-12-е сутки всем пациенткам из-за тонкого эндометрия и повторена на 13-14-е сутки. Во время цикла, когда толщина эндометрия была больше 7 мм, назначены препараты прогестерона 400 мг дважды-вагинально, затем проводили перенос эмбрионов (ПЭ). Прием эстрадиола валерата и прогестерона продолжался в течение 2 недель после ПЭ, и если уровень человеческого хорионического гонадотропина (чХГ) в сыворотке крови был положительным, прием гормональных добавок продолжался до 12 недель беременности.

PRP готовили из аутологичной крови с использованием двухступенчатого процесса центрифугирования. На 11-й или 12-й день менструального цикла в шприц, содержащий 2,5 мл цитрата кислоты, забирали 17,5 мл периферической венозной крови и центрифугировали сразу при 1200 об/мин в течение 12 мин для отделения эритроцитов. Затем отделенную плазму снова центрифугировали при 3300 об/мин в течение 7 мин для получения PRP. 0,5 мл PRP вводили в полость матки с помощью катетера для внутриматочной инсеминации.

Толщина эндометрия после PRP увеличивалась через 48 ч после первой инфузии и достигала более 7 мм после второй внутриматочной инфузии у всех пациентов. После ПЭ пять пациенток были беременны по результатам биохимического анализа, и у четырех из них зафиксирована клиническая беременность.

Исследование по изучению возможности применения аутологичной PRP с целью повышения эффективности процедур ЭКО при бесплодии у женщин с хроническим эндометритом в анамнезе проведены О. К. Дорониной, Э. Н. Дейлидко (О.К. Доронина, Э.Н. Дейлидко. Использование обогащенной тромбоцитами аутоплазмы в программах экстракорпорального оплодотворения у пациенток с бесплодием на фоне хронического эндометрита. Opinion Leader № 32. 2020. Гинекология).

В исследование было включено 73 пациентки с бесплодием, ассоциированным с хроническим эндометритом, у которых имелись показания для ЭКО. На 6-9-й день менструального цикла выполнялась аспирационная биопсия эндометрия. В гистологическом исследовании подтверждали перенесенный хронический эндометрит у пациенток. Все пациентки с хроническим эндометритом были пролечены курсом противовоспалительной терапии, и через 2–3 месяца после лечения выполнялась повторная аспирационная биопсия эндометрия с последующим морфологическим исследованием. Были сформированы две группы наблюдения. Пациенткам обеих групп стимуляция яичников проводилась с применением длинных и коротких протоколов контролируемой овариальной стимуляции, в зависимости от показаний и сопутствующей гинекологической патологии. Первую группу (I) составили пациентки, которым в циклах стимуляции не вводилась аутологичная PRP (n=43). Эта группа стала группой сравнения для второй группы пациенток. Вторую группу (II) составили пациентки (n=30), которым на 6-10-й день стимулированного или синхронизированного цикла в асептических условиях без обезболивания внутриматочно вводился препарат аутологичной PRP, приготовленный с помощью набора пробирок для забора крови Regen BCT-SP производства RegenLab SA для получения аутологичной обогащенной тромбоцитами плазмы. Из 8 мл цельной крови получается 4–5 мл А-PRP. У пациенток первой группы удельный вес женщин с наступившей беременностью составил 32,6%, а во второй группе 66,7%. Авторы указывают, что использование аутоплазмы, обогащенной тромбоцитами, воздействует на процессы воспаления и репарации структур эндометрия.

Задачей изобретения является разработка способа внутриматочной инфузии аутологичной плазмы для повышения эффективности программ вспомогательных репродуктивных технологий у пациенток с неудачными попытками переноса эмбрионов в анамнезе.

Техническим результатом является повышение эффективности программ вспомогательных репродуктивных технологий, а именно наступление клинической беременности в криоцикле, у пациенток с неудачными попытками переноса эмбрионов в анамнезе, вследствие воздействия компонентов аутоплазмы на процессы воспаления и репарации структур эндометрия.

Заявляется способ внутриматочной инфузии аутологичной плазмы (внутриматочной аутоплазмотерапии) женщины в цикле переноса эмбрионов в криопротоколе, заключающийся в том, что приготовленная плазма из цельной венозной крови под ультразвуковым контролем дважды - в первый и третий день приема препаратов прогестерона вводится внутриматочно катетером для инсеминации.

В результате внутриматочной инфузии аутоплазмы происходит естественная активация тромбоцитов на поверхности эндометрия, и на местном уровне запускаются процессы синтеза цитокинов и факторов роста.

Метод коррекции рецептивности эндометрия плазмой, обогащённой тромбоцитами (platelet rich plasmа - PRP) основан на терапевтически-регенеративной функции тромбоцитов и активных компонентов: цитокинов и факторов роста, которые высвобождаются при активации тромбоцитов.

Данная методика приготовления и введения в матку аутологической плазмы утверждена на локальном этическом комитете ФГБУ «НИИ ОММ» МЗ РФ протокол № 1 от 26.02.2019 г.

Показания к внутриматочной аутоплазмотерапии:

- неудачный перенос эмбрионов в анамнезе;

- «тонкий» (менее 7 мм) эндометрий на 18-22 день предыдущего менструального цикла;

- самопроизвольный выкидыш в малом сроке в анамнезе после программы ВРТ (до 8-9 недель беременности);

- регрессирующая беременность в малом сроке в анамнезе после программы ВРТ (до 8-9 недель беременности).

Критерии отбора к внутриматочной аутоплазмотерапии.

1. Нет противопоказаний к применению вспомогательных репродуктивных технологий, согласно приказу №803 «О порядке использования вспомогательных репродуктивных технологий, противопоказаниях и ограничениях к их применению» от 31.07.2020.

2. Отсутствие УЗ-признаков патологии эндометрия (полип, синехии полости матки, гиперплазия и т.д.).

3. Проходимость цервикального канала (отсутствие окклюзии наружного зева цервикального канала).

Противопоказания к внутриматочной аутоплазмотерапии.

1. Острые воспалительные заболевания любой локализации.

2. УЗ-признаки патологии эндометрия (полип, синехии полости матки, гиперплазия и т.д.).

3. Патологические изменения микроскопического исследования влагалищных мазков.

Изобретение осуществляют следующим образом.

Перед проведением внутриматочной аутоплазмотерапии для подготовки к переносу размороженных эмбрионов, пациентке на 2-й-4-й день менструального цикла проводится ультразвуковое исследование органов малого таза трансвагинальным датчиком. При отсутствии патологической ультразвуковой картины назначается препарат эстрагенов (пероральный или трансдермальный метод введения) для подготовки эндометрия. Производится ультразвуковой мониторинг роста эндометрия и при достижении толщины эндометрия 7 мм и более (после 12-го дня менструального цикла при 28-дневном менструальном цикле) назначается препарат прогестерона (пероральный или вагинальный метод введения).

В 1-й и 3-й день приема препаратов прогестерона проводится внутриматочная аутоплазмотерапия. У пациентки натощак проводится забор венозной крови в вакуумную пробирку 4 мл с цитратом натрия 3,8% (пробирка для коагулогических исследований). Пробирка с кровью помещается в центрифугу, где при 1500 об/мин в течение 5 минут происходит отделение эритроцитов. По окончании центрифугирования содержимое пробирки разделяется на две части: верхняя - желтого цвета (плазма), нижняя – красного цвета (конгломерат форменных элементов, в том числе эритроцитов). Плазму набирают шприцом в катетер для внутриматочных инсеминаций (переносов эмбрионов) в объеме 0,8-1 мл. Пациентку укладывают на гинекологическое кресло, после асептической обработки наружных половых органов в асептических условиях производится осмотр шейки матки в зеркалах Куско. Шейка матки обрабатывается водным раствором антисептика с целью удаления цервикальной слизи и влагалищных выделений. Под УЗ-контролем абдоминальным датчиком в цервикальный канал вводится катетер для аутоплазмотерапии, не достигая маточного дна. Шприцом производится медленная эвакуация плазмы женщины в полость матки. После полного введения плазмы извлекаются катетер и зеркало. Пациентка в течение 2-3 минут лежит на гинекологическом кресле с целью увеличения времени экспозиции плазмы в полости матки. На 5-ые - 6-ые сутки приема препаратов прогестерона проводят перенос размороженных эмбрионов.

Клинический пример

Пациентка И., 29 лет, обратилась в отделение ВРТ ФГБУ «НИИ ОММ» МЗ РФ в феврале 2020 года с жалобами на отсутствие беременности с 2016 года и тремя неудачными попытками переносов реконсервированных эмбрионов. В анамнезе в 2016 году проведена лапароскопия, тубэктомия слева в связи с гидросальпинксом, рассечение спаек в связи со спаечным процессом органов малого таза. Во время операции проведена гистеросальпингография – левая маточная труба проходима.

Пациентке проведена базовая программа экстракорпоралного оплодотворения, использовался протокол стимуляции с антГнРГ, суммарная дозировка гонадотропинов 2175 МЕ, получено 23 ооцит-кумулюсных комплекса на 16-й день менструального цикла. В связи с риском синдрома гиперстимуляции яичников решено сегментировать цикл. На 5-е стуки после трансвагинальной пункции витрифицированы 12 эмбрионов. Проведены три попытки переноса эмбрионов в свежем цикле, без эффекта.

На 22-й день менструального цикла проведено УЗ-исследование: толщина эндометрия составила 10,5 мм, проведена Пайпель-аспирация эндометрия. По данным микроскопического исследования: в части желез субнуклеарные вакуоли, в других слабовыраженные признаки апокриновой секреции. Пиноподии низкие, созревающие, занимают менее 5% поверхности, средняя высота 23,4 мкм, маркер Ki67 выявлен в строме 9, в железах 57. В следующем цикле после аспирации эндометрия начата подготовка эндометрия заместительной гормональной терапией к переносу размороженных эмбрионов: прогинова 8 мг/сут per os с 4-го дня менструального цикла, с 12-го дня менструального цикла прогинова заменена на аппликации дивигель 3 гр/сут по желанию пациентки. На 13-й день менструального цикла проведено УЗ-исследование, толщина эндометрия составила 11 мм, проведена аппликационная внутриматочная плазмотерапия, содержание в PRP тромбоцитов: 377*10^9/Л, лейкоцитов 0,61*10^9/Л. С 13-го дня менструального цикла назначен препарат дюфастон 40 мг/сут per os. На 16-й день менструального цикла повторно проведена Пайпель-аспирация эндометрия, УЗ-исследование, толщина эндометрия составила 13 мм, проведена аппликационная внутриматочная плазмотерапия, содержание в PRP тромбоцитов: 288*10^9/Л, лейкоцитов 0,49*10^9/Л. По данным микроскопического исследования: фрагменты эндометрия с относительно неравномерно расположенными извитыми железами, определяются единичные структуры по типу «железа в железе», железы выстланы однорядным призматическим эпителием с субнуклеарными вакуолями, часть извитых желез выстланы высоким призматическим эпителием, в том числе многорядным, с нормохромными ядрами. Строма неравномерной плотности, с очаговым отёком, кровоизлияниями. Пиноподии очень слабо выражены, занимают менее 5% площади, средняя высота 27,9 мкм, маркер Ki67 выявлен в строме 1, в железах 2.

На 18-й день менструального цикла проведен перенос двух эмбрионов: 3АА, 4СВ. Назначен аппликации дивигель 3 гр/сут до 5-8 недель беременности, дюфастон 40 мг/сут per os до 12 недель. На 13 день после переноса эмбрионов бета-ХГЧ составил 3815 МЕ/л. Через 21 день после переноса эмбрионов проведено УЗ-исследование – зафиксирована одноплодная беременность малого срока.

Таким образом, применение данного способа подготовки эндометрия к переносу эмбрионов у пациенток с неудачными попытками переносов в анамнезе позволяет достичь лучшего эффекта наступления клинических беременностей в программах ВРТ.

Источники информации

1. Margiola-Siarkou, C. LIF and LIF R expression in the endometrium of fertile and infertile women: A prospective observational case control study. MOLECULAR MEDICINE REPORTS 13-2016, P. 4721-4728.

2. Кузнецова И.В. Проблема тонкого эндометрия и возможные пути ее решения [Текст] / И.В.Кузнецова, Н.С. Землона, Т.Н. Рашидов, М.А. Коваленко // Эффективная фармакотерапия - 2015. - № 1. - С. 15-25.

3. Sharkey AM, Smith SK. The endometrium as a cause of implantation failure. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. 2003; 17:289-307.

4. Carson DD, Bagchi I, Dey SK, Enders AC, Fazleabas AT, Lessey BA, et al., Embryo implantation. Devel Biol. 2000; 223: 217-37.

5. Duc-Goiran P,Mignot TM, Bourgeois C, Ferre F. Embryo-maternal interactions at the implantation site: a delicate equilibrium. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 1999; 83:85-100.

6. Dey SK, Lim H, Das SK, Reese J, Paria BC, Daikoku T, et al., Molecular cues to implantation. Endocr Rev. 2004; 25:341-73.

7. Diedrich K, Fauser BC, Devroey P, Griesinger G. The role of the endometrium and embryo implantation in the human. Hum Re-prod. 2009;14:365-377. doi: 10.1093/humupd/dmm011.

8. Стрижаков А.Н. Роль ангиогенных факторов роста в прогнозировании плацентарной недостаточности. Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2009;8:4-5. [Strizhakov AN. The role of angiogenous growth factors in the prediction of placental insufficiency. Voprosy ginekologii, akusherstva i perina-tologii. 2009; 8:4-5. (In Russ.)].

9. Чернуха Г.Е., Сметник В.Л. Роль факторов роста в функции репродуктивной системы. Проблемы репродукции. 2011;2:8-13 [Chernukha GE, Smetnik VL. Role of growth factors in repro-ductive function. Problemy reproduktsii. 2011; 2:8-13. (In Russ.)].

10. Diedrich K, Fauser BC, Devroey P, Griesinger G. The role of the endometrium and embryo implantation in the human. Hum Re-prod. 2009;14:365-377.

11. Дюжева Е.В., Калинина Е.А., Кузьмичев Л.Н., Коган Е.А. Иммуногистохимическое исследование эндометрия в программах ВРТ. Акушерство и гинекология. 2009;6:98-104. [Dyuzheva EV, Kalinina EA, Kuz’michev LN, Kogan EA. Im-munohistochemical study of the endometrium in assisted repro-duction programs. Akusherstvo i ginekologiya. 2009; 6:98-104. (In Russ.)].

12. Bentin-Ley U, Sjögren A, Nilsson L, Hamberger L, Larsen JF, Horn T. Presence of uterine pinopodes at the embryo-endometri-al interface during human implantation in vitro. Hum Reprod. 2009;14:515-520. doi: 10.1093/humrep/14.2.515.

13. Брагина Е.Е. Морфологические маркеры рецептивности эндометрия. Проблемы репродукции. 2013;4:17-24 [Bragina EE. Morphological markers of endometrial receptivity. Problemy re-produktsii. 2013; 4:17-24. (In Russ.)].

14. Marini M.G., Perrini C., Esposti P., Corradetti B., Bizzaro D., Riccaboni P. et al., Effects of platelet-rich plasma in a model of bovine endometrial inflammation in vitro // Reprod Biol Endocrinol. 2016. No 14. Р. 58-75.

15. Zadehmodarres S., Salehpour S., Saharkhiz N., Nazari L. Treatment of thin endometrium with autologous platelet-rich plasma: a pilot study // JBRA Assisted Reproduction. 2017. No 21. Р. 54-56.

16. О.К. Доронина, Э.Н. Дейлидко. Использование обогащенной тромбоцитами аутоплазмы в программах экстракорпорального оплодотворения у пациенток с бесплодием на фоне хронического эндометрита. Opinion Leader № 32. 2020. Гинекология.

17. Dieamant F, Vagnini LD, Petersen CG, Mauri AL, Renzi A, Petersen B, Mattila MC, Nicoletti A, Oliveira JBA, Baruffi R, Franco JG Jr. New therapeutic protocol for improvement of endometrial receptivity (PRIMER) for patients with recurrent implantation failure (RIF) - A pilot study. JBRA Assist Reprod. 2019 Aug 22;23(3):250-254. doi: 10.5935/1518-0557.20190035. PMID: 31091064; PMCID: PMC6724389.

Способ внутриматочной инфузии аутологичной плазмы женщины в цикле переноса эмбрионов в криопротоколе, заключающийся в том, что при достижении толщины эндометрия 7 мм и более назначают препарат прогестерона, дважды, при этом в первый и третий день приема препарата прогестерона вводят внутриматочно катетером для инсеминации в полость матки, не достигая маточного дна, приготовленную из цельной венозной крови женщины плазму, обогащенную тромбоцитами в объеме 0,8-1 мл.